SCIENTIA VOL. 8 NO.

1, FEBRUARI 2018

SCIENTIA Jurnal Farmasi dan Kesehatan

SCIENTIA Diterbitkan oleh STIFI Perintis Padang setiap bulan Februari dan Agustus
Website : http://www.jurnalscientia.org/index.php/scientia

8 (1) ; 98 – 103, 2018

UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK BUNGA TAHI

KOTOK (Tagetes erecta L.) DENGAN METODE DPPH (1,1-Difenil-2-
Pikrihidrazil)
Mega Yulia dan Riki Ranova
Akademi Farmasi Imam Bonjol Bukittinggi
*Email : megayuriano@yahoo.com.sg

ABSTRAK

Telah dilakukan penelitian “Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Bunga Tahi Kotok
(Tagetes erecta L.) dengan Metode DPPH (1,1-Difenil-2-Pikrihidrazil)” menggunakan
spektrofotometri UV-VIS. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas antioksidan dari
ekstrak bunga tahi kotok. Proses ekstraksi sampel dilakukan dengan metode sokletasi
menggunakan tiga jenis pelarut secara bertingk at yaitu, N-heksan, etil asetat dan metanol. Dari
35 gram sampel kering didapatkan ekstrak N-heksan sebanyak 4,36 gram, ekstrak etil asetat 2,5
gram dan ekstrak metanol 5,4 gram. Aktivitas antioksidan diberikan oleh ekstrak etil asetat dan
metanol dengan nilai IC50 berturut-turut sebesar 53,40 ppm dan 181 ppm.

Kata kunci : Tagetes erecta L, Aktivitas Antioksidan, DPPH, Bunga

ABSTRACT

Research has been conducted to determine antioxidant activity of the extract of

Tahi Kotok Flowers (Tagetes erecta L.) with DPPH (1,1-Diphenyl-2-Pikrihidrazil)
method using UV-VIS spectrophotometry. Sample extraction process was done by
soxhletation method using tree types of solvent in stages, n-hexane, ethyl acetate and
methanol. As much as 4.36 grams n-hexane extract, 2.5 grams ethyl acetate extract and
5.4 grams methanol extract were obtained from 35 grams dried sample. Antioxidant
activity was given by extract of ethyl acetate and methanol with IC50 value of 53.40
ppm and 181 ppm.

Keywords: Tagetes erecta L, Antioxidant Activity, DPPH, Flower

p-ISSN : 2087-5045 e-ISSN : 2502-1834 98


PENDAHULUAN
Antioksidan merupakan suatu zat
yang memiliki kemampuan untuk
memperlambat proses oksidasi yang
berdampak negatif di dalam tubuh
(Irmawati, 2014). Antioksidan sangat besar
peranannya pada manusia dalam mencegah
terjadinya penyakit, yaitu dengan menekan
kerusakan sel yang terjadi akibat serangan
radikal bebas (Sudewo, 2012).
Berdasarkan sumber
perolehannya ada 2 macam antioksidan,
yaitu antioksidan alami dan antioksidan
buatan (sintetik) (Dalimartha dan Soedibyo,
1999). Adanya kekhawatiran akan
kemungkinan efek samping yang belum
diketahui dari antioksidan sintetik
menyebabkan antioksidan alami menjadi
alternatif yang sangat dibutuhkan
(Rohdiana, 2011; Sunarni, 2005).
Antioksidan alami mampu melindungi
tubuh terhadap kerusakan yang disebabkan
oleh radikal bebas dan menghambat
terjadinya penyakit degeneratif serta
mampu menghambat peroksidae lipid pada
makanan (Sunarni, 2005). Sumber
antioksidan alami dapat diperoleh dari
buah-buahan, sayuran dan bahan makanan
lainnya (Irmawati, 2014).
Salah satu tanaman yang bersifat
antioksidan adalah bunga tahi kotok
(Tagetes erecta L.). Berdasarkan hasil
penelitian Gutierrez dkk, pada tahun 2006
menunjukkan bahwa minyak atsiri dari
bunga tahi kotok memiliki aktivitas
antioksidan dengan nilai IC50 28.0 µg/ml.
Secara tradisional bunga ini digunakan
sebagai obat dalam penyembuhan radang
kulit bernanah (pyodermi), infeksi saluran
nafas bagian atas, pembengkakan payudara
(mastitis), radang mata (conjunctivitis), dll
(Widyaningrum, 2011). Dari literatur
diketahui bunga tahi kotok mengandung
senyawa tagettin 0,1%, terthienyl, helenian
0,74%, flavoxanthin dan flavonoid
(Widyaningrum, 2011; Anonim, 2000).
Berdasarkan hal diatas, maka
dilakukan uji aktivitas antioksidan dari
ekstrak bunga tahi kotok. Proses ekstraksi
dilakukan dengan tiga jenis pelarut secara
bertingkat yaitu, N-heksan, etil asetat dan
p-ISSN : 2087-5045 e-ISSN : 2502-1834
SCIENTIA VOL. 8 NO. 1, FEBRUARI 2018
metanol. Ekstrak yang didapatkan diuji
aktivitas antioksidan dengan metoda
peredaman radikal bebas menggunakan
DPPH. Tujuan dari penelitian ini untuk
mengetahui aktivitas antioksidan dari bunga
tahi kotok, sehingga dapat lebih
dimanfaatkan sebagai salah satu sumber
antioksidan dari bahan alam.
METODE PENELITIAN
Metodologi Penelitian
Alat
Alat yang digunakan adalah alat
sokletasi, timbangan digital, perkamen,
lumpang dan alu, penjepit kayu, plat tetes,
kaca arloji, bola hisap, pipet volume 5 ml,
pipet volume 0,5 ml, pipet tetes, labu ukur
250 ml, labu ukur 50 ml, labu ukur 10 ml,
spektrofotometer UV-vis (T-70), spatel,
tissue, kapas, vial, alumunium foil, test
tube, corong dan rotary evaporator.
Bahan
Bunga tahi kotok, DPPH (1,1-
Difenil-2-pikrihidrazil), aquadest, serbuk
Mg, H2SO4, HCL pekat, n-heksan, etil
asetat, metanol, kloroform,amonia, etanol
destilasi, vit.C, pereaksi mayer, FeCL3,
norit, asetat anhidrat.
Pengambilan Sampel
Bunga tahi kotok didapat dari
Kelurahan Kubu Tanjung, Tigo Baleh, Kota
Bukittinggi sebanyak 500 gram, kemudian
dicudi dan dikering-anginkan.
Proses Ekstraksi
Untuk pengambilan ekstraksi dari
bunga tahi kotok menggunakan metode
sokletasi. Sokletasi dilakukan dengan 3
pelarut secara bertingkat yaitu n-heksan,
etil asetat dan metanol, dengan cara bunga
tahi kotok yang telah dikering-anginkan
dirajang hingga berbentuk masa yang lebih
kecil, lalu sampel dimasukkan kedalam
kertas saring sebanyak 45 gram dan diikat
kedua ujungnya. Pasang penangas air dan
alat sokletasi, lalu masukkan sampel
kedalam alat soklet. Pelarut yang digunakan
yaitu n-heksan, etil asetat dan metanol.
99

Kemudian dimasukkan ke dalam soklet,
ditambahkan pelarut n-heksan sebanyak
250 ml. Lalu dilakukan sokletasi selama 14
jam dengan 117 siklus. Setelah 117 siklus
menunjukkan pelarut bening yang
menandakan penyarian sampel telah
sempurna. Dilanjutkan dengan penambahan
250 ml pelarut etil asetat, lalu dilakukan
sokletasi selama 13 jam dengan 74 siklus.
Lalu ditambahkan pelarut metanol
sebanyak 250 ml dan dilakukan sokletasi
selama 19 jam dengan 66 siklus. Kemudian
ekstrak yang didapat dipekatkan dengan
rotary evaporator sehingga diperoleh
ekstrak kental.
Uji Skrining Fitokimia
1) Pemeriksaan Alkaloid
Pemeriksaan alkaloid dilakukan dengan
metode Culvenor-Fitzgerald, yaitu
sampel sebanyak 2 gram dirajang halus
gerus didalam lumpang dengan bantuan
pasir bersih, tambahkan 10 ml
kloroform. Tambahkan 10 ml larutan
amoniak 0,05 N, lalu gerus dan saring
kedalam tabung reaksi, tambahkan 0,5
ml asam sulfat 2 N, kocok selama 2
menit dan biarkan sampai terjadi
pemisahan. Ambil lapisan asam,
pindahkan kedalam tabung reaksi lain,
kemudian tambahkan beberapa tetes
pereaksi mayer. Reaksi positif ditandai
dengan adanya kabut putih hingga
gumpalan putih atau endapan putih yang
tidak dapat dituang.
2) Pemeriksaan Steroid, Terpenoid dan
Senyawa Fenolik
Pemeriksaan dilakukan berdasarkan
metode simen et al yaitu sampel
sebanyak 2 gram yang telah dirajang
didihkan dengan 25 ml metanol selama
15 menit, saring selagi panas dan
filtratnya dikeringkan di atas penangas.
Ekstrak yang didapat di tambahkan air
suling dan kloroform masing-masing 5
ml, kocok dan dibiarkan sampai
terbentuk lapisan. Lapisan air diambil 3
ml kemudian dikocok dalam tabung
reaksi lain. Jika terbentuk busa yang
bertahan selama 15 menit berarti positif
saponin. Uji fenolik dilakukan dengan
cara menambahkan beberapa tetes FeCl3
pada 0,5 ml larutan air, reaksi akan
p-ISSN : 2087-5045 e-ISSN : 2502-1834
SCIENTIA VOL. 8 NO. 1, FEBRUARI 2018
positif jika terbentuk warna biru.
Lapisan kloroform disaring dengan norit
dalam plat tetes, biarkan mengering.
Setelah mengering tambahkan asetat
anhidrat dan asam sulfat pekat. Jika
terbentuknya warna merah berarti positif
steroid, sedangkan warna biru atau hijau
berarti positif terpenoid.
3) Pemeriksaan Flavonoid
Sampel sebanyak 2 gram dirajang halus,
dimasukkan dalam tabung reaksi,
didihkan dengan 5 ml metanol, dan
saring selagi panas. Filtratnya diuapkan
sampai kering kemudian dilarutkan
dengan aquadest, lalu tambahkan HCl
pekat dan serbuk magnesium. Jika
terbentuk warna merah berarti positif
flavonoid.
Uji Antioksidan
1. Pembuatan larutan DPPH
Sebanyak 5 mg DPPH dilarutkan
dengan etanol dalam labu ukur sampai
250 ml sehingga diperoleh larutan
dengan konsentrasi 20 µg/ml
(Molyneux, 2004).
2. Penentuan Panjang Gelombang Serapan
Maksimum DPPH
Sebanyak 3,8 ml larutan DPPH 20
µg/ml dan ditambahkan dengan 0,2 ml
etanol dalam test tube. Setelah itu
dibiarkan selama 30 menit ditempat
yang gelap. Serapan larutan diukur
dengan spektofotometer UV-Vis pada
panjang gelombang 400-600 nm
(Molyneux, 2004). Tentukan panjang
gelombang maksimum.
3. Pembuatan Sampel
Untuk pengujian awal masing-masing
sampel ekstrak n-heksan, etil asetat dan
metanol dibuat dengan konsentrasi 1000
ppm. Hasil % inhibisi menunjukan hasil
21,23% untuk n-heksan, 91,12% untuk
ekstrak etil asetat dan 78,38 % untuk
ekstrak metanol. Karena hasil %
inhibisi untuk ekstrak n-heksan kecil
yaitu 21,23% sehingga uji aktivitas
antioksidannya tidak dilanjutkan.
Selanjutnya untuk pelarut etil asetat
larutan uji dibuat dengan konsentrasi
100 ppm, 80 ppm, 60 ppm, 40 ppm dan
20 ppm. Untuk pelarut metanol larutan
uji dibuat dengan konsentrasi 250 ppm,
100

200 ppm, 150 ppm,100 ppm dan 50
ppm.
4. Pembuatan Konsentrasi Vitamin C
Konsentrasi vitamin C dibuat dengan
cara yang sama untuk konsentrasi 60
ppm, 50 ppm, 40 ppm, 30 ppm dan 20
ppm.
5. Uji Antioksidan
Masing-masing konsentrasi sampel dan
konsentrasi vitamin C dipipet sebanyak
0,2 ml ditambahkan dengan larutan
DPPH 20 µg/ml sebanyak 3,8 ml.
Campuran didiamkan selama 30 menit
ditempat yang gelap. Larutan ini
kemudian diukur absorbansinya pada
panjang gelombang maksimum.
6. Penentuan persentase inhibisi
% Inhibisi =
A1 = Absorbansi kontrol
A2 = Absorbansi sampel
Nilai 0% berarti tidak mempunyai
aktivitas antiradikal bebas atau
antioksidan, sedangkan nilai 100%
berarti dilanjutkan dengan pengenceran
larutan uji untuk melihat batas
konsentrasi aktivitasnya (Molyneux,
2004).
7. Penetapan IC50dengan persamaan regresi
Setelah didapatkan persentase inhibisi,
lalu dilakukan perhitungan secara
regresi linier (x,y) untuk mendapatkan
nilai IC50.
Persamaan regresi y = a + bx
y = persentase inhibisi
x = konsentrasi (ppm)
a = besarnya nilai y bila x = 0
b = perubahan nilai y bila x berubah
sebesar uni satuannya
Nilai IC50 didapatkan dari nilai x setelah
mengganti y dengan 50.
HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil
Dari penelitian mengenai uji aktivitas
antioksidan ekstrak bunga tahi kotok
dengan metode DPPH maka diperoleh hasil
sebagai berikut :
1. Sampel bunga tahi kotok segar sebanyak
500 gram setelah dikering anginkan
diperoleh bunga kering sebanyak 280
gram.
p-ISSN : 2087-5045 e-ISSN : 2502-1834
SCIENTIA VOL. 8 NO. 1, FEBRUARI 2018
2. Dari uji skrining fitokimia didapatkan
bunga tahi kotok mengandung senyawa
flavonoid dan terpenoid.
3. Proses ekstraksi sampel kering bunga
tahi kotok sebanyak 45 gram
menggunakan metoda sokletasi dengan
tiga pelarut n-heksan, etil asetat dan
metanol, diperoleh ekstrak masing-
masing sampel sebanyak 4.36 gram, 2.5
gram, dan 5.4 gram.
4. Pengukuran panjang gelombang serapan
maksimum DPPH pada konsentrasi 20
µg/ml adalah 516 nm dengan nilai
absorbansi 0,458.
5. Hasil pengujian aktivitas antioksidan
ekstrak n-heksan menunjukkan aktivitas
antioksidan lemah dimana konsentrasi
1000 ppm memiliki inhibisi 21,23 %.
6. Ekstrak etil asetat bunga tahi kotok
didapat nilai IC50 sebesar 53,40 ppm
sedangkan ekstrak metanol bunga tahi
kotok didapat nilai IC50nya 181 ppm.
7. Hasil pengujian aktivitas antioksidan
vitamin C didapat nilai IC50 adalah
30.30ppm.
Pembahasan
Pada penelitian ini sampel yang
digunakan adalah bunga tahi kotok yang
diambil didaerah Tigo Baleh sebanyak 500
gram. Bunga tahi kotok dikering anginkan
dan dirajang hingga berbentuk masa yang
lebih kecil. Sampel dikeringkan untuk
mengurangi kadar air dengan cara dikering-
anginkan untuk menghindari teroksidasinya
sampel dengan sinar matahari langsung.
Setelah proses pengeringan didapat bunga
tahi kotok kering sebanyak 280 gram.
Ekstraksi dilakukan dengan metode
sokletasi, metode ini dipilih karena pelarut
yang digunakan relatif sedikit dan proses
penyarian dapat lebih sempurna (Djamal,
2010). Walaupun demikian proses ini
memiliki kelemahan dimana selama proses
ekstraksi menggunakan panas sehingga
dapat merusak senyawa yang bersifat
termolabil. Pelarut yang digunakan yaitu n-
heksan, etil asetat dan metanol. Pelarut
yang digunakan sebelumnya telah
didestilasi untuk mengurangi kemungkinan
cemaran atau senyawa-senyawa lain dari
101

pelarut. Ekstrak yang didapat dipekatkan
dengan rotary evaporator.
Rotary evaporator digunakan untuk
memperoleh ekstrak kental. Prinsip kerja
dari rotary evaporator adalah pemisahan
ekstrak dengan pelarut menggunakan
pemanasan dibawah titik didih pelarut,
penurunan tekanan pada labu dan
pemutaran dengan kecepatan tertentu
sehingga senyawa yang terkandung didalam
ekstrak tidak rusak oleh suhu tinggi. Proses
ini dilakukan sampai tidak ada lagi pelarut
yang menetes pada labu rotary evaporator.
Ekstrak kental n-heksan yang diperoleh
sebanyak 4.36 gram, ekstrak kental etil
asetat sebanyak 2.5 gram, dan ekstrak
kental metanol sebanyak 5,4 gram.
Pemeriksaan aktivitas antioksidan
dilakukan secara spektrofotometri UV-Vis
menggunakan metode serapan radikal
DPPH, karena metode ini sederhana, mudah
dan pengerjaannya dalam waktu yang
singkat. Pemeriksaan aktivitas antioksidan
sampel diawali dengan pengukuran panjang
gelombang maksimum DPPH pada
konsentrasi 20 µg/ml dalam etanol
menggunakan spektrofotometri UV-Vis
diperoleh 516 nm dan absorbansinya
sebesar 0.485. Penetapan panjang
gelombang maksimal bertujuan untuk
mengetahui besarnya panjang gelombang
yang dibutuhkan larutan DPPH untuk
mencapai serapan maksimal. Pada setiap
pengukuran digunakan blanko tujuannya
untuk mengeliminasi serapan pelarut yang
digunakan, sehingga yang diserap hanya zat
yang diuji.
Pengujian pertama dengan membuat
konsentrasi 1000 ppm pada labu ukur 10 ml
masing-masing untuk 3 sampel, lalu
diujikan aktivitas antioksidannya dengan
mengambil 0,2 ml larutan 1000 ppm
sampel kemudian ditambahkan 3,8 ml
larutan DPPH 20 µg/ml. Dari hasil
pengujian tersebut diketahui ekstrak n-
heksan memiliki aktivitas antioksidan
lemah dimana persen inhibisinya sebesar
21,23 % sehingga penelitian tidak
dilanjutkan lagi. Untuk ekstrak etil asetat
dan metanol dilakukan pengenceran lagi
karena aktivitas antioksidannya sangat
tinggi.
p-ISSN : 2087-5045 e-ISSN : 2502-1834
SCIENTIA VOL. 8 NO. 1, FEBRUARI 2018
Pengujian kedua dengan membuat
konsentrasi 500 ppm pada labu ukur 10 ml
dan diencerkan dengan konsentrasi 400
ppm, 300 ppm, 200 ppm dan 100 ppm. Dari
hasil pengujian tersebut konsentrasi 500
ppm, 400 ppm dan 300 ppm mengalami
perubahan warna ungu menjadi warna
kuning dalam waktu kurang dari 30 menit,
sehingga dilakukan penurunan konsentrasi.
Pada pengujian ketiga konsentrasi
untuk ekstrak etil asetat bunga tahi kotok
dibuat dengan larutan induk 100 ppm yang
kemudian diencerkan menjadi 80 ppm, 60
ppm, 40 ppm dan 20 ppm. Untuk
konsentrasi ekstrak metanol bunga tahi
kotok dibuat dengan larutan induk 500 ppm
kemudian diencerkan menjadi 200 ppm,
150 ppm, 100 ppm dan 50 ppm. Untuk
konsentrasi vitamin C dibuat berdasarkan
penelitian yang telah dilakukan.
Besarnya aktivitas antioksidan ditandai
dengan nilai IC50 yaitu konsentrasi larutan
sampel yang dibutuhkan untuk
menghambat 50 % radikal bebas DPPH.
Nilai IC50 dihitung menggunakan rumus
persamaan regresi. Persamaan regresi yang
diperoleh untuk ekstrak etil asetat yaitu y =
0.88x + 3 dengan koefisien korelasi r2=
0.9625 didapat nilai IC50 sebesar 53.40
ppm. Persamaan regresi untuk ekstrak
metanol yaitu y = 0.238x + 6.9 dengan nilai
r2= 0.9812 dengan nilai IC50nya 181.09
ppm. Untuk vitamin C didapat nilai IC50
sebesar 30.30 ppm, kurvanya dapat dilihat
pada gambar dibawah ini.
Gambar 1. Kurva Persentase Inhibisi Ekstrak
Etil Asetat
102

Gambar 2. Kurva Persentase Inhibisi Ekstrak
Metanol
Gambar 3. Kurva Persentase Inhibisi Vitamin
C Surabaya.
KESIMPULAN
Dari hasil penelitian Uji Aktivitas
Antioksidan Ekstrak Bunga Tahi Kotok
didapat kesimpulan bahwa ekstrak etil
asetat dan ekstrak metanol bunga tahi kotok
memiliki aktivitas antioksidan yang sangat
bagus yaitu dengan nilai IC50 sebesar 53,40
ppm untuk ekstrak etil asetat dan 181,09
ppm untuk ekstrak metanol, sedangkan
untuk ekstrak n-heksan tidak dilanjutkan
untuk pengujian aktivitas antioksidannya
karena dari pengujian awal dengan
konsentrasi larutan 1000 ppm didapatkan %
inhibisi lemah yaitu 21,23%.
DAFTAR PUSTAKA
Anonim, 2000, 100 Plus Herbal Indonesia,
www.trubus-online.co.id,Volume 11,
Jakarta, diakses pada tgl 1 November
2016.
Dalimartha, S., dan Soedibyo, M, 1999,
Awet Muda dengan Tumbuhan Obat
p-ISSN : 2087-5045 e-ISSN : 2502-1834
SCIENTIA VOL. 8 NO. 1, FEBRUARI 2018
dan Diet Suplemen, Trubus
Agriwidya, Jakarta.
Djamal, R., 2010, Kimia Bahan Alam
Prinsip-Prinsip Dasar Isolasi
danIdentifikasi, Universitas
Baiturrahmah, Padang.
Gutierrez, RMP., Luna, HH., Garrido, SH,
2006, Antioxidant Activity of
Tagetes ErectaEssential Oil,J, CHIL,
Chem, Soc.
Hartanto, H., 2012, Identifikasi Potensi
Antioksidan Minum Coklat dari
Kakao Lindak (Theobroma cacao L)
Dengan Berbagai Cara Prepasi:
Metoda Radikal Bebas 1,1 Diphenil-
2-Pikrihidrazhyl (DPPH), Skripsi,
Program Studi Teknologi Pangan
Fakultas Teknologi Pertanian
Universitas Katolik Widya Mandala,
Irmawati, 2014, Keajaiban Antioksidan,
Cijantung- Jakarta Timur.
Molyneux, P., 2004, The Use Stable Free
Radikal Diphenylpierylhydrazyl
(DPPH) for Estimating Antioksidan
Activity, Songklanakarin Journal
Science Thecnology, volume 26
Nomor 2 : 211-219.
Rohdiana, D, 2001, Aktivitas Daya
Tangkap Radikal Polifenol dalam
Daun Teh, Majalah Jurnal Indonesia
12, 1: 53-58.
Sunarni, T, 2005, Aktivitas Antioksidan
Penangkap Radikal Bebas Beberapa
Kecambah dari Biji Tanaman Familia
Papilionaceae, Jurnal Farmasi
Indonesia 2 (2), 2001 : 53-61.
Sudewo, B., 2012, Basmi Kanker dengan
Herbal, Visimedia, Jakarta.
Widyaningrum, 2011, Kitab Tanaman Obat
Nusantara, MedPress, Yogyakarta
103