PENGOPTIMUMAN FASE GERAK KLT MENGGUNAKAN

DESAIN CAMPURAN UNTUK PEMISAHAN KOMPONEN

EKSTRAK MENIRAN (Phyllanthus niruri)

MEGA DEWINA ANGGRAENI PUSPITA

DEPARTEMEN KIMIA
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
BOGOR
2009
 ABSTRAK

MEGA DEWINA ANGGRAENI PUSPITA. Pengoptimuman Fase Gerak KLT

Menggunakan Desain Campuran Untuk Pemisahan Komponen Ekstrak Meniran
(Phyllanthus niruri). Dibimbing oleh MOHAMAD RAFI dan UTAMI DYAH
SYAFITRI.
Pemilihan fase gerak yang tepat merupakan salah satu cara untuk
mendapatkan pemisahan komponen yang baik. Ini merupakan salah satu bagian
yang menunjang analisis sidik jari yang akan digunakan sebagai alat kendali mutu
tumbuhan obat. Meniran merupakan salah satu tumbuhan obat yang digunakan
sebagai sampel pada penelitian. Pengoptimuman fase gerak diawali dengan elusi
menggunakan 13 pelarut tunggal dengan 4 macam deteksi, yaitu ultraviolet (UV)
254 nm, UV 366 nm, vanillin-asam sulfat, dan anisaldehida. Rancangan desain
campuran dengan simplex centroid dipilih untuk memberikan beberapa kombinasi
dari 3 pelarut terpilih, yaitu aseton, diklorometana, dan kloroform. Berdasarkan
piranti lunak Minitab 14, titik optimum saat menggunakan deteksi UV 366 nm
didapat dengan nisbah kloroform dan diklorometana 0.6553:0.3447 sedangkan
titik optimum saat menggunakan deteksi vanillin-asam sulfat didapat dengan
nisbah kloroform dan diklorometana 0.0741:0.9259. Hasil keduanya dapat
dikatakan baik karena menghasilkan nilai R2 yang cukup besar, yaitu 91.56%
untuk deteksi UV 366 nm dan 95.16% untuk deteksi vanillin-asam sulfat.

ABSTRACT

MEGA DEWINA ANGGRAENI PUSPITA. Optimization TLC Mobile Phase

Using Mixture Design for Separating Meniran Extract Component (Phyllanthus
niruri). Under the direction of MOHAMAD RAFI and UTAMI DYAH
SYAFITRI.
The right mobile phase selection is one of methods to obtain a good
component separation. This is the one of method to support fingerprint analysis
that will be used as a quality control tool of herbal medicines. Meniran is one of
herbal medicines that used as a sample in this study. Mobile phase optimization
was started with elution by using 13 single solvents with 4 kind of detections,
namely ultraviolet (UV) 254 nm, UV 366 nm, vanillin-sulfuric acid, and
anisaldehyde. Mixture design with simplex centroid scheme is selected to give
some combinations from 3 selected solvents, they are acetone, dichloromethane,
and chloroform. According to Minitab 14 software, optimum point when using
UV 366 nm detection was obtained using chloroform and dichloromethane ratio
of 0.6553:0.3447, whereas the optimum point was obtained of using vanillin-
sulfuric acid detection with chloroform and dichloromethane ratio of
0.0741:0.9259. Both detections results are considered good in terms of high R2
value, with 91.56% for UV 366 nm detection and 95.16% for vanillin-sulfuric
acid detection.
PENGOPTIMUMAN FASE GERAK KLT MENGGUNAKAN
DESAIN CAMPURAN UNTUK PEMISAHAN KOMPONEN
EKSTRAK MENIRAN (Phyllanthus niruri)

MEGA DEWINA ANGGRAENI PUSPITA

Skripsi
sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar
Sarjana Sains pada
Departemen Kimia

DEPARTEMEN KIMIA
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
BOGOR
2009
Judul : Pengoptimuman Fase Gerak KLT Menggunakan Desain Campuran untuk
Pemisahan Komponen Ekstrak Meniran (Phyllanthus niruri)
Nama : Mega Dewina Anggraeni Puspita
NIM : G44050802

Menyetujui

Pembimbing I, Pembimbing II,

Mohamad Rafi, S.Si., M.Si

Utami Dyah Syafitri, S.Si., M.Si
NIP 197703162006041010 NIP 197709172005012001

Mengetahui :

Ketua Departemen,

Prof. Dr. Ir. Tun Tedja Irawadi, MS

NIP 195012271976032002

Tanggal Lulus :
 PRAKATA

Puji dan syukur ke hadirat Allah SWT karena berkat rahmat dan hidayah-
Nya, penulis dapat menyusun dan menyelesaikan karya ilmiah. Karya ilmiah ini
disusun berdasarkan penelitian yang dilaksanakan pada bulan Mei sampai Agustus
2009 di Laboratorium Kimia Analitik, Departemen Kimia FMIPA IPB, dan
Laboratorium Pusat Studi Biofarmaka IPB, Bogor.
Penulis mengucapkan terima kasih kepada ayah, ibu, nenek, serta keluarga
yang telah memberikan kasih sayang, dorongan, dan doa kepada penulis selama
menempuh studi, penelitian, dan penulisan karya tulis ini. Selain itu, penulis juga
mengucapkan terima kasih kepada Bapak Mohamad Rafi S.Si., M.Si selaku
pembimbing pertama dan Ibu Utami Dyah Syafitri S.Si., M.Si selaku pembimbing
kedua yang telah banyak memberi arahan, saran, dan solusi setiap permasalahan
yang dihadapi penulis selama melaksanakan penelitian. Penghargaan juga penulis
sampaikan kepada Bapak Atep, Ibu Wulan, dan Mbak Salina atas segala diskusi
dan saran berkaitan dengan penelitian.
Penulis juga mengucapkan terima kasih kepada Bapak Eman, Ibu Nunung,
Ibu Nunuk, Mas Zaim, Mas Endi, dan Mas Neo atas segala bantuannya selama
penelitian. Tak lupa, ungkapan terima kasih penulis sampaikan kepada rekan-
rekan peneliti di Laboratorium Analitik dan Pusat Studi Biofarmaka, rekan-rekan
kimia 42 (Rita, Vicky, Dwi, Leni, Jayanti, Deri, Ida, dan Riki), rekan-rekan
Basket FMIPA (Lena, Eyyi, Riken, Ami, dan Wiwid), serta rekan-rekan Basket
IPB atas kebersamaan selama penulis menempuh studi dan menjalankan
penelitian.
Semoga karya ilmiah ini bermanfaat bagi ilmu pengetahuan. Amin.

Bogor, Oktober 2009

Mega Dewina Anggraeni Puspita

 RIWAYAT HIDUP

Penulis dilahirkan di Bogor pada tanggal 19 Desember 1986 dari ayah

Hendra dan ibu Moelyati Moeloek. Penulis merupakan putri tunggal.
Tahun 2005 penulis lulus dari SMA Negeri 2 Bogor dan pada tahun yang
sama lulus seleksi masuk IPB melalui jalur Undangan Seleksi Masuk IPB. Penulis
memilih Program Studi Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam.
Selama mengikuti perkuliahan, penulis menjadi asisten praktikum mata
kuliah Kimia Lingkungan pada tahun ajaran 2007/2008, Kimia Analitik Layanan
pada tahun ajaran 2007/2008, Elektroanalitik dan Teknik Pemisahan serta
Kromatografi 2 pada tahun ajaran 2008/2009. Pada tahun 2006/2007 penulis
terpilih menjadi staf divisi PSDM (Pengembangan Sumber Daya Mahasiswa)
Badan Eksekutif Mahasiswa FMIPA IPB dan staf divisi Chem_Art Ikatan
Mahasiswa Kimia (Imasika) IPB. Pada tahun 2007/2008 penulis menjadi ketua
departemen divisi Edutainment (Education and Entertainment) Ikatan Mahasiswa
Kimia (Imasika) IPB. Tahun 2008 penulis menjadi perwakilan tim bolabasket
putri IPB mengikuti kompetisi Libama (Liga Bolabasket Mahasiswa) tingkat Jawa
Barat.

\
 DAFTAR ISI
Halaman
DAFTAR TABEL ..................................................................................................ii
DAFTAR GAMBAR ..............................................................................................ii
DAFTAR LAMPIRAN .........................................................................................iii
PENDAHULUAN ..................................................................................................1
TINJAUAN PUSTAKA
Kromatografi Lapis Tipis (KLT) ...................................................................1
Fase Gerak......................................................................................................2
Desain Campuran ..........................................................................................2
Meniran ..........................................................................................................2
Evaluasi Kinerja Analitik ..............................................................................3
BAHAN DAN LINGKUP KERJA
Alat dan bahan ...............................................................................................3
Lingkup Kerja ................................................................................................3
HASIL DAN PEMBAHASAN
Kadar Air .......................................................................................................5
Rendemen Ekstrak .........................................................................................5
Pelarut Terbaik ..............................................................................................5
Penentuan titik Optimum dari 3 Pelarut Menggunakan Desain
Campuran.......................................................................................................7
Limit Deteksi .................................................................................................8
Evaluasi Kinerja Analitik ..............................................................................8
SIMPULAN DAN SARAN
Simpulan ......................................................................................................10
Saran ............................................................................................................10
DAFTAR PUSTAKA ...........................................................................................10
LAMPIRAN ..........................................................................................................12
 DAFTAR GAMBAR

Halaman
1 Bejana berisi pelat KLT dan larutan pengembang.................................22
.............................................................................................Tanaman meniran
........................................................................................................................3
3 Titik selektivitas berdasarkan rancangan simplex centroid......................4
4 Jumlah bercak yang dihasilkan ekstrak refluks dan maserasi mengguna-
kan deteksi UV 254 dan 366 nm ...................................................................6
5 Jumlah bercak yang dihasilkan ekstrak refluks dan maserasi mengguna-
kan deteksi vanilin-asam sulfat dan anisaldehida .........................................6
6 Hasil elusi ekstrak refluks (kiri) dan maserasi (kanan) menggunakan
pelarut asam asetat (A), aseton (B), etanol (C), n-butanol (D),
kloroform (E), diklorometana (F), n-heksana (G), dan toluena (H)
menggunakan deteksi UV 366 nm ................................................................7
7 Jumlah bercak yang dihasilkan deteksi vanilin-asam sulfat dan UV 366
nm menggunakan 10 jenis komposisi fase gerak ..........................................7
8 Daerah optimum untuk deteksi UV 366 nm (A) dan deteksi vanilin-
asam sulfat (B)................................................................................................8
9 Hasil deteksi UV 366 nm untuk ekstrak 2500 (A), 5000 (B), 7500 (C),
dan 10000 mg/L (D).......................................................................................8
10 Interaksi antara banyaknya bercak yang tampak selama 5 hari dengan
nilai Rf setiap bercak untuk deteksi vanilin-asam sulfat ...............................9
11 Interaksi antara banyaknya bercak yang tampak selama 5 hari dengan
nilai Rf setiap bercak untuk deteksi UV 366 nm ..........................................9

DAFTAR TABEL

Halaman1................................................Macam-macam senyawa dalam meniran

..................................................................................................................................3
2 Rancangan komposisi fase gerak ...................................................................5

ii
 DAFTAR LAMPIRAN

Halaman1............................................................................Diagram alir penelitian

................................................................................................................................13
2 Perhitungan kadar air ...................................................................................14
3 Perhitungan rendemen ekstrak ....................................................................15
4 Penggolongan pelarut oleh Snyder’s ...........................................................16
5 Jumlah bercak saat elusi menggunakan 13 macam pelarut tunggal ............17
6 Hasil elusi dengan 13 macam pelarut tunggal untuk deteksi UV 254 nm ...18
7 Hasil elusi dengan 13 macam pelarut tunggal untuk deteksi UV 366 nm ...19
8 Hasil elusi dengan 13 macam pelarut tunggal untuk deteksi vanilin-
asam sulfat ...................................................................................................20
9 Hasil elusi dengan 13 macam pelarut tunggal untuk deteksi
anisaldehida .................................................................................................21
10 Jumlah bercak saat elusi menggunakan 10 komposisi fase gerak ...............22
11 Hasil elusi dengan campuran pelarut kloroform, diklorometana, dan
aseton untuk deteksi UV 366 nm .................................................................23
12 Hasil elusi dengan campuran pelarut kloroform, diklorometana, dan
aseton untuk deteksi vanilin-asam sulfat .....................................................24
13 Model yang dihasilkan Minitab 14 untuk deteksi UV 366 nm ...................25
14 Model yang dihasilkan Minitab 14 untuk deteksi vanilin-asam sulfat ........26
15 Hasil keterulangan selama 5 hari dengan menggunakan deteksi
vanillin-asam sulfat .....................................................................................27
16 Hasil keterulangan selama 5 hari dengan menggunakan deteksi
UV 366 nm ..................................................................................................29
17 Rerata nilai Rf setiap bercak ........................................................................31
18 Selisih nilai Rf setiap bercak selama 5 hari ..................................................34
19 Hasil analisis rancangan acak kelompok menggunakan Minitab 14
untuk deteksi vanilin-asam sulfat ................................................................35
20 Hasil analisis rancangan acak kelompok menggunakan Minitab 14
untuk deteksi UV 366 nm ............................................................................37
21 Nilai simpangan baku setiap bercak selama 5 hari ......................................39
22 Nilai resolusi setiap bercak selama 5 hari ...................................................42

PENDAHULUAN

iii
 Perkembangan penggunaan obat-obatan
tradisional khususnya dari tumbuh-tumbuhan
sudah cukup meluas. Salah satu jenis
tumbuhan yang dapat digunakan sebagai obat
ialah meniran (Phyllanthus niruri) (Osward
1995). Meniran merupakan salah satu
tumbuhan obat yang efektif mengobati
beragam penyakit, di antaranya batu ginjal
atau empedu, infeksi saluran pernafasan atas,
diabetes, diare, malaria atau demam, radang
ginjal, epilepsi atau ayan, influenza, hepatitis,
gonorhoe, dan TBC (Kardinan & Kusuma
2004). Akhir-akhir ini meniran banyak diteliti
karena bersifat immunostimulan atau dapat
menjaga kekebalan tubuh. Oleh karena
banyaknya manfaat dari meniran, kendali
mutu meniran perlu dilakukan agar lebih
efektif pemanfaatannya. Kendali mutu
tumbuhan obat sangat sulit dilakukan karena
selain banyaknya komponen kimia penyusun
didalamnya juga antara komponen aktif yang
berguna maupun komponen yang bersifat
racun sulit dibedakan.
Dilatarbelakangi sulitnya melakukan
kendali mutu tumbuhan obat dengan adanya
ratusan komponen kimia di dalamnya maka
diperlukan suatu metode analisis untuk
mengatasi masalah tersebut. Menurut
Delaroza & Scarminio (2008) analisis sidik
jari merupakan metode analisis yang dapat
mengatasi masalah tersebut. Analisis sidik jari
membantu dalam hal klasifikasi dan validasi
spesies botani serta kendali mutu dari
tumbuhan obat (Borges et al. 2007). Beberapa
hal yang diperlukan untuk menunjang metode
analisis sidik jari, di antaranya pemilihan fase
diam, metode derivatisasi, pemilihan bejana
kromatografi, dan pemilihan fase gerak yang
tepat. Oleh karena itu, pada penelitian ini
dilakukan pemilihan fase gerak sebagai salah
satu cara mendapatkan pemisahan komponen
yang baik yang akan menunjang metode
analisis sidik jari. Penelitian ini bertujuan
menentukan pelarut yang digunakan sebagai
fase gerak serta komposisi fase gerak yang
paling optimum menggunakan desain
campuran untuk ekstrak meniran.
Penelitian mengenai pengoptimuman fase
gerak sudah banyak dilakukan di antaranya
oleh Cano et al. (2006), Borges et al. (2007),
Delaroza & Scarminio (2008), dan Nyiredy et
al. (2003). Semua teknik analisis yang
digunakan ialah kromatografi cair kinerja
tinggi (KCKT). Teknik kromatografi lapis
tipis (KLT) dipilih pada penelitian ini karena
memiliki beberapa keunggulan, yaitu mudah
dalam preparasi sampel, kesederhanaan dalam
prosedur kerja, biaya operasional yang rendah
(relatif murah) karena sampel dan standar
dapat diujikan dalam waktu yang sama,
volume pelarut yang digunakan sedikit,
selektif dan sensitif, serta kromatogramnya
dapat diamati secara visual (Kimura et al.
2008).
Suatu metode percobaan yang tepat
diperlukan untuk menggambarkan fase gerak
yang optimum. Berbagai macam rancangan
percobaan dibangun untuk menentukan
kondisi optimum guna memberikan hasil
respons yang baik, di antara lain rancangan
faktorial (factorial design), rancangan respons
permukaan (respons surface design), dan
desain campuran (mixture design) (Nutan
2004). Desain campuran menitikberatkan pada
nilai yang konstan dari penjumlahan tingkatan
faktor untuk setiap kombinasi. Metode
simplex centroid merupakan salah satu bagian
dalam desain campuran yang dirancang untuk
melengkapi ulasan percobaan mengenai
respons permukaan pada bagian tengah bidang
(Anderson & McLean 1974). Metode ini
memiliki beberapa keunggulan, yaitu cepat,
mudah, dan biaya lebih efektif. Oleh karena
itu, desain campuran dipilih dalam penelitian
ini dengan menggunakan metode simplex
centroid. Berdasarkan metode tersebut kondisi
optimum dari fase gerak dapat dilihat baik
secara kualitatif maupun kuantitatif. Secara
kualitatif dengan melihat penampakan kurva
dan secara kuantitatif berdasarkan persamaan
regresi yang dihasilkan.
TINJAUAN PUSTAKA
Kromatografi Lapis Tipis (KLT)
KLT
merupakan salah satu teknik pemisahan.
Cuplikan yang akan dipisahkan akan
terdistribusi diantara 2 fase, yaitu fase diam
dan fase gerak sehingga akan terurai menjadi
komponen-komponen tunggal (Stoenoiu et al.
2006). Secara luas KLT banyak digunakan
untuk berbagai tugas analisis tumbuhan obat.
Penciri berupa kromatogram, kromatogram
yang dihasilkan merupakan pola yang
menggambarkan senyawa dalam setiap
tumbuhan obat sehingga bermanfaat dalam
kendali mutu tumbuhan obat baik untuk
pencirian bahan mentah maupun produk akhir.
Beberapa faktor yang menunjang teknik
KLT di antaranya 1) fase diam, ukuran
partikel penunjang fase diam berperan
penting, semakin kecil dan seragam akan

meningkatkan daya pemisahan, fase diam
yang paling banyak digunakan untuk KLT
adalah silika gel karena silika mempunyai
kekuatan pemisahan yang sangat baik
(Nyiredy 2002), 2) penotolan cuplikan,
penotolan dapat dilakukan secara manual
ataupun otomatis, untuk mendapatkan resolusi
optimum maka penotolan sampel baik berupa
bercak ataupun pita harus sekecil mungkin
sehingga untuk mengatasi volume cuplikan
saat penotolan, penggunaan penotol otomatis
lebih disukai, 3) fase gerak, pemilihan fase
gerak sangat penting dalam teknik KLT,
dipilih berdasarkan adsorben yang digunakan
pada fase diam dan struktur komponen yang
akan dipisahkan, komposisi yang digunakan
harus sesederhana mungkin, 4) bejana
kromatografi, berbagai macam bejana
kromatografi dapat digunakan, disesuaikan
dengan metode yang ada, dan 5) derivatisasi,
dalam kendali mutu tumbuhan obat,
derivatisasi sangat diperlukan untuk
memunculkan komponen yang telah
dipisahkan dan untuk memberikan hasil
spesifik dari analisis sidik jari, derivatisasi
dapat dilakukan dengan pencelupan ataupun
penyemprotan dengan suatu reagen (Koll et
al. 2003). Gambar 1 memperlihatkan
penggunaan teknik KLT.
Penutup gelas
Bejana
Pelat KLT
Garis awal
penotolan
Pelarut
Bercak
Gambar 1 Bejana berisi pelat KLT dan
larutan pengembang.
Fase Gerak
Fase gerak merupakan medium angkut
yang terdiri atas satu atau beberapa pelarut.
Fase gerak bergerak dalam fase diam karena
adanya gaya kapiler. Pelarut yang digunakan
sebagai fase gerak hanyalah pelarut bertingkat
mutu analitik dan bila diperlukan sistem
pelarut multikomponen ini harus berupa suatu
campuran yang sesederhana mungkin yang
terdiri atas maksimum 3 komponen. Angka
2
banding campuran dinyatakan dalam bagian
volume total 100 (Nyiredy 2002). Pelarut
pengembang dikelompokkan ke beberapa
golongan oleh Snyder’s berdasarkan kekuatan
pelarutnya (Lampiran 4).
Menurut Stahl (1985) eluen atau fase
gerak yang digunakan dalam KLT
dikelompokkan ke dalam 2 kelompok, yaitu
untuk pemisahan senyawa hidrofil dan lipofil.
Eluen untuk pemisahan senyawa hidrofil
meliputi air, metanol, asam asetat, etanol,
isopropanol, aseton, n-propanol, tert-butanol,
fenol, dan n-butanol sedangkan untuk
pemisahan senyawa lipofil meliputi etil asetat,
eter, kloroform, benzena, toluena,
sikloheksana, dan petroleum eter.
Desain Campuran
Desain campuran adalah desain dalam
suatu percobaan jika terdapat campuran dari
beberapa faktor, maka penjumlahan tingkatan
faktor untuk setiap kombinasi perlakuan
konstan atau tetap. Terdapat 3 metode yang
termasuk dalam desain campuran, yaitu
simplex lattice, simplex centroid, dan extreme
vertices (Scheffe 1958). Simplex lattice dan
simplex centroid adalah salah satu metode
rancangan yang terkenal dari penentuan ciri
respons permukaan. Titik tengah ditempatkan
dalam model dengan menemukan rata-rata
tingkatan dari semua faktor yang terlibat
simplex. Rancangan 3 komponen dapat
digambarkan dalam segitiga sama sisi dalam
dua dimensi (Anderson & McLean 1974).
Setiap dimensi menggambarkan variabel dan
koordinat dari setiap faktor yang
menggambarkan kondisi untuk satu
percobaan. Beberapa persamaan polinomial
yang dihasilkan dari rancangan simplex,
misalnya linear, kuadratik, spesial kubik,
kubik, dan kuartik.
Meniran
Meniran (Phyllanthus niruri) merupakan
tumbuhan liar yang berasal dari Asia Tropik
yang tersebar di seluruh Asia, termasuk
Indonesia (Kardinan & Kusuma 2004).
Meniran memiliki batang berbentuk bulat,
basah, dan tingginya kurang dari 50 cm. Daun
bersirip genap dan setiap satu tangkai daun
terdiri dari daun mejamuk yang mempunyai
ukuran kecil dan berbentuk lonjong (Gambar
2). Bunga terdapat pada ketiak daun
menghadap ke arah bawah. Di Jawa tanaman
ini disebut meniran tetapi di tempat lain,
disebut gasau madungi (Ternate), child pick a

back (Inggris), kilanelli (India), dan ye xia zhu
(Cina) (Yuniarti 2008).
Gambar 2 Tanaman meniran.
Meniran merupakan tumbuhan obat yang
banyak memiliki berbagai senyawa kimia.
Tabel 1 menunjukkan macam-macam
senyawa kimia pada tumbuhan obat meniran,
Tabel 1 Macam-macam senyawa dalam
meniran
Senyawa Jenis
Lignin Filantina, niratin, nirunin,
filtetralin, hipofilantina,
lintretalin, nirurisida, dan
nirfilin
Terpena Simena, limonena, lupeol,
dan lupeol asetat
Flavonoid Rutina, fisetinglukosida
astragalin, kuersetin,
rutina, kuersitrin, dan
isokuersitrin
Lipid Asam risinoleat, asam
linoleat, asam linolenat,
dotriankontanoat
Benzenoid Metilsalisilat
Alakaloid Norsekurinina, filokrisina,
entnorsekurinina, nirurina,
dan 4-metoksi-norsekurinina
Steroid β-sitosterol
Tanin
Vitamin Vitamin C dan K
Sumber: Kardinan & Kusuma 2004.
Secara empiris dan klinis, herba meniran
berfungsi sebagai antibakteri, antiheptoksik,
antipiretik, antitusif, antiradang, antivirus,
3
diuretik, ekspektoran, hipoglikemik, serta
sebagai immunostimulan. (Kardinan &
Kusuma 2004).
Evaluasi Kinerja Analitik
Pengembangan metode analisis dilakukan
untuk mencari metode yang sesuai dan cepat
untuk pengukuran sampel tertentu. Metode
baru tersebut belum tentu dapat digunakan
untuk suatu pengukuran, sehingga perlu
dilakukan evaluasi kinerja analitiknya.
Evaluasi tersebut bertujuan mengetahui sejauh
mana metode tersebut dapat digunakan dan
hasilnya terhadap metode standar yang sudah
ada. Evaluasi kinerja analitik yang dilakukan
ialah presisi.
Presisi suatu prosedur analisis merupakan
kedekatan nilai dari serangkaian pengukuran
yang diukur pada kondisi yang sama. Presisi
terbagi menjadi 2, yaitu keterulangan
(repeatibility) dan ketertiruan (reproduci
bility). Keterulangan merupakan presisi yang
diukur dari hasil penetapan ulangan dengan
menggunakan metode, operator, peralatan,
pereaksi laboratorium, dan waktu yang sama.
Ketertiruan merupakan presisi yang diukur
dari hasil penetapan ulangan dengan
menggunakan metode, operator, peralatan,
pereaksi laboratorium, dan waktu yang
berbeda (Currell 2000).
BAHAN DAN LINGKUP KERJA
Alat dan Bahan
Alat-alat yang digunakan selama
penelitian, di antaranya Heidolph Titramax
101, Buchi Rotavapor R-114, Camag Linomat
5, dan Camag Reprostar 3 dengan didukung
piranti lunak winCATS. Bahan yang
digunakan selama penelitian ialah tanaman
meniran dari kebun penelitian Pusat Studi
Biofarmaka, Bogor.
Lingkup Kerja
Tahapan yang dilakukan dalam penelitian
ini terdiri atas ekstraksi serbuk tanaman
meniran dengan cara refluks dan maserasi,
penentuan kadar air, pemilihan pelarut sebagai
fase gerak, penentuan komposisi fase gerak
dengan rancangan simplex centroid, deteksi
komponen, perhitungan limit deteksi, dan
evaluasi kinerja analitik.
Penentuan Kadar Air

Cawan porselen dibersihkan dan
dikeringkan dalam oven bersuhu 105 °C
selama 30 menit dan ditimbang (W1).
Sebanyak 3 g serbuk tanaman meniran
ditimbang teliti dan dimasukkan ke dalam
cawan tersebut (W2), kemudian dimasukkan
ke dalam oven bersuhu 105 °C selama 3 jam.
Cawan beserta isinya dipindahkan ke dalam
eksikator selama 15 menit sebelum ditimbang
bobotnya. Pengukuran bobot sampel ini
diulangi setiap 1 jam sampai diperoleh bobot
konstan (W3). Perlakuan diulang sebanyak 3
kali. Kadar air (M) ditentukan sebagai berikut:
W2  W3
M   100%
W2  W1
Ekstraksi dengan Refluks
Serbuk tanaman meniran ditimbang
sebanyak 100 g lalu dimasukkan ke dalam
labu bulat beralas 1 L. Selanjutnya
dimasukkan etanol 96% sebanyak 500 mL
hingga semua bahan terendam. Serbuk
direndam selama 6 jam sambil sesekali
diaduk, lalu direfluks selama 3 jam. Hasil
refluks disaring dan dipindahkan ke labu bulat
lain sedangkan ampas direfluks dengan cara
yang sama sebanyak 2 kali. Hasil refluks
diuapputarkan kemudian dikeringbekukan
sehingga didapat ekstrak kental (BPOM
2004).
Ekstraksi dengan Maserasi
Ekstrak dibuat dengan cara maserasi
menggunakan etanol 96%. Sebanyak 100 g
serbuk tanaman meniran dimasukkan ke
dalam erlenmeyer 1 L kemudian ditambahkan
500 mL etanol 96%. Pada sampel dilakukan
perendaman selama 6 jam menggunakan
maserator, selanjutnya didiamkan selama 24
jam. Maserat dipisahkan dan dipindahkan ke
erlenmeyer lain, sedangkan ampas
diperlakukan sama sebanyak 2 kali maserasi.
Ekstrak kasar yang didapat diuapputarkan
kemudian dikeringbekukan sehingga
diperoleh ekstrak kental (BPOM 2004).
Pemilihan Pelarut Sebagai Fase Gerak
Penotolan sampel
Ekstrak kental yang telah didapat
dilarutkan dengan sedikit etanol 96% hingga
diperoleh konsentasi 10000 mg/L. Penotolan
pada pelat KLT dilakukan dengan
4
menggunakan KLT aplikator, yaitu Camag
Linomat 5.
Pemilihan pelarut
Pemilihan 3 pelarut untuk fase gerak yang
akan digunakan dengan menguji 13 pelarut
tunggal. Sebanyak 10 mL masing-masing
pelarut, yaitu n-heksana, dietil eter, n-
butanol, etanol, metanol, tetrahidrofuran,
asam asetat, diklorometana, etil asetat, aseton,
toluena, asetonitril, dan kloroform
dimasukkan ke dalam bejana kromatografi
dan dijenuhkan selama 20 menit. Setelah itu,
pelat KLT yang telah berisi cuplikan
dimasukkan ke dalam bejana kromatografi,
pengembangan dilakukan hingga eluen (fase
gerak) mencapai jarak ± 0.5 cm dari tepi atas
pelat. Pelat diangkat dan dikeringkan.
Identifikasi dilakukan untuk melihat bercak
yang muncul pada pelat. Tiga pelarut yang
dipilih, yaitu yang memberikan penampakan
bercak terbanyak dan memiliki pemisahan
yang baik dengan mewakili sifat polar,
semipolar, dan nonpolar.
Komposisi Fase Gerak dengan Rancangan
Simplex Centroid
Setelah 3 pelarut dipilih, komposisi dari
fase gerak dirancang menggunakan desain
campuran (Gambar 3) (Almeide & Scarminio
2007). Pada Gambar 3, titik A dimisalkan
pelarut A, titik B pelarut B, dan titik C pelarut
C.
A
(1,0,0)
(1/2,1/2,0) (1/2,0,1/2)
(2/3,1/6,1/6)
(1/6,2/3,1/6) (1/6,1/6,2/3)
(1/3,1/3,1/3
B (0,1/2,1/2) C
(0,1,0) (0,0,1)
Gambar 3 Titik selektivitas berdasarkan
rancangan simplex centroid.
 5

Tiga digit angka menggambarkan Evaluasi Kinerja Analitik

komposisi dari tiap pelarut yang digunakan.
Tiga digit angka yang digunakan dalam Evaluasi kinerja analitik yang dilakukan
penelitian ini di antaranya ditampilkan dalam berupa keterulangan. Selama 5 hari, fase
Tabel 2. Selanjutnya, setiap fase gerak gerak yang optimum diuji. Setiap harinya
diujikan dengan meletakkan cuplikan pada dilakukan pengujian pada pagi, siang, dan
setiap fase gerak. Setelah itu, dilakukan sore hari.
pengeringan pelat dan pendeteksian
komponen. HASIL DAN PEMBAHASAN
Tabel 2 Rancangan komposisi fase gerak Kadar Air
Fase Perbandingan Komposisi
Gerak Pelarut (v/v/v) Penelitian ini diawali dengan penentuan
kadar air. Penentuan kadar air berguna untuk
  A B C mengetahui ketahanan suatu bahan agar dapat
diperkirakan cara penyimpanan terbaik bagi
1 1 0 0
sampel untuk menghindari pengaruh aktivitas
2 0 0 1 mikrob (jamur). Kadar air serbuk tanaman
meniran sebesar 6.48% (Lampiran 2).
3 0 1 0 Kandungan air pada sampel cukup rendah
4 1/2 0 1/2 sehingga menunjukkan bahwa serbuk tanaman
meniran dapat disimpan dalam waktu yang
5 0 1/2 1/2 relatif lama. Hal ini sesuai dengan pernyataan
6 1/2 1/2 0 Winarno (1997), yaitu bila kadar air yang
terkandung dalam suatu bahan kurang dari
7 1/3 1/3 1/3 10% maka kestabilan optimum bahan akan
8 1/6 2/3 1/6 tercapai dan pertumbuhan mikrob dapat
dikurangi.
9 1/6 1/6 2/3
10 2/3 1/6 1/6 Rendemen Ekstrak

Rendemen ekstrak tertinggi didapat

Deteksi Komponen
Deteksi komponen dilihat dengan
beberapa cara. Deteksi pertama, pelat
disemprot dengan campuran larutan vanillin
(1 g) dalam 100 mL asam sulfat:etanol (5:95,
v/v). Setelah dikeringkan, pelat dipanaskan di
dalam oven dengan suhu 110 °C selama 5-10
menit untuk memunculkan warna dari bercak
(Tripathi et al. 2006). Kedua, setelah pelat
dikeringudarakan selama 5-10 menit
kemudian pelat disinari dengan ultraviolet
(UV) 254 nm dan UV 366 nm, bercak akan
terlihat (Fernand 2003). Ketiga, pelat
disemprot dengan anisaldehida.
Penentuan Limit Deteksi
Sebanyak 0.3125 g ekstrak pekat meniran
dibuat larutan stok 12500 mg/L dalam etanol.
Larutan stok ekstrak etanol dibuat ragam
konsentrasi 2500, 5000, 7500, dan 10000
mg/L. Setelah itu, diujikan dengan KLT.
melalui ekstraksi menggunakan metode
refluks. Hasil rendemen menunjukkan nilai
8.62% untuk metode refluks dan 3.94% untuk
metode maserasi dari 100 g sampel yang
diekstraksi (Lampiran 3). Metode refluks
menunjukkan hasil yang lebih tinggi karena
adanya tambahan panas sehingga sampel
cepat terekstraksi secara menyeluruh.
Sementara pada metode maserasi, sampel
hanya dikocok saja tanpa ada bantuan panas
sehingga sampel tidak terekstraksi secara
menyeluruh.
Pelarut Terbaik
Pemilihan 3 pelarut yang akan digunakan
sebagai fase gerak atau eluen, dimulai dengan
menguji ke-13 pelarut tunggal seperti tertera
pada Lampiran 4. Sampel yang digunakan,
yaitu ekstrak refluks dan maserasi dengan
menggunakan 4 metode pendeteksian, yaitu
dengan lampu UV 254 dan 366 nm, vanilin-
asam sulfat, serta anisaldehida. Terlihat pada
Gambar 4 dan 5, pelarut yang terbanyak
 6

memunculkan bercak, yaitu kloroform, diklorometana, dan dietil eter.

Gambar 4 Jumlah bercak yang dihasilkan ekstrak refluks dan maserasi menggunakan deteksi UV
254 dan 366 nm.
Keterangan :
= Ekstrak refluks menggunakan deteksi UV 254 nm
= Ekstrak maserasi menggunakan deteksi UV 254 nm
= Ekstrak refluks menggunakan deteksi UV 366 nm
= Ekstrak maserasi menggunakan deteksi UV 366 nm

Gambar 5 Jumlah bercak yang dihasilkan ekstrak refluks dan maserasi menggunakan deteksi
vanilin-asam sulfat dan anisaldehida.
Keterangan :
= Ekstrak refluks menggunakan deteksi vanilin-asam sulfat
= Ekstrak maserasi menggunakan deteksi vanilin asam-sulfat
= Ekstrak refluks menggunakan anisaldehida
= Ekstrak maserasi menggunakan anisaldehida

Masing-masing pendeteksian memunculkan mendeteksi terpenoid dan minyak atsiri

jumlah bercak yang berbeda-beda.
Perbedaan munculnya bercak ini karena
setiap pendeteksian mempunyai fungsi yang
berbeda-beda, yaitu pendeteksian dengan UV
254 nm untuk alkaloid, flavonoid, dan
triterpena serta UV 366 nm untuk flavonoid,
alkaloid, triterpena, dan lignan (Fernand
2003). Sementara anisaldehida untuk
(Santosa & Hertiani 2005) serta vanilin-asam
sulfat untuk mendeteksi fenilpropena,
monoterpena, dan seskuiterpena (Harborne
1987).
Selain pendeteksian, disebabkan juga oleh
kekuatan dari setiap pelarut dalam mengelusi
sampel. Mengacu pada Gambar 6 A-D,
terlihat bahwa pelarut yang terlalu polar
 7

menunjukkan bercak terlalu tertarik mendekati garis akhir. Selain itu, bercak yang
dihasilkan berekor.

A B C D E F G H

Gambar 6 Hasil elusi ekstrak refluks (kiri) dan maserasi (kanan) menggunakan pelarut asam asetat
(A), aseton (B), etanol (C), n-butanol (D), diklorometana (E), kloroform (F), n-heksana
(G), dan toluena (H) menggunakan deteksi UV 366 nm.

Begitu juga dengan pelarut yang terlalu

nonpolar (Gambar 6 G-H) menunjukkan
bercak sedikit terangkat dan cenderung berada
di sekitar penotolan awal. Lain halnya dengan
pelarut-pelarut yang mempunyai sifat
semipolar (Gambar 6 E-F) seperti pelarut
yang terpilih, selain banyak memunculkan
bercak juga memisahkan dengan baik
sehingga dapat dikatakan bahwa senyawa-
senyawa yang berada dalam tumbuhan
meniran bersifat semipolar.
Walaupun kloroform, diklorometana, dan
dietil eter paling banyak memunculkan bercak
pada prakteknya dietil eter digantikan oleh
aseton. Aseton dipilih menggantikan dietil
eter karena aseton lebih polar sehingga
diharapkan dapat mengangkat beberapa
bercak yang masih berada dekat garis
penotolan awal. Selain itu, metode
pendeteksian yang akan digunakan
selanjutnya hanya UV 366 nm dan vanilin- Gambar 7 Jumlah bercak yang dihasilkan
asam sulfat karena keduanya lebih banyak deteksi UV 366 nm ( ) dan
dalam memunculkan bercak dibandingkan 2 vanilin-asam sulfat ( )
metode deteksi lainnya. menggunakan 10 jenis komposisi
fase gerak.
Penentuan Titik Optimum dari 3
Pelarut Menggunakan Desain Campuran Terlihat pada Gambar 7, ternyata
komposisi yang paling banyak dalam
Setelah 3 pelarut terpilih, dilanjutkan memunculkan bercak, yaitu saat fase gerak
dengan penentuan komposisi setiap pelarut menunjukkan1/2 kloroform:1/2 diklorometana
menggunakan rancangan simplex centroid. baik dengan pendeteksian UV 366 nm
Ketiga pelarut yang diperoleh, yaitu aseton maupun vanilin-asam sulfat. Dapat dilihat
sebagai titik A, diklorometana sebagai titik B, pada saat komposisi tersebut memunculkan
dan kloroform sebagai titik C diujikan dengan bercak sebanyak 16 bercak untuk deteksi UV
setiap komposisi sesuai dengan Tabel 2. 366 nm dan 10 bercak untuk deteksi vanilin-
 8 8
8

asam sulfat (Lampiran 10). Terlihat pada nilai R2 sebesar 95.16% (Lampiran 14). Dapat
8
Gambar 7 bahwa komposisi terbanyak dilihat R2 tertinggi dihasilkan saat
memunculkan bercak, yaitu yang banyak menggunakan deteksi vanilin-asam sulfat
mengandung kloroform dan diklorometana walaupun bercak terbanyak dihasilkan dengan
dan sedikit aseton. Jika komposisi aseton deteksi UV 366 nm. Hal ini dikarenakan
terlalu banyak, bercak yang muncul antara faktor A, B, dan C serta respons yang
cenderung sedikit dan berekor. dihasilkan sudah membentuk model yang
Berdasarkan jumlah bercak yang ideal untuk deteksi tersebut.
dihasilkan Gambar 7, daerah dan titik
optimum ditentukan dengan menggunakan Limit Deteksi
piranti lunak Minitab 14. Terlihat pada
Gambar 8, daerah optimum ditunjukkan Limit deteksi metode yang diuji untuk
dengan daerah yang berwarna hijau tua baik melihat konsentrasi ekstrak yang
untuk deteksi UV 366 nm maupun vanilin- memunculkan bercak sebanyak saat optimum,
asam sulfat. yaitu 16 bercak. Konsentrasi ekstrak yang
digunakan 2500, 5000, 7500, dan 10000
mg/L. Pada Gambar 9 terlihat bahwa beberapa
bercak tidak muncul pada setiap
konsentrasinya.
Konsentrasi ekstrak 2500 mg/L
menunjukkan 11 bercak, 5000 mg/L 13
bercak, 7500 mg/L 15 bercak, dan 10000
mg/L 16 bercak. Ternyata dengan konsentrasi
10000 mg//L, bercak yang dihasilkan sama
seperti titik optimum, yaitu 16 bercak
A B sehingga dapat dikatakan limit deteksi metode
10000 mg/L.
Gambar 8 Daerah optimum untuk deteksi UV
366 nm (A) dan deteksi vanilin-
asam sulfat (B).

Titik optimum untuk deteksi UV 366 nm

diperoleh saat nisbah antara kloroform dan
diklorometana 0.6553:0.3447 sedangkan
untuk deteksi vanilin-asam sulfat saat nisbah
antara kloroform dan diklorometana
0.0741:0.9259. Berdasarkan nisbah titik
optimum tersebut maka pada Gambar 8
terlihat daerah optimum untuk deteksi UV 366
nm cenderung mendekati titik C (Gambar 8A)
dan untuk deteksi vanilin-asam sulfat
cenderung berada di titik B (Gambar 8B).
A B C D
Selain itu, suatu persamaan regresi diperoleh
yang menggambarkan kedua deteksi yang
digunakan. Manfaat yang diperoleh, yaitu Gambar 9 Hasil deteksi UV 366 nm untuk
dapat menduga jumlah bercak yang dihasilkan ekstrak 2500 (A), 5000 (B), 7500
oleh suatu fase gerak tanpa harus mengujinya (C), dan 10000 mg/L (D).
terlebih dahulu. Persamaan regresi yang
dihasilkan untuk deteksi UV 366 nm y = Evaluasi Kinerja Analitik
4.036A+8.763B+13.673C+0.414AB–
1.768AC +15.687BC sedangkan untuk deteksi Evaluasi kinerja analitik yang dilakukan,
vanilin-sulfat y = 2.368A+9.913B+6.913C– yaitu uji presisi berupa keterulangan. Selama
9.808AB+8.192AC+3.283BC. 5 hari dilakukan pengujian KLT dengan
Model yang dihasilkan dari kedua deteksi menggunakan fase gerak yang optimum pada
ini cukup baik karena saat menggunakan pagi, siang, dan sore hari. Hal ini dilakukan
deteksi UV 366 nm dihasilkan nilai R2 yang untuk memastikan jumlah bercak tetap sama
tinggi, yaitu 91.56% (Lampiran 13) dan saat dan letak bercak tidak berpindah-pindah.
deteksi dengan vanilin-asam sulfat dihasilkan Gambar hasil keterulangan tersebut dapat

dilihat pada Lampiran 15 dan 16. Setiap
bercak yang dihasilkan pada Gambar 10 dan
Gambar 10 Interaksi antara banyaknya
bercak yang tampak selama 5
hari dengan nilai Rf setiap
bercak untuk deteksi vanilin-
asam sulfat.
Keterangan : = bercak ke-1,
bercak ke-2, = bercak ke-3,
bercak ke-4, = bercak ke-5,
bercak ke-6, = bercak ke-7,
bercak ke-8, = bercak ke-9,
bercak ke-10
Pada Gambar 10 terlihat 10 grafik yang
mewakili setiap bercak atau senyawa.
Terdapat 2 titik yang menyebabkan pola tidak
sejajar pada hari ke-4 dan 5 karena perbedaan
nilai Rf antarulangan dan antarharinya
melebihi 0.05 (Lampiran 18). Ini berarti saat
hari ke-1 hingga ke-3 letak kesepuluh bercak
dapat dikatakan tidak berpindah sehingga
grafik berpola sejajar.
Berbeda dengan Gambar 11, terdapat 2
titik yang menunjukkan titik dengan nilai Rf
nol. Hal ini disebabkan bercak ke-3 yang
muncul saat hari ke-1 dan ke-4 tidak muncul
pada hari ke-2, 3, dan 5. Selain itu, saat hari
ke-2 muncul bercak ke-5 yang hanya muncul
pada hari ke-2 sehingga keterulangan untuk
hari ke-1 dan ke-4 tetap memunculkan 16
bercak, hari ke-3 dan ke-5 memunculkan 15
bercak, dan hari ke-2 memunculkan 16
termasuk 1 bercak baru. Adanya bercak yang
hilang dikarenakan kondisi bejana
kromatografi yang belum jenuh sempurna
sehingga diduga bercak bersatu dengan bercak
sebelumnya. Sementara bertambahnya jumlah
bercak diduga antara bercak satu dengan yang
lain terpisah sempurna tetapi karena kondisi
kejenuhan bejana kromatografi setiap harinya
9
11 merupakan rerata dari pengujian pagi,
siang, dan sore hari setiap harinya.
Gambar 11 Interaksi antara banyaknya bercak
yang tampak selama 5 hari
dengan nilai Rf setiap bercak
untuk deteksi UV 366 nm.
= Keterangan : = bercak ke-1, =
= bercak ke-2, = bercak ke-3, =
= bercak ke-4, = bercak ke-5, =
= bercak ke-6, = bercak ke-7, =
= bercak ke-8, = bercak ke-9, =
bercak ke-10, = bercak ke-11, =
bercak ke-12, = bercak ke-13, =
bercak ke-14, = bercak ke-15, =
bercak ke-16, = bercak ke-17
berbeda sehingga keterpisahan antarbercak
tersebut tidak diikuti keempat hari lainnya.
Jika titik yang bernilai nol diabaikan maka
ke-17 grafik menunjukkan pola cenderung
sama, hanya saja terdapat pola yang sedikit
menyimpang, yaitu tepatnya titik saat hari ke-
5. Penyimpangan pola disebabkan perbedaan
nilai Rf yang dihasilkan setiap bercak selama
5 hari. Tepatnya pergeseran nilai Rf terbesar
terjadi pada hari ke-5 pada bercak ke-5, 8, 10,
11, 12, 14, 15, dan 16. Ketujuh bercak
tersebut memiliki perbedaan nilai Rf
antarulangan atau selama 5 hari yang melebihi
0.05 (Lampiran 18) sehingga pergeseran
grafik terlihat. Menurut Reich dan Schibli
(2008), kriteria yang diterima untuk bercak
ialah setiap ulangan setiap harinya tidak
melebihi 0.05.
Keterulangan sangat baik jika grafik yang
mewakili setiap hari berpola sama atau
berpola sejajar yang berarti nilai Rf dari setiap
bercak setiap harinya tidak berubah. Selain
itu, dengan hasil analisis rancangan acak
kelompok yang dihasilkan, ternyata pengujian
pada pagi, siang, dan sore hari setiap harinya
berpengaruh nyata (Lampiran 19 & 20) baik
untuk deteksi vanilin-asam sulfat maupun UV
366 nm. Nilai simpangan baku setiap bercak

dihitung untuk melihat seberapa baik
keterulangan yang diperoleh. Dapat dilihat
pada Lampiran 21 , untuk deteksi vanilin-
asam sulfat rentang simpangan baku yang
dihasilkan 0-0.0551 sedangkan rentang
simpangan baku untuk deteksi UV 366 nm 0-
0.0379. Nilai simpangan baku akan semakin
besar jika perbedaan nilai Rf yang dihasilkan
besar. Keterulangan yang baik dihasilkan oleh
deteksi vanilin-asam sulfat karena bercak
yang dihasilkan tetap berjumlah sama setiap
harinya.
SIMPULAN DAN SARAN
Simpulan
Tiga pelarut didapat sebagai fase gerak
terbaik, yaitu kloroform, diklorometana, dan
aseton. Titik optimum didapat saat kloroform
dan diklorometana, yaitu 0.6553:0.3447
untuk deteksi UV 366 dengan nilai R2 sebesar
91.56% dan 0.0741:0.9259 untuk deteksi
vanilin-asam sulfat dengan nilai R2 sebesar
95.16%
Saran
Sebaiknya titik saat komposisi
memunculkan bercak terbanyak dijadikan titik
tengah pada segitiga centroid sehingga
diharapkan titik optimum berada di tengah
bidang segitiga. Selain itu, diperlukan
pemilihan bejana kromatografi yang
terkontrol suhu, kelembapan, dan
kejenuhannya.
DAFTAR PUSTAKA
[BPOM] Badan Pengawas Obat dan Makanan.
2004. Monografi Ekstrak Tumbuhan Obat
Indonesia. Jakarta: BPOM RI.
Almeide AA, Scarminio IS. 2007. Statistical
mixture design of optimization of
extraction media and mobile phase
compositions for the characterization of
green tea. J Separat Sci 30:414-420.
Anderson VL, McLean RA. 1974. Design of
Experiments. New York: Marcel Dekker.
Borges CN, Bruns RE, Almeida AA,
Scarminio IS. 2007. Mixture design for the
Fingerprint optimization of
chromatographic mobile phases and
extraction solutions for Camellia sinensis.
Anal Chim Acta 595:28-37.
10 10
10
Cano et al. 2006. Optimization mobile phase
for separation of carbohydrates in honey
by high performance liquid
chromatography using a mixture design. J
Braz Chem Soc 17:588-593.
Currel G. 2000. Analytical Instrumentation
Performance Characteristics and Quality.
Chichester: Wiley.
Delaroza F, Scarminio IS. 2008. Mixture
design optimization of extraction and
mobile phase media for fingerprint
analysis of Bauhinia variegate L. J
Separat Sci 31:034-1041.
Fernand VE. 2003. Initial characterization of
crude extracts from Phyllanthus amarus
Schum. and Thonn. and Quassia amara L.
using normal phase thin layer
chromatography [tesis]. Lousiana:
Program Pascasarjana, University of
Suriname.
Harborne JB. 1987. Metode Fitokimia.
Bandung: Penerbit ITB.
Kardinan A, Kusuma FR. 2004. Meniran
Penambah Daya Tahan Tubuh Alami.
Jakarta: Agromedia Pustaka.
Kimura M, Fujimura M, Yoshida M, Takeshi
T, Naoko TA. 2008. An easy method to
identify 8-keto-15-hidroxytrichothecenes
by thin layer chromatography. Mycotoxins
58(2):115-117.
Koll K, Reich E, Blatter A, Veit M. 2003.
Validation of standardized high
performance thin layer chromatographic
methods for quality control and stability
testing of herbals. J AOAC Internat (86).
Nutan. 2004. Starch acetate as a film forming
excipient in controlled drig delivery
[disertasi]. Texas: Program Pascasarjana,
University Health Science Center.
Nyiredy Sz. 2002. Planar chromatographic
method development using the prisma
optimization system and flow charts. J
Chromatogr Sci 40:1–10.
Osward TT. 1995. Tumbuhan Obat. Jakarta:
Baratha.
 11

Reich E, Schibli A. 2008. Validation of high

performance thin layer chromatographic Tripathi AK, Verma RK, Gupta AK, Gupta
methods for identification of botanicalsin a MM, Khanuja S. 2006. Quantitative
cGMP environment. J AOAC Internat determination of phyllanthin and
9:13-20. hypophyllanthin in phyllanthus species by
Santosa CM dan Hertiani T. 2005. Kandungan high performance thin layer
senyawa kimia dan efek ekstrak air daun chromatography. Phytochem Anal 17:394-
bangun-bangun (Coleus amboinicus L) 397.
pada aktivitas fagositosis netrofil tikus
putih. Maj Farm Indones 16:141-148. Yuniarti T. 2008. Ensiklopedia Tanaman
Obat Tradisional. Yogyakarta: Media
Stahl E. 1985. Analisis Obat Secara Pressindo.
Kromatografi dan Mikroskopi.
Padmawinata K, penerjemah. Bandung:
Penerbit ITB. Terjemahan dari: Drug
Analysis by Chromatography.

Stoenoiu CE, Bolboaca AD, Jantschi L. 2006.

Mobile phase optimization for steroid
separation. Med Informatics 18:17-24.