Abstrak

latar belakang

Variasi genetik dalam metabolisme endocannabinoid dikaitkan dengan waktu transit usus pada
irritable bowel syndrome (IBS) dengan diare (IBS-D). Cannabinoid nonselektif (CB) agonis
reseptor, dronabinol (DRO), mengurangi motilitas kolon pada non- konstipasi IBS. FAAH .
Dan CNR1 varian dipengaruhi efek DRO pada motilitas kolon. Tujuan kami adalah: (i) untuk
membandingkan efek dosis terkait dari DRO dengan plasebo (PLA) di waktu transit usus pada
IBS-D, dan (ii) untuk menilai pengaruh dari variasi genetic pada mekanisme Cannabinoid
nonselektif (CB) pada efek dronabinool (DRO).

Metode Tiga puluh enam relawan IBS-D secara acak (double-blind, alokasi tersembunyi) untuk
dua kali per hari PLA (n = 13), DRO 2,5 mg (n = 10), atau DRO 5 mg (n = 13) selama 2 hari
. Kami menilai lambung, usus kecil, dan waktu transit di kolon. divalidasi radioscintigraphy dan
genotipe yang polimorfisme nukleotida tunggal CNR1 rs806378 dan rs324420 FAAH. Analisis
data digunakan model genetik yang dominan.

Hasil kunci keseluruhan efek pengobatan DRO pada lambung, usus kecil, atau waktu transit
dikolon tidak terdeteksi. CNR1 dikaitkan dengan penundaan sederhana transit kolon pada 24 jam
dibandingkan dengan CC (P = 0,13 untuk efek perlakuan yang berbeda pada postminus
perubahan pretreatment transit kolon dengan genotipe). Tidak ada interaksi yang signifikan dari
pengobatan dengan FAAH terdeteksi.

Kesimpulan Secara keseluruhan, DRO 2,5 atau 5 mg dua kali per hari selama 2 hari tidak
berpengaruh pada usus transit di IBS-D. Tampaknya ada pengobatan-dengan-genotipe efek,
dimana DRO istimewa penundaan transit usus pada mereka dengan CNR1 CT / TT
genotipe. Studi lebih lanjut dari pharmacogenetics CB dapat membantu mengidentifikasi subset
dari IBS-D pasien yang paling mungkin memperoleh manfaat dari terapi agonis CB.

Pengantar

Reseptor cannabinoid tipe 1 (CB1) diidentifikasi dalam mukosa kolon dan lapisan
neuromuscular, mereka juga dinyatakan dalam sel plasma dan pengaruh pada mukosa
peradangan. Sistem endocannabinoid terdiri dari CB 1 dan CB 2 reseptor; ligan reseptor ini
anandamide dan 2-arachidonyl gliserol (2-AG), dan masing-masing ligan-menonaktifkan enzim
asam lemak amida hidrolase (FAAH) dan monoasilgliserol lipase (MGLL). Aktivasi
CB 1 reseptor digabungkan dengan motor neuron kolinergik akan menghambat transmisi saraf
rangsang pada otot melingkar kolon . Endocannabinoid bertindak atas myenteric reseptor CB1
menghambat propulsi kolon pada tikus, mereka juga menghambat waktu transit di lambung dan
di usus halus tanpa mengubah tekanan intraluminal atau nada basal pada hewan pengerat.
Sebelumnya, kami telah menunjukkan bahwa dronabinol (DRO), agonis reseptor CB
nonselektif, menghambat pengosongan lambung dan motilitas kolon pada manusia yang sehat.
Efek pada kolon dan phasic motilitas diamati dengan 7,5 mg DRO, yang juga disebabkan efek
samping mengantuk dan pusing. DRO dosis 5 mg lebih ditoleransi antara peserta yang
sehat. Pada pasien dengan irritable bowel syndrome (IBS) dengan diare (IBS-D), variasi genetik
dalam metabolisme endocannabinoid di amida asam lemak hidrolase (FAAH) gen berhubungan
dengan gejala dan waktu transit di kolon. Dalam studi lain sebelum pasien IBS nonconstipated
yang terdiri dari kedua pasien dengan IBS-D dan IBS dengan bolak kebiasaan buang air besar
(IBS-A), DRO 5 mg berkurang puasa motilitas kolon.
Kami berhipotesis DRO yang menghambat waktu transit kolon di IBS, dan bahwa efek
penghambatan yang dimodulasi oleh variasi dalam gen untuk CB 1 reseptor (CNR1) dan
untuk FAAH. Tujuan khusus kami adalah: (i) untuk membandingkan efek dari dua hari berturut-
turut dari dua kali per hari dari penggunaan oral placebo, DRO 2,5 mg, dan DRO 5 mg pada
lambung, usus kecil, dan transit kolon pada pasien IBS-D dan (ii) untuk memeriksa pengaruh
potensi variasi genetik di CNR1 dan FAAH pada efek transit pengobatan DRO.

Bahan dan metode

Desain studi
Design studi ini adalah double-blind, acak, terkontrol plasebo, studi kelompok-paralel (terdaftar
di ClinicalTrials.gov, identifier NCT01253408) dari efek farmakodinamik dari DRO pada
lambung, usus kecil, dan transit kolon peserta sehat dengan IBS-D dengan kriteria Roma
III. Usia mereka antara 18 dan 69 tahun, dan indeks massa tubuh antara 21 dan 56 kg m2, dengan
BMI> 40 kg m -2.Penelitian dilakukan di Unit Penelitian Klinis di Mayo Clinic di Rochester, MN
(NIH CTSA hibah RR0024150), di mana protokol sidang penuh disimpan; penelitian dimulai
pada Oktober 2008 dan selesai pada April 2011. Studi ini disetujui oleh Mayo Clinic Institutional
Review Board, dan rencana pemantauan keamanan data yang didirikan sebelum memulai studi.

Peserta
Semua peserta direkrut dari database pasien dengan IBS yang berada dalam 150 mil dari
Rochester, MN. Peserta menyelesaikan kuesioner penyakit usus divalidasi (BDQ, termasuk yang
sesuai dengan kriteria Roma III). dan Hospital Anxiety and Depression Inventory
(HAD). Peserta yang memenuhi kriteria kelayakan untuk penelitian menjalani sejarah yang
lengkap dan pemeriksaan fisik sebelum pendaftaran. Semua kandidat disaring oleh sejarah dan
review catatan medis mereka untuk memastikan mereka CB-naif. Semua wanita usia subur harus
memiliki tes kehamilan negatif dalam waktu 48 jam dari studi. Aliran sidang diringkas
dalam Gambar.1

Gambar 1. Eksperimental desain yang menunjukkan waktu obat studi dan pengukuran angkutan scintigraphic.

Desain eksperimental
Tiga puluh enam peserta dengan IBS-D yang terdaftar dan sesuai pada protokol dengan
pengukuran lebih dari 48 jam. Peserta secara acak oral plasebo, DRO 2,5 mg, atau DRO 5 mg,
diminum dengan air putih dua kali per hari selama 2 hari, di pusat studi di bawah pengawasan
staf studi.
Pengacakan untuk kelompok perlakuan dilakukan oleh program komputer. Alokasi
tersembunyi, dan peserta dan peneliti yang buta untuk semua tugas perawatan. Penelitian
apoteker memastikan peserta ditugaskan untuk kelompok yang tepat, sesuai dengan urutan
alokasi acak. Pada studi selesai, kode pengacakan dikomunikasikan kepada statistik studi oleh
apoteker penelitian.

Farmakologi dari DRO

Dronabinol adalah delta-9-tetrahydrocannabinol sintetis (Δ9 -THC ). Ini adalah agonis CB yang
selektif, dengan afinitas untuk kedua CB 1dan CB 2 reseptor. Hal ini sangat tinggi (~95%)
diserap setelah dosis oral tunggal. Namun, metabolisme hati (terutama oleh mikrosomal
hidroksilasi) dan kelarutan lipid, hanya 10-20% dari dosis oral diberikan mencapai sirkulasi
sistemik. Onset kerja di 0,5-1 jam setelah pemberian oral, dan efek puncak pada 2-4 jam. Tahap
eliminasi mengikuti model dua kompartemen, dengan paruh awal sekitar 4 jam dan waktu paruh
terminal 25-36 jam. Ekskresi bilier adalah rute utama dari eliminasi. Onset yang cepat dan efek
puncak obat dan sifat eksperimental penelitian dengan potensi efek samping (mental, pusing, dll)
menyebabkan kita untuk memilih desain eksperimen yang diperlukan hanya 2 hari pengobatan
untuk mengamati efek akut dari DRO , daripada 7-10 hari pengobatan, yang akan diperlukan
untuk tingkat obat untuk mencapai kondisi mapan. Mengingat farmakokinetik baik diterbitkan
results dan pengamatan sebelum efek farmakologis dari DRO menggunakan desain administrasi
akut ini, kami tidak melakukan apapun pengukuran darah untuk kadar obat.

Prosedur eksperimental
Semua peserta menjalani prosedur berikut: dokumentasi kelayakan, kuesioner skrining,
dan pemeriksaan fisik dalam bulan sebelumnya.Pemeriksaan fisik termasuk pemeriksaan dubur
untuk mengecualikan gangguan evakuasi dubur. Hal ini dianggap perlu untuk memastikan diare
tidak sekunder untuk "retensi tinja dengan overflow". Peserta kemudian menjalani pengukuran
transit usus dasar (GC 24 dan GC 48 jam), off perawatan. Hari pengobatan berhubungan dengan
hari-hari pengujian angkutan scintigraphic (hari 1 dan 2) dengan peserta yang menerima obat
yang mereka secara acak. Pengukuran Scintigraphic dari lambung, usus kecil, dan transit kolon
dilakukan, menggunakan metode divalidasi sebelumnya pada hari 1 dan 2, dan diselesaikan
dengan puasa 48-jam scan pada hari 3 ketika tidak diberikan obat.
Pada hari 1 dan 2, dosis obat pagi tertelan di laboratorium penelitian, dengan peserta
puasa. Pada hari 1 , dosis pagi obat diberikan bersama-sama dengan Indium charcoal (in capsule)
yang digunakan untuk menilai transit kolon. Pada hari 2, dosis pagi obat akan diberikan setelah
24 jam scan. Dosis malam pada hari 1 dan 2 yang dicerna oleh peserta pada saat tidur di rumah
mereka. Waktu ini dipilih untuk mengurangi potensi efek samping seperti mengantuk dan
pusing, yang sebelumnya kami mengamati pada manusia yang diberikan dosis yang sama.
Dengan persetujuan yang tepat, sampel darah vena diperoleh dari semua peserta, kecuali
satu dari siapa sampel darah tidak dapat ditarik meskipun beberapa upaya venipuncture berhasil,
untuk studi ekstraksi DNA dan pharmacogenomics.

Pemilihan calon polimorfisme genetik endocannabinoid

Untuk mengatasi dampak pharmacogenetics pada respon transit DRO, kami memilih dua
varian genetik, berdasarkan temuan dalam penelitian sebelumnya kami dan frekuensi alel minor
diamati dalam database kami. FAAH dan CB 1 reseptor ekspresi telah diterjemahkan ke neuron
myenteric.
1. CNR1 adalah pengkodean gen untuk CB 1 reseptor. CNR1 rs806378 (CC vs CT / TT)
menunjukkan efek potensial pada puasa proksimal kiri motilitas kolon di IBS-D dan IBS-A
pasien. T alel dari CNR1 polimorfisme rs806378 adalah terkait dengan protein nuklir diubah
mengikat dalam uji pergeseran mobilitas elektroforesis, menunjukkan bahwa rs806378 adalah
polimorfisme fungsional. Kami memilih untuk belajar rs806378 (yang terdekat gen pada
kromosom adalah CNR1), seperti kami sebelumnya menunjukkan hubungan varian ini dengan
fungsi motorik lambung . Dalam sebuah studi oleh Vazquez-Roque et al., rs806378 CC genotipe
dikaitkan dengan penurunan volume yang lambung puasa, asosiasi tidak signifikan dengan
pengosongan lambung padat dibandingkan dengan kelompok / TT CT.
2. FAAH adalah enzim untuk metabolisme endocannabinoid, anandamide. 385C-to-A alel varian
rs324420 pada genFAAH manusia mengarah ke Pro129Thr perubahan asam amino, yang
menurunkan ekspresi protein FAAH sekunder untuk stabilitas protein berkurang. Prevalensi A
alel adalah 16-25% dalam studi bule di database NCBI. Sebelumnya, laboratorium kami
dikonfirmasi frekuensi alel A menjadi 25% pada populasi sampel kami kontrol sehat dan pasien
IBS di tenggara Minnesota. Penurunan tingkat protein FAAH dan aktivitas kompromi inaktivasi
dari anandamide endocannabinoid. Hal ini menyebabkan konsentrasi sinaptik yang lebih tinggi
dari anandamide dan, hipotetis, efek yang lebih besar dari CB eksogen, DRO, melalui aktivasi
CB 1 dan CB 2 reseptor.

Genotipe
DNA diekstraksi dari darah utuh, seperti yang dijelaskan sebelumnya. genotipe dari
rs324420 FAAH dan CNR1 rs806378 dilakukan dengan menggunakan TaqMan ™ SNP genotipe
tes (Applied Biosystems, Inc., Foster City, CA, USA) sesuai dengan instruksi produsen.

Gastrointestinal dan transit kolon

Sebuah metode scintigraphic divalidasi digunakan untuk mengukur lambung, usus kecil,
dan transit kolon. Sebuah kapsul berlapis metakrilat yang larut dalam pH basa dari ileum distal
digunakan untuk mengevaluasi angkutan kolon pada scan berurutan. Metode ini telah terbukti
untuk mendeteksi dipercepat atau ditunda transit. Pengukuran ini transit kolon yang berhubungan
dengan diubah frekuensi tinja dan konsistensi dan prediksi respon terhadap terapi untuk disfungsi
usus. Makanan standart tiga kali sehari pada hari pertama dan pasien diinstruksikan untuk makan
diet normal mereka pada hari 2.
Titik akhir primer untuk analisis adalah transit usus pada 24 jam. Titik akhir sekunder
adalah transit usus pada 48 jam. Pengosongan kolon asendingT 1/2; pengosongan lambung
T 1/2; dan pengisian kolon pada 6 jam (pengganti untuk usus kecil waktu transit).
Penilaian ukuran sampel
Tabel S1 (informasi Mendukung) menunjukkan koefisien variasi (COV) dan efek ukuran
dibuktikan dengan sekitar% kekuatan 80, dengan asumsi rata-rata n = 12 per kelompok,
menggunakan dua-sample t-test dengan tingkat α dua sisi dari 0,05.

Analisis statistik
Seluruh tim penelitian buta untuk alokasi pengobatan sampai semua studi telah selesai. Semua
subjek secara acak dimasukkan dalam analisis bawah intention-to-treat (ITT) paradigma. Subyek
dengan data yang hilang memiliki nilai-nilai yang sesuai diperhitungkan menggunakan rata-rata
keseluruhan untuk mata pelajaran yang tersisa. Analisis kovarians (ANCOVA) digunakan untuk
menilai efek pengobatan transit kolon menggabungkan BMI dan sesuai "dasar" nilai sebagai
kovariat. Penyesuaian dalam derajat kesalahan kebebasan dibuat (mengurangkan satu untuk
setiap nilai yang hilang diperhitungkan) untuk menyesuaikan perkiraan kesalahan varians dalam
model ANCOVA. Dalam model ANCOVA farmakogenetik yang dieksplorasi gen secara pengobatan
interaksi, satu pasien diacak untuk Dro 2,5 mg dikeluarkan karena dia tidak menyetujui untuk
memberikan sampel DNA.

Hasil
Peserta dan kepatuhan dengan obat
Aliran percobaan ditunjukkan pada Gambar. 1. Empat puluh enam pasien dinilai untuk
kelayakan. Tiga puluh enam relawan IBS memenuhi kriteria masuk disaring, acak, dan
menyelesaikan studi. Sebanyak 13 relawan secara acak menerima plasebo BID, 10 menerima
DRO 2,5 mg BID, dan 13 menerima DRO 5 mg BID. Satu pasien di DRO 5 kelompok mg
dihentikan obat karena suatu peristiwa yang merugikan, dan data mereka yang diperhitungkan
sesuai dengan rencana analisis statistik. Tabel dalam Gambar. 2 merangkum demografi pasien
dengan kelompok perlakuan. Tidak ada perbedaan klinis penting dalam usia, jenis kelamin, dan
indeks massa tubuh yang diamati antara kelompok perlakuan.
Gambar 2. Percobaan aliran grafik dan karakteristik dasar dari peserta studi (mean ± SEM, kecuali dinyatakan lain).

Efek farmakodinamik dari DRO pada lambung, usus kecil dan transit kolon
Tidak ada secara keseluruhan atau efek-dosis terkait pengobatan pada lambung (P = 0,88), usus
kecil (P = 0,76), dan kolon (keseluruhanP = 0,23; 2,5 mg DRO vs plasebo, P = 0,16; 5 mg DRO
vs plasebo P = 0.53) angkutan (Gambar 3A., B).
Gambar 3. (A) Pengaruh dronabinol (DRO) pada pengosongan lambung, mengisi kolon, dan pengosongan kolon
asending t 1/2. Data menunjukkan rata-rata ± SEM. (B) Pengaruh DRO transit kolon dinyatakan sebagai pusat
geometris pada 24 dan 48 jam (GC24 dan GC48, masing-masing). Data menunjukkan rata-rata ± SEM. The predrug
GC48 untuk DRO 2,5 mg tidak memiliki bar SEM karena semua pengukuran mencapai maksimal 5 unit GC.

Pharmacogenetics: pengobatan dengan efek interaksi genotipe untuk seluruh kelompok IBS
Dalam CC rs324420 FAAH kelompok genotipe nilai-nilai dasar yang cukup mirip. Tidak ada
perbedaan kualitatif untuk perubahan (Post-Pra) transit kolon dari nilai-nilai dasar pretreatment
berikut placebo atau pengobatan DRO (Gambar. 4A). Namun, dasar GC 24 nilai h dalam
subkelompok CA / AA yang agak berbeda. Dalam subkelompok ini, meskipun tampaknya ada
efek pengobatan diferensial (misalnya, plasebo vs 2,5 atau 5 mg dosis), pengobatan-dengan-gen
interaksi yang signifikan secara statistik tidak terdeteksi (P = 0,46).

Gambar 4. (A) pharmacogenetics dari rs324420 FAAH dan efek dari dua dosis dronabinol (DRO) dan plasebo
transit kolon pada 24 h (GC24). Data menunjukkan rata-rata, SEM, dan median. (B) pharmacogenetics
dari CNR1rs806378 dan efek dari dua dosis DRO dan plasebo transit kolon pada 24 h (GC24). Data menunjukkan
rata-rata, SEM, dan median.

CNR1 rs806378 CC genotipe dikaitkan dengan perubahan pasca pengobatan numerik di kolon
perjalanan GC24 dari pretreatment yang kualitatif serupa pada tiga kelompok
perlakuan (Gambar. 4B). Sebaliknya, CT / TT genotipe subkelompok menunjukkan perlambatan
transit kolon pasca-pengobatan dengan dosis kedua 2.5- dan 5-mg, berbeda dengan kelompok
plasebo, yang menunjukkan percepatan sedikit pasca perawatan. Analisis statistik menunjukkan
tidak ada perbedaan yang signifikan untuk menyarankan interaksi dosis gen secara pengobatan.
Mengingat kesamaan dalam efek memperlambat dari DRO 2.5- dan dosis 5 mg
dalam CNR1 rs806378 CT / TT kelompok genotipe, kami menguji efek perlakuan yang berbeda
potensial yang terkait dengan genotipe membandingkan plasebo dengan kelompok dosis DRO
gabungan. Seperti diilustrasikan dalam Gambar. 5, perlambatan numerik transit kolon pada 24
jam (ditunjukkan oleh data pasien individu dalam Gambar. 5A, dan dengan perubahan pasca-pra
transit kolon pada 24 jam dalam Gambar. 5B) dikonfirmasi pada kelompok genotipe CT / TT,
relatif terhadap plasebo. Sementara ini tidak signifikan secara statistik (P = 0,14 untuk delta GC
24), kurangnya terduga korelasi di pra vs pasca perawatan GC 24 nilai mengakibatkan lebih
besar dari variasi diantisipasi untuk perubahan dalam transit kolon.

Gambar 5. pharmacogenetics dari rs324420 FAAH dan CNR1 rs806378 pada pra dan pasca perawatan transit usus
GC24 untuk setiap peserta individu (A) dan perubahan dalam transit kolon pada 24 h (B) untuk kelompok perlakuan
dronabinol dikombinasikan dibandingkan dengan plasebo.

Analisis FAAH rs324420 genotipe untuk efek perlakuan yang berbeda pada pasca perawatan
dikurangi pretreatment transit usus pada 24 jam tidak signifikan (tes untuk interaksi gen-by-
pengobatan, P = 0,47).
Dampak buruk
Efek samping yang diamati tidak berbeda secara signifikan antara ketiga kelompok perlakuan.

Diskusi
Reseptor cannabinoid terletak pada neuron kolinergik di batang otak, perut, dan usus
besar. Aktivasi mereka dengan agonis reseptor CB nonselektif, DRO, menghambat pencernaan
dan eksitasi otot kolon dengan menghambat neuron kolinergik dalam sistem saraf pusat dan
enterik. Hipotesis kami secara keseluruhan adalah bahwa modulasi reseptor CB adalah target
potensial untuk terapi penyakit yang berhubungan dengan memendeknya waktu transit, seperti
dalam peningkatan fungsi motor kolon diamati pada pasien dengan IBS-D. Tentang 48% dari
pasien dengan IBS-D telah dipercepat transit usus pada 24 atau 48 jam dibandingkan dengan
kontrol yang sehat. Mengingat efek dari CB1 modulasi reseptor pada fungsi kolon dan asosiasi
variasi genetik FAAH dengan gejala diare dan transit kolon pada pasien IBS-D, kami melakukan
analisis farmakogenetik menjelajahi pengaruh variasi genetik di CB 1 reseptor dan di tingkat-
membatasi enzim katabolik untuk anandamide (FAAH) pada manusia.
Studi ini menunjukkan bahwa stimulasi reseptor CB nonselektif dengan DRO 2,5 atau 5
mg tidak secara signifikan mengubah lambung keseluruhan, usus kecil, atau transit usus pada
pasien dengan IBS-D, di antaranya sebagian besar (34/36) dalam penelitian ini adalah
perempuan. Dalam studi sebelumnya dari gastrointestinal dan transit kolon di 30 sukarelawan
sehat (tujuh laki-laki dan delapan perempuan secara acak di masing-masing dua kelompok untuk
Dro dan plasebo), kami telah mengevaluasi efek dari DRO tawaran 7,5 mg dan mengamati
penundaan yang signifikan dari pengosongan lambung pada wanita , tapi tidak ada efek
signifikan pada usus kecil atau transit kolon baik gender. Oleh karena itu, efek dari DRO pada
pasien IBS-D pada akhir primer bunga (transit usus keseluruhan) konsisten dengan efek diamati
pada subyek manusia yang sehat. Tidak adanya efek pada pengosongan lambung pada pasien
IBS-D dalam penelitian ini mungkin mencerminkan dosis rendah DRO digunakan (5 mg bid
bukan bid 7,5 mg).
Hasil penelitian ini tidak sesuai dengan pengurangan diamati di intraluminally diukur
motilitas kolon dan kepatuhan diamati dengan pengobatan DRO pasien dengan IBS
nonconstipated. Namun, perlu dicatat bahwa DRO 5 mg puasa, aktivitas dihambat tekanan
phasic kolon dan kepatuhan kolon, dan tidak ada menunjukkan efek pada kolon postprandial atau
kegiatan tekanan phasic. Secara keseluruhan, dua studi mempertanyakan apakah CB agonis
selektif yang memiliki potensi efek samping sentral dapat tertutup pada tingkat tinggi yang
cukup untuk meniru efek penghambatan motorik kolon diamati dengan 7,5 mg DRO tawaran
Jelas, perifer selektif, CB1 agen modulasi diperlukan untuk mengeksplorasi peran mekanisme
CB di kontrol atau modulasi fungsi motorik kolon .
 Di sisi lain, komponen farmakogenetik penelitian menunjukkan bahwa, bahkan dengan
sejumlah kecil pasien yang terlibat dalam subkelompok genotipe, beberapa pasien yang
membawa CNR1 rs806378 CT / TT genotipe dapat menunjukkan penundaan waktu transit kolon
dengan pengobatan DRO.
Dalam studi saat ini, kami memilih untuk menggunakan dosis maksimum yang lebih
rendah dari tawaran DRO 5 mg karena efek samping sentral mengantuk dan pusing diamati
dalam penelitian kami sebelumnya dengan dosis tunggal 7,5 DRO mg pada subyek
sehat. Sebaliknya, dosis tunggal 5 mg pada pasien IBS tidak meningkatkan stres dalam studi
sebelumnya di laboratorium kami. Kami merasa bahwa itu penting untuk membatasi dosis
maksimum untuk tawaran DRO 5 mg, karena ini dikaitkan dengan efek sentral ditoleransi dalam
studi sebelumnya, dan sebelumnya telah menunjukkan bahwa dosis 5 mg tunggal DRO akut
meningkatkan kepatuhan kolon dan mengurangi puasa motilitas kolon dalam sub kelompok
pasien IBS-D dan IBS-A. sama 5 mg dosis DRO juga meningkatkan kepatuhan kolon dan
penurunan motilitas kolon dan nada pada pria sehat dan relawan perempuan. Bahkan, efek
diferensial dari DRO (gabungan kelompok 2,5 dan 5 mg) relatif terhadap pengobatan plasebo
pada median transit usus adalah sekitar 0,80 unit pada 24 jam di CNR1 rs806378 CT / TT
kelompok genotipe. Perbedaan dalam GC24 dengan DRO relatif terhadap plasebo konsisten
dengan besarnya efek dari agen lain yang secara signifikan mempengaruhi fungsi usus, seperti
linaclotide pada pasien dengan IBS-C atau Alosetron pada pasien IBS-D, dalam hal perbedaan
antara posting -. dan pretreatment transit usus.
Kurangnya efek, dibuktikan variasi genetik di FAAH (rs324420) pada transit dalam
menanggapi DRO tidak diketahui. Namun, berbeda dengan modulasi signifikan dari efek DRO
oleh perubahan fungsi CB 1 reseptor karena variasi dalam CNR1, dapat dibayangkan bahwa hasil
perubahan FAAH hanya variasi tambahan kecil di tingkat endocannabinoid di sinaps. Sesuai
dengan hipotesis ini, variasi dalam endocannabinoid tidak cukup untuk memodifikasi efek
keseluruhan atau gabungan dari CB agonis (DRO) dan endocannabinoid mencapai CB 1 reseptor.
Studi kami menggambarkan potensi untuk agen CB untuk memodulasi fungsi kolon di IBS-D,
meskipun ini mungkin hanya berhubungan dengan subkelompok pasien, berdasarkan variasi
dalam gen untuk CB 1 reseptor. Ada kemungkinan bahwa selektivitas perifer lebih besar dari
CB 1 agonis mungkin memiliki efek lebih besar pada transit, dan seleksi yang pasien IBS
berdasarkan CNR1 rs806378 CT / TT genotipe dapat meningkatkan efek dari agen yang
bertindak atas CB 1 reseptor. Potensi CB untuk mengubah gastrointestinal dan transit kolon
diilustrasikan oleh efek dari eksperimen, agen lebih perifer selektif. Dengan demikian, dalam
studi vivo pada tikus oleh Storr dkk. 35menunjukkan bahwa agonis terbalik CB, AM251,
dipercepat angkutan pencernaan bagian atas dan seluruh usus transit, sedangkan CB antagonis
netral, AM4113, juga meningkat angkutan pencernaan bagian atas. Efek Regional antagonis CB
juga berbeda pada tikus, dengan mengurangi waktu transit kolon dengan baik AM251 dan
AM4113; sedangkan, seluruh usus transit dipercepat oleh kedua agen pada tingkat dosis
tertentu. Meskipun ada data yang menunjukkan bahwa modulasi CB dengan CB 1 dan
CB 2 antagonis reseptor dan inhibitor FAAH, AM3506, dapat mempengaruhi sensasi visceral
peradangan model atau angkutan gastrointestinal dan output fecal kolon pada tikus terkena
endotoksin, efek pada rasa sakit atau sensasi viseral dalam studi manusia telah mengecewakan.
Kekuatan dari penelitian kami meliputi metode yang divalidasi mengukur pencernaan dan
transit kolon, signifikansi klinis (jumlah dan konsistensi buang air besar) dari pengukuran
digunakan sebagai titik akhir primer (yang GC24 kolon), dan penyertaan analisis farmakogenetik
untuk menilai apakah efek DRO mungkin dipengaruhi oleh variasi genetik di CB sinyal atau
metabolisme.
Kelemahan dari penelitian ini meliputi penilaian dari hanya empat dosis DRO lebih dari 2
hari dan sifat selektif dari DRO untuk CB 1 dan CB 2 reseptor. Yang penting, penelitian kami
memiliki kekuatan yang cukup untuk mendeteksi gen secara interaksi pengobatan. Kami
melakukan analisis post hoc dari kekuatan statistik penelitian berdasarkan variasi ukuran respon
primer (GC pada 24 jam), ukuran sampel masing-masing kelompok berdasarkan genotipe
tertentu, dan pola delta GC24 h data antar empat gen-by-obat kombinasi. Menggunakan model
yang dominan genetik (homozigot utama vs heterozigot gabungan ditambah kelompok
homozigot minor), kelompok perlakuan dikategorikan sebagai plasebo dibandingkan dengan
gabungan 2.5- dan 5-mg kelompok, dan pola nilai median di Gambar. 5B, akan ada sekitar 80%
kekuatan untuk mendeteksi gen-by-pengobatan interaksi dari besarnya diilustrasikan dalam
Tabel S3, jika variasi delta (pasca-pra) nilai GC24 akan sama dengan variasi dalam nilai-nilai
GC24 dasar (SD = 1,04). Sayangnya, variasi diamati pada nilai-nilai GC24 delta lebih besar (SD
= 1,44) dan, sebagai hasilnya, ada kekuatan yang cukup untuk mendeteksi potensi gen-by-
pengobatan interaksi. Bahkan, keuntungan yang biasa diperoleh dari menggunakan dasar GC24
sebagai kovariat tidak memanifestasikan dirinya dalam penelitian ini. Singkatnya, analisis untuk
efek obat diferensial tergantung pada genotipe terbatas baik oleh ukuran sampel, serta dengan
lebih besar dari yang diharapkan variasi diamati di delta GC24. Dengan demikian, hanya ada
52% kekuatan untuk mendeteksi "interaksi" yang digambarkan oleh pola pada Tabel S3,
mengingat variasi yang diamati dalam delta GC24. Untuk mencapai daya 80% dengan SD
diamati di GC24 1,44, kita akan membutuhkan sekitar 40 pasien per kelompok pengobatan
dengan asumsi distribusi yang sama genotipe di setiap lengan (Tabel S3). Informasi ini
membantu untuk merencanakan studi masa depan.
Oleh karena itu, hasil farmakogenetik khususnya dipandang sebagai pembangkit
hipotesis. Namun, respon individu pada pasien yang membawa CNR1 rs806378 CT / TT
genotipe menunjukkan bahwa masuknya pharmacogenetics dalam penilaian obat relevan,
setidaknya pada tahap bukti-of-konsep dengan endpoint terukur.
Singkatnya, penelitian kami menunjukkan bahwa agonis reseptor CB nonselektif, DRO,
tidak secara signifikan mempengaruhi transit usus;Namun, DRO dapat menghambat perjalanan
kolon dalam subset dari pasien IBS-D, berdasarkan variasi genetik tertentu di CB 1. Sebuah
selektif CB 1 agonis mungkin memiliki potensi sebagai terapi diare-dominan pasien
IBS. Penelitian lebih lanjut untuk menilai peran terapi agonis reseptor CB selektif dalam IBS
dijamin. Uji klinis dapat ditingkatkan dengan dimasukkannya stratifikasi
berdasarkan CNR1rs806378 genotipe atau penggunaan variasi genotipe sebagai kovariat dalam
analisis hasil.