1) PROSEDUR KERJA KROMATOGRAFI KOLOM GRAVITASI

a) Preparasi sampel

5 gram ekstrak etanol

- Dilarutkan dengan etanol 96% sebanyak 10 ml, jika terdapat endapan disaring.
- Ditimbang 2 gram silica gel 60-230 mesh dan dicampurkan hingga homogeny
dengan sampel yang sudah dilarutkan.
- Dihomogenkan campuran kemudian dikeringanginkan.
-
Hasil preparasi
 Cara keri
sampel naga

b) Preparasi kolom
Cara kering
Rangkaian kolom kromatografi

- Dilarutkan ke dalam kolom (melalui corong gelas) silika gel kering (250
mesh, sebanyak 15 g), secara perlahan dan kontinyu melalui corong
gelas.
- Dipadatkan silika gel dalam kolom dengan alat sumbat karet atau
silinder kayu.
- Dituangkan silika yang sudah bercampur dengan ekstrak ke dalam
kolom, melalui corong gelas.
- Dituangkan silika gel (250 mesh) ke dalam kolom hingga ketebalannya
± 0,5 cm.
- Dimasukkan pelarut etana hingga kira-kira berjarak 3 cm dari mulut
kolom, sambil kerannya dibuka dan dielusikan.

Hasil kolom kromatografi kering

  Cara basah
Rangkaian kolom kromatografi

- Dituangkan pelarut etanol ke dalam kolom hingga setengahnya.

- Dibuat bubur silika gel (ukuran 250 mesh, sebanyak 15 g) dengan
pelarut etanol, sambil diaduk.
- Dituangkan bubur silika yang sudah siap ke dalam kolom secara
kontinyu melalui corong gelas sambil keran kolom dibuka.
- Dipadatkan silika gel dengan cara pengetukan, menggunakan pengetuk
karet sambil volume pelarut dijaga ± 3 cm dari mulut kolom.
- Dikeluarkan pelaut hingga bersisa 2 cm dari permukaan silika gel,
kemudian silika yang sudah bercampur dengan ekstrak dituangkan ke
dalam kolom.
- Dituangkan sedikit demi sedikit hingga semua sampel tertambat ke
dalam penyerap dan tidak menghablur (kecepatan tetesan dibuat ± 1
tetes/detik dan dijaga konstan).
- Dimasukkan kapas hingga berjarak 2 cm dari permukaan silika yang
bercampur dengan ekstrak.
- Dielusikan dengan pelarut etanol yang sesuai dan volume pelarut dijaga
jangan sampai habis (dijaga tidak boleh melebihi 10 cm dari permukaan
silica impregnasi.

Hasil kolom kromatografi basah

c) Pengelusian kolom

Kolom

- Dielusikan menggunakan pelarut yang sesuai (melalui hasil pemeriksaan dengan

KLT).
- Diatur kecepatan air pelarut ± 1 tetes/detik dan pelarut yang menetes ditampung
dengan botol vial volume 10 ml tiap vial.
- Dielusi dengan pelarut etanol hingga silika gel kelihatan bersih.

Elusi kolom