ISSN: 0975-

8585

Jurnal Penelitian Farmasi, Biologi dan Kimia,

Ilmu

Evaluasi Invitro Antioksidan dan Invivo Potensi

Hepatoprotektifdari Myristica Malabarica,

BK Manjunatha *1, Vinay Hegde2, Abhilash N1,

Divakara R1

1 Departemen Bioteknologi, The Oxford College of Rekayasa, Bommanahalli, Bangalore 560068,

Karnataka, India. 2 Departemen Botani, Sekolah Tinggi Ilmu Terapan SRNMN, Shimoga 577401,
Karnataka, India.

ABSTRAK

Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengevaluasi ekstrak metanol Myristica malabarica
untuk potensi hepatoprotektifnya. Aktivitas antioksidan ekstrak dievaluasi dengan menggunakan
radikal radikal difenil picryl hidrazil (DPPH), scavenging hidrogen peroksida, 2, 2'-azino-bis, 3-
ethylbenzothiazoline-6-sulphonic acid (ABTS) scavenging radikal dan Nitric oxide (NO) aktivitas
pemulungan radikal diikuti dengan penentuan konten Total Phenol. Aktivitas hepatoprotektif dari
ekstrak dievaluasi oleh karbon tetraklorida (CCl ) yang diinduksihati model kerusakanpada tikus.
4

Mekanisme molekuler dari aktivitas hepatoprotektif dipelajari melalui pendekatan insilico

menggunakan docking molekuler terhadap Nuclear Factor kappa B (NFkB) dan reseptor Pregnane X
untuk mengidentifikasi kemungkinan lead yang bertanggung jawab untuk aktivitas yang diklaim.
Ekstrak menunjukkan aktivitas antioksidan tergantung dosis yang signifikan denganIC50 nilai0,02 mg /
ml dalam uji DPPH, 0,107 mg / ml dalam Pembilasan hidrogen peroksida, 1,6 μg / ml dalam uji
dekolorisasi kation radikal ABTS dan 0,5 mg / ml dalam Nitrat oksida uji pembilasan yang sebanding
dengan asam askorbat. Kelompok-kelompok hewan yang dirawat dengan CCl4 mencatat kenaikan
penanda serum yang signifikan yang mencerminkan kerusakan hati. Perlakuan awal tikus dengan
ekstrak metanol dari M. malabarica (200mg / kg po) menghambat peningkatan kadar serum total
bilirubin, total protein, transaminase alanin serum, transaminase aspartat dan alkali fosfatase yang
mencerminkan perlindungan hati dengan obat kasar dan data sebanding dengan silymarin (100mg /
kg po). Penelitian ini menunjukkan bahwa M. malabarica kulit batangmemiliki aktivitas radikal bebas,
aktivitas hepatoprotektif dan kemungkinan Prunetin dan Biochanin A menjadi kandidat utama untuk
perlindungan hati. Kata kunci: Myristica malabarica; Antioksidan; hepatoprotektif; Insilco docking
molekul.

PENDAHULUAN

Tanaman M. malabarica L., (Myristicaceae) dikenal karena banyak khasiat obat seperti gangguan
pencernaan, borok, luka, aphrodiasic, seperti rejuvenator pada kandung kemih, peradangan, batuk, diare, sakit
gembur-gembur, kelumpuhan, rematik, batu saluran kemih, muntah, bronkitis, demam, sensasi terbakar,
menghilangkan nyeri pada otot, keseleo dan luka [1]. Tanaman ini mengandung banyak konstituen aktif seperti 7,
4-dimetoksi-5 hidroksil isoflavon, biochanin A, prunetin, 1,3-diarilpropanol dan alfa-hidroksildihidroklonal [2], 2-
asilresorinol, diarilonanoid, malararaton C [3], malabarikon A [ 4], Malabaricones AD, diarylnonanoids (Talukdar
et al 2000). Tanaman ini dikenal karena aktivitas antioksidannya [5]. Survei botani etno di Ghats Barat distrik
Uttarkannada, Karnataka, India mengungkapkan bahwa kulit batang M. malabarica digunakan oleh kelompok
etnis untuk mengobati penyakit kuning, penyembuhan luka dan penyakit kulit (komunikasi pribadi). Meskipun
tanaman ini digunakan oleh kelompok etnis Ghats Barat untuk mengobati penyakit kuning, tidak ada penelitian
ilmiah yang dilakukan untuk mengevaluasi potensi hepatoprotektifnya. Oleh karena itu, penelitian ini dilakukan
untuk mengevaluasi potensi hepatoprotektif dari M. malabarica melalui CCl4 yang diinduksihati model
kerusakandan kemampuannya untuk mencari radikal bebas. Penelitian ini juga dilengkapi dengan Insilico
diphytoconstituentsdigabungkan analisis mana yang diperoleh dari survei literaturdengan reseptor target yang
diunduh dari Protein Data Bank untuk memprediksi orientasi yang disukai dan ikatan afinitas molekul timah.

BAHAN DAN METODE

Pengumpulan dan ekstraksi bahan mentah

Kulit batang M. malabarica dikumpulkan dari hutan rentang Sirsi, Negara Bagian Karnataka, selama
Juni 2011. Keaslian taksonomi dikonfirmasikan oleh penulis yang sesuai dan spesimen voucher disimpan di
herbaria departemen (BKM- 133, BKM-134) sebagai spesimen otentik untuk referensi di masa depan. Kulit
batang dikeringkan dengan cara teduh, bubuk secara mekanis (Saringan No. 10/44) dan disimpan dalam wadah
kedap udara. Sekitar 250g bahan serbuk menjadi sasaran perombakan, pertama-tama dihilangkan lemaknya
dengan petroleum eter (Hi-Media, Bangalore) dan kemudian diekstraksi secara mendalam dengan metanol (Hi-
Media, Bangalore) selama 48 jam. Pelarut didestilasi pada suhu rendah di bawah tekanan tereduksi
menggunakan evaporator flash rotory (Buchi, Flawil, Swiss.). Hasilnya adalah 29,3% b / b.

Parameter pengujian yang digunakan

Evaluasi Aktivitas Antioksidan Uji decation kation radikal

ABTS
 Untuk menghasilkan ABTS (2,2'-azino-bis, 3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic acid) radikal kation, 50 ml
2 mM ABTS dan 0,3 mL 17 mM potassium persulfate dicampur bersama dan diinkubasi dalam gelap selama 12-
16 jam untuk mengembangkan warna biru prusia

ABTS· + solusi yang memiliki maksimum penyerapan pada 734 nm * 9 +. Untuk menentukan aktivitas
pemulungan ekstrak, 400 μl ekstrak metanol dari konsentrasi yang berbeda ditambahkan ke 320 μl larutan
ABTS· + . Absorbansi diukur pada 734 nm setelah 10 menit inkubasi pada suhu kamar. Semua bacaan dilakukan
dalam rangkap tiga dan aktivitas pembersihan radikal bebas dihitung dari persamaan 1. Persentase
penghambatan ekstrak tanaman, standar asam askorbat diplotkan terhadap masing-masing konsentrasi yang
digunakan danIC50 nilaidihitung dengan mengekstrapolasi grafik.

Evaluasi aktifitas antioxcidan nitric oxide ( uji invivo parameter yang diamati Persentase penghambatan
ekstrak tanaman dan standar asam askorbat diplot )

Nitric oxide radikal scavenging diperkirakan berdasarkan modifikasi reaksi Griess Illosvoy [10].
Campuran reaksi 6 ml yang mengandung 2 ml 10 mM natrium nitroprussida, 1 ml salin dapar fosfat dan 1 ml
ekstrak metanol dengan konsentrasi berbeda diinkubasi pada suhu 25 ° C selama 150 menit. Setelah inkubasi, 1
ml campuran reaksi dicampur dengan 1 ml reagen asam sulfanilat (0,33% dalam 20% asam asetat glasial) dan
dibiarkan selama 5 menit untuk menyelesaikan diazotisasi. Selanjutnya 1 ml naftil etilen diamina dihidroklorida
ditambahkan, dicampur dan dibiarkan selama 30 menit pada 25 ° C dalam cahaya yang disebarkan. Absorbansi
kromofor berwarna merah muda yang terbentuk diukur pada 540 nm terhadap larutan kosong yang sesuai.
Semua bacaan dilakukan dalam rangkap tiga dan aktivitas pembersihan radikal bebas dihitung dari persamaan 1
Persentase penghambatan ekstrak tanaman dan standar asam askorbat diplot terhadap masing-masing
konsentrasi yang digunakan. IC50 nilaidihitung dengan ekstrapolasi grafik.

Evaluasi Kegiatan
Hepatoprotektif

Formulasi obat ( uji invitro parameter yang diamati total bilirubin , protein total, serum alanine
transaminase, aspartate transaminase dan alkaline phosphatase)

Suspensi oral yang mengandung 100mg / ml dan 200mg / ml ekstrak kulit batang metanol disiapkan
dalam 1% b / v gusi tragacanth.

Tikus albino Wistar Jantan Jantan, masing-masing dengan berat 150-200 g diperoleh dari National
College of Pharmacy, Shimoga dan dipelihara pada kondisi perumahan standar. Hewan-hewan diberi makan
dengan diet komersial (Hindustan Lever Ltd., Bangalore) dan air ad libitum selama percobaan. Penelitian ini
diizinkan oleh Komite Etik Hewan Institusional dengan Reg No. 144/1999 / CPCSEA / SMG.

Uji toksisitas akut

Ekstrak metanol kulit batang ditemukan tidak beracun hingga dosis 2000mg per kg bb Dalam penelitian
ini 100mg / kg po dan dosis 200 mg / kg po dipilih untuk menilai aktivitas hepatoprotektif tanaman [11 ]
Uji hepatoprotektor

Hewan-hewan dibagi menjadi lima kelompok masing-masing enam tikus. Hewan-hewan dalam
kelompok I berfungsi sebagai kontrol dan menerima kendaraan (1ml / kg / hari 1% b / v gusi tragacanth g)
selama 14 hari. Semua hewan dari kelompok II hingga V menerima 0,1ml / kg / hari CCl 4 (Hi-Media, Bangalore)
selama 14 hari. Kelompok III hewan menerima obat standar Silymarin (Ranbaxy Lab. Dewas) dalam dosis 100
mg / kg / hari po selama 14 hari. Ekstrak kulit batang metanol M. malabarica diberikan kepada hewan kelompok
IV dan V dalam dosis 100mg / kg / hari po dan 200mg / kg / hari po masing-masing selama 14 hari. CCl4,
Silymarin dan ekstrak diberikan bersamaan dengan masing-masing kelompok hewan. Hewan-hewan dari semua
kelompok dikorbankan pada hari ke-14 di bawah anestesi eter ringan. Sampel darah masing-masing hewan
dikumpulkan secara terpisah oleh perdarahan karotid ke dalam tabung sentrifugal kering yang disterilkan dan
dibiarkan menggumpal selama 30 menit pada37 suhuoC. Serum yang jernih dipisahkan pada 2500 rpm selama 10
menit dan menjadi subjek penyelidikan biokimia yaitu, total bilirubin [12], protein total [13], serum alanine
transaminase, aspartate transaminase [14] dan alkaline phosphatase [15]. Hasil estimasi biokimia dicatat
sebagai rata-rata ± SE dari enam hewan di masing-masing kelompok. Data menjadi sasaran satu arah ANOVA
0,001 dianggap sebagai statistik * diikuti oleh nilai uji P Dunnett yang signifikan.

Hispatologi

Sampel hati dikeluarkan dari hewan percobaan masing-masing kelompok dan dicuci dengan salin
normal. Awalnya bahan diperbaiki dalam formalin netral buffered 10% selama 48 jam dan kemudian dengan
larutan sapi selama 6 jam. Mereka diproses untuk ketebalan parafin menggunakan embedding mikrotom. Bagian
diambil pada 5 μm diproses dalam seri alkohol-xylene dan diwarnai dengan alum hematoksilin dan eosin [16].
Bagian diperiksa secara mikroskopis untuk evaluasi perubahan histopatologis.

Uji insilico (parameter yang digunakan . Chem Sketch dari perangkat lunak ACDLABS 10.00)

Untuk mempelajari mekanisme molekuler, dipilih konstituen aktif seperti biochanin A, prunetin,
malabaricone C, malabaricone A, malabaricone B dan malabaricone D yang dipilih. Chem Sketch dari perangkat
lunak ACDLABS 10.00 digunakan untuk merancang ligan diikuti oleh optimasi 3D. File format Sybyl Mol2 dari
ligan ini dikonversi menjadi format Protein data bank (pdb) menggunakan perangkat lunak Open Babel [17].
Reseptor target potensial yang terlibat dalam hepatoproteksi yaitu NFkB dan reseptor Pregnane X diperoleh dari
survei literatur [18, 19,20] dan masing-masing file pdb mereka ID: 1VKX [21] dan ID: 1ILG [22] diambil dari bank
data Protein. Muatan atom Gastieger, penghapusan pelarut dan hidrogen ditambahkan ke dalam file reseptor
untuk persiapan reseptor dalam simulasi docking oleh UCSF Chimera [23]. Analisis docking dilakukan
menggunakan Autodock 4.2 [24]. Torsi dalam konstituen aktif ditetapkan ke 6 dan hidrogen non-polar hadir
dalam reseptor digabung. File disimpan dalam format .pdbqt. Program AutoGrid 4.2, disertakan dengan
AutoDock 4.2 digunakan untuk menghasilkan peta kisi. Ukuran kotak kisi diatur pada 62, 62 dan 62 A ° (x, y, dan
z) untuk memasukkan semua residu asam amino yang ada di situs makromolekul aktif. Algoritma Genetika
Lamarckian (LGA) dipilih untuk mencari konformer terbaik dengan energi ikat terendah. Hasil dianalisis untuk
mempelajari interaksi, energi ikat, interaksi ikatan hidrogen dan jarak ikatan antara donor ikatan hidrogen dan
akseptor untuk konformer terbaik.