BAB III

METODE PRAKTIKUM

A. Waktu dan Tempat

Hari / Tanggal : Jumat / 18 September 2020
Waktu : Pukul 13.00-15.00 WITA
Tempat : Laboratorium Mikrobiologi FMIPA UNM
B. Alat dan Bahan
1. Alat :
a. Cawan petri 4 buah
b. Batang penyebar 1 buah
c. Spoid 4 buah
d. Botol You C 4 buah
e. Bunsen 1 buah
f. Enkas 1 buah
g. Erlenmeyer 1 buah
h. Swab 1 buah
i. Sprayer 1 buah
2. Bahan :
a. Air kolam 0,1 ml
b. Medium NA Secukupnya
c. Plastik wrap secukupnya
d. Sampel flora normal belakang daun telinga secukupnya

A. Prosedur Kerja
1. Pengenceran
a. Siapkan enkas, sterilkan dengan menggunakan bunsen selama 15 menit.
b. Masukkan kedalam enkas alat yang digunakan dalam pengenceran seperti medium
NA, 5 spoit, 4 botol you c yang berisi aquades 1 ml, dan sampel air sumur. Terlebih
dahulu semprot dengan alcohol.
c. Di dalam enkas, ambil 1 ml air sumur dengan menggunakan spoit dan masukkan
kedalam botol you c 1, kemudian homogenkan (sebagai pengenceran 1 atau 10-1).
 d. Ambil 1 ml sampel dalam botol 1 tadi dengan menggunakan spoit dan masukkan
kedalam botol you c 2, kemudian homogenkan (sebagai pengenceran 2 atau 10-2).
e. Ambil 1 ml sampel dari botol 2 dengan menggunakan spoit dan masukkan kedalam
botol you c 3, kemudian homogenkan (sebagai pengenceran 3 atau 10-3).
f. Ambil 1 ml sampel dari botol 3 dengan menggunakan spoit dan masukkan kedalam
botol you c 4, kemudian homogenkan (sebagai pengenceran 4 atau 10-4).
g. Pengenceran hanya kita lakukan sebanyak 4 kali.
2. Isolasi Metode Sebar
a. Mensterilkan seluruh peralatan yang akan digunakan dengan cara menyemprotnya
menggunakan alkohol 70%, lakukan pula hal yang sama terhadap tangan hingga siku.
b. Setelah steril, memasukkan semua alat dan bahan yang telah setril ke dalam enkas
c. Menyiapkan cawan petri yang berisi medium Nutrient Agar yang telah didiamkan
hingga padat
d. Mengambil 0,1 ml suspensi sampel pada pengenceran terakhir
e. Memfiksasi cawan petri terlebih dahulu dengan cara meletakkannya diatas api bunsen
f. Membuka penutup cawan petri, kemudian memasukkan spuit dan meletakkan suspensi
sampel diatas medium NA yang telah padat
g. Mengambil batang penyebar, kemudian memfiksasinya diatas apai bunsen
h. Meratakan suspensi sampel menggunakan batang penyebar hingga seluruh permukaan
medium NA tertutupi oleh suspensi sampel
i. Menutup kembali cawan petri kemudian merekatkannya menggunakan plastik wrap
j. Menginkubasi cawan petri di dalam inkubator selama 24 jam
3. Isolasi Mikroba Metode Tuang
a. Menyiapkan dan mensterilisasi cawan petri di atas bunsen,
b. Ambil 0,1 ml sampel pengenceran 4 pada botol 4 dan kemudian masukkan kedalam
cawan petri.
c. Fiksasi mulut Erlenmeyer dan tuangkan medium NA komposisi 1 cair dari Erlenmeyer
kedalam cawan petri secara merata.
d. Putar-putar cawan petri di atas api Bunsen agar sampel merata
e. Tutup cawan petri dan tutupi pinggiran cawan petri dengan plastic wrap
f. Diamkan selama 15 menit.
4. Isolasi Flora Normal

a. Membersihkan tangan menggunakan alcohol 70 %

b. Memfiksasi cawan petri berisi medium padat yang ingin di pakai didalam enkas
menggunakan Bunsen.
c. Mengambil swab dan menggoreskan kekulit kepala.
d. Menggoreskan swab tadi secara perlahan pada medium dengan cara zig zag.
e. Kemudian menutup cawan petri dan memfiksasi kembali.
f. Dan menutup rapat cawan petri menggunakan plastik wrap.
5. Isolasi Mikroba Udara

a. Menyiapkan cawan petri yang berisi medium Nutrient Agar yang telah didiamkan
hingga padat
b. Meletakkan cawan petri tersebut diatas meja pada ruangan Laboratorium Mikrobiologi
dengan posisi cawan petri yang terbuka
c. Mendiamkannya selama 15 menit
d. Menutup kembali cawan petri setelah didiamkan selama 15 menit
e. Merekatkan sisi cawan petri menggunakan plastik wrap
f. Menginkubasi cawan petri di dalam inkubator
 BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN

A. Hasil Pengamatan

Elevans
No. Medium Sampel Bentuk Tepi Warna Tekstur
i

Irregular
Coklat Tidak
& Wavy Effuse
susu berlendir
spreading

Round
with Putih Tidak
Wavy Effuse
raised susu berlendir

Udara margin
1
Putih Low
Round Smooth Berlendir
susu convex

Hitam
Convex Tidak
Rhizoid Ciliate kecok-
rugose berlendir
latan

Putih Convex Tidak

Rhizoid Ciliate
susu rugose berlendir

Air Irregular
Tidak
2 kolam & Wavy Cream Effuse
berlendir
(sebar) spreading
 Elevans
No. Medium Sampel Bentuk Tepi Warna Tekstur
i

Flora Tidak
3 Round Smooth Cream Effuse
Normal berlendir

Air
4 kolam - - - - -
(tuang)