Biokimia Makanan dan Pemrosesan Makanan

Diedit oleh YH Hui

Hak Cipta © 2006 oleh Blackwell
Publishing

3
Kemajuan terbaru dalam Penelitian
Bioteknologi Pangan
S. Jube dan D. Borthakur *
pengantar Tumbuhan PENGANTAR
bioteknologi
Vitamin Esensial Bioteknologi modern melibatkan teknik
Vitamin A molekuler yang menggunakan seluruh atau
Vitamin C sebagian organisme hidup untuk menghasilkan atau
Vitamin E meningkatkan produk dan proses komersial. Ini
Mineral Besi adalah cabang biologi molekuler yang relatif baru
Penting
dan berkembang pesat, yang dimulai dengan
Asam Amino Esensial
penciptaan gen rekombinan pertama 30 tahun yang
Lysine
Phytochemical Esensial lalu. Teknik-teknik ini, dalam banyak cara berbeda,
Metionin dan Tirosin mengubah cara hidup kita dengan memperbaiki
Isoflavonoid makanan yang kita makan, minuman yang kita
Hewan Rekayasa Bio minum, pakaian yang kita kenakan, dan obat-obatan
Susu Modifikasi pada Sapi Perah yang kita minum. Mereka juga telah meningkatkan
Transgenik Meningkatkan Pertumbuhan aspek lain dari kehidupan kita melalui
Otot pada Sapi yang Mengurangi pengembangan metode deteksi baru untuk
Kandungan Lemak pada Transgenic diagnosis dini banyak penyakit seperti
Swine Unggas Transgenik: Telur sebagai
arteriosklerosis, kanker, diabetes, Parkinson, dan
Bioreaktor
Ikan Bioteknologi
Alzheimer. Penerapan metode bioteknologi dalam
Meningkatkan Tingkat Pertumbuhan industri pangan dan pertanian adalah salah satu dari
Ikan, Meningkatkan Properti banyak aspek bioteknologi yang memiliki dampak
Antibeku dalam Ikan besar pada masyarakat. Pada tahun 2050,
Mikroorganisme Bioengineered diharapkan bahwa lebih dari 10 miliar orang akan
Penghapusan Senyawa Karsinogenik hidup di planet ini, dan juga diyakini bahwa
Penghambatan Bakteri Patogen mungkin tidak ada sumber daya yang cukup untuk
Pemanis Alami Diproduksi oleh memberi makan populasi dunia (UNFPA 1995).
Mikroorganisme, Produksi Karotenoid dalam Kelaparan dan malnutrisi telah merenggut 24.000
Mikroorganisme
nyawa per hari di negara-negara berkembang di
Metode Deteksi dalam Deteksi Transgen
Bioteknologi Makanan
Asia, Afrika, dan Amerika Latin (James 2003).
Deteksi Patogen Makanan Malnutrisi, bagaimanapun, tidak eksklusif untuk
Kesimpulan Deteksi Ensefalopati Bongine negara-negara berkembang. Banyak orang di
Spongiform negara-negara industri, meskipun sebagian besar
Referensi makan dengan baik, masih menderita kekurangan
makanan yang layak. Malnutrisi, bagaimanapun,
tidak eksklusif untuk negara-negara berkembang.
* Kontributor terkait. Banyak orang di negara-negara industri, meskipun
sebagian besar makan dengan baik, masih
menderita kekurangan makanan yang layak.
Malnutrisi, bagaimanapun, tidak eksklusif untuk
negara-negara berkembang. Banyak orang di
negara-negara industri, meskipun sebagian besar
makan dengan baik, masih menderita kekurangan
makanan yang layak.
Bioteknologi adalah bidang ilmiah yang
menawarkan potensi terbesar untuk menghentikan
kelaparan saat ini dan membantu menghindari
kelaparan massal di masa depan. Melalui
bioteknologi, para ilmuwan dapat meningkatkan
ketahanan tanaman terhadap

penyakit dan tekanan lingkungan, yang
memungkinkan tanaman ditanam di lahan yang
relatif tidak produktif dan tidak cocok.
Perkembangan terbaru dalam bioteknologi akan
memungkinkan produksi makanan yang lebih
bergizi, lebih aman, lebih enak, dan lebih sehat.
Kemajuan dalam rekayasa genetika sedang
merevolusi cara kita memproduksi dan
mengonsumsi makanan, dan sangat mungkin bahwa
dalam dekade berikutnya sebagian besar dari
makanan yang kita makan akan bioteknologi.
Dalam ulasan ini, kemajuan terbaru, metode, dan
aplikasi bioteknologi dalam pembuatan produk
makanan dari tanaman transgenik, hewan, dan
mikroorganisme telah dirangkum. Artikel ini
bukan, dengan cara apa pun, dokumentasi dari
setiap aplikasi bioteknologi dalam industri
makanan, tetapi tinjauan komprehensif, yang
mencakup contoh yang paling relevan. Hasil
penelitian ilmiah penting yang berusaha
meningkatkan nilai gizi tanaman pangan seperti
beras, kentang, dan kedelai akan dibahas.
Peningkatan ini dapat dicapai melalui pengenalan
gen yang menyandikan enzim dalam jalur
biosintetik vitamin, asam amino esensial, elemen
esensial, dan protein pengikat mikronutrien. Contoh
rekayasa genetika sapi, babi, unggas, dan ikan akan
dijelaskan, dengan tujuan meningkatkan kualitas
susu, mengurangi kadar lemak, meningkatkan
produktivitas / pertumbuhan, dan memberikan
toleransi terhadap suhu beku. Penggunaan kelenjar
susu dan telur sebagai bioreaktor untuk produksi
protein penting juga akan dibahas. Bagian ketiga
dari artikel ini akan fokus pada peran
mikroorganisme untuk perbaikan produk makanan
melalui penghapusan senyawa karsinogenik dari
minuman, penyebaran bakteri patogen dari kultur
pemula, produksi pemanis alami yang lebih sehat,
dan sintesis senyawa bermanfaat seperti karotenoid.
Akhirnya, beberapa contoh tentang penggunaan
teknik bio-teknologi dalam mendeteksi bahan
transgenik dan patogen berbahaya dalam produk
makanan akan dijelaskan.
TANAMAN BIOENGINEERED
Metode rekayasa genetika telah banyak digunakan
untuk meningkatkan jumlah nutrisi yang berbeda
(vitamin, asam amino esensial, mineral, dan
fitokimia) dan meningkatkan ketersediaannya pada
tanaman. Ada dua metode utama untuk mentransfer
gen ke dalam tanaman untuk produksi tanaman
transgenik: Transformasi yang dimediasi agro-
bakteri dan pengeboman mikroproyek. Dalam
metode transformasi yang dimediasi
Agrobacterium, strain Agrobacterium tumefaciens
yang direkayasa secara genetika digunakan untuk
mentransfer transgen ke dalam tanaman. Beberapa
strain A. tumefaciens memiliki kemampuan alami
36
untuk mentransfer segmen DNA mereka sendiri ke dalam
tanaman untuk menginduksi tumor mahkota-empedu.
Galur jenis A. tumefaciens yang merangsang mahkota
tipe liar ini memiliki plasmid Ti (penginduksi tumor)
yang membawa gen untuk induksi tumor. Selama proses
infeksi, Agrobacterium mentransfer segmen Ti plasmid,
yang dikenal sebagai T-DNA, untuk menanam sel
(Willmitzer et al. 1983). Plasmid Ti dapat direkayasa
menjadi sistem dua-plasmid (biary) yang mengandung
plasmid Ti yang "dilucuti", di mana T-DNA telah
dihapus, dan sebuah plasmid kecil (disebut vektor
kloning biner) terkoneksi mempertahankan segmen T-
DNA yang "direkayasa". Plasmid Ti yang dipersenjatai,
yang dipertahankan dalam strain A. tumefaciens,
berfungsi sebagai penolong, menyediakan fungsi transfer
untuk T-DNA yang direkayasa, yang berisi gen target dan
gen penanda tanaman yang dapat dipilih yang diselipkan
di antara T-DNA Pemotong kiri dan kanan. Ketika A.
tumefaciens mengandung Ti plasmid yang dilepaskan dan
vektor kloning biner ditumbuhkan di hadapan
asetosyringon, protein gen Agrobacterium vir (virulence),
yang membantu memindahkan daerah T-DNA yang
direkayasa dari vektor kloning biner ke sel-sel tanaman,
diproduksi (Zamrryski 1988). Transformasi yang
dimediasi Agrobacterium adalah metode yang paling
umum digunakan untuk rekayasa genetika tanaman.
Metode pengeboman mikroproyekil, juga dikenal
sebagai senjata gen atau metode transformasi biolistik,
melibatkan pengiriman dan ekspresi DNA asing langsung
ke sel tanaman individu (Klein et al. 1987). Telah terbukti
sebagai metode yang kuat untuk mengubah sejumlah
besar spesies tanaman, termasuk monokotil, yang
seringkali sulit ditransformasikan menggunakan A.
tumefaciens (Vain et al. 1995). Dalam metode ini,
partikel bola tungsten atau emas, berukuran sekitar 4 μm,
dilapisi dengan DNA dan kemudian dipercepat hingga
kecepatan tinggi dan dimasukkan ke dalam sel tanaman
menggunakan sistem pengiriman partikel biolistik atau
senjata gen. Begitu DNA masuk ke dalam sel, ia
berintegrasi ke DNA tanaman melalui beberapa proses
yang tidak diketahui. Tidak diketahui apakah integras
tion DNA ke dalam kromosom membutuhkan pengiriman
mikroproyek ke dalam inti tanaman. Metode
bombardemen mikroproyekil telah digunakan untuk
mentransfer gen ke berbagai bagian tanaman yang
digunakan dalam regenerasi kultur jaringan, kalus,
suspensi sel, embrio belum matang, dan serbuk sari
dalam berbagai spesies tanaman. Metode ini juga dapat
digunakan untuk mentransfer gen ke kloroplas dan
mitokondria, yang tidak dapat dicapai oleh transfer gen
yang dimediasi A. tumefibens (Southgate et al. 1995).
ESSENTIAL VITAMIN
Vitaminmemainkan peran penting dalam kesehatan
manusia dengan mengendalikan metabolisme dan
membantu proses biokimia yang melepaskan energi
dari makanan. Mereka penting dalam pembentukan
hormon, sel darah, bahan kimia sistem saraf, dan
 37
bahan genetik. Vitamin bergabung dengan (cDNA) dan gen crtI bakteri ditempatkan di bawah
protein untuk membuat enzim aktif secara kendali promotor glutelin (Gt1) spesifik endosperma
metabolis yang penting dalam banyak reaksi dan promotor virus CaL (Lifelower Mosaic Virus /
kimia. Dari 13 vitamin terkenal, tubuh hanya CaMV) 35S, masing-masing, dan diperkenalkan
dapat memproduksi vitamin D; semua yang dalam biner. plasmid pZPsC. Plasmid lain, pZLcyH,
lain, seperti vitamin A, C, dan E, harus berasal dibangun dengan menyisipkan gen lcy dari daffodil
dari makanan. Kurangnya asupan vitamin dapat di bawah kendali promotor Gt1 beras dan gen aphIV,
menyebabkan berbagai masalah kesehatan. untuk resistensi higromisin, di bawah kendali
Melalui bioteknologi, para ilmuwan dapat promotor 35S CaMV. Plasmid pZPsC dan pZLCyH
meningkatkan kandungan vitamin dalam ditransformasi menjadi embrio padi yang belum
tanaman tertentu, memungkinkan jangkauan matang oleh Agrobacterium-mediated transformation
yang lebih luas dari populasi dunia untuk (Ye et al. 2000). Semua transforman yang tahan
memanfaatkan manfaat kesehatan mereka. higromisin disaring untuk mengetahui adanya psy,
crtI, dan gen lcy oleh hibridisasi Selatan. Beberapa
tanaman trans-formasi menghasilkan þ-karoten dalam
Vitamin A endo-sperma, yang menyebabkan kernel tampak
Hampir dua pertiga populasi dunia bergantung kuning. Baris yang dipilih mengandung 1,6-4 μg ot-
pada beras sebagai makanan pokok mereka, karoten per gram endosperma dan ditetapkan sebagai
dan di antara mereka diperkirakan 300 juta “beras emas.”
menderita kekurangan vitamin A (WHO 1997).
Ini adalah masalah kesehatan masyarakat yang
Vitamin C
serius di sejumlah negara, termasuk daerah
padat penduduk di Asia, Afrika, dan Amerika Vitamin C atau asam askorbat, yang ditemukan di
Latin. Endosperma beras (bagian dalam yang banyak tanaman, merupakan komponen penting
mengandung tepung dari beras) tidak dalam nutrisi manusia. Ini memiliki sifat antioksidan,
mengandung þ-karoten, yang merupakan meningkatkan sel kekebalan dan fungsi
prekursor untuk vitamin A. Vitamin A adalah kardiovaskular, mencegah penyakit terkait dengan
komponen pigmen visual sel batang dan jaringan ikat (Davey et al. 2000), dan diperlukan
kerucut di retina, dan kekurangannya untuk pemanfaatan zat besi (Hallberg et al. 1989).
menyebabkan gejala mulai dari kebutaan Sebagian besar hewan dan tumbuhan dapat
malam hingga kebutaan total. Di Asia mensintesis asam askorbat, tetapi manusia tidak
Tenggara, diperkirakan seperempat juta anak memiliki enzim, L-gulono-1,4-lactone oxidoreductase
menjadi buta setiap tahun karena kekurangan (EC 1.1.3.8),
gizi ini. Makanan nabati seperti wortel dan
banyak sayuran lainnya mengandung þ-
karoten.
Ingo Potrykus dari Institut Teknologi
Federal Swiss, Zurich, Swiss, dan Peter Beyer
dari Universitas Freiburg baru-baru ini
mengembangkan beras transgenik,
mengekspresikan gen untuk bio-sintesis car-
karoten dalam butiran beras (Potrykus 2001).
Beras endo-sperma secara alami mengandung
geranlylgeranyl pyphosphate (GGPP), yang
merupakan pendahulu dari jalur untuk
biosintesis car-karoten. GGPP dapat dikonversi
menjadi þ-karoten dalam empat langkah
(Bartley et al. 1994) (Gambar 3.2). Enzim
bakteri phytoene desaturase (EC 1.14.99.30)
yang disandikan oleh gen crtI dapat
menggantikan fungsi kedua phytoene desatase
dan $-karoten desaturase (EC 1.14.99.30) pada
tanaman (Armstrong 1994). Untuk mengurangi
jumlah gen yang diubah menjadi beras untuk
jalur þ-karoten, para peneliti menggunakan gen
crtI dari bakteri Erwinia uredovora (Ye et al.
2000). Gen pengkodean gen phytoene synthase
(EC 2.5.1.32) dan gen pengkodean lycopene þ-
cyclase yang digunakan untuk transformasi
berasal dari tanaman bakung. Gen psy tanaman
Gambar 3.1. Pembentukan vitamin A dari þ-karoten.
diperlukan untuk langkah terakhir dalam biosintesis
asam askorbat. Untuk alasan ini, asam askorbat
perlu dikonsumsi dari sumber makanan, terutama
dari tanaman (Davey et al. 2000). Identifikasi jalur
asam askorbat baru-baru ini pada tanaman
membuka cara untuk memanipulasi biosintesisnya
dan memungkinkan desain tanaman rekayasa hayati
yang menghasilkan asam askorbat pada tingkat
yang jauh lebih tinggi. Jalur biosintetik asam
askorbat pada hewan berbeda dari pada tumbuhan.
Pada tanaman, biosintesis vitamin C dapat
dilakukan dengan dua cara. Pertama, asam D-
galakturonat, yang dilepaskan pada hidrolisis pektin
(komponen dinding sel utama), diubah menjadi
asam L-galaktonat dengan bantuan enzim D-
galakturonat asam reduktase (EC 2.7.1.44). Asam
L-galaktonat kemudian mudah diubah menjadi L-
galaktono-1,4-lakton, yang merupakan prekursor
langsung asam askorbat (Gambar 3.3; Wheeler et al.
1998, Smirnoff et al. 2001). Peneliti di Spanyol (Agius et
al. 2003) mengisolasi dan mengkarakterisasi GalUR, gen
dalam stroberi yang mengkode enzim D-galacturonic acid
reductase. Gen GalUR diamplifikasi dengan reaksi rantai
polimerase (PCR) sebagai fragmen 956 bp dan dikloning
ke vektor biner di belakang promotor 35S CaMV.
Plasmid yang dihasilkan diubah menjadi E. coli dan
dikirim ke Agrobacterium melalui kawin triparental.
Akhirnya, gen GalUR diperkenalkan ke tanaman Arab-
idopsis thaliana melalui transformasi Agrobacterium-
mediated. Ekspresi gen GalUR stroberi di A. thaliana
memungkinkan tanaman bioenergi untuk meningkatkan
biosintesis asam askorbat dua hingga tiga kali
dibandingkan dengan tanaman tipe liar (Agius et al.
2003).
Gambar 3.2. Jalur biosintesis þ-karoten pada tanaman dan bakteri.
Cara kedua dimana tanaman mensintesis vitamin
C adalah melalui daur ulang asam askorbat bekas
(Gbr. 3.4). Selama langkah pertama daur ulang ini,
asam askorbat dioksidasi, membentuk radikal yang
disebut monodehydroascorbate (MDHA). Setelah
MDHA terbentuk, dapat dengan mudah diubah
kembali menjadi asam askorbat oleh enzim
monodehydroascorbate reductase (MDHAR) (EC
1.6.5.4) atau dioksidasi lebih lanjut, membentuk
dehydroascorbate (DHA). DHA kemudian dapat
mengalami hidrolisis ireversibel atau didaur ulang
menjadi asam askorbat oleh enzim
dehydroascorbate reductase (DHAR) (EC 1.8.5.1),
yang menggunakan glutathione reduktan (GSH)
(Washko et al. 1992, Wheeler et al. 1998, Smirnoff
et. 1998) al. 2001). Peneliti dari University of
California, River-
sisi, berhipotesis bahwa dengan meningkatkan
ekspresi DHAR pada tanaman, mereka dapat
meningkatkan sintesis asam askorbat, karena proses
daur ulang askorbat yang lebih efisien akan dicapai
(Chen et al. 2003). Untuk menguji hipotesis
mereka, mereka mengisolasi DHAR cDNA dari
gandum dan mengekspresikan gen dalam tanaman
tembakau dan jagung. Tanaman tembakau
ditransformasi dengan menggunakan
Agrobacterium. Tag-Nya ditambahkan ke DHAR,
yang kemudian diperkenalkan dalam vektor biner
pBI101, di belakang 35S CaMV promotor. Untuk
jagung, DHAR tanpa tag-Nya ditempatkan di
bawah kendali pemasar ubiquitin (Ub) atau
promotor Shrunken 2 (Sh2) dalam vektor pACH18.
Jagung transgenik dihasilkan oleh pengeboman
partikel kalus embriogenik.

Gambar 3.3. Jalur biosintetik vitamin C pada tanaman.
Gambar 3.4. Jalur oksidatif daur ulang vitamin C.
Ekspresi DHAR diamplifikasi hingga 32 kali dalam
tembakau, dan hingga 100 kali dalam jagung,
menghasilkan peningkatan kadar asam askorbat
hingga empat kali lipat pada tanaman bioengineer
(Chen et al. 2003).
Vitamin E
Vitamin E adalah istilah luas yang digunakan untuk
menggambarkan sekelompok delapan antioksidan
yang larut dalam lemak dalam keluarga tokotrienol
dan tokoferol yang disintesis oleh organisme
fotosintesis, terutama tanaman (Hess 1993). Baik
keluarga tocotrienol dan tocopherol dapat
dibedakan menjadi empat bentuk masing-masing (a,
þ, μ, 6), berdasarkan jumlah dan posisi gugus metil
dalam cincin aromatik (Kamal-Eldin dan Ap-
pelqvist 1996). Tokotrienol dan tokoferol
melindungi tanaman terhadap tekanan oksidatif,
dan sifat antioksidan dari molekul-molekul ini
menambah kualitas fungsional untuk produk
makanan (Andlauer dan Furst 1998). Vitamin E
merupakan komponen penting dari diet mamalia,
dan kelebihan asupan telah terbukti menghasilkan
banyak sifat terapeutik yang bermanfaat, termasuk
pengurangan kadar kolesterol, penghambatan
pertumbuhan sel kanker payudara secara in vitro,
Tokotrienolmemiliki ikatan antioksidan yang lebih
kuat daripada tokoferol tetapi tidak diserap dengan
mudah. Bentuk utama vitamin E dalam daun dan
biji adalah a-tokoferol dan μ-tokotrienol, masing-
masing (Munné-Bosch dan Alegre 2002).
Sementara biosintesis tokoferol dan tokotrienol
telah dikenal selama bertahun-tahun, gen khusus
yang menyandikan berbagai enzim di jalur baru-
baru ini telah ditemukan. Para peneliti berusaha
mengembangkan tanaman dengan kadar vitamin E
yang meningkat, dan beberapa hasil positif telah
tercapai.
Langkah pertama dalam jalur biosintesis
tokoferol dan tokotrienol adalah pembentukan asam
homogentisat (HGA) dari p-hidroksifenil-piruvat,
dikatalisis oleh enzim p-hidroksfenil-piruvat
dioksigenase (HPPD) (EC 1.13.11.27) Gambar 3.5)
(Grusack dan DellaPenna 1999). Tocotrienol
Gambar 3.5. Jalur biosintetik vitamin E (a-tocotrienol dan a-tocopherol). (Diadaptasi dari Cahoon et al. 2003.)
dan biosintesis tokoferol pada tanaman berasal dari
dua prekursor yang berbeda. Tocotrienol dihasilkan
dari kondensasi HGA dan geranyl-geranyl
diphosphate (GGDP), dikatalisis oleh HGA
geranylgeranyl transferase (HGGT) (EC 2.5.1.32),
dan tokoferol dibentuk dari kondensasi HGA dan
phytyl diphosphate (PDP) dikatalisis oleh HGA
phytyl transferase (HPT) (EC 2.5.1.62) (Gbr. 3.5)
(Soll dkk. 1980, Schultz dkk. 1985, Collakova dan
DellaPenna 2001). Para peneliti dari Institute of
Botany di Jerman menggambarkan efek ekspresi
konstitutif dari HPPD cDNA dari barley (Hordeum
vulgare) pada tanaman tembakau. Gen HPPD
dikloning ke dalam vektor biner pBinAR, di situs
kloning SmaI yang terletak di antara promotor 35S
CaMV dan sinyal polyadenylation octopine
synthase (EC 1.5.1.11).
digunakan untuk mengubah eksplan tembakau.
Hasil penelitian menunjukkan bahwa garis
transgenik memiliki kapasitas yang lebih besar
untuk biosintesis HGA secara keseluruhan dan
menghasilkan peningkatan dua kali lipat dalam
vitamin E dalam biji. Kandungan vitamin E dalam
daun tidak terpengaruh (Falk et al. 2003).
Dalam pendekatan lain terhadap peningkatan
vitamin E, Cahoon et al. (2003) melaporkan
identifikasi dan isolasi gen monokotil baru yang
mengkode HGGT, yang sejauh ini merupakan satu-
satunya enzim yang diketahui spesifik untuk
sintesis tocotrienol. Para peneliti ini menemukan
bahwa ekspresi barley HGGT meningkatkan
sintesis tocotrienol sebanyak 10 hingga 15 kali lipat
dalam daun A. thaliana dan enam kali lipat dalam
biji jagung. Barley HGGT cDNA ditempatkan di
bawah kendali pemicu 35S CaMV dan terminator
nopaline synthase. Konstruksinya dimasukkan ke
dalam vektor biner pZS199 untuk menghasilkan
plasmid pSH24. Plasmid kemudian dimasukkan ke
dalam Agrobacterium untuk ditransformasi menjadi
tembakau dan A. thaliana (Cahoon et al. 2003).
Cara ketiga dimana kandungan vitamin E dalam
tanaman dapat dimanipulasi melibatkan enzim
terakhir pada langkah terakhir dari jalur biosintesis
tokotrienol dan tokoferol, di mana μ-tocotrienol dan
μ-toco-pherol dikonversi menjadi a-tocotrienol dan
-toko- pherol, masing-masing. Langkah ini
dikatalisis oleh enzim μ-tokoferol metiltransferase
(μ-TMT) (EC 2.1.1.95) (Gbr. 3.5) (Shintani dan
DellaPenna 1998). a-tokoferol memiliki sifat
oksidatif tertinggi di antara anggota keluarga
vitamin E (Kamal-Eldin dan Appelqvist 1996).
Sayangnya, minyak nabati, yang merupakan
sumber makanan utama vitamin E, hanya
mengandung fraksional a-tokoferol tetapi tingkat
prekursornya yang tinggi, μ-tokoferol. Shintani dan
DellaPenna mengekspresikan endogen secara
berlebihan
A. thaliana μ-TMT untuk meningkatkan
konversi μ-tokoferol menjadi a-tokoferol.
Mereka memperkenalkan konstruksi cDNA μ-
TMT di bawah kendali promotor 35S CaMV
dalam vektor biner ke dalam tanaman A.
thaliana melalui transformasi yang dimediasi
Agrobacterium. Kandungan a-tokoferol biji
bioengineered sembilan kali lipat lebih besar
dari biji tipe liar (Shintani dan DellaPenna
1998).
ESSENTIAL M.INERAL
Untuk mempertahankan tubuh yang berfungsi dan
sehat, manusia membutuhkan 17 mineral esensial
yang berbeda
diet. Mineral adalah ion anorganik yang ditemukan
di alam dan tidak dapat dibuat oleh organisme
hidup. Mereka dapat dibagi menjadi dua kelas:
makronutrien dan mikro-nutrisi. Makronutrien
adalah mineral yang kita butuhkan dalam jumlah
besar, termasuk kalsium, fosfor, natrium,
magnesium, klorin, belerang, dan silikon.
Mikronutrien, atau trace mineral, adalah mineral
yang dibutuhkan dalam jumlah kecil, di mana zat
besi adalah yang paling umum, diikuti oleh fluor,
seng, tembaga, kobalt, yodium, selenium, mangan,
molibdenum, dan kromium. Meskipun konsumsi
makanan nabati yang seimbang harus secara alami
menyediakan nutrisi ini, kekurangan mineral,
terutama zat besi, tersebar luas di antara populasi
dunia.
Besi
Meskipun zat besi diperlukan dalam jumlah yang
sangat sedikit, ini adalah defisiensi nutrisi yang
paling luas di seluruh dunia. Dipercayai bahwa
sekitar 30% populasi dunia menderita masalah gizi
serius yang disebabkan oleh asupan zat besi yang
tidak mencukupi (WHO 1992). Zat besi adalah
unsur penting dari hemoglobin, komponen
pembawa oksigen dalam darah, dan juga
merupakan bagian dari mioglobin, yang membantu
sel otot menyimpan oksigen. Kadar zat besi yang
rendah dapat menyebabkan perkembangan anemia
defisiensi besi. Pada orang yang anemia darah
mengandung kadar oksigen yang rendah, yang
mengakibatkan banyak masalah kesehatan termasuk
keterbelakangan bayi (Walter et al. 1986),
komplikasi kehamilan (Murphy et al. 1986), fungsi
kekebalan tubuh yang rendah (Murakawa et al.
1987), dan kelelahan (Basta et al. 1979). Zat besi
hadir dalam makanan dalam bentuk anorganik (besi
dan besi) dan organik (heme dan non-heme). Heme
iron, yang sangat bioavailable, berasal terutama dari
hemoglobin dan mioglobin dari makanan daging
seperti daging, ikan, dan unggas (Taylor et al.
1986). Pada manusia, besi tereduksi (besi) lebih
mudah diambil daripada besi teroksidasi (besi).
Beberapa pendekatan telah digunakan dalam
memerangi defisiensi zat besi termasuk
suplementasi nutraceutical, fortifikasi makanan, dan
berbagai metode persiapan dan pengolahan
makanan (Maberly et al. 1994). Sejauh ini, tidak
ada satu pun dari pendekatan ini yang berhasil
menghilangkan kekurangan zat besi, terutama di
negara-negara berkembang. Alat baru dalam
memerangi defisiensi nutrisi adalah penggunaan
bioteknologi untuk meningkatkan nutrisi mineral
esensial dalam tanaman pokok. yang sangat
bioavailable, berasal terutama dari hemoglobin dan
mioglobin dari makanan daging seperti daging,
ikan, dan unggas (Taylor et al. 1986). Pada
manusia, besi tereduksi (besi) lebih mudah diambil
daripada besi teroksidasi (besi). Beberapa
pendekatan telah digunakan dalam
memerangi defisiensi zat besi termasuk
suplementasi nutraceutical, fortifikasi
makanan, dan berbagai metode persiapan dan
pengolahan makanan (Maberly et al. 1994).
Sejauh ini, tidak ada satu pun dari pendekatan
ini yang berhasil menghilangkan kekurangan
zat besi, terutama di negara-negara
berkembang. Alat baru dalam memerangi
defisiensi nutrisi adalah penggunaan
bioteknologi untuk meningkatkan nutrisi
mineral esensial dalam tanaman pokok. yang
sangat bioavailable, berasal terutama dari
hemoglobin dan mioglobin dari makanan
daging seperti daging, ikan, dan unggas
(Taylor et al. 1986). Pada manusia, besi
tereduksi (besi) lebih mudah diambil daripada
besi teroksidasi (besi). Beberapa pendekatan
telah digunakan dalam memerangi defisiensi
zat besi termasuk suplementasi nutraceutical,
fortifikasi makanan, dan berbagai metode
persiapan dan pengolahan makanan (Maberly
et al. 1994). Sejauh ini, tidak ada satu pun
dari pendekatan ini yang berhasil
menghilangkan kekurangan zat besi, terutama
di negara-negara berkembang. Alat baru
dalam memerangi defisiensi nutrisi adalah
penggunaan bioteknologi untuk
meningkatkan nutrisi mineral esensial dalam
tanaman pokok. Pada manusia, besi tereduksi
(besi) lebih mudah diambil daripada besi
teroksidasi (besi). Beberapa pendekatan telah
digunakan dalam memerangi defisiensi zat
besi termasuk suplementasi nutraceutical,
fortifikasi makanan, dan berbagai metode
persiapan dan pengolahan makanan (Maberly
et al. 1994). Sejauh ini, tidak ada satu pun
dari pendekatan ini yang berhasil
menghilangkan kekurangan zat besi, terutama
di negara-negara berkembang. Alat baru
dalam memerangi defisiensi nutrisi adalah
penggunaan bioteknologi untuk
meningkatkan nutrisi mineral esensial dalam
tanaman pokok. Pada manusia, besi tereduksi
(besi) lebih mudah diambil daripada besi
teroksidasi (besi). Beberapa pendekatan telah
digunakan dalam memerangi defisiensi zat
besi termasuk suplementasi nutraceutical,
fortifikasi makanan, dan berbagai metode
persiapan dan pengolahan makanan (Maberly
et al. 1994). Sejauh ini, tidak ada satu pun
dari pendekatan ini yang berhasil
menghilangkan kekurangan zat besi, terutama
di negara-negara berkembang. Alat baru
dalam memerangi defisiensi nutrisi adalah
penggunaan bioteknologi untuk
meningkatkan nutrisi mineral esensial dalam
tanaman pokok. tidak satu pun dari
pendekatan ini yang berhasil menghilangkan
kekurangan zat besi, terutama di negara-
negara berkembang. Alat baru dalam memerangi
defisiensi nutrisi adalah penggunaan bioteknologi
untuk meningkatkan nutrisi mineral esensial dalam
tanaman pokok. tidak satu pun dari pendekatan ini
yang berhasil menghilangkan kekurangan zat besi,
terutama di negara-negara berkembang. Alat baru
dalam memerangi defisiensi nutrisi adalah
penggunaan bioteknologi untuk meningkatkan
nutrisi mineral esensial dalam tanaman pokok.
Pada saat ini, pada dasarnya ada dua cara di
mana rekayasa genetika dapat digunakan untuk
tujuan ini. berpose: (1) dengan meningkatkan
konsentrasi ferritin protein pengikat besi dan (2)
dengan mengurangi jumlah asam fitat penghambat
zat besi. Meskipun asupan zat besi penting untuk
kesehatan manusia, itu bisa beracun, sehingga
kemampuan untuk menyimpan dan melepaskan zat
besi secara terkendali sangat penting. Protein
ferrytin 450 kDa, yang ditemukan pada hewan,
tumbuhan, dan bakteri, dapat terakumulasi hingga
4.500 atom besi (Andrews et al. 1992). Protein ini
terdiri dari 24 subunit yang dirakit menjadi struktur
bola berongga tempat besi disimpan sebagai inti
mineral oksida besi hidro (Gambar 3.6). Dua fungsi
utama feritin dalam organisme hidup adalah untuk
memasok zat besi untuk sintesis protein seperti
ferredoksin dan sitokrom dan untuk mencegah
kerusakan radikal bebas pada sel. Penelitian telah
menunjukkan bahwa ferritin dapat diberikan secara
oral dan efektif untuk pengobatan anemia tikus
(Beard et al. 1996), menunjukkan bahwa
peningkatan kadar feritin sereal dapat memecahkan
masalah kekurangan zat besi pada manusia. Peneliti
Jepang (Goto et al. 1999) memperkenalkan ferritin
cDNA kedelai ke dalam tanaman padi, di bawah
kendali promotor spesifik benih, GluB-1, dari gen
protein penyimpanan benih padi yang mengkode
glutelin. Dua keuntungan dari program ini moter
adalah akumulasi zat besi khususnya dalam
endosperma biji-bijian beras, dan kemampuannya
untuk menginduksi ferritin pada tingkat tinggi.
Feritin cDNA diisolasi dari kotiledon kedelai,
dimasukkan ke dalam vektor biner pGPTV-35S-
bar, dan dipindahkan ke dalam beras menggunakan
Agrobacterium. Kandungan besi dari benih padi di
tanaman transgenik adalah tiga kali lebih besar dari
pada tanaman tipe liar yang tidak ditransformasi.
Asam fitat, atau fitat, adalah penghambat utama
dari banyak mineral penting, termasuk zat besi,
seng, dan magnesium, dan diyakini secara langsung
bertanggung jawab atas masalah defisiensi besi
(Ravindran et al. 1995). Dalam biji-bijian sereal,
asam fitat adalah penyimpanan fosfat utama, dan
disimpan dalam vakuola penyimpanan aleuron
(Lott 1984). Selama perkecambahan biji, asam fitat
dikatalisis menjadi fosfat anorganik, oleh aksi
phytase enzim hidrolitik (EC 3.1.3.8) (Gbr. 3.7).
Ada sedikit atau tidak ada aktivitas fitase dalam biji
kering atau dalam saluran pencernaan hewan
monogastrik (Gibson dan Ullah 1990, Lantzsch et
 al. 1992). Dalam sebuah penelitian baru-baru matang di bawah kondisi pH dan suhu optimal
ini, telah ditunjukkan bahwa aktivitas fitase (Brinch-Pedersen et al. 2002).
dapat diestimasi ulang dalam biji kering

Gambar 3.6. Ferritin protein pengikat besi.

Gambar 3.7. Asam fitat terdegradasi selama perkecambahan biji oleh enzim spesifik yang disebut phytase
[myo-inositol- (1,2,3,4,5,6) -hexakisphosphate phosphohydrolase] (EC 3.1.3.8).

Pengurangan jumlah asam fitat dalam makanan
pokok kemungkinan akan menghasilkan
bioavailabilitas yang jauh lebih besar dari besi dan
mineral penting lainnya. Lucca et al. (2002)
memasukkan cDNA phytase jamur (Aspergillus
fumigatus) ke dalam beras untuk meningkatkan
degradasi asam fitat. Sel-sel suspensi beras, berasal
dari embrio zygotik yang belum matang, digunakan
untuk transformasi biolistik dengan gen A. fumigatus
phytase. Phytase dari A. fumigatus adalah enzim pilihan
karena panasnya stabil dan dengan demikian dapat kembali
menjadi bentuk aktif setelah denaturasi panas (Wyss et al.
1998). Tujuan utama dari penelitian ini adalah untuk
meningkatkan aktivitas phytase selama perkecambahan biji
dan untuk mempertahankan aktivitas enzim dalam biji
setelah pengolahan makanan dan di saluran pencernaan
manusia. Meskipun para peneliti mencapai tingkat
ekspresi phytase yang tinggi dalam endosperma
beras, dengan menempatkannya di bawah kendali
promotor global spesifik jaringan yang kuat,
thermotolerance dari beras transgenik tidak setinggi
yang diharapkan. Telah dispesifikasikan bahwa
alasan rendahnya kemampuan terentabilitas phytase
A. fumigatus yang tak terduga ini dalam beras
transgenik adalah karena gangguan lingkungan
seluler endosperma untuk mempertahankan enzim
dalam konfigurasi aktif (Holm et al. al. 2002). Lebih
lanjut fumigatus phytase dalam beras transgenik
disebabkan oleh gangguan lingkungan seluler
endosperma untuk mempertahankan enzim dalam
konfigurasi aktif (Holm et al. 2002). Lebih lanjut
fumigatus phytase dalam beras transgenik
disebabkan oleh gangguan lingkungan seluler
endosperma untuk mempertahankan enzim dalam
konfigurasi aktif (Holm et al. 2002). Lebih lanjut
studi diperlukan untuk mengembangkan enzim fasa
endogen yang termostabil dan mempertahankan
aktivitas tinggi dalam jaringan tanaman.
ESSENTIAL SEBUAHMINO SEBUAH CIDS
Protein adalah molekul organik yang dibentuk oleh
asam amino. Sistem pencernaan memecah protein
menjadi asam amino tunggal sehingga mereka dapat
masuk ke dalam aliran darah. Sel kemudian
menggunakan asam amino sebagai bahan pembentuk
untuk membentuk enzim dan protein struktural. Ada
dua jenis asam amino, esensial dan tidak esensial.
Asam amino esensial tidak dapat disintesis oleh
hewan, termasuk manusia, dan karena itu perlu
diperoleh dalam makanan. Sembilan asam amino
esensial adalah histidin, isoleusin, lein, lisin,
metionin, fenilalanin, treonin, triptofan, dan valin.
Tubuh dapat mensintesis asam amino nonesensial
selama ada asupan yang tepat dari asam amino
esensial dan kalori. Protein hadir dalam makanan
dalam jumlah yang bervariasi; beberapa makanan
mengandung sembilan asam amino esensial di
dalamnya, dan mereka disebut sebagai protein
lengkap. Sebagian besar produk hewani (daging,
susu, telur) menyediakan sumber protein lengkap
yang baik. Sumber sayuran, di sisi lain tangan,
biasanya rendah atau hilang asam amino esensial
tertentu. Misalnya, biji-bijian cenderung kekurangan
lisin, sedangkan pulsa pendek dalam metionin (Miflin
et al. 1999). Untuk memberikan nutrisi yang lebih
baik dari sumber nabati, penting untuk meningkatkan
kandungan asam amino esensial dalam protein benih
dan umbi. Ini sangat penting bagi negara-negara di
mana tanaman tertentu, seperti beras, kentang, dan
jagung, adalah sumber makanan utama.
Lisin
Beras adalah salah satu tanaman pokok yang
paling penting dan dikonsumsi oleh 65% populasi
dunia berdasarkan basis harian (Lee et al. 2003). Ini
adalah sumber nutrisi penting yang baik seperti vitamin B1
(thiamin), B2 (riboflavin), dan B3 (niasin), tetapi rendah
dalam asam amino esensial lisin dan isoleusin (Fickler
1995). Asupan lisin yang adekuat adalah penting karena ia
melayani banyak fungsi penting dalam tubuh termasuk
membantu penyerapan kalsium, pembentukan kolagen, dan
produksi antibodi, hormon, dan enzim. Kekurangan lisin
dapat menyebabkan kelelahan, ketidakmampuan untuk
berkonsentrasi, mudah marah, mata berdarah, pertumbuhan
terbelakang, rambut rontok, anemia, dan masalah
reproduksi (Cooper 1996). Zheng et al. (1995)
mengembangkan beras transgenik dengan kandungan lisin
yang ditingkatkan. Mereka mencapai hal ini dengan
mengekspresikan protein penyimpanan phase-phaseolin
dari biji biasa (Phaseolus vulgaris) dalam biji padi
transgenik. Urutan genomik dan cDNA dari gen phase-
faseolin dari P. vulgaris ditempatkan di bawah kendali
salah satu promotor glutelin Gt1 spesifik biji padi atau pro-
moter phase-phaseolin asli. Vektor yang mengandung gen
phase-phaseolin dipindahkan ke kromosom padi melalui
transformasi yang dimediasi oleh protoplast. Empat persen
dari total protein endosperma dalam beras transgenik
adalah fase-olin, yang menghasilkan peningkatan signifikan
dalam kandungan lisin dalam beras (Zheng et al. 1995).
vulgaris ditempatkan di bawah kendali salah satu promotor
glutelin Gt1 spesifik benih padi atau pro-motolin native-
phaseolin asli. Vektor yang mengandung gen phase-
phaseolin dipindahkan ke kromosom padi melalui
transformasi yang dimediasi oleh protoplast. Empat persen
dari total protein endosperma dalam beras transgenik
adalah fase-olin, yang menghasilkan peningkatan signifikan
dalam kandungan lisin dalam beras (Zheng et al. 1995).
vulgaris ditempatkan di bawah kendali salah satu promotor
glutelin Gt1 spesifik benih padi atau pro-motolin native-
phaseolin asli. Vektor yang mengandung gen phase-
phaseolin dipindahkan ke kromosom padi melalui
transformasi yang dimediasi oleh protoplast. Empat persen
dari total protein endosperma dalam beras transgenik
adalah fase-olin, yang menghasilkan peningkatan signifikan
dalam kandungan lisin dalam beras (Zheng et al. 1995).
Metionin dan Tirosin
Dalam hal produksi pangan global, kentang (Solanum
tuberosum) hanya berada di belakang beras, gandum, dan
jagung dalam daftar spesies tanaman yang paling penting
bagi nutrisi manusia di seluruh dunia (Chakraborty et al.
2000). Ada empat tujuan utama untuk produksi kentang:
untuk pasar makanan segar, untuk pakan ternak, untuk
industri pengolahan makanan, dan untuk keperluan industri
non-makanan seperti pembuatan pati dan alkohol
(Chakraborty et al. 2000). Kentang adalah sumber
potasium, zat besi, dan vitamin C dan B yang baik, tetapi
bukan sumber protein yang kaya. Protein kentang terbatas
dalam nilai gizi karena mereka tidak memiliki asam amino
lisin, metionin, dan tirosin (Jaynes et al. 1986). Kurangnya
metionin dalam makanan seseorang dapat mengakibatkan
penyerapan asam amino lain yang tidak seimbang, serta
keterbelakangan dalam pertumbuhan dan perkembangan.
Metionin juga merupakan pemasok utama belerang, yang
mencegah gangguan rambut, kulit, dan kuku,
membantu menurunkan kadar kolesterol dengan
meningkatkan produksi lecithin fosfolipid dalam hati,
dan merupakan agen pengkhelat alami untuk logam
berat (Cooper 1996) .
Para ilmuwan dari Pusat Penelitian Genom
Tumbuhan Nasional di India mengisolasi dan
mengkloning gen yang mengkode protein spesifik biji
dari Amaranthus hypocondriacus yang disebut
amaranth seed albumin (AmA1) (Chakraborty et al.
2000). Keuntungan menggunakan protein AmA1
untuk meningkatkan nilai gizi tanaman adalah bahwa
(1) seimbang dengan komposisi semua asam amino
esensial, (2) itu adalah protein non-alergenik, dan (3)
dikodekan oleh satu gen, AmA1. Gen ini dikloning
menjadi vektor biner, di bawah kendali promotor 35S
CaMV konstitutif (plasmid pSB8) dan promotor
promotor pati granul-terikat pati (EC 2.4.1.21) umbi
spesifik (EC 2.4.1.21) promotor (plasmid pSB8G).
Konstruksi gen AmA1 dari dua plasma biner ini
dimasukkan ke dalam kentang melalui transformasi
yang dimediasi Agrobacterium.
ESSENTIAL PHYTOCHEMICALS
Selain sebagai pemasok utama nutrisi penting
seperti vitamin, asam amino, dan mineral, tanaman
juga merupakan sumber penting phytochemical
yang diketahui bermanfaat bagi kesehatan.
Beberapa contoh phytochemical termasuk indole,
isothiocyanate, dan sulforaphane, ditemukan dalam
sayuran seperti broc- coli; allylic sulfides,
ditemukan dalam bawang dan bawang putih; dan
isoflavonoid, ditemukan terutama pada kedelai.
Sejak asupan phytochemical ini tidak selalu
mencukupi, para ilmuwan berusaha untuk
meningkatkan kualitas nutrisi tanaman melalui
rekayasa genetika.
ini, isoflavonoid menunjukkan potensi besar untuk
melawan berbagai jenis penyakit. Mereka membantu
mencegah penumpukan plak arteri, yang mengurangi risiko
penyakit jantung koroner dan stroke (FDA 1999);
membantu mengurangi kanker payudara (Peterson dan
Barnes 1991); membantu mencegah kanker prostat dengan
menunda pertumbuhan sel (Messina dan Barnes 1991);
melawan osteoporosis dengan merangsang pembentukan
tulang (Civitelli 1997); dan bahkan meringankan beberapa
gejala menopause (Nestel et al. 1999). Sumber utama
isoflavonoid dalam makanan manusia berasal dari
konsumsi kedelai dan produk-produknya. Meskipun hadir
dalam konsentrasi tinggi dalam kedelai yang tidak diolah,
kadar isoflavonoid dapat menurun hingga 50% selama
pemrosesan benih untuk makanan kedelai tradisional
(Wang dan Murphy 1996). Peningkatan konsentrasi
isoflavonoid dalam kedelai dapat memecahkan masalah
ini. Cara lain untuk mengambil keuntungan dari manfaat
kesehatan isoflavonoid adalah melalui pengembangan
tanaman lain yang dapat menghasilkan senyawa kuat ini,
sehingga memperluas konsumsinya.
Isoflavonoid disintesis oleh cabang dalam jalur degradasi
asam amino phenylala-sembilan, dan langkah komitmen
pertamanya dikatalisis oleh enzim isoflavone synthase (EC
1.14.13.53) (Gbr. 3.9). Jung et al. (2000) mengidentifikasi
dua gen kedelai yang mengkode isoflavone synthase,
IFS1 / IFS2, dan menyatakan gen-gen ini dalam A.
thaliana, memicu sintesis gen isein isoflavonoid. Meskipun
A. thaliana tidak mensintesis isoflavonoid, ia memiliki
substrat naringenin, yang merupakan perantara dari jalur
biosintesis antosianin. Naringenin kemudian dapat
dikonversi menjadi isoflavonoid genistein oleh isoflavone
synthase asing. Gen isoflavon sintase kedelai IFS1
dikloning dalam plasmid pOY204 di bawah kendali
promotor 35S CaMV dan dipindahkan ke A. thaliana
melalui transformasi Agrobacterium-mediated. Gen ISF1
yang diperkenalkan menunjukkan dan menghasilkan
isoflavon sintase aktif dalam tanaman yang ditransformasi.

Isoflavonoid
Flavonoid, yang meliputi antosianin, tanin
terkondensasi, dan isoflavonoid, adalah kelas
phytochemical yang melakukan berbagai fungsi
penting untuk tanaman, termasuk pigmentasi,
pencegahan makan, perlindungan kayu, pertahanan
jamur dan serangga, dan pengenalan gen untuk
nodulasi akar (Buchanan et al. 2001). Isoflavonoid
(atau isoflavon) adalah jenis fitoestrogen, atau
hormon tanaman, yang memiliki struktur kimia yang
mirip dengan estrogen manusia. Manfaat kesehatan
yang diyakini disediakan oleh isoflavonoid berasal
dari aktivitas estrogenik yang lemah dari molekul-
molekul ini dalam tubuh manusia (Jung et al. 2000).
Isoflavonoid ditemukan dalam kedelai, buncis, dan
banyak kacang-kacangan lainnya; Namun, kedelai
unik karena mereka memiliki konsentrasi tertinggi
dari dua isoflavonoid yang paling menguntungkan,
genistein dan daidzein (Eldridge dan Kwolek
1983,Al. 1995). Dalam studi yang dilakukan sejauh
Gambar 3.8. Perbandingan komposisi asam amino dari kentang transgenik dan tipe liar. (Dari Chakraborty et al. 2000.)

Gambar 3.9. Jalur biosintetik untuk isoflavonoid kedelai: daidzein dan genistein. (Diadaptasi dari Jung et al. 2000.)
HEWAN BIOENGINEERED
Dengan perkembangan teknologi transgenik,
perbaikan dalam spesies ternak yang penting
secara komersial menjadi mungkin dengan
mentransfer gen dari spesies terkait atau tidak
terkait. Peningkatan genetic ment melalui
bioteknologi dapat dicapai dalam satu generasi,
bukan beberapa generasi yang diperlukan untuk
metode pemuliaan hewan tradisional.
Meskipun beberapa metode transfer gen telah
dikembangkan, empat metode yang digunakan
saat ini dalam produksi sebagian besar hewan
transgenik: transfer nuklir, infeksi mikro, infeksi
vektor virus, dan transfer sel induk embrionik.
Metode transfer nuklir mencakup memasukkan
seluruh materi genetik dari inti sel donor ke dalam
telur matang yang tidak dibuahi yang nukleusnya
telah dihilangkan. Setelah itu, embrio ditransfer
menjadi ibu asuh, di mana ia akan berkembang
menjadi hewan yang secara genetik identik dengan
sel donor (Wolf et al. 2001). Dalam injeksi mikro,
sebuah segmen DNA asing yang membawa satu atau
lebih gen disuntikkan ke dalam pronukleus jantan
dari sel telur yang telah dibuahi. Telur harus dalam
tahap sel tunggal untuk memastikan bahwa semua sel
 somatik pada hewan mengandung transgen.
Embrio kemudian dipindahkan ke rahim ibu
pengganti (Wall 2002). Dalam teknik infeksi
retroviral, gen ditransfer dengan bantuan vektor
virus. Retoviovirus sering digunakan dalam
proses transfer DNA karena kemampuan alami
mereka untuk menginfeksi sel (Cabot et al.
2001). Dalam teknik transfer sel induk, sel-sel
induk embrionik dikumpulkan dari
Retoviovirus sering digunakan dalam proses
transfer DNA karena kemampuan alami
mereka untuk menginfeksi sel (Cabot et al.
2001). Dalam teknik transfer sel induk, sel-sel
induk embrionik dikumpulkan dari
Retoviovirus sering digunakan dalam proses
transfer DNA karena kemampuan alami
mereka untuk menginfeksi sel (Cabot et al.
2001). Dalam teknik transfer sel induk, sel-sel
induk embrionik dikumpulkan dari blastokista
dan tumbuh dalam budaya. Sel-sel yang
dikultur kemudian disuntikkan ke dalam massa
sel bagian dalam dari embrio pada tahap
blastokista, yang kemudian ditanamkan ke
induk asuh, menghasilkan produksi hewan
chimeric (Hochedlinger dan Jaenisch 2003).
Penting untuk diingat bahwa metode ini tidak
menciptakan spesies baru; mereka hanya
menawarkan alat untuk memproduksi galur
hewan baru yang membawa informasi genetis
baru. Beberapa contoh hewan rekayasa
genetika termasuk sapi transgenik yang
menghasilkan susu dengan komposisi yang
lebih baik dan babi transgenik yang
menghasilkan daging dengan kandungan lemak
lebih rendah. Tujuan utama program rekayasa
genetika ternak adalah untuk meningkatkan
efisiensi produksi sambil memberikan produk
makanan hewani yang lebih sehat.
M.DITUBUHKAN M.MENCARI IN
TRANSGENIK DUDARA TERNAK
Susu sapi telah digambarkan sebagai makanan yang
hampir sempurna karena kaya akan vitamin,
kalsium, dan asam amino esensial (Karatzas dan
Turner 1997). Beberapa vitamin yang ditemukan
dalam susu termasuk vitamin A, B, C, dan D. Susu
memiliki kandungan kalsium yang lebih besar
daripada sumber makanan lainnya, dan konsumsi
dua porsi susu setiap hari atau produk susu lainnya
memasok semua kebutuhan kalsium dari suatu
orang dewasa (Rinzler et al. 1999). Kasein
mewakili sekitar 80% dari total protein susu dan
memiliki nilai gizi tinggi dan sifat fungsional
(Brophy et al. 2003). Kasein memiliki afinitas yang
kuat untuk kation seperti kalsium, magnesium, zat
besi, dan seng. Ada empat jenis kasein yang terjadi
secara alami dalam susu: aS1, aS2, þ, dan n
(Brophy et al. 2003). Mereka berkelompok dalam
misel besar, yang menentukan sifat fisikokimia
susu. Bahkan variasi kecil dalam rasio kasein yang
berbeda mempengaruhi struktur misel, yang pada
gilirannya dapat mengubah sifat fungsional susu. Jumlah
kasein dalam susu merupakan faktor penting untuk
pembuatan keju, karena kandungan kasein yang lebih
besar menghasilkan hasil keju yang lebih besar dan
kualitas gizi yang lebih baik (McMahon dan Brown
1984). Diperkirakan bahwa meningkatkan kandungan
kasein dalam susu sebesar 20% akan menghasilkan
peningkatan produksi keju, menghasilkan tambahan $
190 juta / tahun untuk industri susu (Wall et al. 1997).
Sapi perah hanya memiliki satu salinan gen yang
mengkode protein (s1 / s2), þ, dan n-kasein, dan dari
empat kasein, n dan þ adalah yang paling penting
(Bawden et al. 1994). Peningkatan kandungan n-kasein
susu berkurang Bahkan variasi kecil dalam rasio kasein
yang berbeda mempengaruhi struktur misel, yang pada
gilirannya dapat mengubah sifat fungsional susu. Jumlah
kasein dalam susu merupakan faktor penting untuk
pembuatan keju, karena kandungan kasein yang lebih
besar menghasilkan hasil keju yang lebih besar dan
kualitas gizi yang lebih baik (McMahon dan Brown
1984). Diperkirakan bahwa meningkatkan kandungan
kasein dalam susu sebesar 20% akan menghasilkan
peningkatan produksi keju, menghasilkan tambahan $
190 juta / tahun untuk industri susu (Wall et al. 1997).
Sapi perah hanya memiliki satu salinan gen yang
mengkode protein (s1 / s2), þ, dan n-kasein, dan dari
empat kasein, n dan þ adalah yang paling penting
(Bawden et al. 1994). Peningkatan kandungan n-kasein
susu berkurang Bahkan variasi kecil dalam rasio kasein
yang berbeda mempengaruhi struktur misel, yang pada
gilirannya dapat mengubah sifat fungsional susu. Jumlah
kasein dalam susu merupakan faktor penting untuk
pembuatan keju, karena kandungan kasein yang lebih
besar menghasilkan hasil keju yang lebih besar dan
kualitas gizi yang lebih baik (McMahon dan Brown
1984). Diperkirakan bahwa meningkatkan kandungan
kasein dalam susu sebesar 20% akan menghasilkan
peningkatan produksi keju, menghasilkan tambahan $
190 juta / tahun untuk industri susu (Wall et al. 1997).
Sapi perah hanya memiliki satu salinan gen yang
mengkode protein (s1 / s2), þ, dan n-kasein, dan dari
empat kasein, n dan þ adalah yang paling penting
(Bawden et al. 1994). Peningkatan kandungan n-kasein
susu berkurang yang pada gilirannya dapat mengubah
sifat fungsional susu. Jumlah kasein dalam susu
merupakan faktor penting untuk pembuatan keju, karena
kandungan kasein yang lebih besar menghasilkan hasil
keju yang lebih besar dan kualitas gizi yang lebih baik
(McMahon dan Brown 1984). Diperkirakan bahwa
meningkatkan kandungan kasein dalam susu sebesar 20%
akan menghasilkan peningkatan produksi keju,
menghasilkan tambahan $ 190 juta / tahun untuk industri
susu (Wall et al. 1997). Sapi perah hanya memiliki satu
salinan gen yang mengkode protein (s1 / s2), þ, dan n-
kasein, dan dari empat kasein, n dan þ adalah yang paling
penting (Bawden et al. 1994). Peningkatan kandungan n-
kasein susu berkurang yang pada gilirannya dapat
mengubah sifat fungsional susu. Jumlah kasein dalam
susu merupakan faktor penting untuk pembuatan keju,
karena kandungan kasein yang lebih besar
menghasilkan hasil keju yang lebih besar dan
meningkatkan kualitas gizi (McMahon dan Brown
1984). Diperkirakan bahwa meningkatkan
kandungan kasein dalam susu sebesar 20% akan
menghasilkan peningkatan produksi keju,
menghasilkan tambahan $ 190 juta / tahun untuk
industri susu (Wall et al. 1997). Sapi perah hanya
memiliki satu salinan gen yang mengkode protein
(s1 / s2), þ, dan n-kasein, dan dari empat kasein, n
dan þ adalah yang paling penting (Bawden et al.
1994). Peningkatan kandungan n-kasein susu
berkurang karena kandungan kasein yang lebih
besar menghasilkan hasil keju yang lebih besar dan
meningkatkan kualitas gizi (McMahon dan Brown
1984). Diperkirakan bahwa meningkatkan
kandungan kasein dalam susu sebesar 20% akan
menghasilkan peningkatan produksi keju,
menghasilkan tambahan $ 190 juta / tahun untuk
industri susu (Wall et al. 1997). Sapi perah hanya
memiliki satu salinan gen yang mengkode protein
(s1 / s2), þ, dan n-kasein, dan dari empat kasein, n
dan þ adalah yang paling penting (Bawden et al.
1994). Peningkatan kandungan n-kasein susu
berkurang karena kandungan kasein yang lebih
besar menghasilkan hasil keju yang lebih besar dan
meningkatkan kualitas gizi (McMahon dan Brown
1984). Diperkirakan bahwa meningkatkan
kandungan kasein dalam susu sebesar 20% akan
menghasilkan peningkatan produksi keju,
menghasilkan tambahan $ 190 juta / tahun untuk
industri susu (Wall et al. 1997). Sapi perah hanya
memiliki satu salinan gen yang mengkode protein
(s1 / s2), þ, dan n-kasein, dan dari empat kasein, n
dan þ adalah yang paling penting (Bawden et al.
1994). Peningkatan kandungan n-kasein susu
berkurang Sapi perah hanya memiliki satu salinan
gen yang mengkode protein (s1 / s2), þ, dan n-
kasein, dan dari empat kasein, n dan þ adalah yang
paling penting (Bawden et al. 1994). Peningkatan
kandungan n-kasein susu berkurang Sapi perah
hanya memiliki satu salinan gen yang mengkode
protein (s1 / s2), þ, dan n-kasein, dan dari empat
kasein, n dan þ adalah yang paling penting
(Bawden et al. 1994). Peningkatan kandungan n-
kasein susu berkurang ukuran misel, menghasilkan
peningkatan stabilitas panas. Kasein phosph sangat
terfosforilasi dan berikatan dengan kalsium fosfat,
sehingga mempengaruhi kadar kalsium susu
(Dalgleish et al. 1989, Jimenez Flores dan
Richardson 1988).
Penelitian tentang modifikasi komposisi
susu untuk meningkatkan sifat gizi atau fungsional
telah banyak dilakukan pada tikus transgenik. Tikus
adalah model yang baik untuk studi ekspresi protein
pada kelenjar susu, tetapi mereka tidak selalu
mencerminkan tingkat ekspresi protein yang sama
dengan ruminansia (Colman 1996). Brophy et al.
(2003), menggunakan teknologi transfer nuklir,
menghasilkan sapi transgenik yang membawa
salinan tambahan gen CSN2 dan CSN3, yang masing-
masing menyandikan bovine þ- dan n-casein. Klon
genomik yang mengandung CSN2 dan CSN3 diisolasi
dari perpustakaan genom sapi. Studi sebelumnya yang
dilakukan dengan tikus mengungkapkan bahwa CSN3
memiliki tingkat ekspresi yang sangat rendah (Persuy et
al. 1995). Untuk meningkatkan ekspresi CSN3, para
peneliti membuat konstruksi fusi CSN2 / 3, di mana gen
CSN3 menyatu dengan promotor CSN2. Klon genomik
CSN2 dan konstruk fusi CSN2 / 3 secara bersama
ditransfusikan menjadi sel-sel bovine fetal fibroblast
(BFF), di mana kedua gen menunjukkan ekspresi
terkoordinasi. Sel-sel transgenik menjadi sel donor dalam
proses transfer nuklir, menghasilkan sembilan sapi yang
sepenuhnya sehat dan fungsional. Ekspresi berlebihan
dari CSN2 dan CSN2 / 3 pada sapi transgenik
menghasilkan peningkatan 8-20% pada kasein dan
peningkatan 100% pada tingkat n-kasein (Brophy et al.
2003).
sayaNCREASED M.USCLE GROWTH IN CATTLE
Myostatin, juga dikenal sebagai faktor pertumbuhan
dan diferensiasi 8 (GDF-8), adalah anggota dari keluarga
faktor pertumbuhan þ (TGF-þ) yang bertransformasi,
yang bertanggung jawab untuk pengaturan negatif massa
otot rangka pada tikus, sapi, dan mungkin vertebrata lain.
Mio-statin diekspresikan dalam embrio mioblas dan
mengembangkan otot rangka dewasa; itu diproduksi
sebagai molekul prekursor asam amino-375 yang
diproses lebih lanjut oleh pembelahan enzimatik dari
segmen N-terminus prodomain. Segmen C-terminus 109-
asam amino yang tersisa adalah protein myostatin
(Gleizes et al. 1997). Protein yang diproses membentuk
dimer yang aktif secara biologis. McPherron dan Lee
(1997), melalui penyelarasan urutan asam amino
myostatin dari babon, sapi, ayam, manusia, murine,
ovine, babi, tikus, kalkun, dan zebra-ikan, ditentukan
bahwa gen myostatin sangat dilestarikan di antara
vertebrata, yang menunjukkan bahwa fungsinya dapat
dilestarikan juga. Para peneliti juga menunjukkan bahwa
peningkatan fenotipe massa otot (double-muscling) yang
diamati pada beberapa ras sapi, seperti Belgian Blue dan
Piedmontese, disebabkan oleh mutasi pada gen
myostatin. Pada tikus myostatin-null yang memiliki gen
myo-statin tersingkir oleh penargetan gen, otot individu
menimbang rata-rata dua sampai tiga kali lebih banyak
dibandingkan dengan tikus tipe liar, dan berat badan 30%
lebih tinggi. Perbedaan ini bukan karena peningkatan
jumlah lemak, tetapi karena peningkatan luas penampang
serat otot (hipertrofi) dan peningkatan jumlah serat otot
(hiperplasia) (McPherron dan Lee 1997).
Dipercayai bahwa myostatin prodomain dapat
berikatan secara tidak kovalen dengan myostatin yang
sudah matang, menghasilkan penghambatan aktivitas
biologis myostatin (Thies et al. 2001). Berdasarkan
model molekul umum protein TGF, Yang et al. (2001)
berhipotesis bahwa ekspresi berlebih dari segmen
prodomain akan mengganggu myostatin dewasa,
menghasilkan promosi perkembangan otot. DNA
 prodomain timah saya dikloning menjadi vektor
pMEX-NMCS2, yang berisi promotor myosin light
chain 1 (MLC1) tikus, urutan adenilasi poli SV40,
dan penambah MLC. Konstruksi ini kemudian
dimasukkan ke dalam genom tikus menggunakan
teknik injeksi mikro pronuklear. Dibandingkan
dengan tikus tipe liar, ekspresi berlebih dari
myomainin prodomain pada tikus transgenik
menghasilkan peningkatan 17-30% berat badan;
peningkatan 22-44% dalam total berat karkas pada
usia 9 minggu (Gbr. 3.10); dan penurunan yang
signifikan dalam berat pad lemak epididimis, yang
merupakan indikator massa lemak tubuh (Yang et
al. 2001). Tidak ada fenotipe yang tidak diinginkan
atau masalah kesehatan atau reproduksi yang
diamati pada hewan transgenik. Hasil ini
menunjukkan bahwa pendekatan yang sama ini
dapat digunakan untuk mengembangkan hewan
ternak dengan peningkatan kinerja pertumbuhan,
peningkatan massa otot, dan penurunan kadar
lemak, yang akan menyamakan dengan produk
daging yang lebih sehat bagi konsumen (Yang et al.
2001).
RPENDIDIKAN FDI CONTENT IN
TRANSGENIK BABI
Dalam makanan manusia, lemak eksogen yang
dicerna berfungsi sebagai bahan baku untuk sintesis
lemak, kolesterol, dan banyak fosfolipid.
Gambar 3.10. Perbandingan antara tikus tipe liar dan
genetika yang mengekspres berlebihan myostatin
prodomain. (Atas perkenan Dr. J. Yang, Universitas
Hawaii.)
Karena kandungan energi lemak adalah dua kali
lebih besar dari energi yang diperoleh dari
karbohidrat dan protein, sebagian besar energi yang
disimpan dalam tubuh adalah dalam bentuk lemak.
Lemak adalah sekelompok senyawa kimia yang
mengandung asam lemak. Asam lemak yang paling
umum ditemukan dalam lemak hewani adalah asam
palmitat, asam stearat, dan asam oleat. Tubuh
manusia mampu mensintesis lemak-lemak ini,
tetapi ada satu lagi kelas asam lemak yang disebut asam
lemak esensial (asam linolenat, asam linoleat, dan asam
arakidonat), yang tidak dapat diproduksi oleh tubuh;
karena itu mereka harus diperoleh dari diet (Campbell
dan Reece 2002). Ada dua jenis utama asam lemak alami:
jenuh dan tidak jenuh. Asam lemak jenuh (SFA) terutama
lemak hewani. Mereka disebut jenuh karena semua rantai
karbon terisi penuh dengan hidrogen dan tidak ada ikatan
rangkap yang terbentuk antara atom karbon. Asam lemak
jenuh dipercaya sebagai lemak "jahat" karena mereka
meningkatkan baik lipoprotein densitas tinggi (HDL) dan
kolesterol lipoprotein (LDL) berdensitas rendah (Keys et
al. 1965, NRC 1988). Lemak tak jenuh ditemukan
terutama dalam produk yang berasal dari sumber nabati
dan dibagi menjadi dua kategori: asam lemak tak jenuh
tunggal (MUFA), yang memiliki satu ikatan rangkap; dan
asam lemak jenuh ganda (PUFA), yang memiliki dua
atau lebih ikatan rangkap dalam rantai karbon. Telah
diamati bahwa peningkatan konsumsi lemak "baik" ini
benar-benar mengurangi kadar LDL dan meningkatkan
kadar HDL (Grundy 1986, NRC 1988). ini Asam lemak
jenuh dipercaya sebagai lemak "jahat" karena mereka
meningkatkan baik lipoprotein densitas tinggi (HDL) dan
kolesterol lipoprotein (LDL) berdensitas rendah (Keys et
al. 1965, NRC 1988). Lemak tak jenuh ditemukan
terutama dalam produk yang berasal dari sumber nabati
dan dibagi menjadi dua kategori: asam lemak tak jenuh
tunggal (MUFA), yang memiliki satu ikatan rangkap; dan
asam lemak jenuh ganda (PUFA), yang memiliki dua
atau lebih ikatan rangkap dalam rantai karbon. Telah
diamati bahwa peningkatan konsumsi lemak "baik" ini
benar-benar mengurangi kadar LDL dan meningkatkan
kadar HDL (Grundy 1986, NRC 1988). ini Asam lemak
jenuh dipercaya sebagai lemak "jahat" karena mereka
meningkatkan baik lipoprotein densitas tinggi (HDL) dan
kolesterol lipoprotein (LDL) berdensitas rendah (Keys et
al. 1965, NRC 1988). Lemak tak jenuh ditemukan
terutama dalam produk yang berasal dari sumber nabati
dan dibagi menjadi dua kategori: asam lemak tak jenuh
tunggal (MUFA), yang memiliki satu ikatan rangkap; dan
asam lemak jenuh ganda (PUFA), yang memiliki dua
atau lebih ikatan rangkap dalam rantai karbon. Telah
diamati bahwa peningkatan konsumsi lemak "baik" ini
benar-benar mengurangi kadar LDL dan meningkatkan
kadar HDL (Grundy 1986, NRC 1988). ini asam lemak
tak jenuh tunggal (MUFA), yang memiliki satu ikatan
rangkap; dan asam lemak jenuh ganda (PUFA), yang
memiliki dua atau lebih ikatan rangkap dalam rantai
karbon. Telah diamati bahwa peningkatan konsumsi
lemak "baik" ini benar-benar mengurangi kadar LDL dan
meningkatkan kadar HDL (Grundy 1986, NRC 1988). ini
asam lemak tak jenuh tunggal (MUFA), yang memiliki
satu ikatan rangkap; dan asam lemak jenuh ganda
(PUFA), yang memiliki dua atau lebih ikatan rangkap
dalam rantai karbon. Telah diamati bahwa peningkatan
konsumsi lemak "baik" ini benar-benar mengurangi kadar
LDL dan meningkatkan kadar HDL (Grundy 1986, NRC
1988). ini sekarang diketahui bahwa diet tinggi lemak
(khususnya SFA) tidak hanya meningkatkan risiko
penyakit jantung tetapi juga risiko kanker payudara, usus
besar, dan prostat. Banyak lembaga kesehatan, termasuk
American Depticic Association, American Diabetes
Association, dan American Heart Association,
merekomendasikan agar asupan lemak tidak boleh
lebih dari 30% dari total kalori harian.
Dalam penelitian yang dilakukan oleh
Departemen Pertanian Amerika Serikat (USDA),
para ilmuwan memperkenalkan gen hormon
pertumbuhan sapi (rBGH) rekombinan menjadi
babi, dengan tujuan memahami hubungan antara
ekspresi rBGH dan jumlah asam lemak pada hewan
(Solomon et al. 1994). Hormon pertumbuhan sapi
(BGH), juga dikenal sebagai bovine somatotropin,
yang diproduksi di kelenjar hipofisis, merangsang
pertumbuhan pada sapi yang belum matang dan
meningkatkan produksi susu pada sapi menyusui
(Leury et al. 2003). BGH adalah hormon protein,
dan karena itu, itu dipecah selama pencernaan di
saluran pencernaan, sehingga secara biologis tidak
aktif pada manusia (Etherton 1991). Pada tahun
1993, berdasarkan investigasi ilmiah yang ketat, AS
Hormon pertumbuhan sapi telah terbukti
mengurangi kandungan lemak babi transgenik yang
mengekspresikan gen rBGH (Pursel et al. 1989).
Babi transgenik yang digunakan dalam penelitian
ini dibuat dengan teknik injeksi mikro pronuklear.
Pengkodean gen rBGH dimasukkan ke dalam
genom babi di bawah kendali promotor
metallothionein-I (MT) tikus. Setelah garis
transgenik babi rBGH dibuat, generasi yang sukses
diproduksi dengan cara buatan wanita
nontransgenik dengan sperma yang dikumpulkan
dari pria transgenik rBGH. Untuk menentukan efek
rBGH dalam komposisi karkas babi, babi
transgenik dan nontransgenik (kontrol) dibesarkan
dalam kondisi yang sama dan diberi makan dengan
jenis makanan yang sama. Hewan-hewan itu
diproses dengan lima bobot hidup yang berbeda:
14, 28, 48, 68, dan 92 kg. Seluruh sisi kiri setiap
bangkai ditumbuk, dan sampel acak jaringan
dikumpulkan dan dianalisis untuk kadar asam
lemak dan kolesterol. Para peneliti mengamati
bahwa dengan bertambahnya berat badan hidup,
karkas dari babi transgenik menunjukkan
penurunan konstan dalam jumlah total lemak
dibandingkan dengan babi kontrol (Tabel 3.1).
Meskipun hasilnya tidak menunjukkan perbedaan
dalam kadar kolesterol.
Selain babi transgenik dan babi kontrol,
ditunjukkan bahwa babi transgenik yang
mengekspresikan BGH mengalami penurunan
kadar asam lemak spesifik secara signifikan
dibandingkan dengan babi nontransgenik pada
kelompok kontrol (Gambar 3.11). Hasil ini
menunjukkan bahwa konsumen mungkin sangat
diuntungkan dari produk babi dengan kadar lemak
rendah jika regulasi tingkat sekresi BGH dapat
dikontrol secara tepat selama tahap pertumbuhan
cepat babi muda (Solomon et al. 1994).
TRANSGENIK POULTRY: EGG AS BIOREACTOR
Mamalia dan burung telah menjadi fokus penelitian
intensif untuk kemungkinan penggunaannya
sebagai bioreaktor. Penggunaan mamalia sebagai
bioreaktor menjadi mungkin dengan penciptaan
tikus transgenik dan isolasi promotor spesifik
jaringan (Gordon et al. 1980, Swift et al. 1984).
Clark et al. (1987) adalah yang pertama
mengusulkan penggunaan kelenjar susu transgenik
ternak untuk produksi protein biofarmasi dalam
susu. Meskipun ekspresi protein asing dalam susu
tinggi dan produksi susu besar, ada beberapa
masalah yang terkait dengan penggunaan kelenjar
susu sebagai bioreaktor, termasuk waktu yang
dibutuhkan untuk membangun garis stabil hewan
pendiri transgenik dan biaya tinggi untuk
memurnikan asing. protein dari susu (Ivarie 2003).
Para peneliti juga telah lama membayangkan
menggunakan telur ayam untuk ekspresi protein
eksogen. Ada banyak keuntungan yang terkait
dengan penggunaan telur sebagai aktor biore,
termasuk fakta bahwa satu gen ovalbumin
mengendalikan sebagian besar protein dalam putih
telur (Gilbert 1984). Juga, putih telur memiliki
kandungan protein yang relatif tinggi, secara alami
steril, dan memiliki umur simpan yang lama
(Tranter dan Board 1982, Harvey et al.
Meja 3.1. Perbandingan Total Lemak
Karkas (g / 100g) antara rBGH Transgenik
dan Babi Kontrol, Diukur pada Bobot Live
Berbeda
Total Lemak, g / 100g
Bobot Kelompok, Transgeni Kontrol
kg k
14 6.19 10,04
28 7.62 12.32
48 8.16 16.58
68 5.97 26.78
92 4.49 29.07
Sumber: Diadaptasi dari Solomon et al. 1994
Gambar 3.11. Perbedaan asam lemak dalam komposisi karkas babi transgenik dan babi tipe rBGH. (Dari Solomon
et al. 1994.)
2002). Ada infrastruktur yang sudah mapan untuk
produksi, panen, dan pengolahan telur ayam (Ivarie
2003).
Baru saja, sekelompok peneliti dari perusahaan
bioteknologi AviGenics, Athens, Georgia, berhasil
memperkenalkan, mengungkapkan, dan
mengeluarkan gen bakteri dalam putih telur ayam
transgenik (Harvey et al. 2002). Transgen yang
dipilih adalah gen reporter E. coli l-lacta- mase (EC
3.5.2.6) karena mudah dikeluarkan dan diuji dari
sel eukariotik. Vektor retroviral yang kekurangan
replikasi, bernama NLB, dari avian leucosis virus
(ALV) digunakan untuk mengekspresikan transgen.
Urutan pengkodean þ-laktamase dimasukkan ke
dalam vektor virus pNLB-CMV-BL dan
ditempatkan di bawah kendali promotor
sitemegalovirus (CMV) di mana-mana. Protein act-
lakta- mase ditemukan aktif secara biologis dan
disekresikan dalam darah dan putih telur, dan
tingkat ekspresinya tetap konstan pada empat
generasi ayam transgenik. Hasil ini menunjukkan
bahwa secara teknis dimungkinkan untuk
mengekspresikan dan menyembunyikan protein
asing dalam telur ayam, menjadikannya kandidat
yang menarik untuk bioreaktor. Pekerjaan utama
yang perlu dilakukan dengan model ayam adalah
mengembangkan metode berbasis nonviral yang
lebih efisien untuk pembuatan ayam transgenik dan
untuk mengidentifikasi, mengisolasi, dan
mengkarakterisasi peningkat gen dan promotor
yang memiliki aktivitas tinggi dan mendorong
ekspresi spesifik jaringan protein dalam saluran
telur dewasa (Harvey et al. 2002).
IKAN BIOENGINEERED
Dari semua transgenik, hewan peliharaan yang
telah diproduksi sejauh ini, ikan dianggap paling
aman untuk dikonsumsi manusia dan diharapkan
menjadi hewan transgenik pertama yang disetujui
sebagai bahan makanan (Niiler 2000). Perusahaan
AquaBounty memiliki aplikasi yang sedang ditinjau
dengan FDA untuk komersialisasi salmon Atlantik
yang membawa pertumbuhan gen hormon (GH)
dari salmon Chinook (Zbiowska 2003). Kendala
utama yang harus diatasi untuk pencapaian tujuan
ini adalah untuk lebih memahami potensi risiko
yang terkait dengan pelepasan ikan transgenik di
alam liar, dan pada titik ini, tidak cukup penelitian
yang telah dilakukan untuk menjawab masalah ini
(Muir dan Howard 1999). Salah satu pilihan untuk
menghindari proliferasi ikan transgenik di alam liar
adalah mensterilkan semua ikan transgenik, tetapi
metode yang dapat diandalkan untuk sterilisasi
100% belum tercapai (Razak et al. 1999). Beberapa
strategi transgenik yang sedang dikembangkan
untuk meningkatkan tingkat pertumbuhan dan
meningkatkan sifat antibeku dijelaskan di bawah
 ini.
sayaMPROVING FISH GROWTH RMakan
Gen hormon pertumbuhan ikan telah dikloning dan
dikarakterisasi dari sejumlah ikan, termasuk banyak
spesies salmon (Du et al. 1992, Devlin et al. 1994). Para
peneliti dari University of Southampton di Inggris
(Rahman et al. 1998) mengembangkan ikan nila
transgenik (Oreocromis niloticus) yang ditransformasi
dengan gen hormon pertumbuhan beberapa salmon.
Rahman et al. menggunakan berbagai jenis konstruk
dalam percobaan mereka, tetapi yang memberikan hasil
terbaik adalah konstruk dengan gen GH salmon salmon
Chinook di bawah kendali promotor antibeku cemberut
laut. Metode yang digunakan untuk penyisipan transgen
adalah mikroinjeksi sitoplasma dari telur ikan yang
dibuahi. Para peneliti melaporkan integrasi genomik
konstruk yang berhasil pada nila pendiri (G0) dan
transfer transgen ke generasi G1 dan G2. Nila
transgenik yang mengekspresikan transgen
menunjukkan tingkat pertumbuhan tiga kali lebih besar
dari nila tipe liar dan memiliki rasio konversi pangan
33% lebih tinggi, yang akan mengurangi biaya produksi
petani. Nila transgenik ini juga menunjukkan infertilitas
pada usia dewasa, yang merupakan sifat yang
diinginkan untuk ikan transgenik komersial (Rahman et
al. 1998).
sayaPENTINGNYA SEBUAHNTIFREEZE PROPERTY
DI FISH
Banyak spesies ikan, seperti cemberut laut (Macro-
zoarces americanus) dan flounder musim dingin
(Pleuroectes americanus), yang mendiami air di bawah
titik beku di wilayah utara menghasilkan dan
mengeluarkan protein spesifik dalam plasma mereka
untuk melindungi tubuh mereka dari pembekuan
(Davies dan Hew 1990). Saat ini, dua jenis protein yang
telah dikarakterisasi adalah protein antibeku (AFP) dan
antibeku glikoprotein (AFGs) (Davies dan Sykes 1997).
AFP dan AFG menurunkan suhu beku serum ikan dan
karenanya melindungi ikan dari pembekuan dengan
menempelkan diri ke permukaan es, menghambat
pembentukan kristal es (DeVries 1984). Ada empat
jenis AFP (I, II, III, IV) dan setidaknya satu jenis AFG
yang diidentifikasi saat ini (Davies dan Hew 1990,
Deng et al. 1997). Sebagian besar spesies ikan yang
penting dalam budidaya, seperti salmon Atlantik dan
nila, tidak secara alami menghasilkan semua jenis
protein antibeku dan karena itu tidak dapat bertahan
hidup dan dibesarkan di daerah di dunia di mana air
mencapai suhu di bawah nol, yang menciptakan
masalah besar bagi pertanian keramba laut di sepanjang
pantai Atlantik utara (Hew et al. 1995). Produksi ikan
transgenik yang penting secara komersial, terutama
salmon, yang tahan beku akan sangat memperluas area
untuk peternakan ikan, meningkatkan produktivitas, dan
mengurangi harga bagi konsumen. AFP flounder adalah
polipeptida kecil yang merupakan bagian dari AFP tipe
I, yang memiliki dua isoform yang berbeda, "tipe kulit"
dan "tipe hati." AFP tipe kulit adalah protein matang
intraseluler yang diekspresikan dalam beberapa
jaringan perifer; AFP tipe hati adalah protein imatur
yang perlu diproses lebih lanjut sebelum dikeluarkan ke
dalam sirkulasi dan ditemukan terutama di jaringan hati
(Hew et al. 1986, Gong et al. 1996). Hew et al. (1999)
menggunakan gen AFP tipe hati dari flounder musim
dingin untuk menghasilkan garis stabil transgenik
salmon Atlantik (Salmo salar) yang menunjukkan
kapasitas toleransi beku. Dengan menyuntikkan gen ke
dalam telur yang dibuahi, satu salinan gen AFP
dimasukkan dan diintegrasikan ke dalam kromosom
salmon, menghasilkan ikan pendiri transgenik dengan
ekspresi AFP yang stabil dan protein aktif secara
biologis. Tingkat ekspresi dan aktivitas protein yang
sama diamati pada hingga tiga generasi berikutnya dari
salmon transgenik. Ekspresi AFP adalah spesifik hati
dan menunjukkan variasi musiman yang serupa dengan
yang terjadi pada flounder musim dingin, tetapi kadar
AFP dalam darah ikan ini rendah (250 ug / mL)
dibandingkan dengan konsentrasi AFP alami dalam
flounder musim dingin (10-20). mg / mL) dan
karenanya tidak cukup untuk memberikan resistensi
beku terhadap salmon (Hew et al. 1999). Fokus
penelitian saat ini adalah untuk merancang konstruksi
gen yang akan meningkatkan jumlah salinan transgen
dan karenanya meningkatkan level ekspresi AFP dalam
aplikasinya. tetapi kadar AFP dalam darah ikan ini
rendah (250 μg / mL) dibandingkan dengan konsentrasi
AFP alami pada musim dingin menggelepar (10-20
mg / mL) dan karenanya tidak cukup untuk
memberikan resistensi beku terhadap salmon ( Hew et
al. 1999). Fokus penelitian saat ini adalah untuk
merancang konstruksi gen yang akan meningkatkan
jumlah salinan transgen dan karenanya meningkatkan
level ekspresi AFP dalam aplikasinya. tetapi kadar AFP
dalam darah ikan ini rendah (250 μg / mL)
dibandingkan dengan konsentrasi AFP alami pada
musim dingin menggelepar (10-20 mg / mL) dan
karenanya tidak cukup untuk memberikan resistensi
beku terhadap salmon ( Hew et al. 1999). Fokus
penelitian saat ini adalah untuk merancang konstruksi
gen yang akan meningkatkan jumlah salinan transgen
dan karenanya meningkatkan level ekspresi AFP dalam
aplikasinya. milik jaringan, memberikan sifat antibeku
yang lebih baik pada ikan budidaya.
MIKROORGANISME
BIOENGINEERED
Selama lebih dari 5000 tahun, umat manusia,
secara sadar dan tidak sadar, telah menggunakan
fermentasi spontan dari berbagai jenis makanan, yang
meliputi roti, minuman beralkohol, produk susu, produk
sayur-sayuran, dan produk daging. Tetapi baru-baru ini,
hanya pada abad terakhir, para ilmuwan menyadari
bahwa proses fermentasi dipengaruhi oleh aksi
mikroorganisme dan bahwa setiap mikroorganisme yang
bertanggung jawab untuk fermentasi makanan tertentu
dapat diisolasi dan diidentifikasi. Sekarang, dengan
teknik bioteknologi canggih, dimungkinkan untuk
mengkarakterisasi dengan strain makanan penting
sayaPENGHAPUSAN PATGENIK BACTERIA
berpresisi tinggi, mengisolasi dan meningkatkan gen yang
terlibat dalam proses fermentasi, dan mentransfer sifat Untuk meningkatkan keamanan, kebersihan, dan
yang diinginkan antara strain atau bahkan antara efisiensi dalam produksi makanan fermentasi,
organisme yang berbeda. penggunaan starter dan kultur bakteri pelindung adalah
praktik umum dalam industri makanan saat ini (Gardner
et al. 2001). Kultur starter adalah cairan yang terdiri
EPEMBATASAN CARCINOGENICCOMPOUNDS
dari campuran mikroorganisme terpilih, yang digunakan
Brewerragi (Saccharomyces cerevisiae) adalah salah untuk memulai fermentasi komersial. Perbedaan antara
satu mikroorganisme yang paling penting dan banyak kultur starter dan protektif adalah kultur starter
digunakan dalam industri makanan. Mikroorganisme ini memberi aroma atau tekstur yang diinginkan pada
dibudidayakan tidak hanya untuk produk akhir yang makanan, sementara kultur protektif menghambat
disintesis selama fermentasi, tetapi juga untuk sel dan pertumbuhan mikroorganisme patogen yang tidak
komponen sel (Aldhous 1990). Saat ini, ragi terutama diinginkan, tetapi tidak mengubah properti makanan
digunakan dalam fermentasi roti dan minuman (Geisen dan Holzapfel 1996). Untuk tujuan kepraktisan
beralkohol. Teknologi DNA rekombinan telah selama pemrosesan makanan, mikroorganisme yang
memungkinkan untuk memperkenalkan sifat-sifat baru ke sama harus digunakan untuk kultur starter dan protektif,
dalam ragi, serta menghilangkan produk samping yang tetapi sayangnya hal ini tidak selalu memungkinkan.
tidak diinginkan. Salah satu produk sampingan yang tidak
Penelitian rekayasa genetika yang bertujuan untuk
diinginkan yang terbentuk selama fermentasi ragi
mengoptimalkan kultur starter difokuskan pada tiga
makanan dan minuman adalah etil-karbamat, atau uretan,
tujuan utama: (1) untuk meningkatkan stabilitas proses,
yang merupakan zat karsinogenik potensial (Ough 1976).
(2) untuk meningkatkan efisiensi, dan (3) untuk
Untuk alasan ini, industri minuman beralkohol telah
meningkatkan keamanan produk (Geisen dan Holzapfel
mendedikasikan sejumlah besar sumber dayanya untuk
1996). Selama produksi beberapa makanan fermentasi,
mendanai penelitian yang berorientasi pada pengurangan
seperti keju yang sudah matang, tingkat pH meningkat
etilkarbamat dalam produk-produknya (Dequin 2001).
dalam kultur karena degradasi asam laktat oleh aktivitas
Etilkarbamat disintesis oleh reaksi spontan antara etanol
jamur. Media alkali ini menawarkan kondisi yang ideal
dan urea, yang dihasilkan dari degradasi arginin,
untuk proliferasi mikroorganisme patogen bawaan
ditemukan dalam jumlah besar dalam anggur. Ragi, yang
makanan seperti Listeria monocyto gen (Lewus et al.
digunakan dalam fermentasi anggur, memiliki enzim
1991). Keamanan produk makanan dapat sangat
arginase yang mengkatalisasi degradasi arginin. Jika
ditingkatkan dengan menggunakan starter
enzim ini dapat diblokir, arginin tidak akan lagi
terdegradasi menjadi urea, yang pada gilirannya tidak kultur yang juga dapat berfungsi sebagai kultur
akan bereaksi dengan etanol untuk membentuk pelindung dan menghambat pertumbuhan
etilkarbamat. Dalam ragi industri, gen memiliki enzim mikroorganisme berbahaya tersebut. Enzim lisozim
arginase yang mengkatalisasi degradasi arginin. Jika (EC 3.2.1.17) dapat menjadi agen yang efektif untuk
enzim ini dapat diblokir, arginin tidak akan lagi menghambat Listeria dalam makanan. Van de Guchte
terdegradasi menjadi urea, yang pada gilirannya tidak et al. (1992) mengintegrasikan gen yang bertanggung
akan bereaksi dengan etanol untuk membentuk jawab untuk pembentukan lisozim dalam strain bakteri
etilkarbamat. Dalam ragi industri, gen memiliki enzim Lactococcus lactis. Setelah transformasi genetik, strain
arginase yang mengkatalisasi degradasi arginin. Jika bakteri ini mampu mengekspresikan dan mengeluarkan
enzim ini dapat diblokir, arginin tidak akan lagi lisozim pada tingkat tinggi. Para peneliti mengkloning
terdegradasi menjadi urea, yang pada gilirannya tidak gen penyandi lisozim dari bakteri E. coli T4 dan
akan bereaksi dengan etanol untuk membentuk lambda dalam vektor kisaran inang luas dan
etilkarbamat. Dalam ragi industri, gen CAR1 diekspresikan dalam L. lactis. Lisozim yang aktif
mengkodekan enzim arginase (EC 3.5.3.1) (Dequin secara biologis diproduksi dan disekresikan oleh strain
2001). Untuk mengurangi pembentukan urea dalam sake, L. lactis transgenik, menunjukkan bahwa bakteri ini
Kitamoto et al. (1991) mengembangkan strain ragi dapat digunakan sebagai starter dan kultur pelindung
transgenik di mana gen CAR1 tidak aktif. Para peneliti (Van de Guchte et al. 1992).
membangun strain ragi mutan dengan memperkenalkan
gen CAR1 yang tidak efektif, diapit oleh urutan DNA
homolog ke daerah gen arginase. Melalui rekombinasi
homolog, gen yang tidak efektif diintegrasikan ke dalam
gen CAR1 aktif dalam kromosom ragi, mengganggu
fungsinya (Gambar 3.12). Akibatnya, urea dihilangkan
dan etil karbamat tidak lama terbentuk selama fermentasi
sake. Prosedur yang sama ini dapat digunakan untuk
menghilangkan etilkarbamat dari minuman beralkohol
lainnya, termasuk anggur (Kitamoto et al. 1991).

Gambar 3.12. Gangguan gen oleh rekombinasi homolog.
NATURAL SWEETENER PDIPRODUKSI
OLEH M.ICROORGANISME
Teknik untuk meningkatkan rasa dalam makanan
telah dikenal sejak lama, tetapi baru belakangan ini
mengakui bahwa mikroorganisme juga dapat
digunakan dalam produksi dan peningkatan rasa.
Saat ini, banyak teknik untuk membumbui makanan
dan minuman menggunakan bahan kimia sintetis
(Vanderhaegen et al. 2003). Dengan meningkatnya
kekhawatiran publik tentang bahaya menggunakan
bahan kimia sintetis, rasa yang diproduksi oleh
metode biologis, juga disebut bioflavours, menjadi
lebih populer di kalangan konsumen (Arm-strong
dan Yamazaki 1986, Cheetham 1993). Industri flor
dan aroma diperkirakan di seluruh dunia pada $ 10
miliar per tahun; dan meskipun ribuan wewangian
alami yang mudah menguap dan sintetis diketahui,
hanya beberapa ratus yang secara teratur digunakan
dan diproduksi pada skala industri (Somogyi 1996).
Ada beberapa metode untuk produksi bioflavours
termasuk (1) ekstraksi produk dari bahan tanaman
dan (2) penggunaan mikroorganisme yang
direkayasa secara spesifik untuk biosintesisnya.
Produksi bioteknologi dari bioflavours
menggunakan mikroorganisme memiliki
keuntungan tertentu seperti produksi skala besar
dengan biaya rendah, tidak tergantung pada bahan
tanaman, dan pelestarian sumber daya alam (Krings
dan Berger 1998).
54
Xylitol, juga disebut gula kayu, dibuat dari xylose,
yang ditemukan di dinding sel sebagian besar
tanaman darat (Nigam dan Singh 1995). Xylitol
murni adalah zat kristal putih yang terlihat dan terasa
seperti gula, menjadikannya penting bagi industri
makanan sebagai pemanis. Salah satu keuntungan
utama xylitol dibandingkan pemanis lain adalah
dapat digunakan oleh pasien diabetes, karena
pemanfaatannya tidak tergantung pada insulin
(Pepper and Olinger 1988). Xylitol dipercaya untuk
mengurangi tingkat kerusakan gigi dengan
menghambat Streptococcus mutans, bakteri utama
yang bertanggung jawab untuk gigi berlubang.
Karena xylitol secara perlahan diserap dan hanya
dimanfaatkan sebagian dalam tubuh manusia, ia
mengandung 40% lebih sedikit kalori daripada gula
biasa dan karbohidrat lainnya. Di Amerika Serikat,
xylitol telah digunakan sejak 1960-an, dan disetujui
sebagai tambahan untuk makanan dengan tujuan diet
khusus (Emodi 1978). Ragi (S. cerevisiae) dianggap
sebagai mikroorganisme yang ideal untuk produksi
komersial xylitol dari xylose karena penggunaannya
yang mapan dalam industri fermentasi. Peneliti
Afrika Selatan (Govinden et al. 2001) mengisolasi
gen xylose reductase (EC 1.1.1.21) (XYL1) dari
Candida shehatae dan memperkenalkannya ke dalam
S. cerevisiae. Gen XYL1 dari Candida diklon ke
vektor ekspresi ragi pJC1, di belakang promotor
PGK1, dan konstruknya diubah menjadi ragi oleh
elektroprasi. Produksi xylitol dari xylose oleh
transforman dievaluasi dengan adanya berbagai
macam substrat termasuk glukosa, galaktosa, dan
 55

maltosa. Hasil xylitol tertinggi (15 g / L dari 50 plasmid pCRAL-10EBIY-3 mengandung gen crtY,
g / L xylose) diperoleh dengan glukosa sebagai crtI, crtE, dan crtB (Gbr. 3.14b). Sistem plasmid
cosubstrate. ganda dengan pCLEIZ1 yang mengandung crtE, crtI,
dan crtZ dan pCLBWY1 yang mengandung crtW,
crtY, dan crtB digunakan untuk menghasilkan
PRODUKSI DARI CAROTENOID DI
astaxanthin (Gbr. 3.14c, d). Untuk mengintegrasikan
M.ICROORGANISME gen-gen ini ke dalam kromosom ragi, Plasmid
Karotenoid adalah pigmen yang secara dilinearisasi oleh restriksi pencernaan dan diubah
struktural beragam ditemukan dalam menjadi C. utilis dengan elektroporasi. Ragi
mikroorganisme dan tanaman. Pigmen ini transgenik yang dihasilkan menghasilkan sejumlah
memiliki berbagai fungsi biologis, seperti besar likopen (1,1 mg / g berat kering), þ-karoten (0,4
pewarnaan, perlindungan foto, panen cahaya, mg / g berat kering), dan astaxanthin (0,4 mg / g
dan produksi hormon (Campbell dan Reece berat kering), dalam jumlah yang mirip dengan
2002). Karotenoid digunakan sebagai pewarna jumlah yang ditemukan dalam mikroorganisme yang
makanan, suplemen pakan ternak, dan baru- secara alami menghasilkan karotenoid ini (Miura et
baru ini, sebagai nutraceutical dalam industri al. 1998). Hasil ini menunjukkan bahwa C. utilis
farmasi. Studi terbaru menunjukkan banyak memiliki potensi besar untuk digunakan dalam
manfaat kesehatan dari konsumsi karotenoid. produksi skala besar karoten yang penting secara
Karotenoid seperti astaxanthin, þ-karoten, dan komersial
likopen memiliki sifat antioksidan yang tinggi,
yang dapat melindungi terhadap berbagai jenis
kanker, meningkatkan sistem kekebalan tubuh,
dan membantu meringankan rasa sakit dan
radang radang sendi (Miki 1991, Jyocouchi et
al. 1991) , Giovan-mengekstraksi sejumlah
besar karoten dari sumber alami. Pasar dunia
tahun 1999 untuk karotenoid adalah $ 800 juta,
dengan proyeksi sebesar $ 1 miliar pada tahun
2005 (Business Communications Co. 2000).
Meskipun para peneliti telah menemukan
mikroalga tertentu seperti Haematococcus
pluvialis yang menghasilkan jumlah tinggi
karotenoid astaxanthin, ekstraksi karotenoid
dari mikroalga ini sulit karena dinding selnya
yang tebal. Untuk alasan ini, metode rekayasa
genetika telah diterapkan untuk menghasilkan
karotenoid dalam mikroorganisme lainnya.
Candida utilis yang dapat dimakan adalah
kandidat yang baik untuk produksi karotenoid
komersial. Ini adalah "umumnya diakui sebagai
aman" (GRAS) organisme, dan produksi
peptida skala besar, seperti glutathione, telah
berhasil dicapai dalam C. utilis (Boze et al.
1992). Dalam mikroorganisme dan tanaman,
karotenoid disintesis dari prekursor farnesyl
pyrophosphate (FPP) (Gbr. 3.13). Miura et al.
(1998) mengembangkan a nucci et al. 1995).
Ada peningkatan minat dalam de novo
biosintesis karotenoid lycopene, car-karoten,
dan astaxanthin dalam C. utilis menggunakan
gen bakteri kloning yang menyandikan enzim
dari jalur biosintesis. Mereka menggunakan Gambar 3.13. Jalur biosintetik dari karotenoid likopen, þ-
empat gen (crtE, crtB, crtI, crtY) dari Erwinia karoten, dan astaxantin.
uredovora dan dua gen (crtZ, crtW) dari
Agrobacterium aurantiacum untuk
pembangunan empat plasmid yang berbeda.
Plas-mid pCLR1EBI-3 berisi crtE, crtI, dan
crtB, yang diperlukan untuk produksi likopen
(Gambar 3.14a). Untuk sintesis þ-karoten,
56
Gambar 3.14. Konstruksi likopen, þ-karoten, dan astaxanthin plasmid.
METODE DETEKSI DALAM
BIOTEKNOLOGI MAKANAN
Bioteknologi memainkan peran penting
dalam menjaga keamanan pasokan makanan.
Pengembangan metode yang andal untuk
memastikan keterlacakan bahan genetik
dalam rantai makanan sangat bernilai bagi
produsen dan konsumen makanan. Keyakinan
konsumen dalam bioteknologi pangan akan
meningkat jika ada metode penelusuran yang
lebih baik. Alat bioteknologi modern juga
diterapkan untuk mengembangkan metode
yang sensitif, andal, cepat, dan murah untuk
mendeteksi organisme patogen berbahaya
seperti E. coli O157: H7 dan agen infeksi
untuk penyakit sapi gila.
TRANSGENE DETEKSI
Prestasi dalam bioteknologi pangan
membutuhkan pengembangan produk baru
yang berkelanjutan dan komersialisasi yang
sukses melalui penerimaan konsumen. Salah
satu tuntutan terbesar yang dibuat oleh
kelompok konsumen sebagai prasyarat untuk
dukungan mereka terhadap penggunaan
tanaman transgenik, adalah pengembangan
metode yang dapat diandalkan untuk
mendeteksi transgen dalam produk makanan
manusia (James 2001). Tetapi ketika jumlah
organisme yang dimodifikasi secara genetik
(GMO) disetujui untuk penanaman dan
komersialisasi tumbuh, ada juga peningkatan
risiko kontaminasi bahan transgenik dalam
produk makanan nontransgenik. Salah satu
peristiwa yang dipublikasikan dengan baik terjadi
pada Oktober 2000, ketika Safeway dan Taco Bell
menarik produk jagung karena mereka
terkontaminasi dengan sejumlah kecil jagung hasil
rekayasa genetika. Untuk alasan ini dan lainnya,
keberhasilan dan penerimaan GMO di masa depan
akan tergantung pada mekanisme penahanan dan
deteksi yang tepat atas bahan transgenik. Di antara
berbagai metode untuk mendeteksi bahan
transgenik yang digunakan saat ini, PCR kuantitatif
waktu nyata adalah yang paling kuat, dapat diakses,
dan hemat biaya (Higuchi et al. 1992). Perhatian
utama untuk penerapan metode deteksi yang dapat
diandalkan adalah untuk menentukan jenis urutan
gen unik apa yang harus diperkuat selama skrining
PCR. Urutan tanda tangan seperti penanda
resistensi antibiotik dan promotor adalah elemen
utama yang digunakan saat ini untuk mendeteksi
transgenik, tetapi mereka tidak ideal karena urutan
tanda tangan yang sama dapat ditemukan di lebih
dari satu jenis transgenik. Juga, ada kekhawatiran
yang tidak terbukti bahwa urutan tanda tangan ini,
terutama penanda resistensi antibiotik, dapat
menyebabkan masalah kesehatan dan lingkungan.
Untuk mengatasi masalah ini, Uni Eropa, yang
telah mengadopsi peraturan ketat tentang GMO,
melarang penggunaan gen antibiotik sebagai
penanda untuk pilihan transformasi, pada tahun
2004. Uni Eropa juga membentuk label wajib
makanan GMO dengan 1% tingkat ambang untuk
kehadiran bahan transgenik, yang pada gilirannya
mendorong penelitian yang lebih agresif pada
sangat spesifik, tepat,
Peneliti untuk perusahaan Jerman Icon Ge-
netics mengembangkan ide baru untuk
identifikasi universal GMO (Marillonet et al.
2003). Mereka mengusulkan pembuatan
prosedur standar di mana informasi teknis
berbasis DNA nontranskripsi dapat
ditambahkan ke transgen sebelum
dimasukkan ke dalam genom organisme.
Pengodean buatan ini akan didasarkan pada
triplet nukleotida, seperti kodon asam amino,
dan setiap triplet akan mengkodekan salah
satu dari 26 huruf alfabet Latin, angka Arab
dari 0 hingga 9, dan satu karakter luar
angkasa, memberikan total 37 karakter
( Tabel 3.2) (Marilonet et al. 2003). Dengan
karakter-karakter ini, para peneliti dapat
menyisipkan urutan pengkodean non-biologis
yang netral yang diterjemahkan menjadi
unikn informasi seperti nama perusahaan,
tanggal produksi, tempat produksi, model
produk, dan nomor seri. Wilayah variabel di
mana informasi dikodekan akan dikloning di
antara sekuens yang dilayani yang berisi
domain pengikat primer. Untuk membaca
informasi yang dikodekan-DNA, seseorang
hanya perlu melakukan PCR dan
mengurutkan fragmen.
Metode lain berbasis PCR untuk
deteksi GMO melibatkan penggunaan
sekuens genom unik yang mengapit transgen.
Hernandez et al. (2003), bekerja dengan jalur
jagung transgenik Monsanto MON810, yang
berisi pengkodean gen untuk insektisida
CryIA (b) endotoksin, mengidentifikasi
sekuens genomic berdekatan dengan situs 3-
integrasi transgenic pabrik dengan
menggunakan pendekatan thermal
asymmetric interlaced (TAIL) -PCR.
Amplifikasi PCR target DNA dan
kuantifikasi produk PCR waktu-nyata adalah
dua teknik yang paling sering digunakan
untuk kuantifikasi DNA yang akurat. PCR
kuantitatif waktu nyata dapat digunakan
dengan alat kuantitatif yang berbeda seperti
pewarna pengikat DNA (Morrison et al.
1998), oligonukleotida berfluoresensi
(Whitcombe et al. 1999), suar molekul (Tyagi
dan Kramer 1996), energi resonansi
fluoresensi probe transfer (FRET) (Wittwer et
al. 1997), dan probe TaqMan (Heid et al.
1996). Keuntungan utama dari sistem
TaqMan adalah ia sangat spesifik karena
menggunakan tiga oligonukleotida dalam
reaksi PCR. Sistem deteksi ini terdiri dari dua
primer yang bertanggung jawab untuk
amplifikasi produk, dan probe TaqMan,
oligonukleotida fluorogenik yang akan dianil
pada produk.
menyewa tag fluorescent 5 'dari probe Taq-
Man yang dianil, yang mengeluarkan cahaya
fluoresensi yang dapat diukur. Intensitas cahaya
yang lebih tinggi diterjemahkan menjadi jumlah
yang lebih besar dari gen target yang ada dalam
sampel makanan.
FOOD PATHOGEN DETEKSI
Keracunan makanan dapat terjadi karena kontaminasi
makanan oleh bakteri penghasil racun tertentu seperti
Salmonella, Vibrio, Listeria, dan E. coli. Strain O157:
H7 adalah yang paling mematikan di antara semua
strain E. coli; itu menghasilkan racun yang disebut
Shiga, yang dikodekan oleh dua gen, stx1 dan stx2.
Racun Shiga (Stx1 dan Stx2) merusak lapisan usus
besar, menyebabkan diare dan dehidrasi yang parah;
dan jika diserap ke dalam aliran darah, racun bisa
membahayakan yang lain organ, seperti ginjal (Riley
et al. 1983). Di Amerika Utara, galur O157: H7
ditemukan sebagian besar di usus sapi yang sehat.
Centre for Disease Control (CDC) memperkirakan
bahwa Shiga yang memproduksi E. coli (STEC)
penghasil racun, seperti O157: H7, menyebabkan
73.480 penyakit dan 61 kematian per tahun di
Amerika Serikat saja dan 85% dari kasus ini
disebabkan oleh digunakan untuk penularan melalui
makanan, terutama dari daging sapi giling, susu yang
tidak dipasteurisasi, dan daging sapi panggang (Mead
et al. 1999). Sebagaimana laporan dari wabah E. coli
O157: H7 menjadi lebih umum, upaya yang lebih
besar telah dilakukan untuk mengembangkan metode
yang cepat dan andal untuk pendeteksiannya. PCR
telah menjadi metode pilihan untuk deteksi patogen
karena, berbeda dengan uji kultur dan isolasi
serologis, metode PCR memberikan hasil yang cepat,
akurat, dan sangat sensitif. Di antara gen yang saat ini
digunakan sebagai target untuk amplifikasi PCR
O157: H7 adalah Shiga toksin (stx) (Brian et al.
1992), intimin (Gannon et al. 1993),
enterohemorrhagic E. coli hemolysin (Hall dan Xu
1998) , dan þ-glukuronidase (EC 3.2.1.31) (Feng
1993). Dalam metode PCR tradisional untuk deteksi
patogen, yang meliputi elektroforesis gel, jumlah
sampel yang dapat dianalisis selama satu kali proses
elektroforesis sangat kecil. Untuk ini alasannya, para
peneliti dari Departemen Ilmu Pengetahuan Makanan
dan Pangan, Universitas Maryland, College Park,
Maryland, dan dari Pusat Keamanan Pangan dan
Nutrisi Terapan, Administrasi Makanan dan Obat-
obatan, Washington, DC, mengembangkan sebuah
contoh, cepat , metode skala besar untuk analisis
produk PCR dengan penggunaan uji immunosorbent
terkait-enzim (ELISA) (Ge et al. 2002). Pendekatan
PCR-ELISA untuk mendeteksi E. coli O157: H7 dan
STEC lain dalam makanan didasarkan pada
penggabungan digoxigenin berlabel deoxyuriine
triphosphate (dUTP) dan primer berlabel biotin
khusus untuk gen stx1 dan stx2 selama PCR
amplifikasi. Dalam metode ini, produk PCR berlabel
biotin diikat ke sumur pelat mikrotiter yang
dilapisi dengan streptavidin dan kemudian
dideteksi oleh ELISA menggunakan konjugat
anti-DIG-peroksidase (Gbr. 3.15). Untuk
menetapkan spesifisitas primer yang digunakan
dalam metode PCR ini, 39 strain bakteri yang
berbeda, termasuk strain STEC dan non-STEC
seperti Salmonella, digunakan. Semua strain
STEC positif dan semua organisme non-STEC
negatif. Para peneliti mengamati bahwa
dibandingkan dengan elektroforesis gel
tradisional dengan metode pewarnaan etidium
bromida, ELISA
Meja3.2.Pengkodean Triplet Buatan untuk Karakter Alfabet dan Numerik Khusus, Digunakan
dalam Identifikasi Organisme GM

Karakter Kodon Karakter Kodon

1 TTA CCT H CAC AGA
2 TTG CCC IJ CAA AGG
3 CTT ACC K GTC
4 CTC ACA L GTA
5 CTA ACG M CAG AGT
6 CTG BERTIN GTG
DAK N
7 ATT GCA O AAT GGA
8 ATC GCG P AAC GGG
9 ATA GCT Q TCT
0 TTC CCG MUNTAH R TCC
ruang TTT CCA AAG S AAA GGT
T GAT TGC
SEBUAH TAT CGA U GAC TGA
B ATG V GAA TGG
C TAC CGG TCA
W
D TAA CGT TCG
E MENA CGC X GCC
NDAI Y
F GTT Z TGT
G KUCIN AGC GGC
G
Sumber: Diadaptasi dari Marillonnet et al. 2003
Gambar 3.15. Diagram metode digoxygenin-ELISA (DIG-ELISA).
 3 Uang Muka
Terbaru
sistem meningkatkan sensitivitas uji PCR hingga
100 kali lipat (Ge et al. 2002). Di masa depan,
penggunaan peralatan robotik akan menghasilkan
otomatisasi prosedur PCR-ELISA, memungkinkan
penyaringan mikroorganisme yang cepat, sensitif,
akurat, dan berskala besar yang menghasilkan racun
Shiga. Metode ini juga dapat diterapkan untuk
mendeteksi patogen makanan lainnya,
menggunakan primer PCR berlabel biotin tertentu.
BYG BERHUBUNG DGN DOMBA SPONGIFORM
ENCEPHALOPATHY DETEKSI
The spongiform encephalopathies (TSEs) yang
dapat ditransmisikan, adalah sekelompok penyakit
neurodegeneratif yang mempengaruhi banyak
hewan, termasuk manusia, dan ditandai oleh
pembentukan "lubang" mikroskopis di jaringan
otak. Anggota keluarga TSE termasuk (1) penyakit
yang menimpa manusia: kuru, Gertsmann-
Sträussler-Scheinker (GSS), insomnia keluarga
yang fatal (FFI), dan penyakit Creutzfeldt-Jakob
(CJD); dan (2) penyakit yang menimpa hewan:
scrapie (domba dan kambing), penyakit wasting
(rusa dan rusa), mink ensefalopati (mink),
ensefalopati spongiformis kucing (kucing), dan
ensefalopati spongiformis sapi (BSE) (Prusiner
1998) ). Ensefalopati spongiformis sapi
mempengaruhi sapi dan umumnya dikenal sebagai
penyakit sapi gila. Gejala yang terkait dengan BSE
adalah penurunan berat badan, air liur, kepala
melambai, perilaku agresif, dan akhirnya kematian.
Semua TSE, termasuk BSE, disebabkan oleh agen
infeksi baru yang disebut "prion protein" (PrP)
(Prusiner 1982). Stanley Prusiner menemukan
hadiah pada tahun 1984 dan dianugerahi Hadiah
Nobel Kedokteran 1997 untuk penelitiannya. Prion
adalah glikoprotein endogen yang ditemukan
melimpah di jaringan otak semua mamalia dan
dapat berfungsi sebagai pembantu neuron. Mereka
dapat bermanifestasi dalam dua konfigurasi protein
yang berbeda: (1) PrPc, bentuk normal, yang non-
patogenik, peka terhadap protease, dan tinggi dalam
kandungan heliks, dan (2) PrPSc, bentuk salah
lipatan, yaitu penyakit -Inducing, tahan protease,
dan konten þ- lembar tinggi. PrPSc memiliki sifat
infeksi, dan ketika bersentuhan dengan PrPc, ia
memulai reaksi berantai, mengubah PrPc menjadi
PrPSc (Horiuchi dan Caughey 1999). Prion tidak
sepenuhnya hancur oleh sterilisasi, autoklaf,
desinfektan, radiasi, atau memasak. Mereka benar-
benar terdegradasi hanya dengan pembakaran pada
suhu lebih dari 1000 ° C atau perawatan dengan
larutan natrium hidroksida yang kuat (Dormont
1999).
60
Para ilmuwan percaya bahwa BSE dapat
menyebar di antara kucing melalui pakan
terkontaminasi yang mengandung bentuk prion
yang menginduksi penyakit. Ini adalah praktik
umum di banyak negara untuk memberi makan
ternak dengan sisa-sisa hewan ternak lainnya
sebagai sumber protein. Hipotesis untuk
penyebaran BSE pada sapi adalah bahwa bagian
tubuh domba yang terinfeksi scrapie dimasukkan
dalam pakan ternak, dan PrPSc melompat spesies
untuk menginfeksi sapi (Bruce et al. 1997).
Penyakit ini menyebar ke seluruh dunia ketika
Inggris menjual pakan ternak yang terkontaminasi
BSE ke negara lain. Sejak pertama kali muncul
pada tahun 1986, risiko infeksi BSE telah
mengakibatkan kerusakan 3,7 juta hewan di Inggris.
Pada manusia, CJD adalah penyakit bawaan yang
disebabkan oleh mutasi pada gen protein primer,
PRNP, dan mempengaruhi satu dari satu juta orang.
Dipercaya bahwa korban manusia mungkin telah
mengontrak varian baru CJD (nv-CJD) dari
memakan produk daging yang terkontaminasi BSE.
Protein prion patogenik yang menyebabkan BSE
hampir identik dengan prion yang menyebabkan
nv-CJD (Johnson dan Gibbs 1998). Antara 1996
dan 2003, 156 kasus nv-CJD telah dicurigai atau
dikonfirmasi di banyak negara, terutama di Inggris
Raya.
Salah satu masalah utama dalam menangani dan
mengandung epidemi BSE adalah bahwa tidak ada
tes untuk mendeteksi penyakit pada hewan hidup.
Prion tidak memicu respons imun spesifik apa pun
yang terdeteksi, dan kadar prion abnormal di bagian
tubuh lain, seperti darah, terlalu rendah untuk
dideteksi. Satu-satunya cara diagnosis pada hewan
hidup adalah pengamatan gejala BSE pada hewan.
Karena kurangnya metode pendeteksian hidup yang
andal, semua hewan dalam kawanan yang mungkin
bersentuhan dengan pakan yang terkontaminasi
BSE harus dimusnahkan, sehingga menyebabkan
kerugian besar bagi industri ternak.
Metode laboratorium utama yang digunakan
untuk mengkonfirmasi diagnosis BSE adalah
pemeriksaan mikroskopis jaringan otak setelah
kematian hewan. Selain pemeriksaan mikroskopis,
ada beberapa teknik yang digunakan untuk
mendeteksi PrPSc, di antaranya, tes Western blot
dan imunositokimia (dikembangkan oleh Prionics
AG, Swiss) adalah yang paling umum digunakan
(Kübler et al. 2003). Tes BSE lain yang saat ini
disetujui termasuk (1) tes yang dikembangkan oleh
CEA, sebuah kelompok penelitian di Perancis, di
mana teknik sandwich immunoassay untuk PrPSc
dilakukan mengikuti langkah denaturasi dan
konsentrasi dan
(2) tes yang dikembangkan oleh Enfer Scientific, di
Irlandia, di mana antibodi poliklonal dan enzim
digabungkan
antibodi sekunder digunakan dan deteksi dilakukan
oleh ELISA-chemiluminescence (Moynagh dan
Schimmel 2000). Meskipun tes ini 100% dapat
diandalkan, mereka hanya dapat dilakukan di
jaringan otak postmortem.
Untuk meningkatkan sensitivitas metode deteksi
saat ini dan memungkinkan deteksi BSE hewan
hidup, penelitian intensif telah dilakukan dalam
mengembangkan tes yang memanfaatkan kapasitas
infeksi PrPSc untuk mengubah protein prion
normal menjadi yang patogen. Sebuah tim peneliti
dari Serono Pharmaceutical Research Institute di
Geneva pertama kali melakukan mutasi prion
mutasi in vitro dan telah merancang metode untuk
mereplikasi mereka ke tingkat yang cukup tinggi
untuk mendeteksi penyakit pada tahap awal
(Saborio et al. 2001). Teknik, yang disebut
amplifikasi siklik protein misfolding (PMCA),
mirip dengan reaksi PCR, di mana amplifikasi
sejumlah kecil protein patogen dalam sampel
dicapai melalui beberapa siklus inkubasi PrPSc di
hadapan kelebihan PrPc, diikuti oleh gangguan
agregat melalui sonikasi di hadapan deterjen (Gbr
3.16). Teknik baru ini memiliki potensi untuk
meningkatkan BSE dan metode deteksi TSE
lainnya, untuk memberikan pemahaman yang lebih
baik tentang penyakit prion dan untuk membantu
dalam mencari target obat untuk penyakit otak.
Baru-baru ini, peneliti dari Chronix Biomedical di
San Francisco dan Institute of Veterinary Medicine
di Göttingen, Jerman, mengklaim telah
mengembangkan tes BSE pertama yang dapat
dilakukan pada hewan hidup (Urnovitz 2003).
Metode deteksi ini, yang disebut tes hidup penanda
pengganti untuk BSE, adalah tes PCR real-time
berdasarkan deteksi in vitro RNA spesifik dalam
serum sapi. Ini menggunakan sampel darah dari
sapi untuk identifikasi RNA microvesicle, dan itu
dianggap sebagai tes penanda pengganti karena
mendeteksi RNA darah dan bukan protein prion.
RNA ditemukan dalam fraksi darah yang terutama
mengandung mikrovesikel, dan sementara
mikrovesikel ditemukan pada hewan yang sehat
dan berpenyakit, kandungan RNA mereka
tampaknya berbeda. Sapi yang menunjukkan reaktif
terhadap tes ini harus menjalani tes kedua yang
lebih spesifik untuk diagnosis konklusif penyakit
sapi gila (Urnovitz 2003).
KESIMPULAN
Penelitian tentang organisme transgenik untuk
industri makanan telah dimaksudkan sebagian besar
untuk menguntungkan produksi.
ers. Penciptaan tanaman transgenik yang tahan
patogen, serangga, dan herbisida telah
menyebabkan peningkatan produktivitas dan
penurunan biaya produksi banyak tanaman pangan.
Demikian pula, pengenalan gen asing pada salmon
transgenik memungkinkannya tumbuh tiga kali
lebih cepat dari salmon tipe liar. Manfaat dari
penelitian bioteknologi generasi mendatang akan
diarahkan kepada konsumen dan akan memerlukan
penciptaan makanan desainer dengan karakteristik
yang ditingkatkan seperti nutrisi, rasa, kualitas, dan
keamanan yang lebih baik. Contoh yang baik dari
penelitian tersebut adalah penggunaan bioteknologi
untuk mengurangi jumlah asam lemak jenuh dalam
minyak nabati.
Di antara banyak kemungkinan yang tersedia di
bidang bioteknologi makanan, penelitian di masa
depan di bidang rekayasa genetika tanaman
ditujukan untuk meningkatkan umur simpan buah-
buahan dan sayuran segar, menciptakan tanaman
yang menghasilkan protein manis, mengembangkan
kopi bebas kafein. dan teh, dan meningkatkan rasa
buah dan sayuran. Kemajuan besar telah dicapai
dalam menggunakan pabrik sebagai bioreaktor
untuk pembuatan dan sebagai sistem pengiriman
vaksin. Berbagai tanaman seperti tembakau,
kentang, tomat, dan pisang telah digunakan untuk
memproduksi vaksin eksperimental melawan
penyakit menular. Kemajuan dalam rekayasa
genetika akan memungkinkan penciptaan tanaman
transgenik yang menghasilkan protein penting
untuk produksi obat-obatan seperti hormon
pertumbuhan, antigen, antibodi, enzim, kolagen,
dan protein darah.
Aplikasi rekayasa genetika dalam industri
makanan tidak terbatas pada manipulasi genom
tanaman. Hewan dan mikroorganisme juga telah
banyak diteliti untuk menghasilkan produk
makanan yang lebih baik. Di bidang bioteknologi
hewan, fokus utamanya adalah pada penggunaan
kelenjar susu dan sel telur sebagai bioreaktor dalam
pembuatan biofarmasi. Sejauh ini, fokus penelitian
bioengineering hewan telah diarahkan pada manfaat
produsen. Di masa depan, penelitian hewan
transgenik akan bergeser ke arah produksi produk
daging yang lebih sehat, dengan penurunan jumlah
lemak dan kolesterol.
Mikroorganisme, terutama ragi, sangat penting
bagi industri pengolahan makanan selama berabad-
abad. Di antara banyak kualitas mereka, ragi
memainkan peran penting dalam produksi makanan
fermentasi, enzim, dan protein. Penelitian di masa
depan tentang rekayasa genetika mikroorganisme
dapat difokuskan pada produksi skala besar yang
aktif secara biologis
Gambar 3.16. Diagram amplifikasi siklik protein-salah lipatan (PMCA). (Dari Saborio et al. 2001.)
komponen yang memberikan manfaat kesehatan,
tetapi ditemukan dalam jumlah rendah pada
tanaman. Di antara komponen yang memiliki sifat
antikanker adalah lecros yang ditemukan dalam
tomat, glukosinolat ditemukan dalam brokoli, asam
ellagic ditemukan dalam stroberi, dan iso-flavonoid
yang ditemukan dalam kedelai. Kemajuan
bioteknologi lebih lanjut akan meningkatkan nilai
dan ruang lingkup penggunaan mikroorganisme
dalam industri makanan dan farmasi.
Selain produksi senyawa baru dan perbaikan yang
sudah ada, bioteknologi memainkan peran penting
dalam keamanan pangan. Kontaminasi mikroba
menjadi perhatian utama di industri makanan.
Metode bioteknologi baru sedang dikembangkan
dioperasikan untuk membantu mengurangi jumlah
mikroba pada produk hewani dan tanaman dan dengan
demikian meningkatkan keamanan pasokan makanan.
Selain itu, bioteknologi menyediakan banyak alat untuk
mendeteksi mikroorganisme dan racunnya. Beberapa
metode deteksi baru dan lama seperti tes ELISA,
polymerase chain reaction (PCR), protein misfolding
cyclic amplification (PMCA), probe DNA, dan biosensor
telah dikembangkan untuk mendeteksi keberadaan agen
patogenik yang menular seperti bakteri, virus, jamur, dan
primer. Peningkatan terbaru dalam metode deteksi adalah
pengembangan teknologi PCR real-time, yang
menyediakan alat yang sensitif dan lebih dapat
diandalkan untuk mengidentifikasi patogen dalam produk
makanan.
 Terlepas dari manfaat yang diberikan oleh
bioteknologi modern, ilmu yang relatif baru ini
belum sepenuhnya dianut oleh populasi umum.
Masih ada banyak masalah keamanan, keandalan,
dan kemanjuran yang harus diatasi sebelum para
ilmuwan meyakinkan menjawab semua
keprihatinan publik. Pada saat ini, ada polarisasi
yang sangat kuat pada masalah rekayasa genetika.
Di satu sisi, beberapa ilmuwan dan korporasi
mendorong untuk komersialisasi produk rekayasa
genetika; di sisi lain, beberapa lembaga
nonpemerintah, yang mewakili sektor-sektor
tertentu dari populasi, berusaha menghentikan
produk bioteknologi agar tidak digunakan.
REFERENSI
Agius F, Gonzales-Lamothe R, Caballero J,
Munoz-Blanco J, Botella M, Valpuesta V.
2003. Rekayasa meningkatkan kadar vitamin C
pada tanaman dengan ekspresi berlebihan dari
reduktase asam D-galakturonat. Bioteknologi
Alam 21: 177–181.
Aldhous P. 1990. Rekayasa genetika.
Dimodifikasi ragi yang baik untuk makanan.
Alam 344: 186.
Andlauer W, Furst P. 1998. Kekuatan antioksidan
phytochemical dengan referensi khusus untuk
sereal. Cereal Foods World 43: 356–359.
Andrews SC, Arosio P, Bottke W, Briat JF, von
Darl M, Harrison PM, Laulhere JP, Levi S,
Lobreaux S, Yewdall SJ. 1992. Struktur, fungsi
dan evolusi feritin. J Inorg Biochem 47: 161–
174.
Armstrong DW, Yamazaki H. 1986. Produksi rasa
alami: Suatu pendekatan bioteknologi. Tren
Biotekn 4: 264–268.
Armstrong GA. 1994. Eubacteria menunjukkan
warna sebenarnya: Genetika biosintesis pigmen
karotenoid dari mikroba ke tanaman. J Bakteriol
176: 4795–4802. Bartley GE, Scolnik PA, Giuliano
G. 1994. Biologi molekuler biosintesis karotenoid
pada tanaman. Ann
Rev Plant Physiol Plant Mol Biol 45: 287–301.
Basta SS, Soekirman, Karyadi D, Scrimshaw NS.
1979. Anemia defisiensi besi dan produktivitas
pria dewasa di Indonesia. Am J Clin Nutr 32:
916– 925.
Bawden WS, Passey, RJ, MacKinlay, AG. 1994.
Gen yang mengkode protein spesifik susu
utama dan penggunaannya dalam studi
transgenik dan rekayasa protein. Biotechnol
Genet Eng Rev 12:89.
Beard JL, Burton JW, Theil EC. 1996. Ferritin
murni dan bungkil kedelai dapat menjadi
sumber zat besi untuk mengobati kekurangan
zat besi pada tikus. J Nutr 126: 154–160.
Boze H, Moulin G, Glazy P. 1992. Produksi ragi
makanan dan makanan ternak. Crit Rev
Biotechnol 12: 65-86.
Brian MJ, Frosolono M, Murray BE, Miranda A,
Lopez EL, Gomez HF, Cleary TG. 1992. Reaksi
berantai polimerase untuk diagnosis infeksi
Eskaya-colia enterohemorrhagic dan sindrom
hemolitik-uremik. J Clin Microbiol 30: 1801–1806.
Brinch-Pedersen H, Sorensen LD, Holm, PB. 2002.
Rekayasa tanaman tanaman: Mendapatkan pegangan
pada fosfat. Tren dalam Ilmu Tanaman 7: 118-125.
Brophy B, Smolenski G, Wheeler T, Wells D, L'Huillier
P, Laible G. 2003. Kucing transgenik kloning
menghasilkan susu dengan kadar þ-casein dan n-
casein yang lebih tinggi. Bioteknologi Alam 21: 157–
162.
Bruce ME, Will RG, Ironside, JW, McConnell, I,
Drummond D, Suttie A, McCardle L, Chree A, Hope,
J, Birkett C, Cousens S, Fraser H, Bostock CJ. 1997.
Transmisi ke tikus menunjukkan bahwa varian baru
CJD disebabkan oleh agen BSE. Alam 389: 498–501.
Buchanan BB, Gruissem W, Jones RL. 2001. Biokimia
dan Biologi Molekuler Tumbuhan, edisi ke-3.
Rockville: Perhimpunan Fisiologi Tumbuhan
Amerika. Hal.1288–1309.
Perusahaan Komunikasi Bisnis RGA-110. 2000. Pasar
Global untuk Karotenoid. Connecticut: Perusahaan
Komunikasi Bisnis Norwalk.
Cabot RA, Kuhholzer B, Chan AW, Lai L, Taman KW,
Chong KY, Schatten G, Murphy CN, Abeydeera LR,
Hari BN., Prather RS. 2001. Babi transgenik diproduksi
menggunakan oosit matang in vitro yang terinfeksi vektor
retroviral. Anim Biotechnol 12: 205–214.
Cahoon EB, Aula SE, Ripp KG, Ganzke TS, Hitz WD,
Coughlan SJ. 2003. Desain ulang metabolisme biosintesis
vitamin E pada tanaman untuk produksi tocotrienol dan
peningkatan kandungan antioksidan. Bioteknologi Alam
21: 1082-1087.
Campbell NA, Reece JB. 2002. Biologi, edisi ke-6. San
Francisco: Pearson Education. Pp. 69–70.
Chakraborty S, Chakraborty N, Datta A. 2000. Menambah
nilai nutrisi kentang transgenik dengan mengekstraksi gen
albumin benih non-alergi dari Amaranthus hypocondriacus.
PNAS 97: 3724-3729. Cheetham PSJ. 1993. Penggunaan
biotransformasi untuk produksi rasa dan wewangian. Tren
Biotekn 11: 478–488.
Chen Z, Young T, Ling J, Chang S, Gallie D. 2003.
Meningkatkan kandungan vitamin C tanaman melalui
peningkatan daur ulang askorbat. PNAS 100: 3525–3530.
Civitelli R. 1997. Efek ipriflavon in vitro dan in vivo pada
pembentukan tulang dan biomekanik tulang. Calcif Tissue
Int 61: S12 – S14.
Clark AJ, Simons P, Wilmut I, Lathe R. 1987. Farmasi dari
ternak transgenik. Tren Bioteknologi 5: 20-24.
Collakova E, DellaPenna D. 2001. Analisis isolasi dan
fungsi dari homogentisatephytyltransferase dari
Synechocystis sp. PCC 6803 dan Arabidopsis. Tumbuhan
Physiol 127: 1113–1124.
Colman A. 1996. Produksi protein dalam susu ternak
transgenik: Masalah, solusi, dan keberhasilan. Am J Clin
Nutr 63: S639-S645.
Cooper KH. 1996. Terapi Nutrisi Lanjut. Nashville: Penerbit
Thomas Nelson.
Dalgleish DG, Horne DS, Law AJ. 1989. Perbedaan terkait
ukuran dalam misel casein sapi. Biochem Biophys Acta
991: 383-387.
Daniell H, Dhingra A. 2002. Rekayasa multigene: Fajar era
baru yang menarik dalam bioteknologi. Curr Opin
 Biotechnol 13: 136–141.
Davey MW, Van Monatgu M, Sanmatin M, Kanellis
A, Smirnoff N, Benzie IJJ, Strain JJ, Favell D,
Fletcher
J. 2000. Plant L-ascorbic acid: Kimia, fungsi,
metabolisme, bio-availabilitas dan efek dari proses.
J Sci Food Agric 80: 825–860.
Davies PL, Hew CL. 1990. Biokimia ikan anti protein
beku. FASEB J 4: 2460–2468.
Davies PL, Sykes BD. 1997. Protein antibeku. Opini
Saat Ini dalam Biologi Struktural 7: 828-834.
Deng G, Andrews DW, Laursen RA. 1997. Urutan
asam amino tipe baru protein antibeku dari longhorn
sculpin Myoxocephalus octodecimspinosis. FEBs
Letters 402: 17-20.
Dequin S. 2001. Potensi rekayasa genetika
untuk meningkatkan pembuatan bir,
pembuatan anggur dan pembuatan ragi. Appl
Microbil Biotechnol 56: 577–588.
Devlin RH, Yesaki TY, Biagi CA, Donaldson
EM, Swanson P, Chan W. 1994.
Pertumbuhan salmon yang luar biasa. Alam
371: 209–210.
DeVries AL. 1984. Peran glikopeptida dan
peptida dalam menghambat kristalisasi air
pada ikan kutub. Phil Trans R Soc Lond
B304: 575–588.
Dormont D. 1999. Agen yang menyebabkan
enchaphalopathies spongiform subakut
menular. Biomed Pharbother 53: 3–8.
Dove A. 2002. Melepas leher botol
biomanufaktur. Bioteknologi Alam 20: 777-
779.
Du SJ, Gong ZY, Fletcher, GL, Gunting MA,
Raja MJ, DR Pemalas, Hew CL. 1992.
Peningkatan pertumbuhan salmon transgenik
Atlantik dengan menggunakan konstruksi gen
hormon pertumbuhan chimeric "all-fish".
Bio / Teknologi 10: 176–181.
Eldridge AC, Kwolek WF. 1983. Kedelai
isoflavon: Pengaruh lingkungan dan variasi
pada komposisi. J Agric Food Chem 31: 394–
396.
Emodi A. 1978. Xylitol: Properti dan aplikasi
makanannya. Makanan Technol 32: 20–32.
Etherton TD. 1991. Ulasan klinis 21: Efikasi
dan keamanan hormon pertumbuhan untuk
peternakan hewan. J Clin Endocrinol Metab
72: 957A-957C.
Komisi Eropa. 2000. Peraturan Komisi (EC)
No. 49/2000 Komisi mengubah Peraturan
Dewan (EC) 1139/98 tanggal 10 Januari
2000, mengenai indikasi wajib pada pelabelan
bahan makanan tertentu yang dihasilkan dari
organisme yang dimodifikasi secara genetika
dari informasi lainnya. dari yang diatur dalam
Petunjuk 79/112 / EEC Off J Eur
Communities L6: 13–14.
Falk J, Andersen G, Kernebeck B, Krupinska K.
2003. Ekspresi berlebihan barley 4-hydroxy-
phenylpyruvate dioxygenase dalam tembakau
menghasilkan peningkatan kandungan
vitamin E dalam biji tetapi tidak dalam daun.
FEBS Letters 540: 35–40.
Feng P. 1993. Identifikasi Escherichia coli serotipe
O157: H7 dengan probe DNA spesifik untuk alel
gen uidA. Probe Sel Mol 151–154.
Fickler J. 1995. Komposisi asam amino dari bahan
makanan. New York: Degussa Corporation.
Administrasi Makanan dan Obat-obatan (FDA). 1999.
Penukaran makanan: Klaim kesehatan; protein
kedelai dan penyakit jantung koroner; aturan
terakhir. Daftar Federal 64 FR 57699.
Gannon VP, Rashed M, King, RK, Thomas EJ. 1993.
Deteksi dan karakterisasi gen eae dari
Escherichia coli penghasil racun seperti Shiga
menggunakan reaksi berantai polimerase. J Clin
Microbiol 1268-1274.
Gardner NJ, Savard T, Obermeier P, Caldwell G,
Champagne CP. 2001. Seleksi dan karakterisasi
kultur starter campuran untuk fermentasi asam laktat
dari wortel, kol, bit dan campuran sayuran bawang.
Int J Food Microbiol 64: 261–75.
Ge B, Zhao S, Hall R, Meng J. 2002. A PCR-ELISA
untuk mendeteksi Escherichia coli penghasil racun
Shiga.
Mikroba Menginfeksi 4: 285–290.
Geisen R, Holzapfel WH. 1996. Budaya starter dan
pelindung yang dimodifikasi secara genetik. Int J
Food Micro 30: 315–324.
Gibson DM, Ullah AB. 1990. Phytases dan aksinya pada
asam fitat. Dalam: Metabolisme Inositol pada
Tumbuhan. New York: Wiley-Liss Inc. Pp. 77–92.
Giddings G, Allison G, Brooks D, Carter A. 2000.
Pabrik transgenik sebagai pabrik untuk biofarmasi.
Bioteknologi Alam 18: 1151–1155.
Gilbert AB. 1984. Telur albumen dan pembentukannya.
Dalam: Fisiologi dan Biokimia dari Unggas
Domestik. Pers Akademik. Pp. 1291–1329.
Giovannucci E, Ascherio A, Rimm EB, Stampfer MJ,
Colditz GA, Willett WC. 1995. Asupan karotenoid
dan retina dalam kaitannya dengan risiko kanker
prostat. J Natl Cancer Inst 87: 1767-1776.
Gleizes PE, Munger JS, Nunes I, Harpel JG, Mazzieri R,
Noguera I, Rifkin DB. 1997. TGF-beta latency:
Signifikansi biologis dan mekanisme aktivasi. Sel
Induk 15: 190–197.
Gong Z, Ewart KV, Hu Z, Fletcher GL, Hew CL. 1996.
Gen protein antibeku kulit dari flounder musim
dingin, Pleuronectes americanus, menyandikan
polipeptida yang aktif dan berbeda tanpa sinyal
sekretori dan prose- quences. J Biol Chem 271: 4106-
4112.
Gordon JW, Scangos GA, DJ Plotkin, Barbosa JA,
Ruddle FH. 1980. Transformasi genetik embrio tikus
dengan injeksi mikro DNA murni. Proc Natl Acd Sci
77: 7380-7384.
Goto F, Yoshihara T, Shigemoto N, Toki S, Takaiwa F.
1999. Besi fortifikasi benih padi oleh gen feritin
kedelai. Bioteknologi Alam 17: 282–286.
Govinden R, Pillay B, van Zyl WH, Pillay D. 2001.
Produksi Xylitol oleh Saccharomyces cerevisiae
rekombinan mengekspresikan Pichia stipitis dan gen
Candida shehatae XYL1. Appl Microbiol Biotechnol
55: 76–80.
Grundy SM. 1986. Perbandingan asam lemak tak jenuh
tunggal dan karbohidrat untuk menurunkan kolesterol
plasma. N Engl J Med 314: 745-748.
 Grusack MA, DellaPenna D. 1999. Meningkatkan
komposisi nutrisi tanaman untuk meningkatkan
nutrisi manusia dan kesehatan. Annu Rev Plant
Physiol Plant Mol Biol 50: 133–161.
Hall RH, Xu JG, penemu. 1998. Deteksi O157
yang cepat dan sensitif: H7 dan
enterohemorrhagic lainnya
E. coli. Paten AS 5.756.293
Hallberg L, Brune M, Rossander L. 1989.
Penyerapan zat besi pada manusia: Asam
askorbat dan zat yang tergantung dosis oleh
fitat. Am J Clin Nutr 49: 140–144.
Hansen EB. 2002. Budaya starter bakteri
komersial untuk makanan fermentasi di masa
depan. Int J Food Microbiol 78: 119–131.
Harvey AJ, Speksnijder G, Baugh LR, Morris JA,
Ivarie R. 2002. Ekspresi protein eksogen dalam
putih telur ayam transgenik. Bioteknologi Alam
20: 396–399.
Heid CA, Stevens J, Livak KJ, Williams PM.
1996. PCR kuantitatif waktu nyata. Genome
Res 6: 986–994.
Hernandez M, Pla M, Esteve T, Prat S, P
Puigdomenech, Ferrando A. 2003. Sistem
deteksi PCR kuantitatif waktu nyata khusus
untuk acara MON810 dalam jagung
YieldGard berdasarkan pada integrasi integrasi 3'-
transgen
quence. Penelitian Transgenik 12: 179–189.
Hess J L. 1993. Antioksidan pada Tanaman
Tinggi. Boca Raton: CRC Press Inc. 112–134.
Hew CL, Fletcher GL, Davies PL. 1995. Salmon
transgenik: Menyesuaikan genom untuk
produksi makanan. J Fish Biol 47: 1–19.
Hew CL, Poon R, Xiong F, Gauthier S, Gunting
M, Raja M, Davies PL, Fletcher GL. 1999.
Ekspresi salmon transgenik Atlantik spesifik-
hati dan musiman menyimpan gen protein
antibeku beku musim dingin. Penelitian
Transgenik 8: 405-414.
Hew CL, Scott GK, Davies PL. 1986. Biologi
molekuler antibeku. Dalam: Hidup dalam
Dingin: Adaptasi Fisiologis dan Biokimia. New
York: Elsevier Press. Pp. 117–123.
Higuchi R, Dollinger G, Walsh PS, Griffith R.
1992. Amplifikasi simultan dan deteksi urutan
DNA spesifik. Bioteknologi 10: 413-417.
Hochedlinger K., Jaenisch R. 2003. Transplanasi
nuklir, sel induk embrionik, dan potensi terapi
sel. N Engl J Med 349: 275–286.
Holm PB, Kritiansen KN. Pedersen HB. 2002.
Pendekatan transgenik dalam sereal yang biasa
dikonsumsi untuk meningkatkan kandungan
besi dan seng dan ketersediaan hayati. Jurnal
Nutrisi. 132: 514S – 516S.
Horiuchi M, Caughey B. 1999. Protein intercon-
versi protein dan ensefalopati spongiform
menular. Struktur Lipat Des 7: R231 – R240.
Ivarie R. 2003. Transgenesis burung: Kemajuan
menuju janji. Tren dalam Bioteknologi 21: 14–19.
James C. 2001. Tinjauan Global Tanaman Transgenik
Komersial. Brief ISAAA 24.
———. 2003. Tinjauan Global Transgenik Komersial:
2002Fitur: BtMaize.ISAAABriefs29. Jaynes JM, Yang MS,
Espinoza N, Dodds JH. 1986. Peningkatan protein tanaman
dengan rekayasa genetika: Penggunaan gen sintetis. Tren
Biotek 4: 314–
320.
Jimenez Flores R, Richardson T. 1988. Rekayasa genetika
dari kasein untuk memodifikasi perilaku susu selama
pemrosesan: Tinjauan. J Dairy Sci 71: 2640– 2654.
Johnson R, Gibbs CJ. 1998. Penyakit Creutzfeldt-Jakob dan
ensefalopati spongiformis terkait yang menular. New Engl
J Med 339: 1994–2004.
Jung W, Yu O, Lau SM, O'Keefe DP, Odell J, Fader G,
McGonigle B. 2000. Identifikasi dan ekspresi isoflavone
synthase, enzim kunci untuk biosintesis isoflavon dalam
polong-polongan. Bioteknologi Alam 18: 208–212.
Jyocouchi H, Hill J, Tomita Y, Good RA. 1991. Studi
tindakan imunomodulasi karotenoid. I. Efek þ-karoten dan
astaxanthin pada fungsi limfosit murin dan ekspresi
penanda permukaan sel dalam sistem kultur in vivo. Nutr
Cancer 6: 93-105.
Kamal-Eldin A, Appelqvist LA. 1996. Sifat kimia dan
antioksidan dari tokoferol dan tokotenium. Lipid 31: 671–
701.
Karatzas CN, Turner JD 1997. Menuju mengubah komposisi
susu dengan manipulasi genetik: Status dan tantangan saat
ini. J Dairy Sci 80: 2225–2232.
Kunci A, Anderson T, Grande F. 1965. Respons kolesterol
serum terhadap perubahan diet. IV. Asam lemak khusus
satu-peringkat dalam makanan. Metabolisme 14: 776.
Kitamoto K, Oda K, Gomi K, Takashi K. 1991. Rekayasa
genetika dari ragi sake tidak menghasilkan urea dengan
gangguan sukses dari gen arginase. Appl Environ
Microbiol 57: 2568–2575.
Klein TM, Wolf ED, Wu R, Stanford JC. 1987.
Mikroproyekil berkecepatan tinggi untuk mengirimkan
asam nukleat ke dalam sel hidup. Alam 327: 70–73.
Kleter GA, van der Krieken WM, Kok EJ, Bosch D, Jordi
W, Gilissen LJ. 2001. Regulasi dan eksploitasi tanaman
yang dimodifikasi secara genetis. Bioteknologi Alam 19:
1105–1110.
Krings U, Berger RG. 1998. Produksi rasa dan wewangian
bioteknologi. Aplikasi Mikrobiol Bio-tekol 49: 1–8.
Kübler, E, Oesch B, Raeber AL. 2003. Diagnosis penyakit
prion. British Medical Bulletin 66: 267-279.
Lantzsch HJ, Menke KH, Scheuermann SE. 1992. Studi
perbandingan pemanfaatan fosfor dari gandum, jelai dan
diet jagung oleh tikus muda dan babi. J Anim Physiol
Anim Nutr 67: 123–132.
Lee TT, Wang MM, Hou RC, Chen LJ, Su RC, Wang
CS, Tzen JT. 2003. Peningkatan kadar metionin dan
sistin dalam benih padi transgenik dengan
akumulasi albumin 2S wijen. Biosci Biotechnol
Biokimia 67: 1699–1705.
Leury BJ, Baumgard LH, Blok SS, Segoale N,
Ehrhardt RA, RP Rhoads, Bauman DE, Bell AW,
Boisclair YR. 2003. Pengaruh insulin dan hormon
pertumbuhan pada leptin plasma pada sapi
periparturient. Am J Physiol Regul Integr Comp
Physiol 285: R1107 – R1115.
Lewus CB, Kaiser A, Montville TJ. 1991.
Penghambatan patogen bakteri yang ditularkan
melalui makanan oleh bakteriosin dari bakteri asam
laktat yang diisolasi dari daging. Appl En-viron
Microbiol 57: 1683–1688.
Lott JNA. 1984. Akumulasi cadangan benih
fosfor dan mineral lainnya. Dalam: Fisiologi
Benih. Pers Akademik. Pp. 139–166.
Lucca P, Hurrell R, Potrykus I. 2002.
Memerangi anemia defisiensi besi dengan
beras kaya zat besi. J Am Coll. Nutr 21: 184S
– 190S.
GF Maberly, Trowbridge FL, Yip R, Sullivan
KM., CE Barat. 1994. Program melawan gizi
buruk mikronutrien: Mengakhiri kelaparan
tersembunyi. Annu Rev Kesehatan
Masyarakat 15: 277–301.
Marillonet S, Klimyuk V, Gleba Y. 2003.
Pengkodean informasi teknis dalam
organisme GM. Bioteknologi Alam 21: 224–
226.
McMahon DJ, Brown RJ. 1984. Komposisi,
struktur, dan integritas misel kasein:
Tinjauan. J Dairy Sci 67: 499.
McPherron AC, Lee S. 1997. Berotot ganda
pada sapi karena mutasi pada gen myostatin.
Proc Natl Acad Sci 94: 12457-12461.
Mead PS, Slutsker L, Dietz V, McCaig LF,
Bresee JS, Shapiro C, Griffin PM., Tauxe
RV. 1999. Penyakit dan kematian terkait
makanan di Amerika Serikat. Emerg Infect
Dis 5: 607–625.
Messina M, Barnes S. 1991. Peran produk
kedelai dalam mengurangi risiko kanker. J
Natl Cancer Inst 83: 541 546.
Miflin B, Napier J, Shewry P. 1999.
Meningkatkan kualitas produk tanaman.
Bioteknologi Alam 17: BV13– BV14.
Miki W. 1991. Fungsi biologis dan aktivitas
karotenoid hewan. Pure Appl Chem 63: 141–
146.
Miura Y, Kondo K, Saito T, Shimada H, Fraser
PD, Misawa N. 1998. Produksi lyco-
karotenoid
pene, þ-karoten, dan astaxanthin dalam ragi
makanan
Candida utilis. Appl Envir Micrbiol 64: 1226–
1229. Morrison TM, Weiss JJ, Wittwer CT. 1998.
Quan-
tifikasi transkrip copy rendah dengan
pemantauan SYBR hijau I selama amplifikasi.
Bioteknik 24: 954–962.
Moynagh J, Schimmel H. 2000. Tes untuk BSE
dievaluasi. Alam 400: 105.
Muir WM, Howard RD. 1999. Kemungkinan
risiko ekologis dari pelepasan organisme
transgenik ketika transgen memengaruhi
keberhasilan kawin: Seleksi seksual dan
hipotesis gen Trojan. Proc Natl Acad Sci USA
96: 13853–13856.
Munné-Bosch S, Alegre L. 2002. Fungsi tokoferol
dan tocotrienol pada tanaman. Crit Rev Plant
Sci 21: 31–57.
Murakawa H, Bland CE, Willis WT, Dallman PR.
1987. Kekurangan zat besi dan fungsi neutrofil:
Tingkat yang berbeda dari koreksi depresi pada
oksidasi dan aktivitas myeloperoxidase setelah
perawatan besi. Darah 695: 1464–1468.
Murphy JF, Riordan J, Newcombe RG, Coles EC,
Person JF. 1986. Hubungan kadar hemoglobin pada
trimester pertama dan kedua dengan hasil kehamilan.
Lancelet 1: 992–995.
Dewan Penelitian Nasional (NRC). 1988. Merancang
makanan: Pilihan Produk Hewan di Pasar.
Washington: National Academy Press.
Nestel PJ, Pomeroy S, Kay S, P Komesaroff, Behrsing J,
Cameron JD, West L. 1999. Isoflavon dari semanggi
merah meningkatkan kepatuhan arteri sistemik tetapi
tidak ada lipid plasma pada wanita menopause. J Clin
Endo- crinol Metab 84: 895-898.
Nigam P, Singh D. 1995. Proses produksi fermentasi
xylitol — pengganti gula. Memproses Biokem 30:
117-124.
Niiler E. 2000. Peneliti FDA mempertimbangkan ikan
transgenik pertama. Bioteknologi Alam 18: 143.
Ough CS. 1976. Etilkarbamat dalam minuman
fermentasi dan makanan. I. Etil karbonat yang terjadi
secara alami. J Agric Food Chem 24: 323–328.
Pepper T, Olinger PM. 1988. Xylitol dalam koneksi
bebas gula. Makanan Technol 10: 98-106.
Persuy MA, Legrain S, Printz C, Stinnakre MG,
Lepourry L, Brignon G, Mercier JC. 1995. Ekspresi
tingkat-tinggi, tahap-dan-jaringan mamaria dari
minigene pengkodean n-casein kaprine didorong oleh
promotor promot-casein pada tikus transgenik. Gen
165: 291–296.
Peterson G, Barnes S. 1991. Genistein menghambat
pertumbuhan sel kanker payudara manusia:
Independensi dari reseptor estrogen dan resistansi
multi-obat.gen tance. Biochem Biophys Res Commun
179: 661–667.
Potrykus I. 2001. Beras emas dan seterusnya. Plant
Physiol 125: 1157-1161.
Prusiner SB. 1982. Partikel infeksi protein baru
menyebabkan scrapie. Sains 216: 136–144.
———. 1998. Prion. Proc Natl Acad Sci USA 95:
13363–13383.
Pursel VG, Pinkert CA, Miller KF, DJ Bolt, Campbell
RG, RD Palmiter, Brinster RL, Hammer RE. 1989.
Rekayasa genetika ternak. Sains 244: 1281–1288.
Rahman MA, Mak R, Ayad H, Smith A, Maclean N.
1998. Ekspresi gen hormon pertumbuhan piscine baru
menghasilkan peningkatan pertumbuhan nila
transgenik (Oreochromis niloticus). Penelitian Transg
7: 357-369.
Razak SA, Hwang GL, Rahman MA, Maclean N. 1999.
Kinerja pertumbuhan dan perkembangan gonad
meningkatkan nila transgenik Oreocromis niloticus
(L.) setelah triploidy yang diinduksi oleh goncangan
panas. Mar Biotechnol 1: 533–544.
Ravindran V, Bryden WL, Kornegay ET. 1995. Phytate:
Kejadian, bioavailabilitas dan implikasi dalam nutrisi
unggas. Unggas Avian Biol Rev 6: 125–143. Riley LW,
Remis RS, Helgerson SD, McGee HB, Wells JG, Davis
BR, RJ Hebert, Olcott ES, Johnson LM, Hargrett NT,
Blake PA, Cohen ML 1983. Kolitis hemoragik
berhubungan dengan Escherichia coli yang langka
serotipe. Engl J Med 308: 681-685 Baru.
Rinzler CA, Jensen MD, Brody JE. 1999. Buku
Makanan Lengkap Baru: Panduan Gizi, Medis, dan
Kuliner. New York: Fakta di File, Inc.
Saborio GP, Permanne B, Soto C. 2001. Deteksi sensitif
 protein prima patologis oleh amplifikasi siklik
protein salah lipatan. Alam 411: 810–813. Schultz
G, Soll J, Fiedler E, Schulze-Siebert D. 1985.
Sintesis prenilquinon dalam kloroplas. Fisik
iolo Plant 64: 123-129.
Sharma HC, Crouch JH, Sharma KK, Seetharama
N, Hash CT. 2002. Aplikasi bioteknologi untuk
perbaikan tanaman: Prospek dan kendala. Ilmu
Tumbuhan 163: 381–395.
Shintani D, DellaPenna D. 1998. Meningkatkan
kandungan vitamin E tanaman melalui rekayasa
metabolisme. Sains 282: 2098–2100.
Smirnoff N, Conklin P, Loewus F. 2001.
Biosintesis asam askorbat: Kebangkitan
kembali. Annu Rev Plant Physiol Plant Molec
Biol 52: 437–467.
Soll J, Kemmerling M, Schultz G. 1980. Sintesis
tokoferol dan plastoquinone dalam subfraksi
kloroplas bayam. Arch Biochem Biophy 204:
544–550.
Solomon MB, Pursel VG, Paroczay EW, Bolt DJ.
1994. Komposisi lipid dari jaringan karkas dari babi
transgenik yang mengekspresikan gen hormon
pertumbuhan sapi. J Anim Sci 72: 1242-1246.
Somogyi LP. 1996. Industri aroma dan aroma:
Melayani pasar global. Chem Ind 4: 170–173.
Southgate EM, Davey MR, Power JB, Marchant R.
1995. Faktor-faktor yang mempengaruhi rekayasa
genetika tanaman oleh pengeboman mikroproyekil.
Biotechnol Adv 13: 631-651.
GH Swift, RE Palu, MacDonald RJ, Brinster RL. 1984.
Ekspresi spesifik jaringan dari gen elastase I pankreas
tikus pada tikus transgenik. Sel 38: 639–646. Taylor
PG, Martinez C, Romano EL, Layrisse M. 1986. Efek
peptida yang mengandung sistein dilepaskan selama
pencernaan daging terhadap penyerapan zat besi pada
manusia.
Am J Clin Nutr 43: 68–71.
Taylor SL, Hefle SL. 2002. Makanan rekayasa
genetika: Implikasi untuk alergi makanan. Klinik
Alergi Curr Immunol 2: 249–252.
Theriault A, Chao, JT, Wang Q, Gapor A, dan Adeli
K. 1999. Tocotrienol: Tinjauan tentang potensi
terapi. Clin Biochem 32: 309–319.
Thies RS, Chen T, Davies MV, Tomkinson KN,
Pearson AA, Shakey QA, Wolfman NM. 2001.
Propeptida GDF-8 berikatan dengan GDF-8 dan
memusuhi aktivitas biologis dengan menghambat
pengikatan reseptor GDF-8. Faktor Pertumbuhan
18: 251–259.
Tranter HS, Dewan RB. 1982. Definisi antimikroba
dari telur unggas: Perspektif biologis dan dasar
kimia. J Appl Biochem 4: 295–338.
Tsukamoto C, Shimada S, Igita K, Kudou S, Kokubun
M, Okubo K, Kitamura K. 1995. Faktor-faktor yang
mempengaruhi kandungan isoflavon dalam biji
kedelai: Perubahan isoflavon, saponin, dan
komposisi asam lemak pada suhu yang berbeda
selama pengembangan benih. J Agric Food Chem
43: 1184–1192.
Tyagi S, Kramer FR. 1996. Beacon molekuler: Probe
yang berpendar saat hibridisasi. Bioteknologi Alam
14: 303–308.
United Nations Population Fund (UNFPA) 1995. Keadaan
Penduduk Dunia 1995. UNFPA 67: 16-17.
Urnovitz HB. 2003. Penyakit sapi gila: Kasus untuk
mempelajari hewan hidup. Redflagdaily (serial
online)www.redflagsweekly.com
Vain P,de Buyser J, Bui Trang, V, Haicour R, Henry Y.
1995. Pengiriman luar negeri ke dalam spesies monokotil.
Biotechnol Adv 13: 653-671.
Van de Guchte M, van der Wal FJ, Kok J, Venema G. 1992.
Ekspresi lisozim dalam Lactococcus lactis. Appl
Microbiol Biotechnol 37: 216–224.
Vanderhaegen B, Neven H, Coghe S, Verstrepen KJ,
Derdelinckx, G, Verachtert H. 2003. Bioflavoring dan
rujukan bir. Aplikasi Microbiol Biotechnol 62: 140–150.
Vasil IK. 2003. Ilmu dan politik bio-teknologi tanaman
— Perspektif pribadi. Bioteknologi Alam 21: 849-
851.
Dinding RJ. 2002. Mikroinjeksi pronuklear. Kloning
Stem Cells 3: 193–204.
Dinding RJ, Kerr DE, Bondioli KR. 1997. Sapi perah
transgenik: Rekayasa genetika dalam skala besar. J
Dairy Sci 80: 2213–2224.
Walter T, De Anraca I, Chadud P, Perales CG. 1986.
Anemia defisiensi besi: Efek buruk pada
perkembangan psikomotor bayi. Pediatri 84: 7–17.
Wang HJ, Murphy PA. 1996. Studi keseimbangan
massa isoflavon selama pemrosesan kedelai. J Agric
Food Chem 44: 2377–2383.
Washko PW, Welch RW, Dhariwal KR, Wang Y, Levine
M. 1992. Analisis asam askorbat dan asam
dehidroaskorbat dalam sampel biologis. Anal
Biochem 204: 1–14.
Wheeler G, Jones M, Smirnoff N. 1998. Jalur
biosintesis vitamin C pada tanaman tingkat tinggi.
Alam 393: 365-369.
Whitcombe D, Theaker J, Guy SP, Brown T, Little S.
1999. Deteksi produk PCR menggunakan amplikon
dan fluoresensi yang memeriksa sendiri.
Bioteknologi Alam 17: 804–807.
Tugas WHO / UNICEF / IVACGMemaksa. 1997.
Suplemen Vitamin A: Panduan Penggunaannya
dalam Pengobatan dan Pencegahan Kekurangan
Vitamin A dan Xerophthalmia, edisi ke-2. Jenewa,
Swiss.
Willmitzer L, Depicker A, Dhaese P, De Greve H,
Hernalsteens JP, Sarung M, Leemans J, Otten L,
Schroder J, Schroder G, Zambryski P, van Montagu
M, Schell J. 1983. Penggunaan Ti-plasmid sebagai
vektor gen yang diarahkan tanaman. Folia Biol 29:
106–114.
Wittwer CT, Hermann MG, Moss AA, Rasmussen RP.
1997. Pemantauan fluoresensi berkelanjutan untuk
amplifikasi DNA siklus cepat. Bioteknik 22: 130–
138.
Serigala dp, Mitalipov S, Norgren Jr, RB. 2001.
Teknologi transfer nuklir dalam kloning mamalia.
Arsip Penelitian Medis 32: 609–613.
Organisasi Kesehatan Dunia (WHO). 1992. Strategi
nasional untuk mengatasi malnutrisi mikronutrien.
Dokumen A45 / 3 Jenewa, Swiss.
Wyss M, Pasamontes L, Remy R, Kohler J, E Kusznir,
Gadient M, Muller F, van Loon APGM. 1998.
Perbandingan sifat termostabilitas tiga
 asam fosfatase dari cetakan: Aspergillus
Zambryski P. 1988. Proses dasar yang mendasari
fumiga- tus phytase, A. niger phytase, dan A.
transfer DNA yang dimediasi Agro-bakteri ke sel-sel
niger pH 2,4 asam fosfatase. Appl Environ
tanaman. Annu Rev Gent 22: 1–30.
Microbiol 64: 4446–4451.
Zbikowska HM. 2003. Ikan bisa menjadi yang pertama
Yang J, Ratovitski T, Brady JP, Solomon MB,
— Kemajuan dalam transgenesis ikan untuk aplikasi
Wells KD, Wall RJ. 2001. Ekspresi hasil
komersial. Penelitian Genetika 12: 379-389.
myostatin pro-utama pada tikus transgenik
Zheng Z, Sumi K, Tanaka K, Murai N. 1995. Protein
berotot. Mol Repro Dev 60: 351-361.
penyimpanan biji þ-phaseolin disintesis, diproses, dan
Kamu X, Al-Babili S, Klöti A, Zhang J, Lucca P,
terakumulasi dalam badan protein endosperma
Beyer P, Potrykus I. 2000. Rekayasa
transgenik tipe-II vacuolar. Plant Physiol 109: 777–
provitamin A (car-karoten) jalur biosintesis
786
menjadi endosperma beras (bebas karotenoid).
Sains 287: 303–305.