LABORATORIUM MIKROBIOLOGI INDUSTRI

DEPARTEMEN TEKNIK KIMIA FAKULTAS TEKNIK

UNIVERSITAS DIPONEGORO
2018/2019

REVIEW ISOLASI ENZIM

BATCH 2 2017 A
Soal Aslab
1. Explain (min. 3) the problems you can observe at enzyme isolation experiment ! (15)
2. Explain (min. 3) the goals you want to achieve by doing enzyme isolation experiment ! (15)
3. Pada suatu eksperimen isolasi enzim selulase, didapat volume titran uji kadar glukosa sebelum
inkubasi dari dua sampel, A dan B sebesar 12 ml dan 16 ml. Dari standarisasi glukosa teknis
2.5 mg/ml, didapat volume titran sebesar 33 ml. Aktivitas enzim yang ditemukan dari kedua
sampel setelah 13 menit waktu inkubasi ialah 2.37 unit/ml.menit dan 1.4 unit/ml/menit. Dengan
metode uji kadar glukosa yang sama seperti praktikum yang anda lakukan, hitunglah :
a. Kadar glukosa sampel A menit ke-26 jika volume titran ialah 20% lebih kecil daripada menit
ke-13, dengan faktor pengenceran sampel 35 kali. (35)
b. Kadar glukosa sampel B menit ke-26 jika volume titran ialah 10% lebih besar daripada menit
ke-13, dengan faktor pengenceran sampel 25 kali. (35)

Soal Dosen

Diketahui sebuah eksperimen isolasi enzim selulase yang ditujukan untuk mengukur konstanta
kecepatan reaksi enzimatis (Vm dan Km). Data hasil eksperimen, disajikan pada tabel di bawah :

Waktu inkubasi Volume titran

Konsentrasi glukosa = 3 mg/ml
20 24
Faktor pengenceran = 15 kali
40 18
Volume titran standarisasi glukosa = 37 ml
60 11
Volume titran sebelum inkubasi = 33 ml
80 3
a. Hitunglah konstanta Vm dan Km menggunakan metode Lineweaver-Burk Plot ! (60)
b. Dari grafik serta harga konstanta reaksi enzimatis, fenomena apa yang anda simpulkan ? (25)
c. Apakah kebenaran hasil perhitungan menggunakan algoritma yang tersedia dapat
dipertanggungjawabkan ? Jelaskan alasan kalian ! (15)

Trivial (for Bonus Mark)

1. Dari film yang kalian tonton, sebut nama dan berikan pendapat anda terhadap
karakter kartun yang tersemat di samping !
2. Lanjutkan kalimat berikut menjadi 1 paragraf (minimal 3 kalimat) !
a. Mas Milen itu orangnya ...
b. Mbak Florence kalau jadi aslab ...
 LABORATORIUM MIKROBIOLOGI INDUSTRI
DEPARTEMEN TEKNIK KIMIA FAKULTAS TEKNIK
UNIVERSITAS DIPONEGORO
2018/2019

KUNCI JAWABAN :

Soal Aslab

1. Fokus pada rumusan masalah (variabel tetap/bebas yang biasanya tercantum pada LKR)
2. Fokus pada tujuan percobaan (mengisolasi enzim, mengolah substrat, menghitung aktivitas
enzim, mengetahui pengaruh variabel terhadap aktivitas enzim)
3. Data yang diketahui :
F = 33 ml Waktu = 13 menit
M-A0 = 12 ml AE-A13 = 2.37 unit/ml.menit
M-B0 = 16 ml AE-B13 = 1.4 unit/ml.menit
Konsentrasi glukosa = 2.5 mg/ml
𝑉𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙 𝑉𝑝𝑒𝑛𝑔𝑒𝑛𝑐𝑒𝑟𝑎𝑛
(𝐹 − 𝑀) ×
𝐶= 𝑉𝑡𝑖𝑡𝑟𝑎𝑠𝑖 × 𝑉𝑑𝑖𝑎𝑚𝑏𝑖𝑙 × 𝑘𝑜𝑛𝑠𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑠𝑖 𝑔𝑙𝑢𝑘𝑜𝑠𝑎
𝑉𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙
(𝐶𝑡 − 𝐶0) × 1000
𝐴=
𝑡 × 𝐵𝑀
a. Data tambahan :
Faktor pengenceran = 35 kali
Volume titran A pada 26 menit 20% lebih kecil dari pada volume titran 13 menit
20
(33 − 12) × × 35
𝐶𝐴0 = 5 × 2.5 = 367.5 𝑚𝑔/𝑚𝑙
20
(𝐶𝐴13 − 367.5) × 1000
2.37 = → 𝐶𝐴13 = 373.046 𝑚𝑔/𝑚𝑙
13 × 180
20
(33 − 𝑀𝐴26) × × 35
373.046 = 5 × 2.5 → 𝑀𝐴26 = 11.68 𝑚𝑙
20
Volume titran A pada menit ke-26  11.68 ml x (1 – 20%) = 9.344 ml
20
(33 − 9.344) × × 35
𝐶𝐴26 = 5 × 2.5 = 𝟒𝟏𝟑. 𝟗𝟖 𝒎𝒈/𝒎𝒍
20
b. Data tambahan :
Faktor pengenceran = 25 kali
Volume titran B pada 26 menit 10% lebih besar dari pada volume titran 13 menit
20
(33 − 16) × × 25
𝐶𝐵0 = 5 × 2.5 = 337.5 𝑚𝑔/𝑚𝑙
20
(𝐶𝐴13 − 337.5) × 1000
1.4 = → 𝐶𝐴13 = 340.776 𝑚𝑔/𝑚𝑙
13 × 180
20
(33 − 𝑀𝐵26) × × 35
340.776 = 5 × 2.5 → 𝑀𝐵26 = 13.53 𝑚𝑙
20
 LABORATORIUM MIKROBIOLOGI INDUSTRI
DEPARTEMEN TEKNIK KIMIA FAKULTAS TEKNIK
UNIVERSITAS DIPONEGORO
2018/2019

Volume titran B pada menit ke-26  13.53 ml x (1 + 10%) = 14.879 ml

20
(33 − 14.879) × × 35
𝐶𝐵26 = 5 × 2.5 = 𝟑𝟏𝟕. 𝟏𝟏𝟖 𝒎𝒈/𝒎𝒍
20
Soal Dosen

Data yang diketahui :

Waktu inkubasi Volume titran
Konsentrasi glukosa = 3 mg/ml
20 24
Faktor pengenceran = 15 kali
40 18
Volume titran standarisasi glukosa = 37 ml
60 11
Volume titran sebelum inkubasi = 33 ml
80 3
a. Algoritma pekerjaan :
1. Mencari kadar glukosa (C) masing-masing variabel waktu inkubasi :
20
(37 − 29) × × 15
𝐶0 = 5 × 3 = 72 𝑚𝑔/𝑚𝑙
20
Waktu inkubasi Volume titran C (mg/ml)
20 24 117
40 18 171
60 11 234
80 3 306
2. Menyusun persamaan konstanta reaksi enzimatis dengan metode Lineweaver-Burk Plot
1 𝐾𝑚 1 1
= × +
𝑣 𝑉𝑚𝑎𝑥 [𝑆] 𝑉𝑚𝑎𝑥
1 1
Persamaan tersebut mengikuti persamaan garis linear (y = ax + b) dengan 𝑣 dan [𝑆] ialah
𝐾𝑚 1
y dan x, serta 𝑉𝑚𝑎𝑥 dan 𝑉𝑚𝑎𝑥 ialah slope dan intercept.
1 1
3. Menyusun kembali data-data sesuai kebutuhan untuk membuat grafik [𝑆] vs. 𝑣
1 1
= seper laju produksi glukosa per waktu ; [𝑆] = seper kadar glukosa waktu tertentu
𝑣

Waktu 1 1
C (mg/ml) ∆C V (mg/ml.menit)
inkubasi [𝑆] 𝑣
20 117 45 2.25 0.0085 0.444
40 171 54 2.7 0.0055 0.37
60 234 63 3.15 0.0043 0.317
80 306 72 3.6 0.0033 0.278
 LABORATORIUM MIKROBIOLOGI INDUSTRI
DEPARTEMEN TEKNIK KIMIA FAKULTAS TEKNIK
UNIVERSITAS DIPONEGORO
2018/2019

1 1
4. Mengubah data dalam tabel menjadi grafik [𝑆] vs. 𝑣, lalu mennghitung persamaan garisnya

(disarankan menggunakan fitur kalkulator)

0.5

0.45

0.4

1/V 0.35
y = 31.555x + 0.1819
0.3

0.25

0.2
0.0025 0.0035 0.0045 0.0055 0.0065 0.0075 0.0085 0.0095
1/[S]

5. Menghitung harga Km dan Vmax dari persamaan garis pada grafik

Dari grafik didapat persamaan garis  y = 31.555x + 0.1819
1 𝒎𝒈
= 0.1819 → 𝑉𝑚𝑎𝑥 = 𝟓. 𝟒𝟗𝟖
𝑉𝑚𝑎𝑥 𝒎𝒍. 𝒎𝒆𝒏𝒕
𝐾𝑚 𝐾𝑚
= 31.555 → = 31.555 → 𝐾𝑚 = 𝟏𝟕𝟑. 𝟒𝟖𝟗
𝑉𝑚𝑎𝑥 5.498
b. Fenomena yang dimaksud cenderung pada fenomena naik turun grafik, mengetahui adanya
inhibitor yang menyebabkan perubahan pada laju reaksi enzimatis
c. Belum dapat dipertanggungjawabkan. Metode perhitungan Linewaver-Bulk Plot tidak dapat
diaplikasikan seluruhnya melalui cara kerja praktikum isolasi enzim (metode asli
menggunakan perhitungan absorbansi untuk mendapat konsentrasi substrat)