ALAT

1. Spektrofotometer
2. Sentrifuga
3. Spuit
4. Pipet
5. Kuvet/tabung reaksi

BAHAN

1. Serum atau plama heparin atau EDTA

2. Aquadest
3. Alkohol 70%
4. Reagen glukosa terdiri dari :
a. Reagen 1 :
1) Tris buffer pH 7,8 : 100 mmol/L
2) Mg2+ : 4 mmol/L
3) ATP : 2,1 mmol/L
4) NAD : 2,1 mmol/L
b. Reagen 2:
1) Mg2+ : 4 mmol/L
2) Hexokinase (HK) : ≥ 7,5 kU/L
3) G6P-DH : ≥ 7,5 kU/L

Prosedur
Panjang gelombang : 340 nm, Hg 334 nm, Hg 365 nm
Diameter kuvet : 1 cm
Suhu : 20-25⁰C atau 37⁰C
a. Pengukuran terhadap blanko reagen (BR)
Pengukuran substrat:
Blanko reagen (BR) Sampel atau kalibrator
Sampel atau kalibrator - 10 µL
Aquadest 10 µL -
Reagen 1 1000 µL 1000 µL
 Dicampurkan dan diinkubasi 1-5 menit pada 20-25⁰C atau
37⁰C. Kemudian absorbansi A1 dibaca lalu ditambahkan reagen
2

Blanko reagen (BR) Sampel atau kalibrator

Reagen 2 250 µL 250 µL

Dicampurkan dan diinkubasi 5 menit pada 37⁰C atau 10 menit

pada 20-25⁰C . Kemudian absorbansi A2 terhadap BR dibaca
dalam waktu 30 menit. ΔA= (A2-A1) sampel atau kalibrator.

b. Pengukuran Sampel
Blanko reagen (BR) Sampel atau kalibrator
Sampel atau kalibrator - 10 µL
Aquadest 10 µL -
Monoreagen 100 µL 100 µL

Dicampurkan dan diinkubasi 5 menit pada 37⁰C atau 10 menit

pada 20-25⁰C . Kemudian absorbansi terhadap BR dibaca
dalam waktu 30 menit. ΔA= A sampel atau kalibrator.

c. Perhitungan
- Dengan faktor
Kalikan ΔA dengan faktor f dari tabel dibawah ini untuk menghitung konsentrasi glukosa.
Pengukuran Substrat f (mg/dl) F (mmol/l)
340 nm 361 20,0
Hg 334 nm 367 20,5
Hg 365 nm 667 37,1

Pengukuran Sampel f (mg/dl) F (mmol/l)

340 nm 289 16,0
Hg 334 nm 294 16,4
Hg 365 nm 535 29,7

- Dengan Kalibrator
 ΔA Sampel
Glukosa (mg/dL) = x Kons.Kalibrator (mg/dL)
ΔA Kalibrator
- Faktor Konversi
Glukosa (mg/dL) x 0,05551 = Glukosa (mmol/L)