IOSR Journal Of Pharmacy

(E) -ISSN: 2250-3013, (p) -ISSN: 2319-4219

www.iosrphr.org Volume 5, Issue 10 (Oktober 2015), PP. 07-19

Suatu Tinjauan pada Langkah-Langkah Metode Analisis Validasi

Panchumarthy Ravisankar * 1, Ch. Naga Navya 1, D. Pravallika 1, D. Navya Sri 1

1 Vignan Farmasi College, Vadlamudi, Guntur (Dist.) - 522.213, Andhra Pradesh State, India.

Abstrak: Ketika metode analisis digunakan untuk menghasilkan hasil tentang karakteristik sampel obat yang terkait adalah penting bahwa hasil
yang dapat dipercaya. Mereka dapat digunakan sebagai dasar untuk keputusan yang berkaitan dengan pemberian obat kepada pasien. metode
analisis validasi diperlukan selama pengembangan obat dan manufaktur dan metode analisis ini cocok untuk tujuan mereka dimaksudkan. Untuk
memenuhi kebutuhan industri farmasi GMP harus memiliki kebijakan validasi keseluruhan yang dokumen bagaimana validasi akan dilakukan.
Tujuan dari validasi ini adalah untuk menunjukkan bahwa proses yang terlibat dalam pengembangan dan pembuatan obat, produksi dan
pengujian analitis dapat dilakukan secara efektif dan direproduksi.

Kata kunci: Metode analisis validasi, analisis farmasi, Kekhususan, Precision, Akurasi.

SAYA. PENGANTAR
Ini dapat didefinisikan bahwa Analytical kimia adalah studi pemisahan, kuantifikasi dan komponen kimia identifikasi bahan-bahan
alami dan buatan didasari dengan satu atau lebih senyawa atau unsur-unsur. kimia analitik dipisahkan menjadi dua kategori utama, analisis
kualitatif yang mengatakan identifikasi berkaitan dengan komponen kimia yang ada dalam sampel, di mana sebagai analisis kuantitatif
memperkirakan jumlah elemen tertentu atau senyawa dalam substansi yaitu, sampel.

analisis farmasi [ 1-3] memainkan peran yang sangat luar biasa dalam pemeriksaan formulasi farmasi dan obat massal mengenai
pengendalian mutu dan jaminan. peningkatan pesat dalam industri farmasi [ 4] dan produksi narkoba di dan di seluruh dunia membawa maju
kenaikan permintaan yang tak terelakkan untuk mencari teknik analisis novel dan sistematis dalam industri farmasi. Sebagai konsekuensinya,
pengembangan metode analisis telah menjadi aktivitas dasar analisis.

Pembangunan di metode analisis ilmiah dan beton telah dihasilkan dari kemajuan instrumen analitis. Perbaikan dari pengembangan
metode analisis dan instrumen analisis telah mengurangi waktu dan biaya analisis [ 5] dan ditingkatkan presisi dan akurasi. Teknik yang
berkaitan dengan analisis yang dikembangkan dan divalidasi untuk bahan aktif farmasi, eksipien, zat terkait, produk obat, produk degradasi
dan, pelarut sisa, dll Hasil yang menjadi bagian integral dari kebutuhan yang diperlukan untuk peraturan organisasi [ 6].

pengembangan metode analisis akhirnya menghasilkan metode tes resmi [ 7]. Akibatnya laboratorium kontrol kualitas menggunakan
metode ini untuk memeriksa kemanjuran, identitas, kemurnian, keamanan serta kinerja produk obat. pihak berwenang memberikan sangat
penting pada metode analisis di bidang manufaktur. persetujuan obat oleh pihak berwenang mengharuskan pemohon untuk membuktikan
kendali seluruh proses pengembangan obat dengan menggunakan metode analisis divalidasi [ 8].

Obat-obatan baru banyak yang diperkenalkan dan terus berkembang dari hari ke hari. Oleh karena itu benar-benar penting untuk
berevolusi metode baru dan memperkenalkan mereka untuk mengontrol kualitas mereka. analisis farmasi modern membutuhkan persyaratan
sebagai berikut.

1. Analisis harus mengambil sedikit waktu dan harus ekonomis.

2. Keakuratan analisis harus menerima pedoman Farmakope.

3. Metode yang dipilih harus tepat dan selektif.

7
 Suatu Tinjauan pada Langkah-Langkah Analytical ...

II. TEKNIK INSTRUMENTAL KHAS

Metode estimasi obat dipisahkan menjadi kategori fisik, kimia, fisika dan biologi. Metode ini, umumnya metode fisik dan fisikokimia
digunakan dan sebagian besar metode fisik yang berkaitan dengan analisis mengasyikkan yang mempelajari sifat-sifat fisik yang berbeda dari
zat. Mereka adalah penentuan kelarutan, transparansi atau tingkat kekeruhan, warna, kepadatan atau berat jenis (untuk cairan), mencair,
membeku, poin dan kadar air mendidih. metode fisikokimia [ 9, 10] dimanfaatkan untuk menguji fenomena fisik yang terjadi sebagai akibat dari
reaksi kimia. Dalam metode fisikokimia Optical (refractometry, polarimetri, Emisi Spektrofotometri dan nephelometry atau turbidimetri),
Elektrokimia (Potensiometrik, amperometry dan Polarografi) dan Kromatografi (Kertas, Kolom, Lapis Tipis [ 11], Gas Liquid Chromatography [ 12] Kromatografi
Cair Kinerja Tinggi [ 13, 14]

metode biasanya lebih. Metode yang melibatkan reaksi nuklir seperti Nuclear Magnetic Resonance kebetulan lebih populer. Kombinasi GC-MS
adalah salah satu alat yang kuat yang menonjol yang tersedia. Metode kimia termasuk volumetrik dan gravimetrik prosedur, yang terutama
tergantung pada pembentukan kompleks, asam - basa dan reaksi redoks. Titrasi di kompleksiometri dan media non-air telah banyak
memanfaatkan dalam analisis farmasi setiap kali sensitivitas pada tingkat mg cukup dan gangguan dapat diabaikan. Metode modern (HPLC,
UPLC, GLC, GC-MS / MS, LC-NMR dan Liquid spektrometri massa kromatografi adalah pilihan yang tersedia untuk pengujian yang melibatkan
peralatan yang canggih, yang sangat sensitif, akurat dan mengkonsumsi jumlah yang sangat kecil dari sampel untuk analisis .

AKU AKU AKU. ANALITIS METODE PENGEMBANGAN [ 15-18]

Ketika tidak ada metode otoritatif yang tersedia, metode baru sedang dikembangkan untuk analisis produk baru. Untuk menganalisis
ada produk baik farmakope atau non-farmakope metode baru yang dikembangkan untuk mengurangi biaya selain waktu untuk presisi yang lebih
baik dan kekasaran. Metode ini dioptimalkan dan divalidasi melalui berjalan percobaan. Metode alternatif diusulkan dan dimasukkan ke dalam
praktek untuk menggantikan prosedur yang ada dalam data laboratorium komparatif dengan semua manfaat yang tersedia dan kerugian.

3.1. Tujuan dari pengembangan metode analisis

analisis obat mengungkapkan identifikasi karakterisasi & penentuan obat dalam campuran seperti bentuk sediaan & cairan
biologis. Selama proses manufaktur dan obat pengembangan tujuan utama dari metode analisis adalah untuk memberikan informasi tentang
potensi (yang dapat langsung berhubungan dengan kebutuhan dosis dikenal), kenajisan (terkait dengan profil keamanan obat), bioavailabilitas
(termasuk karakteristik obat kunci seperti bentuk kristal, keseragaman obat dan pelepasan obat), stabilitas (yang menunjukkan produk
degradasi), dan efek manufaktur parameter untuk memastikan bahwa produksi produk obat konsisten [ 19].

Konsep pengendalian mutu dimaksudkan untuk memeriksa dan mengidentifikasi produk asli dan benar oleh serangkaian langkah-langkah yang
dirancang untuk menghindari dan menyingkirkan kesalahan di tahap bervariasi dalam produksi. Untuk mengambil keputusan untuk melepaskan atau
membuang produk didasarkan pada satu atau lebih macam tindakan kontrol. Menyediakan proses analisis sederhana dan untuk berbagai formulasi
kompleks adalah subyek yang sangat penting. peningkatan pesat dalam industri farmasi dan produksi konstan obat di berbagai belahan dunia telah
membawa peningkatan cepat dalam permintaan untuk teknik analisis baru dalam industri farmasi sebagai konsekuensinya, pengembangan metode analisis
telah menjadi aktivitas dasar analisis di laboratorium kontrol kualitas.

Alasan untuk pengembangan metode baru analisis obat adalah:

Sebuah) Ketika tidak ada obat atau obat resmi kombinasi yang tersedia di farmakope.

b) Ketika tidak ada proses analitis sopan untuk obat yang ada dalam literatur karena peraturan paten.

c) Ketika tidak ada metode analisis untuk formulasi obat karena gangguan yang disebabkan oleh eksipien formulasi.

d) metode analisis untuk kuantisasi analit dalam cairan biologis yang ditemukan tidak tersedia.

e) Prosedur analitis yang ada mungkin perlu reagen mahal dan pelarut. Hal ini juga dapat melibatkan memberatkan prosedur
ekstraksi dan pemisahan.

8
 Suatu Tinjauan pada Langkah-Langkah Analytical ...

3.2. Langkah untuk pengembangan metode

Prosedur pengembangan mengikuti dengan dokumentasi yang tepat. Semua data yang berhubungan dengan studi ini harus dicatat baik dalam
notebook laboratorium atau dalam database elektronik.

3.3. Analit karakterisasi standar

Sebuah) Semua informasi penting diketahui tentang analit dan strukturnya yang mengatakan fisika-kimia
sifat seperti kelarutan, isomer optik dll, dikumpulkan.

b) Analit standar (≈100% kemurnian) diperoleh. pengaturan yang diperlukan harus dibuat untuk sempurna
penyimpanan (lemari es, desikator, dan freezer).
c) Dalam matriks sampel ketika beberapa komponen yang harus dianalisis, jumlah komponen dicatat sepatutnya penyajian data dan
aksesibilitas standar diperkirakan.

d) Metode seperti spektroskopi, HPLC, GC, MS dll, yang dipertimbangkan saat dicocokkan dengan sampel
stabilitas.

3.4. persyaratan metode

Persyaratan metode analisis kebutuhan untuk mengembangkan angka analitis merit seperti linearitas, selektivitas, rentang, akurasi,
presisi, batas deteksi dll, harus ditetapkan.

3.5. pencarian literatur dan metodologi sebelumnya

Semua informasi sastra terhubung dengan obat ditinjau untuk sifat fisiko-kimia, sintesis, kelarutan dan metode analisis yang sesuai
dengan referensi buku yang relevan, jurnal, USP / NF, AOAC dan publikasi ASTM dan itu sangat nyaman untuk mencari Chemical Abstracts
Service otomatis terkomputerisasi sastra.

3.6. Memilih metode

Sebuah) Sepatutnya memanfaatkan informasi yang tersedia dari literatur, metodologi berkembang sejak metode berubah dimanapun
diperlukan. Kadang-kadang sangat penting untuk mendapatkan instrumen tambahan untuk mengembangkan, memodifikasi atau
mereproduksi dan memvalidasi ada prosedur untuk analit dan sampel.

b) Jika tidak ada metode yang cocok masa lalu yang tersedia untuk menganalisis analit yang akan diperiksa.

3.7. Setup instrumental dan studi awal

Instalasi, operasional dan kinerja kualifikasi instrumentasi dengan mengacu ke laboratorium prosedur operasi standar diverifikasi
dengan mendirikan instrumentasi yang tepat.

3.8. optimasi
Sambil melakukan optimasi, salah satu parameter berubah pada suatu waktu dan satu set kondisi terisolasi, sebelum memanfaatkan trial and error
pendekatan. Mengatakan kebutuhan pekerjaan yang harus diselesaikan mendasarkan pada rencana metodis sistematis sepatutnya mengamati semua langkah dan
didokumentasikan berkaitan dengan buntu.

3.9. Dokumentasi tokoh analitis merit

Angka-angka analitis memutuskan aktual jasa seperti Batas kuantisasi, Batas deteksi, linearitas, waktu yang dibutuhkan untuk
analisis, biaya, persiapan sampel dll juga didokumentasikan.

3.10. Evaluasi metode pengembangan dengan sampel nyata

Larutan sampel harus mengarah tegas, jumlah identifikasi kepentingan puncak obat selain dari semua komponen matriks lainnya.

3.11. Estimasi pemulihan persen dari sampel nyata dan demonstrasi analisis sampel kuantitatif

pemulihan persen dari berduri, obat standar asli ke dalam matriks sampel yang tidak mengandung analit diperkirakan. Optimasi untuk
reproduktifitas pemulihan (rata-rata ± standar deviasi) dari sampel ke sampel harus menunjukkan. Hal ini tidak perlu untuk mendapatkan 100%
recovery sejauh hasilnya direproduksi untuk mengenali dengan tingkat kepastian yang tinggi.

9
 Suatu Tinjauan pada Langkah-Langkah Analytical ...

IV. ANALITIS METODE VALIDASI

Proses validasi metode analisis [ 20-24] diadopsi untuk mengkonfirmasi bahwa prosedur analitis dipekerjakan untuk tes tertentu
memenuhi persyaratan dimaksud. Pedoman dari USP, ICH, FDA dll, dapat menyediakan kerangka kerja untuk validasi metode farmasi. Hasil
dari metode validasi dapat dianggap untuk menilai kualitas, kehandalan sebagai konsistensi juga berkaitan dengan hasil analisis. Dalam dunia
industri farmasi alasan utama untuk memvalidasi assay adalah orang penting pertama adalah validasi dari pengujian yang merupakan bagian
integral dari sistem kontrol kualitas dan kedua regulasi praktek manufaktur asli pasti membutuhkan validasi assay.

Parameter Metode Analytical Validasi

Metode analisis telah divalidasi menurut pedoman ICH dari Q2 (R1) [ 25]. parameter validasi adalah:

1. kesesuaian sistem

1. Kekhususan

2. linearitas

3. ketelitian

4. Ketepatan

5. LOD

7. LOQ

8. kesegaran

4.1. sistem Kesesuaian

Kesesuaian sistem pengujian awalnya diyakini oleh industri obat-obatan untuk memutuskan apakah sistem kromatografi sedang
digunakan sehari hari dengan cara rutin di laboratorium farmasi di mana kualitas hasil yang paling penting yang cocok untuk analisis yang
pasti.

Parameter yang digunakan dalam tes (SST) Laporan kesesuaian sistem adalah sebagai berikut:

• Jumlah pelat teoritis atau Efisiensi (N).

• faktor kapasitas (K).

• Pemisahan atau retensi relatif (α).

• Resolusi (Rs).

• Tailing factor (T).

• Relatif Standar Deviasi (RSD).

Jumlah pelat teoritis / Efisiensi (N)

Dalam kolom tertentu, efisiensi didefinisikan sebagai pengukuran tingkat dispersi puncak dan itu harus memiliki karakteristik kolom.
Efisiensi yang disampaikan dalam hal jumlah pelat teoritis ". Rumus perhitungan N diilustrasikan bawah dalam Gambar 1.1 berikut. (Metode
tinggi Setengah).

Metode tinggi Gambar 1. Setengah berkaitan dengan penentuan N.

10
 Suatu Tinjauan pada Langkah-Langkah Analytical ...

N = Efisiensi / Jumlah pelat teoritis. V e = waktu retensi analit. h = Tinggi puncak. w 1/2
= fungsi Gaussian puncak lebar pada ketinggian setengah.

Sigma / metode tangensial (metode USP)

Dengan bantuan sigma / metode tangensial N dihitung yang ditunjukkan pada gambar berikut 1.2 sepatutnya mencatat rumus untuk
perhitungan N.

Gambar 2. Sigma / metode tangensial yang berkaitan dengan penentuan N.

N = Jumlah pelat teoritis. V e = Volume elusi, waktu retensi atau retensi jarak (mL, detik, atau cm).
h = tinggi puncak. w b = lebar puncak pada garis dasar (mL, detik, atau cm).

Plat nomor tergantung pada panjang kolom. plat nomor teoritis adalah ukuran efisiensi kolom. Seperti yang dinyatakan oleh teori
piring, analit akan di instan kesetimbangan dengan fase diam dan kolom telah dibagi menjadi jumlah pelat hipotetis dan setiap piring terdiri dari
ketinggian tetap dan analit menghabiskan waktu yang terbatas di piring. Tinggi setara dengan pelat teoritis (HETP) diberikan oleh rumus
berikut:

HETP = L / N, Dimana, (1)

L = panjang kolom. N = plat
nomor.

rasio kapasitas atau faktor kapasitas (k)

(2)

Kata di atas faktor kapasitas kadang-kadang disebut sebagai faktor retensi yang tidak memiliki dimensi dan independen dari laju alir
fase gerak serta dimensi kolom yang merupakan ukuran sejauh mana retensi yang berkaitan dengan suatu analit relatif terhadap puncak
un-dipertahankan. Dimana t R menyiratkan waktu retensi sampel puncak dan retensi waktu puncak un-dipertahankan adalah t M.

k'= 0 berarti tidak ada senyawa yang tersisa dalam kolom. Umumnya nilai k' adalah> 2.

Gambar 3. Penentuan rasio kapasitas faktor / kapasitas.

11
 Suatu Tinjauan pada Langkah-Langkah Analytical ...

retensi relatif atau faktor pemisahan (α)

(3)
= Retensi relatif.
= Waktu retensi dihitung dari titik injeksi. = Unretained waktu puncak (Waktu retensi (t R) dari komponen
lembam tidak dipertahankan oleh kolom).

= Waktu retensi dari titik injeksi puncak referensi didefinisikan. (Misalkan ada puncak referensi ditemukan, nilai akan menjadi nol).

Resolusi (Rs)
Resolusi adalah kemampuan kolom untuk memisahkan 2 obat di 2 puncak individu atau zona kromatografi dan ditingkatkan dengan
meningkatkan panjang kolom, pengurangan ukuran partikel dan meningkatnya suhu, mengubah eluen atau fase diam. Hal ini dapat
mengatakan dalam hal rasio pemisahan puncak dua puncak dengan lebar rata-rata tangensial dari puncak. Dengan menggunakan resolusi
rumus berikut dihitung.

(4)

Gambar 4. Penentuan resolusi antara dua puncak.

t R1 dan T R2 adalah waktu retensi untuk dua puncak komponen. t w1 dan T w2 = Pada kebohongan awal antara garis singgung ditarik ke sisi puncak.
(Tangents diambil pada 0,6 kali tinggi puncak). Jika puncak yang benar simetris, disediakan lembah antara dua puncak harus menyentuh Rs
dasar adalah 1,5. umumnya baik nilai resolusi adalah Rs ≥2 harus memadai dan disukai normal.

Faktor resolusi (R)

Resolusi adalah fungsi dari faktor kapasitas, fungsi selektivitas dan fungsi dari efisiensi (atau) jumlah pelat teoritis (N). Dalam
rangka untuk memisahkan setiap dua puncak Anda harus memiliki faktor kapasitas yang tepat idealnya antara 2 dan 10, namun selektivitas
yang tepat diperlukan yaitu, idealnya 1,2 dan cukup efisiensi yaitu, jumlah pelat teoritis (lebih dari 2000 piring teoritis). Resolusi harus ≥ 1,5.
1,5 mendefinisikan baseline resolusi.

(5)

Tailing faktor atau faktor Asimetri

puncak kromatografi diasumsikan memiliki bentuk Gaussian dalam kondisi ideal. Namun dalam kondisi praktis, selalu ada
penyimpangan dari distribusi normal yang menunjukkan migrasi non-seragam dan proses distribusi non-seragam. Oleh karena itu peraturan
organisasi seperti USP dan EP telah merekomendasikan ini sebagai salah satu parameter kesesuaian sistem. Faktor asimetri dan faktor tailing
yang kira-kira sama dan jarang akurat dan sama dalam banyak kasus. Nilai harus biasanya antara 1,0-1,5 dan nilai-nilai yang lebih besar dari
2 tidak dapat diterima. Puncak asimetri dihitung dengan memanfaatkan rumus berikut.

SEBUAH s = B / A (6)

Dimana s = Faktor asimetri puncak.

12
 Suatu Tinjauan pada Langkah-Langkah Analytical ...

B = jarak dari titik di puncak titik tengah ke tepi trailing.

(Diukur pada 10% dari tinggi puncak).
A = jarak dari tepi terkemuka puncak ke titik tengah.
(Diukur pada 10% dari tinggi puncak).
Idealnya, puncak harus Gaussian dalam bentuk atau benar-benar simetris. Penentuan tailing dan faktor asimetris ditunjukkan pada Gambar
1.5.

Gambar 5. Penentuan tailing dan faktor asimetris.

kriteria penerimaan (batas) dari parameter kesesuaian sistem ditunjukkan dalam Tabel 1.1 berikut.

Kriteria Tabel 1. Penerimaan untuk parameter kesesuaian sistem.

S.No nama parameter Kriteria penerimaan

1 Jumlah pelat teoritis atau Efisiensi (N) > 2000

2 faktor kapasitas (K) <1

3 Pemisahan atau retensi relatif (α) >1

4 Resolusi (Rs) > 1,5

5 Tailing factor atau Asimetri (T) <2

6 Relatif Standar Deviasi (RSD) <2

4.2. Kekhususan
Salah satu fitur yang signifikan dari HPLC adalah kemampuannya untuk menghasilkan sinyal bebas dari gangguan. Spesifisitas
mengacu pada kemampuan metode analisis untuk membedakan dan mengukur analit dalam campuran kompleks. Sebuah penyelidikan
kekhususan yang akan dilakukan selama penentuan kotoran dan validasi tes identifikasi.

Sebuah ICH pedoman mendefinisikan kekhususan sebagai kemampuan untuk menilai tegas analit di hadapan senyawa lain yang
mungkin kemungkinan akan hadir. Biasanya ini mungkin kotoran, urai, matrix, dll definisi memiliki implikasi berikut:

• uji identifikasi: tes identifikasi harus mampu senyawa membedakan struktur terkait erat yang diperkirakan akan hadir yaitu,
untuk menjamin identitas suatu analit.

• uji kemurnian: Untuk memastikan bahwa prosedur analitis yang dilakukan memungkinkan pernyataan yang akurat dari isi
pengotor dari suatu analit yaitu zat terkait, sisa pelarut konten, logam berat, dll

• Pengujian kadar logam: Untuk sampai pada hasil yang akurat, ini memungkinkan sebuah laporan yang benar pada potensi atau konten dari analit dalam sampel.

13
 Suatu Tinjauan pada Langkah-Langkah Analytical ...

4.3. Linearitas dan Rentang

Linearitas metode adalah ukuran dari seberapa baik plot kalibrasi konsentrasi respon vs mendekati garis lurus. Linearitas dapat dinilai
dengan melakukan pengukuran tunggal pada beberapa konsentrasi analit. Data tersebut kemudian diolah menggunakan kuadrat-linear
regresi. Yang dihasilkan Plot lereng, intercept dan koefisien korelasi memberikan informasi yang diinginkan pada linearitas.

4.4. ketelitian
Ketepatan prosedur analitis merupakan kedekatan kesepakatan antara serangkaian pengukuran dapatkan dari beberapa sampel dari
sampel homogen yang sama di bawah kondisi analisis yang sama dan dibagi menjadi 3 kategori.

• Pengulangan: presisi dalam kondisi operasi yang sama, analis yang sama selama periode waktu yang singkat.

• Menengah presisi: metode diuji pada beberapa hari, instrumen, analis dll
• Reproducibility: studi antar-laboratorium.

Pedoman ICH menyarankan bahwa pengulangan harus sesuai sepatutnya memanfaatkan setidaknya 9 penentuan dengan kisaran
yang ditentukan untuk prosedur (misalnya, tiga konsentrasi masing-masing / tiga ulangan) atau minimal 6 penentuan pada 100% dari
konsentrasi uji.

4.5. Ketepatan
Akurasi pengukuran didefinisikan sebagai kedekatan nilai diukur dengan nilai sebenarnya. Dalam metode dengan akurasi yang
tinggi, sampel (yang “nilai sebenarnya” dikenal) dianalisis dan nilai diukur identik dengan nilai sebenarnya. Biasanya, akurasi diwakili dan
ditentukan oleh studi pemulihan. Ada tiga cara untuk menentukan akurasi:

1. Dibandingkan dengan standar referensi.

2. Pemulihan analit berduri ke dalam matriks kosong.

3. Selain standar analit.

Ini harus jelas bagaimana kotoran individu atau total yang akan ditentukan.

4.6. Batas deteksi

LOQ ditentukan oleh analisis sampel dengan konsentrasi dikenal analit dan dengan mendirikan tingkat minimum di mana analit
dapat diandalkan terdeteksi, tetapi tidak harus kuantitatif menilai sebagai nilai yang tepat, di bawah kondisi percobaan menyatakan. Batas
deteksi umumnya dinyatakan dalam konsentrasi analit (ppm) dalam sampel.

Sejumlah pendekatan yang direkomendasikan oleh ICH untuk menentukan batas deteksi sampel, tergantung pada instrumen
yang digunakan untuk analisis, sifat analit dan kesesuaian metode. Pendekatan diterima adalah

• evaluasi visual.

• Sinyal untuk rasio kebisingan.

• Standar deviasi dari respon.

• standar deviasi kemiringan linearitas petak.

Rumus untuk menghitung LOD adalah

LOD = 3,3 δ / S (7)
Dimana δ = standar deviasi dari penyadapan dari kurva kalibrasi.
S = kemiringan linearitas petak.

4.7. Batas kuantitasi

Batas kuantitasi adalah konsentrasi paling obat dalam sampel yang diperkirakan dengan presisi dan akurasi yang tepat di bawah
kondisi percobaan menegaskan.

14
 Suatu Tinjauan pada Langkah-Langkah Analytical ...

Mirip dengan LOD, ICH merekomendasikan empat metode berikut untuk estimasi LOQ. Pendekatan diterima adalah

• evaluasi visual.
• Sinyal untuk rasio kebisingan.

• Standar deviasi dari respon.

• standar deviasi kemiringan linearitas petak.

Rumus untuk menghitung LOQ adalah

LOQ = 10 δ / S (8)

Dimana δ = standar deviasi dari respon.

S = Mean lereng kurva kalibrasi.

4.8. kesegaran
Ketahanan didefinisikan oleh ukuran kemampuan suatu metode analisis untuk tetap tidak berubah oleh perubahan yang
disengaja kecil dalam parameter metode. Metode parameter variabel dalam teknik HPLC mungkin melibatkan laju aliran, suhu kolom, suhu
sampel, pH dan komposisi fase gerak.

V. STATISTIK PENGOBATAN ANALYTICAL DATA

Fungsi analis adalah untuk mencapai hasil yang spesifik sebagai dekat dengan nilai sebenarnya sebagai layak oleh aplikasi yang tepat dengan
menggunakan prosedur analitis. Keadaan keyakinan bahwa analis dapat menikmati dengan hasil nya akan sangat kecil kecuali ia memiliki pengetahuan
tentang akurasi dan presisi dari metode yang digunakan serta menyadari sumber-sumber kesalahan yang mungkin diperkenalkan. pengukuran eksperimental
selalu memiliki beberapa variabilitas, sehingga tidak ada kesimpulan dapat ditarik dengan pasti. Statistik memberi kita alat untuk membiarkan kesimpulan
yang memiliki probabilitas tinggi menjadi tepat dan untuk menolak kesimpulan mustahil.

Tujuan melaksanakan tekad adalah untuk mencapai perkiraan yang valid dari nilai 'benar'. Ketika seseorang menganggap kriteria
seperti yang dikatakan oleh yang prosedur analitis yang dipilih; presisi dan akurasi umumnya titik utama yang menonjol untuk datang ke pikiran
untuk aplikasi. Presisi dan akurasi bersama-sama menentukan kesalahan penentuan individu. Mereka adalah yang paling parameter kritis
yang signifikan untuk menilai prosedur analitis dengan hasil mereka tercapai.

5.1. ketelitian
Presisi dapat didefinisikan sebagai konkordansi dari serangkaian pengukuran (n) dari jumlah yang sama. Presisi mengungkapkan
“reproduktifitas" dari pengukuran. Salah satu yang paling istilah statistik yang umum digunakan untuk presisi adalah standar deviasi sampel yang
ditunjukkan dalam persamaan berikut.

(9)

Kuadrat dari standar deviasi disebut Variance (S 2). RSD atau% RSD adalah nilai absolut dari CV (Koefisien Variasi) dan sering
dinyatakan sebagai% yang digunakan untuk mendekatkan ketidakpastian antara pengukuran yang berbeda dari berbagai magnitude total.

5.2. Ketepatan[ 26]

Akurasi biasanya mengacu pada perbedaan antara mean “x" dari himpunan hasil dan nilai benar atau yang paling mungkin untuk
kuantitas yang diukur. Seperti yang dinyatakan oleh IUPAC, akurasi berkaitan dengan perbedaan antara hasil (atau) mean dan nilai
sebenarnya. Untuk metode analisis, ada dua cara layak menentukan akurasi: metode mutlak dan metode komparatif.

metode mutlak
Uji akurasi metode yang dipertimbangkan dilakukan dengan mengambil jumlah konstituen dan hasil seperti yang dikatakan oleh
petunjuk tertentu untuk melakukan tes untuk akurasi metode ini. Perbedaan antara sarana jumlah yang memadai hasil dan jumlah konstituen
pada kenyataannya sekarang, biasanya dinyatakan sebagai bagian per seratus (%) yang disebut sebagai kesalahan%.

15
 Suatu Tinjauan pada Langkah-Langkah Analytical ...

Konstituen yang bersangkutan akan ditentukan di hadapan zat lain, dan karena itu akan diperlukan untuk mengetahui pengaruh
penentuan. Hal ini akan membutuhkan menguji pengaruh sejumlah besar senyawa kemungkinan dalam sampel yang dipilih dari
masing-masing jumlah yang bervariasi. Dalam beberapa kasus, akurasi metode ini dikendalikan oleh pemisahan (biasanya pelarut ekstraksi
atau teknik kromatografi) yang terlibat.

metode komparatif
Dalam analisis formulasi farmasi (atau sampel sintetis padat komposisi yang diinginkan), isi dari konstituen yang akan dicari telah
ditentukan oleh satu atau lebih akurat metode analisis. Pada dasarnya jika beberapa metode yang jauh (berbeda) dari analisis untuk
konstituen yang diberikan yang tersedia, misalnya gravimetri, titrimetri, spektrofotometri, atau kromatografi, kesepakatan antara setidaknya dua
metode karakter dasarnya berbeda secara umum dapat diterima sebagai indikasi tidak adanya cukup kesalahan sistematis dalam metode
baik.

eksperimen pemulihan
Sebuah jumlah yang diketahui dari konstituen yang sedang diperkirakan akan ditambahkan ke sampel, yang dianalisis untuk jumlah
total konstituen hadir. Perbedaan antara hasil analisis untuk sampel dengan dan tanpa konstituen menambahkan memberikan pemulihan dari
jumlah konstituen menambahkan. Jika pemulihan memuaskan, kepercayaan diri kami dalam akurasi prosedur ditingkatkan.

5.3. Evaluasi presisi dan akurasi dengan perbandingan dua prosedur [ 27]
Dengan membandingkan metode pengujian (metode untuk diselidiki) harus dibandingkan dengan metode referensi (metode yang ada)
untuk mencapai akurasi metode yang akan diselidiki.

Student t-test
Student t-test digunakan untuk membandingkan cara dua terkait sampel (dipasangkan) dianalisis dengan referensi dan cara uji.
Ini memberikan jawaban kebenaran hipotesis nol dengan keyakinan tertentu seperti 95% atau 99%. Jika jumlah pasangan (n) kurang dari 30,
kondisi normalitas x atau setidaknya normalitas perbedaan (d saya) Dibutuhkan. Jika hal ini terjadi kuantitas memiliki mahasiswa t-distribusi
dengan (n -1) derajat kebebasan.

saya
• (10)

d
/ nsdt

Dimana D i = x R ( metode referensi) - x T. ( metode uji) dan s d adalah standar deviasi.

F-test
Oleh F-test kita dapat menguji signifikansi perbedaan varians referensi dan cara uji. Mari kita anggap salah satu yang dilakukan n 1 pengukuran
mereplikasi dengan metode uji dan n 2 pengukuran mereplikasi dengan menggunakan metode referensi. Jika hipotesis nol benar maka
2 ( varians dari metode uji) dan S R 2
memperkirakan S T
(Varians dari metode referensi) tidak berbeda sangat banyak dan rasio mereka tidak harus berbeda jauh dari kesatuan. Bahkan, satu menggunakan rasio
varians.

2/ SR 2
F = ST (11)

Hal ini konvensional untuk menghitung F - rasio dengan membagi varians lebih besar dengan varians yang lebih kecil untuk mencapai nilai
yang sama atau lebih besar dari kesatuan. Jika dihitung F - nilai lebih kecil dari F - nilai dari Ftabel, kita dapat menyimpulkan bahwa prosedur tidak
berbeda secara signifikan dalam presisi pada tingkat kepercayaan tertentu.

5.4. kalibrasi
Sebuah bagian yang sangat penting dari semua prosedur analitis adalah kalibrasi dan standarisasi proses. Kalibrasi menentukan
hubungan antara respon analitis (Absorbance, daerah puncak, tinggi puncak dll,) dan konsentrasi analit. Umumnya ini dilakukan dengan
penggunaan standar kimia. Sebuah presisi dan akurasi yang baik hanya dapat diperoleh ketika prosedur kalibrasi sangat baik digunakan.
Dalam analisis farmasi prosedur kalibrasi berikut biasanya digunakan.

16
 Suatu Tinjauan pada Langkah-Langkah Analytical ...

kalibrasi standar eksternal

Standar eksternal disiapkan secara terpisah dari sampel. standar eksternal yang digunakan untuk instrumen mengkalibrasi dan
prosedur ketika tidak ada efek gangguan dari komponen matriks dalam larutan analit. Serangkaian standar eksternal seperti yang
mengandung analit konsentrasi dikenal disiapkan. Idealnya tiga atau lebih solusi tersebut digunakan dalam proses kalibrasi. Kalibrasi dicapai
dengan mendapatkan sinyal respon sebagai fungsi dari konsentrasi analit yang diketahui. Kurva kalibrasi dibuat dengan memplot data atau
dengan pas mereka untuk persamaan matematika sesuai seperti hubungan linear digunakan dalam metode kuadrat terkecil. Langkah
selanjutnya adalah langkah prediksi,

kalibrasi standar internal

Standar internal adalah jumlah senyawa, berbeda dengan analit yang ditambahkan ke yang tidak diketahui. Sinyal dari analit
disandingkan dan dibandingkan dengan sinyal standar internal untuk mengetahui berapa banyak jumlah suatu analit hadir.

Selain standar
Selain standar, kuantitas dikenal obat ditambahkan ke yang tidak diketahui. Dari peningkatan sinyal dan kemudian mencari tahu
berapa banyak analit ada di diketahui original. Metode Selain standar mendapat respon linier untuk analit.

5.5. Metode kuadrat terkecil [ 28]

Dalam prosedur kalibrasi idealnya respon linear harus diperoleh. Metode kuadrat terkecil adalah alat statistik kunci yang tersedia
untuk pas data menjadi model linear.

Kuadrat-analisis regresi dapat digunakan untuk mengungkapkan hubungan antara respon (y) dan konsentrasi (x). Hubungan
dapat direpresentasikan oleh fungsi umum.

Y = f (x, a, b 1, ....... .... bm)

Di mana a, b 1 ..........., b m adalah parameter dari fungsi.

Kami mengadopsi konvensi bahwa x nilai berhubungan dengan variabel yang dikendalikan atau independen (misalnya konsentrasi
standar) dan nilai-nilai y terkait dengan variabel dependen (pengukuran respon). Ini berarti bahwa nilai-nilai X tidak memiliki kesalahan. Pada
kondisi bahwa kesalahan yang dibuat dalam penyusunan standar secara signifikan lebih kecil dari kesalahan pengukuran (yang biasanya terjadi di
masalah analitis). Nilai-nilai yang tidak diketahui parameter a, b 1, .... b m harus diestimasi sedemikian rupa bahwa model sesuai dengan titik data
percobaan (x saya, y saya) sedekat mungkin. Hubungan yang benar antara x dan y dianggap diberikan oleh garis lurus. Hubungan antara masing-masing
pasangan pengamatan (X saya, Yi) dapat direpresentasikan sebagai

= yi • + • Xi + ei (12)

Sinyal y saya terdiri dari komponen deterministik diprediksi oleh model linear dan acak

komponen e saya. Satu sekarang harus menemukan perkiraan dan b dari dua nilai • dan •. Hal ini dapat dilakukan dengan
2 minimal. Komponen e saya mewakili perbedaan antara
menghitung nilai a dan b yang e saya

diamati y saya nilai-nilai dan diprediksi y saya nilai oleh model. e saya disebut residu, a dan b adalah

intercept dan slope masing-masing.

n n n

• ii
•
• • yxyxnb
ii
•1 •1 •1
• saya saya saya
2
n
• n • (13)
• • • • xxn
2

saya •
saya
•1
saya • saya
•1 •

17
 Suatu Tinjauan pada Langkah-Langkah Analytical ...

n n n

• saya• saya
• • 12 •
saya
yxxxya
ii
• 1 • • • 1
•
saya saya saya saya

2
n n
• •
• • • • xxn
21

di •
saya

• 1
saya • saya
• 1 •

Standard error dari estimasi (S e)

Standard error dari estimasi adalah pengukuran perbedaan antara nilai-nilai eksperimental dan dihitung dari variabel dependen.
Hal ini diwakili oleh persamaan berikut,

n •
(14)
• • ( S• ) •2 / ()
2
e ii
NYY
•1
saya

y saya
dan y,sayaadalah nilai-nilai yang diamati dan diprediksi, masing-masing. standar deviasi di lereng (S b)
dan penyadapan (S Sebuah) dikutip kurang sering, meskipun mereka digunakan untuk mengevaluasi perbedaan proporsional antara atau di antara
metode serta untuk menghitung variabel independen seperti konsentrasi dll Hal ini penting untuk memahami bagaimana ketidakpastian di lereng
dipengaruhi oleh sifat dikendalikan dari data mengatur seperti jumlah dan berbagai titik data dan juga bagaimana sifat dari set data dapat
dirancang untuk mengoptimalkan kepercayaan pada data tersebut.

standar deviasi lereng (S b)

Standar deviasi dari lereng sebanding dengan standard error dari estimasi dan berbanding terbalik dengan jangkauan dan akar
kuadrat dari jumlah titik data.

n •

•
2
( • yyii ) n (15)
S
•
2
•
•1
saya * (1 • xxii )
b
n •2 ( ) •1
saya

Dimana

xsaya
adalah mean aritmetik dari nilai xi

standar deviasi intercept (S Sebuah)

nilai-nilai mencegat kuadrat cocok setidaknya dari data dan sering digunakan untuk menghitung kesalahan aditif antara atau di antara metode yang berbeda.

n • n

• •
2 2
( • yyii ) n saya
S
•
Sini 2
•
•1
saya * (1 • xxii ) * •1
saya (16)
Sebuah
n •2 ( ) •1
saya nx

x saya adalah itu

mean aritmetik dari x saya

nilai-nilai

koefisien korelasi (r)

Dalam rangka untuk memastikan apakah ada hubungan linear antara dua variabel “x" dan “y", koefisien korelasi (r) digunakan.
Untuk mencapai koefisien korelasi, co-varian dibagi dengan produk dari standar deviasi dari x dan y.

18
 Suatu Tinjauan pada Langkah-Langkah Analytical ...

• •
• • ) •1 / ()
nyyxxr
••
) ((
saya saya •
• •
•
• n 2 • 2 (17)
( • ) ( • ) •1 / ()
nyyxx
2

•• di saya •
• •

VI. KESIMPULAN
Artikel ini memberikan gambaran bagaimana melakukan proses validasi untuk membuktikan bahwa metode ini tepat untuk tujuan
yang dimaksudkan dan untuk menjamin kemampuan metode pengujian. Definisi parameter validasi metode dijelaskan dengan baik. Meskipun
persyaratan validasi telah jelas didokumentasikan oleh pihak berwenang, pendekatan untuk validasi bervariasi dan dibuka untuk interpretasi,
dan persyaratan validasi berbeda selama proses pengembangan obat-obatan. Validasi merupakan prosedur penting dalam industri farmasi
dan digunakan untuk memastikan bahwa kualitas dibangun untuk proses mendukung pengembangan obat dan pembuatan.

REFERENSI
[1] G. David Watson, Analisis Farmasi ( 3 rd . Ed, Churchill Livingstone, London: Harcourt Publishers Limited, Essex CM 20 2JE, 2012). [2]

AH Beckett, dan JB Stenlake, Praktis Farmasi Kimia ( 4 th Ed., Vol. AKU AKU AKU. CBS Penerbit dan Distributor, New Delhi: 2007). [3]

T. Higuchi, dan Brochman-Hansen, Analisis farmasi, ( 3 rd edisi, CBS Penerbit dan Distributor pvt. Ltd, New Delhi: 1997). [4]

G. Oliver, R. Gerrit, dan VZ. Maxmilian, Memimpin Farmasi Inovasi, “ Tren dan driver untuk Pertumbuhan di
industri farmasi, ( 2 nd Ed., Springer, 2008) 12-15. [5]
Br. Jay, J. Kelvin, dan B. Pierre, Memahami dan Menerapkan Efisien Analitis Metode Pengembangan dan Validasi,
2003.
[6] RM Christopher, dan WR Thomas, Pendekatan kualitas Systems untuk farmasi cGMP Pengembangan dan validasi Metode Analytical, ( 1 st Ed., 2005)
147-152. [7]
R. Lloyd Snyder, J. Joseph Kirkland dan L. Joseph Glajah, pengembangan metode HPLC praktis ( 2 nd Ed., 1997) 179-184. [8]
BK Sharma, Metode instrumental analisis kimia ( 29 th Ed., Meerut, Kromatografi, HPLC, Goel Publishing House,
2013) 286-385.
[9] HH Willard, LL Merrit, JA Jr Dean, dan FA Jr. Settle, Metode Instrumental Analisis ( CBS Publishers, New Delhi:
1986).
[10] RA Day, dan AL, Underwood, Kuantitatif Analisis, ( 5 th Ed, Prentice Hall, New Delhi:. 1986). [11]
Macek dan Karel, Aplikasi farmasi Lapis Tipis dan Kromatografi Kertas, 62 (6) 1972,1032. [12]
G. Ramana Rao, SSN Murthy, dan P. Khadgapathi, Gas Chromatography Analisis Farmasi, Timur Apoteker,
30 (353), 1987, 35. [13]
G. Ramana Rao, SSN Murthy, dan P. Khadgapathi, tinggi Liquid Chromatography Kinerja dan Perannya dalam Analisis Farmasi, Timur Apoteker, 29
(346), 1986,53. [14]
CSP Sastry, TNV Prasad, dan EV Rao, aplikasi terbaru dari kromatografi cair kinerja tinggi dalam analisis farmasi, India J. Pharm. Pendidikan, 21
(37), 1987. [15]
Ravisankar P, Gowthami S, dan Devala Rao G, A review pada pengembangan metode analisis, jurnal India penelitian di bidang farmasi dan bioteknologi, 2
(3), 2014, 1183-1195. [16]
Ravisankar P, Rajyalakshmi G, Devadasu Ch, dan Devala Rao G, kiat-kiat Instan untuk pendekatan yang tepat dan efektif untuk memecahkan HPLC trouble
shooting, Jurnal ilmu kimia dan farmasi. 7 (3), 2014, 259-274. [17]
Jay Breaux, Kevin Jones, dan Pierre Boulas, Pengembangan layanan pengembangan metode analisis dan validasi “ teknologi farmasi, 27 (1), 2003,
6-13. [18]
E. Michael Swartz, dan Iras Krull, pengembangan metode analisis dan validasi, CRC pers, Marcel Dekker, Inc., Madison Avenue, New York: 1997. [19]

K. Yuri, dan LB. Rosario, HPLC bagi para ilmuwan farmasi, ( John Wiley and Sons, Inc., Hoboken, New Jersey, 2007) 92-98. [20]
GP Carr, dan JC Wahlichs. “Sebuah pendekatan praktis untuk validasi metode dalam analisis farmasi", J. Pharm, Biomed. Anal, 8,1990,613-618. [21]

Amerika Serikat Pharmacopoeia, 24, National formularium 19, section <1225> “Validasi metode kompendial". AS farmakope konvensi, Rockville,
Validasi analisis prosedur teks dan metodologi Q2 (R1), November 2000:
2005.
[22] Konferensi Internasional tentang harmonisasi (ICH) dari persyaratan teknis untuk pendaftaran obat-obatan untuk digunakan manusia,
Validasi prosedur analitis: metodologi Teks, ( Q2 (R1) Jenewa, 2005) 6-13. [23]
prosedur analitis bimbingan rancangan dan metode validasi, makanan AS dan pemberian obat, Pusat untuk obat dan biologis, Departemen Kesehatan dan Layanan
Kemanusiaan. http://www.fda.gov/cder/guidance/2396 dft.htm # 111 2000.
[24] Orr JD, Krull IS dan Swartz ME, Validasi metode kenajisan Bagian II, ( LC Utara Am; 21, 2003) 1146-1152. [25]
ICH Q2 (R1), Validasi prosedur analitis (definisi dan terminologi); 2005; pp. 9-10. [26]
DL Massart, BGM Vandeginste, SN Deming, Y. Michotte dan L. Kaufman, Kemometrika: Sebuah Buku Teks, Elsevier, Amsterdam: 1988. [27]

MM Kiser dan JW Dolan, Memilih yang terbaik kurva fit LC-GC ( Eropa: 2004) 138-143. [28]
RE Moore, analisis interval ( Englewood Cliffs, NJ: Prentice-Hall, 1966).

19