Halaman 1

Prosiding 2018 , 2 , 1527; doi: 10.3390 / prosiding2251527

www.mdpi.com/journal/proceedings
Prosiding
Investigasi Dampak Tamoxifen dan
Kombinasi Vitamin D pada Ekspresi P53,
Bcl-2 dan Bax dan Siklus Sel dalam Garis Sel Mcf-7 †
Derya Yetkin 1 , Ebru Ballı 1 , Gülsen Bayrak 1, *, Deniz Kibar 1 dan Merve Türkegün 2
1
Departemen Histologi dan Embriologi, Universitas Mersin, Mersin, 33300, Turki;
deryayetkin84@gmail.com (DY); ebru_balli@yahoo.com (EB); dkibar@mersin.edu.tr (DK)
2
Departemen Biostatistik dan Informatika Medis, Universitas Mersin, Mersin, 33300, Turki;
merveturkegun@gmail.com
* Korespondensi: gulsenyilmaz61@gmail.com
†
Dipresentasikan pada Kongres Penelitian Sel Kematian Internasional ke-2, Izmir, Turki, 1-4
November 2018.
Diterbitkan: 6 Desember 2018
Abstrak: Kanker payudara adalah jenis kanker utama pada wanita. Mayoritas sel dalam
diagnosis
kanker payudara adalah estrogen receptor alpha (ER α) positif dan pertumbuhan tumor ini
disebabkan oleh
estrogen. Tamoxifen digunakan sebagai metode perawatan suportif pada pasien kanker payudara.
Vitamin D adalah a
sekelompok sterol dengan fungsi seperti hormon. Vitamin D diketahui memiliki efek anti-
proliferasi dan
diketahui menginduksi penangkapan sel dan apoptosis pada fase G0 / G1 dalam siklus sel.
Penelitian ini bertujuan untuk
menyelidiki potensi efek anti-karsinogenik dari berbagai konsentrasi Tamoxifen dan vitamin
D, yang dianggap memiliki efek anti-proliferasi pada garis sel kanker payudara. Dalam
penelitian kami,
kombinasi berbagai konsentrasi Tamoxifen dan vitamin D dievaluasi. Sebagai akibat dari
data yang diperoleh, siklus sel dipelajari dalam perangkat FACS ARIA III. Selain itu, ekspresi
p53, BcL-2
dan protein Bax diperiksa dalam qRT PCR. Dalam penelitian kami, konsentrasi rendah
Tamoxifen dan
vitamin D meningkatkan proliferasi dalam sel kanker. Konsentrasi yang efektif ditemukan untuk
Tamoxifen.
Vitamin D saja tidak mengurangi proliferasi sel tetapi menurunkan proliferasi sel dengan
kombinasi. Sebagai
Hasilnya, ditemukan bahwa terapi yang menggunakan kedua agen ini secara terpisah
menurunkan proliferasi
sel kanker dan penangkapan sel yang diinduksi dalam fase G0 / G1 dalam siklus sel dan
mengubah ekspresi
p53, BcL-2 dan protein Bax.
Kata kunci: kanker payudara; tamoxifen; vitamin D
1. Perkenalan
Kanker adalah penyakit yang semakin meningkat di dunia dalam beberapa tahun terakhir.
Kematian terkait kanker di seluruh dunia adalah
segera diikuti oleh penyakit kardiovaskular [1]. Kanker payudara menyumbang 30% dari kasus
kanker
pada wanita dan menyumbang 18% dari semua kematian akibat kanker [2]. Meskipun
perkembangan banyak
obat kanker terhadap penyakit ini, angka kematian terus meningkat [3]. Mayoritas sel dalam
diagnosis kanker payudara adalah estrogen receptor alpha positive (ER α +), dan
pertumbuhannya serta
perkembangan dimediasi oleh estrogen. Modalitas pengobatan tumor ER α + ini adalah
maju untuk menargetkan sinyal yang dimediasi estrogen dengan anti-estrogen. Tamoxifen
(TAM) adalah selektif
estrogen receptor modulator (SERM) yang bertindak sebagai antiestrogen dalam sel kanker
payudara dan telah
digunakan selama tiga puluh tahun sebagai metode pengobatan suportif pada pasien kanker
payudara [4]. Vitamin D adalah a
sekelompok sterol dengan fungsi seperti hormon [5]. Reseptor vitamin D (VDR) banyak
ditemukan
tumor dan garis sel yang diturunkan tumor seperti payudara ganas, prostat, epidermal, tiroid,
kanker hemapoietik dan retinoblastoma. Penelitian ini bertujuan untuk menyelidiki potensi efek
karsinogenik dari berbagai konsentrasi Tamoxifen dan vitamin D, yang diperkirakan
memiliki efek anti-proliferasi, pada garis sel kanker payudara, MCF-7.
2. Bahan & Metode
Analisis Proliferasi Sel Real-time: Dalam penelitian ini, perangkat xCELLigence digunakan
untuk sitotoksisitas
uji. Dalam analisis ini kelangsungan hidup sel-sel dengan dosis Tamoxifen dan Vitamin D yang
berbeda (20 µM
Tam + 50 nM vit D, 20 TamM Tam + 100 nM vit D, 10 MM Tam + 50 nM vit D, 10 TamM Tam
+ 100 nM vit D)
dievaluasi. Untuk analisis sitotoksisitas, sel dibudidayakan di E-piring setelah penambahan
terkait
senyawa dan sistem berbasis komputer yang terhubung ke perangkat secara otomatis merekam
data
berikan grafik “indeks sel / waktu”.
Analisis Siklus Sel: Sebagai hasil dari data yang diperoleh dari pengujian proliferasi sel waktu-
nyata, sel
siklus dipelajari dengan menggunakan perangkat FACS ARIA III. Persentase sel yang
terdistribusi berbeda
fase, sub-G0, G0 / G1, S dan G2 / M, dihitung menggunakan perangkat lunak analisis bawaan.
Reaksi Rantai Polymerase Terbalik-Transcriptase Kuantitatif (qRT-PCR): Ekspresi protein
BAX dan BCL2 dan P53 dievaluasi oleh qRT-PCR. Total RNA diisolasi dari batang otak
jaringan menggunakan High Isolasi RNA Murni Kit, sesuai dengan instruksi pabrik. Itu
Kit Sintesis C-DNA Untai First Strand digunakan untuk menghasilkan c-DNA dari RNA
untuk instruksi pabrik.
Analisis statistik: Semua studi in vitro dilakukan dalam rangkap tiga dan hasilnya dinyatakan
sebagai sarana ± SD. Signifikansi statistik antara kelompok dievaluasi dengan Tukey-HSD untuk
post-hoc
beberapa perbandingan. p <0,05 dianggap signifikan secara statistik.
3. Hasil
1. Temuan Analisis Kombinasi pada Tamoxifen + Vitamin D: Konsentrasi setelah 48 jam 20 µM
TAM ( p <0,001) terus menurunkan proliferasi sel. Peningkatan proliferasi sel dengan 50 nM
dan 100 nM vit D ( masing-masing p = 0,429, p = 0,881) dan penurunan proliferasi sel dengan
10 µM
TAM ( p = 0,092)) tidak signifikan secara statistik. Untuk 20 µM TAM + 100 nM vit D ( p =
0,01), 20 µM
TAM + 50 nM vit D ( p = 0,001), 10 µM TAM + 100 nM vit D ( p = 0,002) dan 10 µM TAM +
50 nM Vit
Kombinasi D ( p = 0,005), proliferasi sel menurun secara signifikan. Setelah 72 jam
sitotoksisitas
percobaan, (20 µM TAM + 100 nM vit D ( p <0,001), 20 µM TAM + 50 nM vit D ( p <0,001),
10 µM
TAM + 100 nM vit D ( p <0,001), 10 µM TAM + 50 nM vit D ( p <0,001)) tingkat proliferasi sel
menurun. Selain itu, administrasi TAM 20 μM ( p <0,001) dan TAM 10 µM ( p = 0,033) juga
penurunan proliferasi sel (Gambar 1).
Gambar 1. Grafik variasi tergantung waktu dari indeks sel Tamoxifen, vitamin D dan
Kombinasi Tamoxifen + vit D pada konsentrasi yang berbeda antara 24, 48 dan 72 jam.

Halaman 3
Prosiding 2018 , 2 , 1527
3 dari 4
2. Demonstrasi Kerusakan DNA oleh Analisis Siklus Sel: Ketika tahap G1 (57%) dari
kelompok kontrol dibandingkan dengan kelompok lain 48 jam setelah percobaan kombinasi, the
perbedaan antara rata-rata 20 µM TAM (84%), 50 nM Vit D (82%), 20 µM TAM + 50 nM Vit D
(91%), 20 µM TAM + 100 nM Vit D (88%) kelompok ditemukan signifikan secara statistik ( p
<0,05) (Data
tidak ditampilkan). Perubahan pada fase S kelompok kontrol (34%) dan kelompok lain diperiksa
dan perbedaan antara kelompok ditemukan signifikan secara statistik ( p <0,05). Bahkan,
perbedaan antara 20 µM grup TAM dibandingkan dengan 20 µM TAM + 100nM Vit D, 10 µM
TAM + 100
nM Vit D, 10 µM TAM + 50 nM kelompok kombinasi Vit D ditemukan signifikan secara
statistik
( p <0,05). Pengukuran fase G2 menunjukkan perbedaan yang signifikan secara statistik antara
kelompok dosis
( p = 0,001). 72 jam setelah pemberian kombinasi, Perbedaan rata-rata antara G1 dan S
fase dari kelompok kontrol dan bahwa dari 20 μM TAM, 100 nM Vit D, 20 µM TAM + 50 nM
Vit D,
10 µM TAM + 50 nM Vit D, 10 µM TAM + 100 nM Vit D ditemukan secara statistik
signifikan ( p <0,05). Selain itu perbedaan rata-rata antara 20 µM TAM dan 20 µM TAM + 100
nM
Kelompok Vit D ditemukan signifikan secara statistik ( p <0,05 Perbedaan rata-rata antara G2
fase kontrol dan kelompok lain tidak ditemukan signifikan secara statistik ( p = 1,256, p = 0,306)
(Data tidak ditampilkan).
3. Pengaruh Tamoxifen dan Vitamin D pada p53, Bcl-2 dan Ekspresi Gen Bax: Secara Statistik
perbedaan signifikan dalam perubahan lipatan tingkat ekspresi mRNA dari Bax, Bcl-2, p53 di
MCF-7
sel dibandingkan dengan sel yang tidak diobati dengan PCR real-time ditunjukkan ( p <0,05)
(Gambar 2). 48 jam setelahnya
aplikasi kombinasi, tingkat ekspresi gen p53 menurun pada 10 µM dan 20 µM TAM,
50 nM Vit D, dibandingkan dengan kelompok kontrol, sedangkan ekspresinya meningkat
menjadi 72 jam. Namun,
perubahan dalam ekspresi kelompok kombinasi pada 72 jam lebih tinggi dari pada kelompok
lain.
Pada jam ke-48, ekspresi Bcl-2 dari semua kelompok kombinasi meningkat dibandingkan
dengan kontrol
kelompok. Pada jam ke-72, level ekspresi dalam kelompok 20 µM TAM +100 nM vit D
meningkat
secara signifikan dibandingkan dengan jam ke-48. Setelah 48 jam, ekspresi Bax dalam 20 µM
TAM + 50 vit D,
20 µM TAM + 100 nM vit D kelompok ditemukan meningkat. Setelah 72 jam, ekspresi Bax
meningkat
pada semua kelompok kombinasi, sementara itu menurun pada 20 μM TAM + 100 nM
kelompok vit D (Gambar 2).
4. Diskusi & Kesimpulan
Dalam penelitian kami, konsentrasi rendah Tamoxifen dan vitamin D ditemukan meningkat
proliferasi sel kanker. Konsentrasi efektif untuk Tamoxifen ditemukan. Itu juga ditemukan
bahwa vitamin D tidak mengurangi proliferasi sel saja tetapi menurunkan proliferasi sel ketika
digunakan
dalam kombinasi dengan Tamoxifen. Kesimpulannya, ditemukan bahwa terapi menggunakan
dua agen ini di
kombinasi berbeda mengurangi proliferasi sel kanker dan menginduksi penangkapan siklus sel
pada G0 / G1

Halaman 4
Prosiding 2018 , 2 , 1527
4 dari 4
tahap. Selain itu, tergantung pada hasil ekspresi p53, Bcl-2 dan Bax, ditemukan itu
kelompok kombinasi lebih efektif dalam mengarahkan sel ke apoptosis.