A.

Immunochromatography assay (ICA)

Immunochromatography assay (ICA) adalah perangkat sederhana yang dimaksudkan

untuk mendeteksi ada atau tidaknya target analit. Konsep imunokromatografi adalah
kombinasi kromatografi (pemisahan komponen sampel berdasarkan perbedaan
pergerakannya melalui sorben) dan reaksi imunokimia. Sistem imunokromatografi yang
paling luas adalah strip test. Strip yang digunakan untuk ICA mengandung empat komponen
utama,yaitu :

1. Aplikasi Sample Pad

Pad terbuat dari selulosa dan atau serat gelas dan sampel pada pad ini diterapkan
untuk memulai pengujian dimana memiliki fungsi untuk membaawa sampel ke
komponen lain. Pad sampel harus mampu mengangkut sampel dengan cara yang
halus, kontinu dan homogen. Pretreatment ini dapat meliputi pemisahan komponen
sampel, penghilangan gangguan, penyesuaian pH, dll. Sampel analit harus
ditambahkan ke pad aplikasi sampel untuk memulai pengujian.
2. Conjugate Pad
Merupakan tempat dimana molekul biorecognition berlabel (antibodi berlabel,
biasanya partikel emas nanocolloid) dikeluarkan. Bahan pad konjugat harus segera
melepaskan konjugat berlabel setelah kontak dengan sampel cairan bergerak.
Konjugat berlabel harus tetap stabil selama umur strip aliran lateral. Setiap variasi
dalam pengeluaran, pengeringan atau pelepasan konjugat dapat mengubah hasil
pengujian secara signifikan. Persiapan konjugat berlabel yang buruk dapat
mempengaruhi sensitivitas uji. Serat kaca, selulosa, poliester dan beberapa bahan
lain digunakan untuk membuat pad konjugat.
3. Membran Substrat (Nitroselulosa)
Garis uji dan kontrol digambar di atas selaput membran karena itu sangat penting
dalam menentukan sensitivitas ICA. Membran yang ideal harus memberikan
dukungan dan ikatan yang baik untuk menangkap probe (antibodi, dll.). Adsorpsi
nonspesifik di atas garis uji dan kontrol dapat mempengaruhi hasil uji secara
signifikan, sehingga membran yang baik akan ditandai dengan adsorpsi nonspesifik
yang lebih rendah di wilayah jalur uji dan kontrol. Pemberian bioreagen yang tepat,
pengeringan dan pemblokiran berperan dalam meningkatkan sensitivitas pengujian.
4. Adsorbent Pad
Adsorben berada di ujung strip. Ini juga membantu dalam mempertahankan laju
aliran cairan di atas membran dan menghentikan aliran balik sampel. Kapasitas
adsorben untuk menahan cairan dapat memainkan peran penting dalam hasil
pengujian.
Semua komponen ini diperbaiki atau dipasang di atas kartu pendukung. Bahan
untuk kartu pendukung sangat fleksibel karena tidak ada hubungannya dengan ICA
kecuali menyediakan platform untuk pemasangan yang benar dari semua
komponen. Dengan demikian, kartu pendukung berfungsi sebagai pendukung dan
memudahkan untuk menangani strip.
Langkah-langkah utama dalam ICA adalah:
1. Persiapan antibodi berlabel dan menangkap antibodi terhadap target analit;
2. Melumpuhkan antibodi berlabel ke bantalan konjugat, dan menangkap antibodi ke
membran strip untuk membentuk garis Uji / Kontrol.
3. Merakit semua komponen ke kartu dukungan setelah pengeluaran reagen pada
bantalan yang tepat.
4. Tambahkan sampel dan buffer ke pad sampel.
5. Tunggu aliran sampel melalui jalur tes dan kontrol selama 5-10 menit.
6. Baca hasilnya ketika warna mengungkapkan.

B. Format ICA
Pengujian aliran lateral pada dasarnya menggabungkan sejumlah varian seperti format,
molekul biorecognition, label, sistem deteksi dan aplikasi. Ada tiga jenis ICA berdasarkan
format deteksi, yaitu:
1. Uji Sandwich

Dalam format pengujian ini, antibodi yang dilapis label (Enzim atau nanopartikel
atau fluoresensi) diimobilisasi pada pad konjugat. Ini adalah adsorpsi sementara yang
dapat dihanyutkan oleh aliran larutan buffer apa pun. Antibodi penangkap terhadap
analit target diimobilisasi melalui jalur uji. Antibodi sekunder terhadap antibodi
berlabel diimobilisasi pada zona kontrol (Gambar 2).
 Untuk memulai tes, sampel yang mengandung analit diterapkan ke pad aplikasi
sampel dan kemudian bermigrasi ke bagian strip lainnya. Pada pad konjugat, analit
target ditangkap oleh antibodi berlabel yang diimobilisasi dan menghasilkan
pembentukan kompleks antibodi berlabel analit. Kompleks ini sekarang mencapai
membran nitroselulosa dan bergerak di bawah aksi kapiler. Pada garis uji, kompleks
antibodi berlabel analit ditangkap oleh antibodi lain yang merupakan utama analit.
Analit menjadi terjepit di antara antibodi berlabel dan primer yang membentuk
kompleks antibodi-analit-primer berlabel. Kelebihan antibodi berlabel akan ditangkap
di zona kontrol oleh antibodi sekunder. Buffer atau larutan berlebih masuk ke pad
absorpsi. Intensitas warna pada garis uji sesuai dengan jumlah analit target dan diukur
dengan pembaca strip optik atau diperiksa secara visual. Penampilan warna pada garis
kontrol memastikan bahwa strip berfungsi dengan baik.
2. Uji Kompetitif
Format kompetitif memiliki dua tata letak. Dalam tata letak pertama, solusi yang
mengandung analit target diterapkan ke pad aplikasi sampel dan antibodi berlabel
awalan akan terhidrasi dan mulai mengalir dengan cairan bergerak. Garis uji
mengandung antigen pra-imobilisasi (analit yang sama untuk dideteksi) yang berikatan
khusus dengan label konjugat. Garis kontrol mengandung antibodi sekunder pra-
imobilisasi yang memiliki kemampuan untuk mengikat dengan antibodi berlabel.
Ketika sampel cair mencapai pada garis uji, antigen pra-amobil akan mengikat konjugat
berlabel jika analit target target dalam larutan sampel tidak ada atau hadir dalam jumlah
yang rendah sehingga beberapa situs konjugat antibodi berlabel kosong. Antigen dalam
larutan sampel dan yang diimobilisasi pada jalur uji bersaing untuk mengikat dengan
konjugat berlabel (Gambar 3). Dalam tata letak lain, konjugat analit berlabel dibagikan
pada pad konjugat sementara antibodi primer untuk analit dikeluarkan pada garis uji.
Setelah penerapan solusi analit, terjadi persaingan antara analit dan analit berlabel
untuk mengikat dengan antibodi primer pada garis uji.
Format tersebut paling sesuai untuk senyawa dengan berat molekul rendah yang
tidak dapat mengikat dua antibodi secara bersamaan. Tidak adanya warna pada garis uji
merupakan indikasi untuk adanya analit sementara penampilan warna pada garis uji dan
kontrol menunjukkan hasil negatif.
3. Uji Deteksi Multipleks
Format deteksi multipleks digunakan untuk mendeteksi lebih dari satu spesies target
dan pengujian dilakukan pada strip yang berisi garis uji yang sama dengan jumlah
spesies target yang akan dianalisis. Sangat diinginkan untuk menganalisis beberapa analit
secara bersamaan di bawah kondisi yang sama. Format deteksi multipleks sangat berguna
dalam diagnosis klinis dimana banyak analit yang saling tergantung dalam memutuskan
tentang stadium penyakit yang harus dideteksi. Strip aliran lateral untuk keperluan ini
dapat dibangun dengan berbagai cara misalnya, dengan menambah panjang dan garis uji
pada strip konvensional, membuat struktur lain seperti benang paralel, bintang atau
bentuk-T. Bentuk strip untuk ICA akan ditentukan oleh jumlah analit target.
Immuno assay merupakan teknologi yang sangat tepat bila diterapkan pada berbagai
macam point-of-care (POC) atau aplikasi penggunaan lapangan. Keuntungan dari sistem
lateral flow immunoassay (LFIA) sudah dikenal luas:
a. Relatif mudah dalam proses pembuatan dan peralatan sudah dikembangkan dan
tersedia di pasaran.
b. Mudah terukur ke produksi volume tinggi
c. Stabil; masa simpan 12-24 bulan tanpa pendinginan
d. Kemudahan penggunaan: langkah dan interpretasi yang bergantung pada operator
minimal
e. Dapat menangani volume kecil dari beberapa jenis sampel
f. Dapat diintegrasikan dengan elektronik onboard, sistem pembaca, dan sistem
informasi
g. Biaya yang relatif rendah dan jangka waktu pendek untuk pengembangan dan
persetujuan
h. Kehadiran dan penerimaan pasar, pendidikan yang diperlukan untuk pengguna
dan regulator
Contoh aplikasi yang sudah beredar di pasaran : test untuk malaria, NS-1 of Dengue, TBC,
Covid,dsb.
Daftar Pustaka

Dzantiev B B, Byzova N A, Urusov A E, et al. Immunochromatographic methods in food

analysis[J]. TrAC Trends in Analytical Chemistry, Vol.55: 81-93.

Wong, R.C. and Tse, H.Y., 2009. Lateral Flow Immunoassay, New York: Humana Press.

Zhou G, Mao X, Juncker D. 2012. Immunochromatographic assay on thread[J]. Analytical

chemistry,Vol.84(18): 7736-7743

Sajid M, Kawde A N, Daud M. 2014. Designs, formats and applications of lateral flow
assay: A literature review[J]. Journal of Saudi Chemical Society