A.

PEMBUATAN MEDIA KULTUR MIKROORGANISME DAN PEMBIAKAN

MIKROBA
1. Tujuan
1) Mengetahui jenis media dan pembuatannya
2) Mampu membuat media tumbuh mikroba
3) Mampu menganalisis mikroba melalui berbagai cemaran
2. Alat
1. Cawan Petri,
2. Erlenmeyer,
3. Autoklaf,
4. Pipet mohr,
5. Sudip,
6. Neraca analitik,
7. Magnetic stirer,
8. Hot plate dan
9. Rak tabung reaksi
3. Bahan
1. Akuades,
2. Nutrient Agar (NA)
3. Susu Basi
4. Anti septik
5.
6. Prosedur Kerja
7. Pembuatan Media NA
1. 1,2 gram nutrien agar (NA) ditimbang dan dimasukkan ke dalam Erlenmeyer.
2. Ditambahkan 50 ml akuades.
3. Dipanaskan di atas hot plate hingga mendidih sambil diaduk dengan magnetic stirer
sampai homogen, lalu dibiarkan beberapa saat.
4. Dipipet sebanyak 4 ml dan dimasukkan ke dalam tiga buah cawan petri.
5. Cawan petri ditutup dengan kertas yang diikat dengan karet gelang.
6. Dimasukkan dalam autoklaf untuk disterilkan beserta alat-alat yang akan digunakan
selama 30 menit pada suhu 121̊C dan tekanan 15 psi.
7. Simpan pada lemari penyimpanan media

8. Pembiakan Mikroba
1. Sediakan air yang telah digunakan untuk mencuci tangan yang kotor, teteskan air
pada media kultur dan beri keterangan pada cawan petri kemudian simpan dalam
lemari selama 1 hari.
2. Sediakan air yang telah digunakan untuk mencuci tangan yang telah diberi antiseptik,
teteskan air pada media kultur dan beri keterangan pada cawan petri kemudian simpan
dalam lemari selama 1 hari.
 3. Letakkan media kultur dihadapan mulut sambil berbicara (untuk menangkap mikroba
yang keluar bersama liur), beri keterangan pada cawan petri petri kemudian simpan
dalam lemari selama 1 hari.
4. Letakkan media kultur pada udara terbuka selama 3 jam, beri tanda pada cawan petri.
5. Teteskan susu basi pada media kultur, beri keterangan pada cawan petri petri
kemudian simpan dalam lemari selama 1 hari.

9. Tabel Hasil Pengamatan

No. Jenis Percobaan Gambar Keterangan

B. PENGECATAN DIFFERENSIAL (GRAM)

1. Tujuan
1) Mahasiswa dapat menunjukkan tatalaksana pengecatan differensiasi (Gram).
 2) Mahasiswa dapat membedakan struktur dalam bakteri, seperti dinding sel.

2. Bahan
1. Biakan mikroorganisme
2. Zat warna: carbol fuchsin, crystal violet, dan methylene blue.
3. Minyak emersi
4. Alkohol 95%

3. Alat
1. Kaca benda (object glass)
2. Pensil kaca
3. Rak untuk pewarnaan
4. Bunsen/lapu spiritus
5. Mikroskop
6. Penjepit tabung reaksi

4. Tatalaksana Prosedur pemeriksaan

1. Membersihkan kaca benda dengan kertas saring dan melewatkannya di api untuk
menghilangkan kotoran dan lemak.
2. Membuat tanda lingkaran kira-kira berdiameter 2-3 cm di bagian bawah kaca benda
menggunakan pensil penanda dan beri label.
3. Membuat sediaan pada kaca benda, yaitu suspensi bakteri dipaparkan di atas kaca benda
sehingga merupakan lapisan tipis, keringkan, lalu sediaan ini direkatkan dengan cara
dilewatkan di atas nyala api dua atau tiga kali.
4. Meneteskan 2 ml crystal violet dan dibiarkan selama 1 menit.
5. Mencuci dengan air mengalir secara perlahan.
6. Meneteskan 2 ml cairan Gram’s iodine (lugol), dan dibiarkan selama 1 menit.
7. Mencuci dengan air mengalir secara perlahan.
8. Meneteskan 2 ml etil alkohol 95% beberapa detik sehingga tidak ada lagi zat warna ungu
yang mengaliri sediaan.
9. Mencuci dengan air.
10. Meneteskan 2 ml safranin selama 45 detik, mencuci dengan air dan dikeringkan di udara.
11. Selanjutnya teteskan 1 ml minyak emersi pada sampel dan lihat di bawah mikroskop
dengan pembesaran 10 x 100.
 Gambar 1. Alur Pemeriksaan Differensial/Gram (Gita Pawana, 2012)

4. Interpretasi Hasil
1) Bakteri Gram positif akan berwarna UNGU.
2) Bakteri Gram negatif akan berwarna MERAH (dapat dilihat pada topik
pemeriksaan mikroskopis bakteri dan jamur).

5. Tugas Mahasiswa
1) Setiap mahasiswa mengerjakan pewarnaan Gram untuk masing-masing biakan
bakteri dan jamur yang telah disediakan.
2) Mengamati hasil pewarnaan Gram dengan menggunakan mikroskop lensa
obyektif 100x.
3) Menggambarkan hasil pewarnaan yang diamati.
 6. Lembar Kerja Praktikum Mikrobiologi

……………………………
Nama Mikroba Nama Mikroba Nama Mikroba