Ekspresi sitokin dalam humor aqueous dari pasien keratitis jamur

Yingnan Zhang1, Qingfeng Liang2, Yang Liu1, Zhiqiang Pan1*, Christophe Baudouin3,4, Antoine
Labbé3,4 and Qingxian Lu5

Abstrak
Latar belakang: Meskipun serangkaian laporan tentang infeksi jamur kornea telah
dipublikasikan, studi tentang mekanisme patogen dan sitokin yang terkait dengan peradangan tetap
terbatas. Dalam penelitian ini, sampel humour aquous dari pasien keratitis jamur dikumpulkan
untuk memeriksa pola sitokin dan profil seluler untuk patogenesis keratitis jamur.
Metode: Sampel humour aquous dikumpulkan dari sepuluh pasien dengan keratitis jamur stadium
lanjut. Delapan sampel humor berair dari pasien dengan keratoconus atau distrofi kornea diambil
sebagai kontrol. Sekitar 100 μl hingga 300 μl humor aqueous dalam setiap kasus diperoleh untuk
pemeriksaan. Sampel humour aquous akan disentrifugasi dan sel-sel diwarnai dan diperiksa di
bawah mikroskop optik. Kultur bakteri dan jamur dilakukan pada humour aquous dan corneal
button pada semua pasien. Sitokin yang terkait dengan peradangan termasuk IL-1β, IL-6, IL-8, IL-
10, TNF-α, dan IFN-examined diperiksa menggunakan sistem susunan protein cair Luminex yang
berbasis multiplex bead.
Hasil: Infeksi jamur dikonfirmasi pada sepuluh pasien ini dengan hapusan smear dan / atau kultur
jamur. Kultur bakteri dan jamur menunjukkan hasil negatif pada semua spesimen humour aquous.
Leukosit polimorfonuklear adalah sel infiltrasi dominan dalam humour aquous pada keratitis
jamur. Pada tahap lanjut keratitis jamur, kadar IL-1β, IL-6, IL-8, dan IFN-γ dalam aqueous humor
meningkat secara signifikan jika dibandingkan dengan kontrol (p <0,01). Tingkat IL-10 dan TNF-
α juga menunjukkan tren naik tetapi tanpa signifikansi statistik.
Kesimpulan: Konsentrasi tinggi IL-1β, IL-6, IL-8, dan IFN-γ dalam humour aquous dikaitkan
dengan keratitis jamur.
Kata kunci: sitokin, aqueous humor, keratitis jamur, peradangan.
Latar Belakang
Infeksi kornea adalah salah satu penyakit mata utama yang mempengaruhi kesehatan
masyarakat di seluruh dunia , terutama di negara-negara berkembang . Kejadiannya yang
meningkat dan kesulitan yang terkait dengan terapi menghasilkan masalah penglihatan yang parah
atau kebutaan . Kejadian keratitis jamur lebih tinggi. Laki-laki dan populasi paruh baya (41-50
tahun) lebih mungkin terkena keratitis jamur. Kornea bisa dipengaruhi oleh infeksi jamur karena
kerentanannya terhadap cedera dan non-vaskularisasi, yang mengakibatkan resistensi yang lebih
rendah. Jamur patogen utama adalah spesies Fusarium (73,3%), diikuti oleh spesies Aspergillus
(12,1%) .
Meskipun ada laporan tentang infeksi jamur kornea telah diberitakan termasuk mengenai
epidemiologi, diagnostik, faktor risiko patogen, dan metode pengobatan, studi tentang mekanisme
patogen dan sitokin yang terkait peradangan tetap relatif terbatas. Penelitian tentang patogenesis
keratitis jamur telah dilakukan pada model hewan dan pada sampel air mata pasien dengan keratitis
jamur. Namun, air mata sangat rentan terhadap lingkungan dan pengobatan mata karena lokasi
permukaannya.

Secara klinis, kami menemukan bahwa beberapa pasien keratitis jamur mengalami eksudasi
hypopyon dan fibrin di ruang anterior (Bilik mata depan) , tetapi endotel kornea mereka jelas.
Setelah keratoplasti lamelar anterior yang dalam (DALK), hipopion menghilang tanpa infeksi
berulang. Telah dikemukakan bahwa sitokin dalam aqueous humor memainkan peran penting
dalam patogenesis keratitis jamur.

Dalam penelitian ini, sampel humor aquos dari pasien keratitis jamur dikumpulkan untuk
memantau respon inflamasi intraokular. Pola sitokin dan profil seluler dianalisis untuk patogenesis
keratitis jamur.

Metode
Pasien
Penelitian ini telah di setujui oleh Komite Etika Medis Rumah Sakit Tongren Beijing. Sebelum
operasi, persetujuan dilakukan berdasarkan informasi yang didapat dari pasien dan orang tua / wali
yang sah (jika pasien ≤18 tahun) dari semua peserta setelah penjelasan tentang sifat dan
kemungkinan konsekuensi dari penelitian.
Sepuluh pasien keratitis jamur yang didiagnosis secara klinis dan delapan pasien dengan
keratoconus atau distrofi kornea yang telah menjalani keratoplasti penetrasi di Rumah Sakit
Tongren Beijing dari Juni hingga November 2014 direkrut untuk penelitian ini.
Kasus-kasus tersebut didiagnosis sebagai keratitis jamur ketika kultur jamur dan / atau pewarnaan
kerokan pada spesimen positif. Pasien yang tidak menanggapi terapi awal dengan obat antijamur
topikal dan sistemik direkrut. Sejarah klinis dan demografis yang terperinci diambil dan
pemeriksaan biomikroskopi slit-lamp dilakukan untuk semua pasien. Ukuran, kedalaman, dan
margin ulkus dicatat, bersama dengan adanya lesi satelit dan ketinggian hypopyon. Adanya
kecacatan pada epitel dan pigmentasi pada permukaan juga dicatat.

Pengambilan Sampel
Sebelum operasi, spesimen dan kerokan kultur kornea diambil dari dasar dan tepi ulkus secara
aseptik dengan cotton swab berujung steril dan ditempatkan dalam media transportasi. Spesimen
yang dikerok dikirim untuk inokulasi dalam media agar dekstrosa Sabouraud untuk kultur jamur.
Semua kerokan kornea juga dikirim untuk pewarnaan Gram rutin dan kultur bakteri dalam nutrient
broth.
Para pasien menerima keratoplasti penetrasi dengan anestesi umum. Donor kornea diperoleh dari
Beijing Tongren Eye Bank. Lancet parasentesis digunakan untuk menembus kornea di daerah
perifer avaskular lebih dari 1 mm. Setelah itu, sekitar 100 μl hingga 300 μl humor aqueous
dikeluarkan dari ruang anterior tanpa kontak dengan struktur intraokular Setiap sampel Setiap
sampel humor aqueous disentrifugasi selama 10 menit pada 2000 putaran per menit (rpm) untuk
memisahkan sel dari cairan. Supernatan 50 μl yang dicadangkan dipindahkan ke dalam tabung
microfuge steril dan disimpan pada suhu -80 ° C sampai uji sitokin, dan supernatan yang tersisa
digunakan untuk kultur bakteri dan jamur. Pelet sel diresuspensi dalam 200 μl salin buffer fosfat
dan diendapkan ke objek glass. Setelah airdrying, sel-sel diwarnai dengan Giemsa dan diperiksa
dengan mikroskop optik. Sel-sel dihitung dan secara morfologis diklasifikasikan menjadi leukosit
polimorfonuklear (PMN), limfosit, dan monosit.
Dalam semua kasus, corneal button pasien, yang diperoleh pada saat penetrasi keratoplasty,
dikirim untuk pemeriksaan mikroba.

Kultur Mikrobiologis
Humor aqueous dan kornea dari semua pasien diinokulasi pada media kultur pada suhu 28 ° C
dengan kelembaban 40% selama 8-10 hari. Media kultur mengandung agar Sabouraud dan potato
glucose agar. Jamur diidentifikasi sesuai dengan karakteristik koloni yang tumbuh, hifa, dan spora.
Selain itu, spesimen humor aqueous dan kornea diinokulasi pada broth pada suhu 37 ° C dengan
kelembaban 40% selama 10-14 hari untuk identifikasi bakteri.
Pengukuran Sitokin dengan Sistem Array Protein Cair

Kadar sitokin termasuk interleukin (IL) -1β, IL-6, IL-8, IL-10, interferon-γ (IFN-γ), dan tumor
necrosis factor-α (TNF-α) dalam humor aqueous diukur menggunakan sistem susunan protein cair
Luminex100 ™ (MiraiBio, CA, US).

Analisis statistik

Analisis statistik dilakukan dengan menggunakan SPSS (versi 11.5, SPSS Inc., Chicago, Illinois,
USA). Tingkat setiap sitokin dibandingkan dengan data dan dilaporkan sebagai median dengan
tingkat minimum dan maksimum yang diperoleh untuk masing-masing kelompok. Hasilnya
dipresentasikan sebagai konsentrasi rata-rata geometrik dan rentang sampel yang dapat dideteksi
(Tabel 2). Tingkat sitokin dibandingkan antara dua kelompok dengan uji median dua sampel
nonparametrik. Nilai p <0,05 dianggap signifikan.

Hasil
Kohort Pasien
Usia rata-rata pasien dengan keratitis jamur adalah 49. 30 ± 17,02 tahun (berkisar antara 15 hingga
72 tahun). Tiga pasien (30%) adalah perempuan dan tujuh pasien (70%) adalah laki-laki. Lima
mata (50%) memiliki riwayat benda asing dari kayu atau cedera tanaman. Selain terapi antijamur,
empat mata (40%) telah diobati dengan terapi kombinasi kortikosteroid topikal atau kortikosteroid-
antibiotik dan tiga mata (30%) telah diobati dengan antibiotik topikal saja. Pasien kontrol dengan
keratoconus (87,5%) atau distrofi kornea (12,5%) menerima keratoplasti penetrasi untuk restorasi
visual. Usia rata-rata mereka adalah 24,88 ± 12,12 tahun (berkisar antara 11 hingga 50 tahun). Dua
pasien (25%) adalah perempuan dan enam pasien (75%) adalah laki-laki. (Tabel 1).

Karakterisasi Keratitis Jamur

Keratoplasti terapeutik telah diambil karena pasien tidak menanggapi pengobatan, dengan
kecenderungan untuk melelehkan kornea dan perforasi. Waktu perkembangan penyakit berkisar
antara 7 hingga 30 hari, dengan rata-rata 15,89 ± 10,72 hari. Cacat epitel dan pigmentasi pada
permukaan, ditandai sebagai ulkus kering dan berpigmen dengan margin tidak teratur dan berbulu,
lesi satelit, reaksi air fibrinoid, dan pembentukan hipopion, terdapat pada mata yang terinfeksi
pada pasien keratitis jamur. Fitur borok disorot dalam Tabel 1.

Pemeriksaan sitopatologis
Populasi sel PMN adalah tipe sel infiltrasi dominan dalam sampel humor aqueous yang
dikumpulkan dari mata yang terinfeksi dari pasien keratitis jamur. Persentase rendah limfosit dan
monosit juga diamati. Persentase sel infiltrasi ini ditunjukkan pada Tabel 2. Perbedaan dalam pola
sel infiltrasi antara keratitis jamur dan kontrol secara statistik signifikan (p <0,001 untuk setiap
populasi).
Table 1 Demographic, clinical and microbiological aspects in fungal keratitis patients and controls
No. Gender Age range Diagnosis Duration Pathogeny Smear Aqueous humor culture Corneal culture Ulcer Hypopyon
(years old) (days) (fungus) (fungus / bacteria) (fungus / bacteria) (mm × mm) (depth,
mm)
M 11–20 FK 7 None + – – + –
2 F 51–60 FK 7 Foreign body + – – + – ×7 2.0
3 F 41–50 FK 7 None – – – + – ×4 1.0
4 F 41–50 FK 18 None + – – + – ×6 4.0
5 M 61–70 FK 30 None + – – + – ×4 1.0
6 M 41–50 FK 10 Plant Injury + – – + – ×3 0.5
7 M 41–50 FK 10 Foreign body – – – + – ×7 2.0
8 M 71–80 FK 30 Plant Injury – – – + – ×5 5.0
9 M 71–80 FK 12 None – – – + – ×4 3.0
10 M 41–50 FK 30 Plant Injury – – – + – ×3 2.0
11 F 11–20 KC – – – –

12 F 41–50 CD – – – –

13 M 11–20 KC – – – –

14 M 11–20 KC – – – –

15 M 21–30 KC – – – –

16 M 11–20 KC – – – –

17 M 31–40 KC – – – –

18 M 21–30 KC – – – –

Note: M: male; F: female; FK: fungal keratitis; KC: keratoconus; CD: corneal dystrophy; +, positive; −, negative

Microbial Investigation

Tingkat infeksi jamur positif pada pasien keratitis adalah 50% dengan pewarnaan smear dan 100%
oleh kultur kornea. Di antara sepuluh kasus positif kultur jamur kornea, strain Fusarium spp.
terbukti dalam enam kasus (60%), galur Aspergillus spp. hadir dalam dua kasus (20%), dan strain
Apospory spp. diidentifikasi dalam dua kasus lainnya (20%). Namun, perlu dicatat bahwa kultur
humor aqueous dari kedua keratitis jamur dan kelompok kontrol juga menunjukkan presentasi
negatif baik jamur atau bakteri.

Profil Sitokin
Level protein sitokin IL-1β, IL-6, IL-8, IL-10, IFN-γ, dan TNF-α diukur dengan Liquid Protein
Array System. Konsentrasi dari enam sitokin pada kelompok kontrol digunakan sebagai tingkat
dasar untuk perbandingan. Tingkat sitokin menunjukkan perbedaan yang luar biasa antara keratitis
jamur dan kelompok kontrol. Dalam sampel aqueous humor dari kelompok keratitis jamur, kadar
IL-1β, IL-6, IL-8, dan IFN-found ditemukan meningkat secara signifikan, dibandingkan dengan
kelompok kontrol (P = 0,012 untuk IL-1β , P <0,001 untuk IL-6, P <0,001 untuk IL-8, dan P =
0,001 untuk IFN-γ). Meskipun tingkat IL-10 dan TNF-α juga meningkat, mereka tidak
menunjukkan perbedaan yang signifikan secara statistik (Tabel 3).
Note: FK: fungal keratitis

Table 2 Percentage of various infiltrating cells in aqueous humor from fungal keratitis patients and controls
% onuclear % es % Monocytes
Polymorph Lymphocyt
Median Median
Minimum Maximum Minimum Maximum Median Minimum Maximum

FK 89.5 85.7 92.0 8.1 6.5 13.2 3.9 0.5 6.8

Control 0 0 0 0 0 0 0 0 0

p < 0.001 < 0.001 < 0.001

Diskusi

Kultur humor aqueous dari sepuluh pasien keratitis jamur menunjukkan negatif pada infeksi jamur
dan bakteri, lebih lanjut menegaskan bahwa reaksi steril terjadi pada humor aqueous beberapa
pasien keratitis jamur meskipun hipopion. Sel-sel infiltrasi utama dalam humor aqueous adalah
leukosit PMN. Berdasarkan percobaan pada hewan dan histologi kornea klinis, leukosit PMN
dalam humor aqueous dianggap sebagai dasar seluler utama keratitis jamur. Hasil kami saat ini
mengkonfirmasi harapan ini. Kemungkinan sel-sel infiltrasi ini terlibat dalam pembersihan
patogen. Sebaliknya, tidak ada sel inflamasi yang ditemukan pada kontrol. Dalam penelitian ini,
kami mengukur dan menganalisis profil sitokin intraokular dalam kaitannya dengan keratitis
jamur. Selama stadium menengah keatas dari infeksi jamur, tingkat IL-1β, IL-6, IL-8, dan IFN-in
dalam humor aqueous meningkat secara signifikan dibandingkan dengan kontrol non-keratitis.
Kadar sitokin dalam humor aqueous telah dilaporkan sebagai indikator proses imunologis okular
lokal. Peningkatan IL-1β dan IL-6 adalah sinyal inflamasi spesifik untuk keratohelcosis dan
keratitis. IL-1β, IL-6, dan IL-8 secara signifikan meningkat pada air mata pasien keratitis bakteri,
bersama dengan akumulasi sel dendritik. Dalam studi model hewan pada keratitis yang terinfeksi
virus herpes simpleks, sitokin seperti IL-1β, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12, dan IFN-demonstrated
diperlihatkan memainkan peran utama dalam penyakit. pengembangan. Dalam sel epitel kornea
yang terinfeksi Pseudomonas, IL-1β berfungsi sebagai mediator inflamasi utama yang mengatur
ekspresi IL-6 dan IL-8 [16]. IL-6, IL-10, dan IFN-γ meningkat pada aqueous humor uveitis akut.
IL-10 meningkat pada uveitis infektif dibandingkan dengan uveitis non-infektif. Sitokin IL-4, IFN-
γ, dan TNF-α meningkat dalam humor aqueous pada uveitis Behçet . IL-6, IL-10, dan IFN-
involved terlibat dalam penolakan setelah transplantasi kornea. Semua laporan ini menunjukkan
bahwa ekspresi sitokin terkait erat dengan reaksi inflamasi dan imunologis mata.

IL-1β adalah sitokin proinflamasi dan mediator inflamasi penting. Dalam reaksi inflamasi, itu
dapat menginduksi sintesis sitokin lain, aktivasi limfosit T, dan migrasi monosit, makrofag, dan
sel Langerhans. Dalam penelitian kami, tingkat IL-1β yang tinggi diamati dalam sampel humor
aqueous yang dikumpulkan dari pasien keratitis jamur. Sangat mungkin bahwa peningkatan level
IL-1β menyebabkan infiltrasi leukosit yang parah dan kerusakan sawar darah. IL-6 adalah
mediator potensial peradangan intraokular, dan beberapa bukti menunjukkan bahwa ia memainkan
peran multifungsi yang penting dalam infeksi dan peradangan kornea. Selain itu, dapat
mengaktifkan produksi antibodi dan protein fibrous, menginduksi produksi protein pada
peradangan akut, dan berfungsi sebagai aktivator faktor makrofag dan kemotaksis untuk limfosit
T . IL-6 juga dapat diinduksi oleh sitokin lain seperti IL-1β, TNF-α, dan IFN-γ dan dilepaskan oleh
sel epitel pigmen retina, sel endotel kornea, makrofag, iris, dan sel epitel tubuh ciliary [25]. IL-8
secara selektif mengaktifkan leukosit dan sel T PMN dan memaksakan efek kemotaksis pada
granulosit neutrofilik, yang diinduksi untuk menginfiltrasi peradangan. Oleh karena itu,
peningkatan IL-8, seperti yang diamati dalam aqueous humor dari pasien keratitis jamur, bisa
menjadi penyebab utama peningkatan infiltrasi PMN dan tingkat ekspresi tinggi IL-1β. IFN-
produced diproduksi oleh limfosit teraktivasi. Ini dapat menghambat proliferasi sel dan mencegah
sitokin lain dari direkrut ke tempat peradangan. IFN-γ adalah sitokin primer yang terlibat dalam
hipersensitivitas tipe tertunda [28]. IFN-γ dalam humor aqueous pasien keratitis jamur disekresi
oleh peningkatan limfosit infiltrasi, yang, sampai batas tertentu, mungkin menghambat keparahan
peradangan. Kadar IL-10 dan TNF-α dalam humor aqueous pasien keratitis jamur rata-rata lebih
tinggi daripada kontrol, tetapi tanpa perbedaan statistik. IL-10 adalah sitokin anti-inflamasi. IL-10
dapat mewakili faktor penghambat dalam respon sel T helper 1. Memang, IL-10 mengambil efek
perlindungan selama peradangan sebagai faktor penghambat sitokin inflamasi. TNF-α adalah
faktor penting dalam menghubungkan imunitas spesifik dan reaksi inflamasi. Ini terutama
diproduksi oleh monosit teraktivasi dan dapat menginduksi monosit untuk mensintesis IL-1β, IL-
6, dan IL-8 [30]. Subjek kami hanya melibatkan sejumlah kecil pasien, diikuti selama periode
waktu terbatas, dan sitokin yang dianalisis terbatas pada sitokin terkait peradangan.

Sitokin dan sel-sel inflamasi menginfiltrasi profil dalam humor aqueous pada keratitis yang
disebabkan oleh yang lain ke dalam lokasi inflamasi, sehingga meningkatkan permeabilitas
pembuluh darah dan mengaktifkan sitokin (seperti IL-1β dan TNF-α) yang akan dirilis. Sebagai
akibatnya, respon inflamasi seperti itu selanjutnya mengarah pada peningkatan IL-8 yang terus
menerus dan akumulasi leukosit, yang memperburuk mikroorganisme patogen yang belum pernah
dilaporkan sebelumnya. Dalam penelitian ini, pasien dengan keratoconus dan distrofi kornea
dipilih sebagai kontrol negatif. Meskipun ketat mereka dapat berfungsi sebagai kontrol untuk
patologi okular non-inflamasi. Investigasi lebih lanjut diperlukan untuk melaporkan peran sitokin
dan faktor transduksi sinyal sel lainnya pada setiap tahap peradangan pada keratitis jamur. Karena
peran sitokin yang beragam dalam jalur transduksi sinyal yang berbeda dan efek biologis tambahan
yang disebabkan oleh interaksi antara sitokin dan produksinya, penelitian jaringan sitokin lebih
bermakna daripada sitokin tunggal.

Karena sitokin dalam aqueous humor memainkan peran penting dalam patogenesis keratitis jamur,
penggunaan strategi intervensi dalam sitokin terkait (seperti memblokir sitokin yang berikatan
dengan reseptor, atau ikatan kompetitif dengan reseptor yang menggunakan analog sitokin yang
tidak aktif dan memblokir fungsinya setelah mengikat) untuk mencapai tujuan terapeutik perlu
diselidiki lebih lanjut.

Table 3 Cytokine levels in aqueous humor from fungal keratitis patients and controls
Cytokine levels Fungal keratitis (n = 10) Control (n = 8)
(pg/ml)
Mean (±SD) Median Mean (±SD) Median p
IL-1β 172.89 ± 45.83 121.41 7.50 ± 3.22 5.98 0.012
IL-6 6179.71 ± 6712.84 6.22 ± 7.55 3.12 0.000
1015.726
IL-8 13,003.82 ± 13,755.86 9.61 ± 9.24 6.17 0.000
1803.97
IL-10 25.32 ± 18.99 26.13 8.32 ± 0.25 8.23 0.230
TNF-α 22.82 ± 56.69 1.92 1.52 ± 2.10 0.00 0.237
IFN-γ 28.70 ± 18.93 7.91 2.32 ± 1.18 3.17 0.001
Kesimpulan
Penelitian saat ini menunjukkan bahwa konsentrasi tinggi IL-1β, IL-6, IL-8, dan IFN-γ dalam
humor aqueous dikaitkan dengan keratitis jamur, dan leukosit PMN infiltrasi terlibat dalam respon
inflamasi ini. Mempelajari profil sitokin dalam aqueous humor pasien keratitis jamur bermanfaat
untuk penjelasan perubahan patologis dan respon inflamasi dari keratitis jamur. Diperkirakan
bahwa penelitian lebih lanjut ke arah ini akan mengarah pada inovasi dan pengembangan strategi
terapi yang lebih efektif untuk keratitis jamur.
Abbreviations
IFN-γ: Interferon-γ; DALK: Deep anterior lamellar keratoplasty; IL: Interleukin;
PMN: Polymorphonuclear leukocytes; rpm: Revolutions per minute;
TNF-α: Tumor necrosis factor-α

Acknowledgements
The authors especially thank the patients and their families for taking part in this study. Thanks are
due to Antoine Labbé for his help and consideration.
Funding
This work was supported by the National Natural Scientific Foundation of China: Grant
No.81541105 (Y.Z.). Q.Lu is partly supported by general fund from the Research to Prevent
Blindness.

Availability of data and materials

The datasets used and/or analyzed during the current study are available from the corresponding
author on reasonable request.

Authors’ contributions
Y.Z. performed the samples collection and laboratory experiment, analyzed the data, and was a
major contributor in writing the manuscript. Q. Liang clinically diagnosed the patients and revised
the manuscript. Y.L. performed statistical analysis. Z.P. designed the project and performed the
penetrating keratoplasty surgery. C.B. and A.L. revised the manuscript. Q. Lu edited and proofread
the final manuscript. All authors read and approved the final manuscript.

Ethics approval and consent to participate

The study was approved by the Institutional Review Board and Ethics Committee of Beijing
Tongren Hospital. Informed consent was obtained from all individual participants and
parents/legal guardians in the study.

Consent for publication Not Applicable.

Competing interests
The authors declare that they have no competing interests.
Publisher’s Note
Springer Nature remains neutral with regard to jurisdictional claims in published maps and
institutional affiliations.

Author details
1 Beijing Tongren Eye Center, Beijing Tongren Hospital, Capital Medical
University, Beijing Ophthalmology & Visual Science Key Lab, Beijing 100730,
China. 2Beijing Institute of Ophthalmology, Beijing Tongren Eye Center, Beijing Tongren
Hospital, Capital Medical University, Beijing Key Laboratory of Ophthalmology and Visual
Sciences, Beijing 100005, China. 3Quinze-Vingts National Ophthalmology Hospital, Paris and
Versailles
Saint-Quentin-en-Yvelines University, Versailles, France. 4INSERM, U968, Paris, F-75012,
France; UPMC Univ Paris 06, UMR_S 968, Institut de la Vision, Paris F-75012, France; CNRS,
UMR_7210, Paris F-75012, France, Paris, France.
5 Department of Ophthalmology and Visual Sciences, University of Louisville, 301 E.
Muhammad Ali Blvd, Louisville, KY 40202, USA.

Received: 22 August 2017 Accepted: 29 March 2018

References
1. Whitcher JP, Srinivasan M, Upadhyay MP. Corneal blindness: a global perspective. Bull World
Health Organ. 2001;79(3):214–21.
2. Whitcher JP, Srinivasan M. Corneal ulceration in the developing world–a silent epidemic. Br J
Ophthalmol. 1997;81(8):622–3.
3. Dong X, Xie L, Shi W. Penetrating keratoplasty in management of fungal keratitis. Chin J
Ophthalmol. 1994;35:386–7.
4. Xie L, Zhong W, Shi W. Spectrum of fungal keratitis in north China. Ophthalmol.
2006;113:1943–8.
5. Prajna NV, John RK, Nirmalan PK, Lalitha P, Srinivasan M. A randomised clinical trial
comparing 2% econazole and 5% natamycin for the treatment of fungal keratitis. Br J
Ophthalmol. 2003;87(10):1235–7.
6. Thomas PA. Current perspectives on ophthalmic mycoses. Clin Microbiol Rev.
2003;16(4):730–97.
7. Wu TG, Wilhelmus KR, Mitchell BM. Experimental keratomycosis in a mouse model. Invest
Ophthalmol Vis Sci. 2003;44(1):210–6.
8. Wu TG, Keasler VV, Mitchell BM, Wilhelmus KR. Immunosuppression affects the severity of
experimental Fusarium solani keratitis. J Infect Dis. 2004; 190(1):192–8.
9. Vasanthi M, Prajna NV, Lalitha P, Mahadevan K, Muthukkaruppan V. A pilot study on the
infiltrating cells and cytokine levels in the tear of fungal keratitis patients. Indian J Ophthalmol.
2007;55(1):27–31.
10. Vemuganti GK, Garg P, Gopinathan U, Naduvilath TJ, John RK, Buddi R, Rao GN. Evaluation
of agent and host factors in progression of mycotic keratitis:
A histologic and microbiologic study of 167 corneal buttons. Ophthalmology.
2002;109(8):1538–46.
11. Thomas J, Gangappa S, Kanangat S, Rouse BT. On the essential involvement of neutrophils in
the immunopathologic disease: herpetic stromal keratitis. Journal of immunology (Baltimore,
Md : 1950). 1997;158(3):1383–91.
12. Becker J, Salla S, Dohmen U, Redbrake C, Reim M. Explorative study of interleukin levels in
the human cornea. Graefe's archive for clinical and experimental ophthalmology = Albrecht
von Graefes Archiv fur klinische und experimentelle Ophthalmologie. 1995;233(12):766–71.
13. Yamaguchi T, Calvacanti BM, Cruzat A, Qazi Y, Ishikawa S, Osuka A, Lederer J, Hamrah P.
Correlation between human tear cytokine levels and cellular corneal changes in patients with
bacterial keratitis by in vivo confocal microscopy. Invest Ophthalmol Vis Sci.
2014;55(11):7457–66.
14. Imanishi J. Expression of cytokines in bacterial and viral infections and their biochemical
aspects. J Biochem. 2000;127(4):525–30.
15. Stumpf TH, Shimeld C, Easty DL, Hill TJ. Cytokine production in a murine model of recurrent
herpetic stromal keratitis. Invest Ophthalmol Vis Sci. 2001;42(2):372–8.
16. Xue ML, Willcox MD, Lloyd A, Wakefield D, Thakur A. Regulatory role of IL-1beta in the
expression of IL-6 and IL-8 in human corneal epithelial cells during Pseudomonas aeruginosa
colonization. Clin Exp Ophthalmol. 2001; 29(3):171–4.
17. van Kooij B, Rothova A, Rijkers GT, de Groot-Mijnes JD. Distinct cytokine and chemokine
profiles in the aqueous of patients with uveitis and cystoid macular edema. Am J Ophthalmol.
2006;142(1):192–4.
18. Hamzaoui K, Hamzaoui A, Guemira F, Bessioud M, Hamza M, Ayed K. Cytokine profile in
Behcet's disease patients. Relationship with disease activity. Scand J Rheumatol.
2002;31(4):205–10.
19. Ahn JK, Yu HG, Chung H, Park YG. Intraocular cytokine environment in active Behcet uveitis.
Am J Ophthalmol. 2006;142(3):429–34.
20. van Gelderen BE, Van Der Lelij A, Peek R, Broersma L, Treffers WF, Ruijter JM, van Der
Gaag R. Cytokines in aqueous humour and serum before and after corneal transplantation and
during rejection. Ophthalmic Res. 2000;32(4):157–64.
21. Dinarello CA. Biologic basis for interleukin-1 in disease. Blood. 1996;87(6):2095–147.
22. Rudner XL, Kernacki KA, Barrett RP, Hazlett LD. Prolonged elevation of IL-1 in Pseudomonas
aeruginosa ocular infection regulates macrophage-inflammatory protein-2 production,
polymorphonuclear neutrophil persistence, and corneal perforation. Journal of immunology
(Baltimore, Md : 1950). 2000;164(12):6576–82.
23. Fenton RR, Molesworth-Kenyon S, Oakes JE, Lausch RN. Linkage of IL-6 with neutrophil
chemoattractant expression in virus-induced ocular inflammation. Invest Ophthalmol Vis Sci.
2002;43(3):737–43.
24. Maruo N, Morita I, Shirao M, Murota S. IL-6 increases endothelial permeability in vitro.
Endocrinology. 1992;131(2):710–4.
25. Noma H, Funatsu H, Yamasaki M, Tsukamoto H, Mimura T, Sone T, Jian K, Sakamoto I,
Nakano K, Yamashita H, et al. Pathogenesis of macular edema with branch retinal vein
occlusion and intraocular levels of vascular endothelial growth factor and interleukin-6. Am J
Ophthalmol. 2005;140(2):256–61.
26. Chodosh J, Astley RA, Butler MG, Kennedy RC. Adenovirus keratitis: a role for interleukin-8.
Invest Ophthalmol Vis Sci. 2000;41(3):783–9.
27. Oakes JE, Monteiro CA, Cubitt CL, Lausch RN. Induction of interleukin-8 gene expression is
associated with herpes simplex virus infection of human corneal keratocytes but not human
corneal epithelial cells. J Virol. 1993; 67(8):4777–84.
28. Macatonia SE, Doherty TM, Knight SC, O'Garra
A. Differential effect of IL-10 on dendritic cell- Submit your next manuscript to BioMed
induced T cell proliferation and IFN-gamma Central and we will help you at every step:
production. Journal of immunology (Baltimore, • We accept pre-submission inquiries
Md : 1950). 1993;150(9):3755–65. • Our selector tool helps you to find the most
29. Boorstein SM, Elner SG, Meyer RF, Sugar A, relevant journal
Strieter RM, Kunkel SL, Elner VM. Interleukin-
• We provide round the clock customer
10 inhibition of HLA-DR expression in human
support
herpes stromal keratitis. Ophthalmology.
1994;101(9):1529–35. • Convenient online submission

30. Santos Lacomba M, Marcos Martin C, Gallardo • Thorough peer review

Galera JM, Gomez Vidal MA, Collantes Estevez
• Inclusion in PubMed and all major
E, Ramirez Chamond R, Omar M. Aqueous
indexing services
humor and serum tumor necrosis factor-alpha in
• Maximum visibility for your research
clinical uveitis. Ophthalmic Res. 2001;
33(5):251–5. Submit your manuscript at
www.biomedcentral.com/submit