Genetika Molekuler Alzheimer

Amiloid Penyakit *

Rudolph E. Tanzi:!:, Peter St. George-Hyslop§, dan

JamesF. Gusella

Dari Laboratorium Molekul Neurogenetika, Rumah Sakit Umum Massachusetts, Departemen Genetika,
Sekolah Kedokteran Harvard, Charlestown, Massachusetts

02129

Terjemahan

Penyakit Alzheimer adalah gangguan neurodegeneratif onset lambat yang ditandai dengan
penurunan kognitif global. Diagnosis pasti penyakit Alzheimer membutuhkan autopsi atau biopsi
konfirmasi lesi spesifik yang dibentuk oleh serat aceous protein tidak larut di otak: deposit ekstraseluler
amiloid dalam plak pikun dan pembuluh darah otak, dan kusut neurofibrillary intraseluler dalam
sitoplasma neuron (1, 2) ). Meskipun amiloid intraseluler telah diamati dalam hubungan intim dengan
kusut neurofibrillary, hubungannya menjadi tween kusut dan plak pikun masih belum jelas (3).

Etiologi penyakit Alzheimer tidak diketahui. Meskipun sebagian besar kasus tampak sporadis,
survei epidemiologis telah menunjukkan peningkatan risiko pada kerabat tingkat pertama dan kedua
pasien penyakit Alzheimer (4-10). Sebagian kecil dari kasus penyakit Alzheimer terjadi pada keluarga
yang menunjukkan pewarisan dominan autosomal dari gangguan tersebut. Dalam kasus ini, disebut
penyakit Alzheimer keluarga, penyakit ini tampaknya dipicu oleh cacat genetik (Gbr. 1). Banyak
kontroversi seputar pertanyaan berapa proporsi penyakit Alzheimer yang familial (5-100% (7,10 »,
sebagian karena seringkali sulit untuk menilai apakah agregasi keluarga dari penyakit Alzheimer pada
keturunan onset lambat mencerminkan pewarisan genetik, kecenderungan, atau pengelompokan
bentuk sporadis penyakit Alzheimer yang dihasilkan dari asal lingkungan atau bias kepastian.Kebanyakan
kasus penyakit Alzheimer muncul mulai di atas usia 65 tahun, tetapi pada keluarga Alz heimer familial
terbesar, kelainan ini muncul pada awal kehidupan (usia 40-50). Penyakit Alzheimer familial tidak dapat
dibedakan secara klinis dan neuropatologis dari kasus dengan onset kemudian.

Studi Keterkaitan Genetik Keluarga

Penyakit Alzheimer
Selain penyakit Alzheimer, plak pikun dan kusut neu rofibrillary juga ditemukan pada pasien
yang lebih tua (lebih dari 35 tahun) dengan sindrom Down (trisomi 21 (2, 11 ».Konsekuensinya,
kromosom 21 menjadi salah satu target pertama studi hubungan genetik) bertujuan untuk melokalisasi
cacat gen penyakit keluarga hez Al.Pendekatan ini membutuhkan penelusuran warisan penanda genetik
polimorfik pada keluarga dengan kelainan tersebut.

Munculnya teknologi DNA rekombinan telah memungkinkan deteksi langsung urutan DNA yang
berbeda. Ini mungkin sering diuji sebagai pembatasan polimorfisme panjang fragmen dan menyediakan
sumber penanda DNA yang berlimpah. Jika penanda genetik terletak dekat dengan gen penyakit pada
kromosom yang diberikan, keduanya akan menunjukkan pola pewarisan yang berkorelasi, dengan
penanda alel segre gating (atau menunjukkan "keterkaitan") dengan kelainan pada keluarga individual.
Signifikansi dari pola yang diamati dari pewarisan berkorelasi dinilai dengan "analisis kemungkinan
maksimum" untuk menghitung skor "log of the odds" (LOD) 1. Skor LOD mewakili loglo dari
kemungkinan keterkaitan relatif terhadap kemungkinan segregasi acak untuk set data yang diberikan.
Skor LOD lebih dari +3 (peluang 1.000: 1 yang mendukung keterkaitan) dianggap sebagai bukti bahwa
penanda genetik dan cacat gen berada pada kromosom yang sama dan terkait.

Pada tahun 1987, dua penanda DNA pada lengan panjang proksimal (q
lengan) dari kromosom 21, D21S16 dan D21S1 / D21S11, ditemukan untuk menunjukkan hubungan
genetik dengan gangguan dalam sebuah studi dari empat silsilah penyakit keluarga Alzheimer keluarga
besar yang menunjukkan onset usia dini «65 tahun (12». Contoh dari salah satunya silsilah ditunjukkan
pada Gambar. 1. Bersamaan, kepala sekolah
komponen amiloid terkait Alzheimer, flA4, peptida asam amino 42, ditemukan berasal dari protein yang
lebih besar
prekursor (amiloid fl protein prekursor, APP) dikodekan oleh
gen (APP) pada kromosom 21q (13-16). Namun kapan
gen APP secara langsung diuji untuk hubungan genetik dengan penyakit Alzheimer keluarga, beberapa
rekombinan antara APP dan penyakit Alzheimer keluarga diamati (17, 18), menunjukkan bahwa itu
bukan situs cacat genetik utama pada penyakit Alzheimer keluarga.

Setelah laporan-laporan ini, beberapa kelompok berusaha untuk menguji penanda DNA 21
kromosom yang sama dalam keluarga penyakit Alzheimer tambahan. Goate et al. (19) memperoleh
bukti yang mendukung keberadaan gen Alzheimer cacat keluarga sentromerik ke penanda, D21S1 / S11
dan D21S16. Kelompok lain mampu mendeteksi kemungkinan hubungan antara penyakit Alzheimer
keluarga dan penanda sentromerik lain, D21S13 (20), terkait erat dengan D21S16. Hasil ini memberikan
dukungan lebih lanjut untuk temuan awal dari cacat gen penyakit Alzheimer keluarga pada 21q. Di sisi
lain, Schellenberg et at. (21) melaporkan kemungkinan heterogenitas non-alelik berdasarkan pada
pengecualian penyakit Alzheimer familial dari wilayah D21S1 / D21S11 dalam serangkaian silsilah
keturunan dominan Volga Jerman. Pericak-Vance et at. (22) menyarankan kemungkinan lokus penyakit
Alzheimer familial kedua berdasarkan pada kurangnya hubungan antara D21S1 / D21S11 dan penyakit
Alzheimer familial pada pedigri mani yang merayakan usia onset yang relatif terlambat, meskipun onset
dini penyakit Alzheimer familial ditampilkan positif. hubungan ke D21S1 / D21S11 dan D21S16 dalam
penelitian yang sama.

Upaya kolaboratif internasional yang mengesankan dipasang untuk mengetik 48 silsilah penyakit
keluarga Alzheimer untuk lima polimorfisme DNA di tiga lokus dari setengah proksimal kromosom 21q
(23). D21S1 / D21S11 dan D21S16 / D21S13 keduanya memberikan nilai skor LOD untuk keterkaitan
dengan penyakit Alzheimer keluarga yang lebih besar dari 3,0 yang mendukung temuan asli hubungan
dengan kromosom 21. Selain itu,

Figur 1. Penyakit Alzheimer familial Italia yang sejenis (FAD4 (12)) dan genotipe APP menunjukkan
peristiwa kombinasi yang jelas antara APP dan cacat gen penyakit Alzheimer familial. Individu yang
terkena ditampilkan dalam warna merah sedangkan mereka yang tidak memiliki fenotipe penyakit
Alzheimer ditampilkan dalam warna biru. Simbol yang dipotong menunjukkan individu yang sudah
meninggal. Genotipe APP diperlihatkan di bawah masing-masing individu yang DNA-nya dapat
diketikkan. Alel APP mewakili kombinasi dua EcoRI RFLP yang terdeteksi oleh cDNAs APP, FB68L dan
HL124 (17). Di mana fase gen penyakit sehubungan dengan APP RFLP dapat ditentukan dengan tegas,
alel penanda yang memisahkan dengan cacat ditampilkan dalam warna merah. Satu peristiwa
rekombinasi yang tampak diungkapkan dengan membandingkan saudara empat anggota Cabang I,
generasi VI, dengan saudara empat anggota Cabang II, generasi V. Di masa lalu, alel "B" APP hadir pada
keluarga Kromosom penyakit Alzheimer sementara pada yang terakhir alel "C" APP terdeteksi. Meskipun
fase relatif dari cacat dan alel APP tidak dapat ditetapkan dengan pasti pada anggota yang terkena
dampak lainnya dari setiap cabang, peristiwa crossover + mungkin terjadi dalam beberapa generasi yang
memisahkan dua cabang silsilah.

Metode Anggota yang Terkena Dampak (24), yang meneliti frekuensi anggota keluarga yang
terkena dampak "berbagi" alel dari polimorfisme tertentu, mengkonfirmasi hasil pertalian dengan
menunjukkan hubungan yang signifikan antara penyakit familier Alz Heimer dan tiga lokus kromosom
21.

Studi ini juga mengungkapkan bahwa hanya sebagian dari 48 silsilah berkontribusi positif terhadap
kumpulan data secara keseluruhan dan menunjukkan bahwa penyakit Alzheimer keluarga secara genetik
heterogen. Sementara beberapa silsilah dengan onset awal «65 tahun) menunjukkan hubungan positif
dengan kromosom 21, silsilah onset lambat tidak terkait. Analisis multipoint bertujuan untuk
melokalisasi cacat gen relatif terhadap dua lokus terkait yang menghasilkan skor LOD puncak sekitar 5,0
untuk silsilah onset awal di dua wilayah kromosom 21 yang berbeda, satu proksimal ke D21S16 / D21S13
(wilayah sentromerik) dan bagian lain ke D21S1 / D21S11 (wilayah APP). Kehadiran dua puncak
multipoint menunjukkan kemungkinan bahwa cacat genetik pada kromosom 21 yang terkait dengan
familial penyakit Alzheimer keluarga dapat berada di lokasi yang berbeda pada kromosom 21. Namun,
itu juga bisa disebabkan oleh efek penemuan yang akan terjadi jika suatu bagian dari onset awal silsilah,
pada kenyataannya, tidak terkait dengan kromosom 21. Adanya heterogenitas genetik non-allelic pada
penyakit Alzheimer keluarga telah mendorong pemindaian lebih lanjut dari genom untuk lokus penyakit
Alzheimer familial tambahan. Sampai saat ini, lokus pada kromosom 19 telah disarankan sebagai faktor
predisposisi atau penyebab yang mungkin pada penyakit Alz heimer onset lambat, tetapi ini masih harus
dikonfirmasi (25).

Myloid fJ Peptide Prekursor

Pemeriksaan profil patologis penyakit genetik berpotensi menyebabkan kandidat gen untuk
lokasi cacat. Oleh karena itu, fokus utama dalam studi penyakit Alzheimer familial telah menjadi tempat
pengkodean prekursor protein (APP) dari peptida 4,2-kDa, fJA4, yang merupakan komponen utama
amiloid dalam plak pikun dan deposit cebra serebrovas (2). APP mRNA dapat disambungkan menjadi
tiga transkrip utama yang dinamai sesuai dengan jumlah asam amino yang dikode. Gen APP panjang
penuh asli yang diisolasi, APP695, diekspresikan secara eksklusif di otak (14, 16) sementara dua bentuk
yang lebih besar, APP751 dan APP770, juga diekspresikan dalam jaringan perifer (26, 27). APP751 dan
APP770 mengandung domain asam 56-amino yang mengganggu residu 289 dari APP695 (26-28).
Domain ini mewakili serine protease inhibitor tipe Kunitz.
 APP adalah protein terikat-membran integral (14) dengan domain Kunitz protease inhibitor (KPI)
yang terletak di bagian ekstraseluler molekul yang besar (Gbr. 2). Sementara sepertiga dari domain fJA4
berada di daerah transmembran molekul, dua pertiga sisanya terletak di ruang ekstraseluler. Bagian
ekstraseluler dari APP adalah keduanya
0- dan N-glikosilasi dan dapat dibelah untuk dilepaskan ke ruang ekstraseluler sebagai protein larut
besar (110 kDa) (29,
30). Bentuk APP yang disekresikan yang mengandung domain KPI identik dengan serine protease
inhibitor, protease nexin II (31, 32). Protease nexin II menghambat Faktor XIa dari jalur koagulasi,
chymotrypsin, dan kallikreins, faktor pertumbuhan 7 S syaraf 'Y-subunit dan protein pengikat faktor
pertumbuhan epidermal. Dalam kultur sel tepi, derivatif terlarut yang disekresikan dari APP hanya
mengandung sebagian peptida fJA4 sedangkan sisanya terkandung dalam fragmen terminal-terikat-
membran (33, 34). Dengan demikian, pemrosesan normal APP menghancurkan integritas domain fJA4,
mungkin menghalangi pembentukan amy loid dan meningkatkan kemungkinan bahwa pembentukan
fJA4 dan amiloidosis dapat menjadi konsekuensi dari pemrosesan APP yang abnormal.
Gen APP memetakan kromosom 21 di perbatasan pita sitogenetik 21q21.3 dan 21q22 (35).
Akibatnya, keberadaan deposit amiloid fJA4 dalam otak pasien dengan sindrom Down (trisomi 21)
mungkin paling mudah dijelaskan dengan dosis gen. Dengan pengecualian satu laporan awal dan
tampaknya prematur (36), peningkatan dosis gen APP di garis kuman tampaknya tidak
memperhitungkan keberadaan amiloid pada penyakit Alzheimer atau penyakit familial Alz heimer (37-
39)

Figur 2. Representasi skematis dari APP dan mutasi yang ditemukan pada bagian molekul yang
dikodekan oleh exon 17. Bagian ekstraseluler dari molekul tersebut mengandung sinyal peptida
(diperlihatkan dalam warna putih, tetapi sebenarnya dihilangkan selama penyisipan ke dalam
membran), yang kaya akan sistein wilayah, daerah asam, dan wilayah glikosilasi besar. Di antara dua
segmen terakhir ada dua domain: disandikan oleh ekson alternatif yang disambungkan, domain KPI dan
OX-2. Itu
Bagian ekstraseluler dari APP mengandung kira-kira dua pertiga dari {3A4
wilayah. Sisa {3A4 berada di dalam domain rentang-membran; bagian C-terminal dari APP adalah
sitoplasma. Mutasi pada posisi 693 dan 717 (dari APP770) mewakili situs diduga untuk cacat di HCHWA-
D dan dalam bentuk penyakit Alzheimer yang diturunkan.

Jika gen APP benar-benar menyembunyikan cacat yang menyebabkan penyakit Alzheimer familial, orang
akan berharap untuk mengamati tidak ada persilangan antara dua lokus dalam tes hubungan genetik
dua titik langsung. Ketika diuji dalam empat keluarga Alz Heimer familial penyakit asli yang digunakan
untuk menunjukkan hubungan dengan chro mosome 21 dan silsilah lainnya, beberapa peristiwa
rekombinasi diamati antara APP dan penyakit Alzheimer familial pada individu yang terkena (12, 13)
(lihat contoh pada Gambar.1).
Kehadiran setidaknya satu crossover di masing-masing dari empat keluarga menunjukkan bahwa gen
APP kemungkinan besar bukan situs cacat pada salah satu silsilah ini. Analisis kemungkinan likeli
maksimum menunjukkan bahwa gen APP setidaknya 8 cm dari cacat penyakit Alzheimer familial (12).

Demonstrasi terbaru menunjukkan bahwa penyakit Alzheimer familial secara genetik heterogen
memperbaharui kemungkinan bahwa Gen APP mungkin masih merupakan situs cacat pada beberapa
familial Silsilah penyakit Alzheimer, terutama yang menampilkan tautan usia kromosom 21 dan tidak ada
crossover dengan APP. Goate et Al. (40) memeriksa kembali hubungan genetik APP dalam enam famili
Alz
keluarga penyakit heimer dan menemukan dua silsilah tanpa silang antara APP dan gangguan tersebut.
Ketika sebagian.
ekson 17 gen APP dari individu yang terpengaruh dalam dua silsilah ini diurutkan, sebuah perubahan
asam amino konservatif ditemukan. Exon 17 dipilih berdasarkan laporan baru-baru ini bahwa mutasi
pada ekson ini, yang mengkode wilayah fJA4, mewakili cacat gen pada kelainan Belanda yang jarang,
perdarahan serebral herediter dengan amiloidosis. (HCHWA-D, Ref. 41) (lihat Gambar 2). Dalam
HCHWA-D, tipe fJA4
amiloid terakumulasi dalam jumlah besar di pembuluh serebral danakhirnya mengarah pada stroke dan
kematian pada kelima atau keenam dekade kehidupan (42).

Mutasi missense yang tampak pada exon 17 ditemukan dipenyakit Alzheimer familial
menyebabkan penggantian isoleusin untuk valin pada residu 717 (sesuai dengan urutan APP770) dalam
wilayah transmembran segera terminal C ke domain fJA4. Substitusi dasar ini berbarengangated dengan
penyakit Alzheimer familial dalam dua pedi grees terpisah tetapi tidak ada dari delapan keluarga
penyakit Alzheimer familial lainnya dan dari 200 kromosom normal yang dianalisis (40). Meskipun
sekarang telah ditemukan dalam empat jenis penyakit keluarga Alzheimer tambahan (43), sebagian
besar silsilah penyakit keluarga Alzheimer dari awal dan akhir tidak menunjukkan mutasi ini (40, 44, 45).
Meskipun dapat dibayangkan bahwa perubahan ini dapat mewakili polimorfisme netral yang sangat
langka, tampaknya jauh lebih mungkin bahwa, setidaknya dalam beberapa kasus, mutasi di lokus APP
memang menyebabkan penyakit Alzheimer familial.

Dalam semua kecuali satu dari enam keluarga yang dilaporkan dengan mutasi ini, profil neuropatologis
yang berbeda telah terlihat (40, 43, 46) termasuk tubuh Lewy difus kortikal dan angiopati amiloid congo
philic berlebihan yang menyebabkan beberapa kasus stroke.Gambaran terakhir ini mengingatkan pada
fenotipe pasien dengan Dutch HCHWA-D di mana demensia kadang-kadang terjadi setelah stroke otak.
Dengan demikian, dua mutasi APP yang diketahui mungkin dipandang sebagai bentuk alelik dari
penyakit yang sama yang ditandai dengan keterlibatan vaskular yang menonjol.

Telah disarankan bahwa sedikit lebih hidrofobik residu isoleusin menggantikan valin pada posisi
717 dapat mengubah penahan APP dalam membran (40). Sejalan dengan ini, perbandingan yang
menarik dapat diambil dengan mutasi dominan, deg-l (u38), yang menghasilkan degenerasi neuron pada
elegans Caenorhabditis (47). Mutasi ini pada akhirnya menyebabkan kematian dengan onset lambat
jauh setelah sinaps neuronal terbentuk. Gen deg-l tampaknya mengkodekan protein terkait membran;
telah disarankan bahwa mutasi pada gen ini dapat menyebabkan integritas membran dan lisis sel.
Sebuah fenotipe yang serupa diamati dengan mutasi pada gen mec-4 yang merupakan homolog dekat
dari gen deg-I (48). Mutasi pada mec-4 dan deg- 1 (u38) gen melibatkan residu yang sama, Ala-442,
dalam domain hidro fobik dari protein (48). Substitusi Thr atau Val untuk Ala cukup untuk menginduksi
degenerasi yang tampaknya melalui hambatan sterik. Driscoll dan rekan (48) telah menemukan bahwa
kelangsungan hidup sel dipertahankan jika asam amino dalam posisi 442 mengandung rantai samping
yang tidak lebih besar dari sulfhidril pada karbon fJ. Menariknya, Ala-442 diperkirakan terkandung dalam
struktur belok fJ dekat atau dalam domain rentang-membran hidrofobik. Demikian juga, kedua mutasi
yang diidentifikasi dalam APP terjadi dalam domain hidrofobik fJA4 baik dekat atau dalam domain trans-
membran. Mutasi APP717 yang terkait dengan penyakit Alzheimer familial menggantikan valin dengan
isoleusin. Residu yang terakhir memiliki kelompok R nonpolar yang lebih besar. Dengan analogi dengan
tindakan yang diusulkan dari mutasi Ala-442 dalam C. elegans, substitusi APP717 dapat dibayangkan
mengganggu integritas membran yang menghasilkan pelepasan APP yang tidak diproses. Akibatnya,
domain fJA4 tidak akan mengalami pembelahan "normal" dan berpotensi menerima pembentukan
amiloid.
Penjelasan alternatif untuk peran mutasi APP717 dalam patogenesis penyakit Alzheimer familial
melibatkan gangguan struktur putuskan batang pengatur yang diduga dalam APP mRNA (49). Situs
mutasi diapit oleh 26 pasang nukleo yang mampu membentuk struktur loop-batang yang berisi urutan
konsensus CAGUGAkarakteristik unsur-unsur responsif besi yang mengatur translasi ferritin dan
reseptor transferin dalam menanggapi konsentrasi besi (50). Elemen putatif besi yang responsif dalam
APP terletak tepat pada residu 40-42 dari domain fJA4. Efek destabi lizing yang diberikan pada struktur
loop-batang oleh substitusi APP717 dapat, secara analogi dengan reseptor ferritin dan trans ferrin,
memengaruhi regulasi translasi APP yang menghasilkan perubahan kadar protein APP atau produk yang
terpotong secara tidak normal. Entah produksi berlebih APP atau produksi molekul APP terpotong yang
masih utuh (domain 3A4 dan kekurangan bagian sitoplasma dapat menyebabkan pembentukan amiloid)

Ringkasan
Belum jelas apakah hubungan penyakit Alzheimer familial dengan kromosom 21 dapat
dijelaskan sepenuhnya oleh mutasi pada APP. Goate et al. (40) telah meningkatkan kemungkinan bahwa
laporan rekombinasi antara APP dan penyakit Alzheimer keluarga dalam silsilah 21 terkait kromosom
mungkin keliru karena faktor-faktor seperti kesalahan ketik, misdiagnosis, non-ayah, dan fenokopi.
Keluarga terbesar yang digunakan dalam laporan asli tentang keterkaitan penyakit Alzheimer keluarga
dengan kromosom 21 (12) ditunjukkan pada Gambar. 1. Menghasilkan skor LOD puncak 2,94 pada 15
cM dengan kromo proksimal sekitar 21 penanda D21S52 yang terletak sekitar 15 cm dari APP. Onset dini
ini (40-50 tahun) silsilah keluarga Alzheimer dis easy berisi dua cabang di mana alel-alel APP yang
berbeda tampak terpisah dengan penyakit Alzheimer. Karena sangat tidak mungkin bahwa semua
individu yang terkena dampak di setiap cabang salah ketik dan / atau salah didiagnosis, ini crossover
wajib