IDENTIFIKASI ASAM AMINO

I Gusti Agung Ayu Indah Sukmahendri

1813081004
Jurusan Kimia
Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam
Universitas Pendidikan Ganesha

ABSTRAK
Asam amino adalah suatu senyawa yang mempunyai dua gugus fungsi yaitu gugus amino
dan gugus karboksil. Pada asam amino terikat pada atom karbon yang berdekatan dengan
gugus karboksil (C-α) atau gugus amina dan gugus karboksil dalam asam amino terikat pada
atom karbon yang sama. Dalam bentuk larutan asam amino bersifat amfoterik dimana
cenderung menjadi asam pada larutan basa dan menjadi basa pada larutan asam. Hal tersebut
dapat terjadi karena asam amino dapat menjadi zwiterr-ion. Rantai samping dapat membuat
asam amino bersifat asam lemah, basa lemah, hidrofilik jika polar dan hidrofobik jika non
polar. Tujuan dari praktikum ini adalah, pertama untuk mengidentifikasi asam-asam amino yang
terdapat pada larutan protein melalui uji millon, uji hopkins-cole, dan uji ninhidrin. Kedua
adalah untuk mengidentifikasi asam amino sistein dengan uji PbS dan uji nitroprusida. Serta
ketiga adalah untuk mengidentifikasi jenis asam amino yang terdapat dalam sampel unknown
melalui uji reaksi asam amino. Dari hasil percobaan sampel albumin telur menghasilkan uji
positif pada semua uji asam amino, sampel larutan glisin positif pada uji ninhidrin yang artinya
larutan ini mngendung asam alfa amino bebas. Sampel larutan triptofan menghasilkan uji positif
terhadap uji Hopkins-cole dan ninhidrin yang artinya struktur senyawanya mengandung cincin
indol dan asam a amino bebas. Sampel larutan tirosin positif pada uji millon dan ninhidrin yang
berarti larutan ini pada struktur senyawanya mengandung gugus fenol dan asam α amino bebas.
Fenilalanin menghasilkan uji positif terhadap uji ninhidrin yang artinya senyawanya
mengandung asam α amino bebas. Larutan sistein positif terhadap uji PbS yang berarti senyawa
ini mengandung unsur S dalam strukturnya. Dan pada sampel uknown menunjukan uji positif
pada uji ninhidrin yang artinya mengandung asam α amino bebas.
Key word: Asam Amino, Uji Kualitaif Asam Amino, dan Uji Kualitatif Protein

ABSTRACT
Amino acid is a compound that has two functional groups, namely an amino group and a
carboxyl group. Amino acids are attached to a carbon atom adjacent to a carboxyl group (C-α)
or an amine group and a carboxyl group in an amino acid is bonded to the same carbon atom. In
the form of an amino acid solution is amphoteric which tends to be acidic in alkaline solutions
and to alkaline in acidic solutions. This can happen because amino acids can become zwiterr-
ions. Side chains can make amino acids weak acids, weak bases, hydrophilic if polar and
hydrophobic if non polar. The purpose of this practicum is, firstly, to identify the amino acids
present in protein solutions through the Millon test, Hopkins-cole test, and ninhydrin test. The
second is to identify the amino acid cysteine with the PbS test and nitropruside test. And the third
is to identify the types of amino acids contained in unknown samples through amino acid
reaction tests. From the results of the experiment, the egg albumin sample produced positive
tests on all amino acid tests, the glycine solution sample was positive in the ninhydrin test, which
means that this solution contains free alpha amino acids. Tryptophan solution samples test
positive for the Hopkins-cole and ninhydrin tests, which means that the compound structure
contains an indole ring and free a amino acids. The sample of the tyrosine solution was positive
in the Millon and ninhydrin test, which means that this solution in its compound structure
contains phenol groups and free α amino acids. Phenylalanine produced a positive test on the
ninhydrin test, which means that the compound contains free α amino acids. The cysteine
solution is positive for the PbS test, which means that this compound contains the element S in its
structure. And the UKnown sample shows a positive test on the ninhydrin test, which means that
it contains free α amino acids.
Key words: Amino Acids, Amino Acid Qualitative Test, and Protein Qualitative Test

PENDAHULUAN
Protein ialah polimer alami yang terdiri
dari sejumlah unit asam amino (amino acid)
yang berikatan satu dengan lainnya lewat
ikatan amina (atau peptida). Peptida ialah
oligomer dari asam amino yang memainkan
peran penting dalam banyak proses biologis.
Contohnya, peptide hormone insulin
mengatur kadar gula darah, bradikinin
mengatur tekanan darah, dan oksitosin
meregulasi kontraksi uterus dan laktasi. Jadi,
protein, pepetida, dan asam amino
merupakan bahan yang penting bagi
struktur, fungsi, dan reproduksi makhluk
hidup (Haryanto, 2004).
Gambar 1. Struktur Asam Amino
Sumber: google
Asam amino adalah asam karboksilat
yang memiliki gugus amino. Asam amino
juga merupakan unit penyusun protein, asam
amino yang ada pada komponen protein
memiliki gugus (-NH2). Asam amino adalah
suatu senyawa yang mempunyai dua gugus
fungsi yaitu gugus amino dan gugus
karboksil. Pada asam amino terikat pada
atom karbon yang berdekatan dengan gugus
karboksil (C-α) atau gugus amina dan gugus
karboksil dalam asam amino terikat pada
atom karbon yang sama. Karbon α pada
asam amino merupakan pusat kiral, kecuali
pada glisin yang gugus R-nya adalah atom
H. Dengan demikian seluruh asam amino
yang diturunkan dari protein (kecuali glisin)
bersifat optik aktif. Perlu diperhatikan
bahwa konversi Fischer yang biasa
digunakan pada karbohidrat dapat pula
diterapkan pada asam amino (Hart, 1990).
Asam amino biasanya diklasifikasikan
berdasarkan sifat kimia rantai samping.
Rantai samping dapat membuat asam amino
bersifat asam lemah, basa lemah, hidrofilik
jika polar dan hidrofobik jika non polar.
Berdasarkan sintesisinya 20 asam amino
(biosintesis) dikelompokan menjadi dua
yaitu asam amino esensial dan asam amino
non esensial. Asam amino esensial
merupakan asam amino yang diperoleh dari
makanan sehari – hari yang dikonsumsi
karena tidak dapat disintesis oleh tubuh
sedangkan asam amino non-esensial adalah
asam amino yang dapat disintesis oleh tubuh
melalui perombakan dari senyawa lain.
Dalam bentuk larutan asam amino bersifat
amfoterik dimana cenderung menjadi asam
pada larutan basa dan menjadi basa pada
larutan asam. Hal tersebut dapat terjadi
karena asam amino dapat menjadi zwiterr-
ion. Asam amino murni tidak memiliki
warna, berbentuk kristal, dan larut dalam air
dan pelarut yang bersifat polar, tidak larut
dalam pelarut nonpolar, memiliki titik lebur
yang lebih tinggi dari senyawa karboksilat
dan amina, memiliki momen dipol yang
besar, bersifat elektrolit, serta kurang basa
dibandingkan amina dan kurang asam jika
dibandingkan dengan karboksilat.

Gambar 2. 20 asam macam asam
amino
Identifikasi asam amino dilakukan
secara kualitatif yang bertujuan untuk
mengetahui keberadaan asam amino dalam
protein. Identifikasi asam amino dilakukan
dengan beberapa uji seperti:
Uji Millon
Reagen milon adalah larutan
merkuro dan merkuri nitrat dalam asam
nitrat. Apabila pereaksi ini ditambahkan
pada larutan protein, akan menghasilkan
endapan putih yang dapat berubah menjadi
merah oleh pemanasan. Pada dasarnya
reaksi ini positif untuk fenol-fenol, karena
terbentuknya senyawa merkuri dengan
gugus hidroksifenil yang berwarna. Protein
yang mengandung tirosin akan
menghasilkan hasil positif.
Uji Ninhidrin
Reagen ninhidrin yang merupakan
hidrat dari triketon siklik. Bila bereaksi
dengan asam amino maka akan
menghasilkan warna ungu. Reagen ini juga
dapat digunakan untuk menetapkan
konsentrasi asam amino dalam larutan.
Prolin dan hidroksiprolin yang gugus
aminonya tersubstitusi, memberikan hasil
reaksi lain yang berwarna kuning.
Uji Hopkins-Cole
Reaksi Hopkins-Cole mengunakan
reagen Hopkins-Cole mengandung asam
glioksilat (CHO.COOH). Karena triptofan
berkondensasi dengan aldehid dalam
suasana asam sulfat dan membentuk
kompleks berwarna. Uji positif ditandai
dengan cincin ungu pada batas antara kedua
lapisan tersebut. Pada dasarnya reaksi ini
memberi hasil positif khas untuk gugus
indol dalam protein.
Uji PbS
Belerang yang terdapat didalam
asam amino sistein dibebaskan sebagai ion
sulfida dengan adanya NaOH. Ion sulfida
akan bereaksi dengan ion Pb2+ membentuk
endapan berwarna hitam.
Uji Nitroprusida
Reaksi Nitroprusida merupakan
reaksi antara dua gugus sulfidril dari asam
amino sistein, peptida (glutation) atau
protein dengan natrium nitroprusida dalam
amino berlebih menghasilkan kompleks
berwarna merah.
METODE
Metode yang digunakan adalah metode
kualitatif untuk mengetahui asam amino
yang terdapat dalam sampel.
Alat dan Bahan
Alat yang digunakan dalam
praktikum ini yaitu pipet tetes, tabung
reaksi, rak tabung reaksi, penjepit kayu,
lampu spritus, korek api, gelas ukur 10 mL,
gelas kimia 25 mL, dan batang pengaduk.
Sedangkan bahan yang digunkan dalam
praktikum ini yaitu reagen Millon, reagen
Pb-asetat, reagen Hopkins-Cole, larutan
asam amino, larutan protein, larutan H2SO4
pekat, larutan protein (albumin telur 1:5),
larutan fenilalanin 1%, larutan glisin 1%,
larutan tirosin 1%, larutan ninhidrin, larutan
NaOH, larutan Natrium Nitruprusida, kristal
sistein, triptofan dan akuades.
Prosedur Kerja
Pada uji Millon 5 tetes reagen Millon
ditambahkan ke dalam 3 mL larutan albumin
telur dan dipanaskan, kemudian dilakukan
hal yang sama pada larutan asam amino
seperti tirosin, fenilalanin, tritopan, glisin
dan sampel uknown. Kemudian diamati
perubahan yang terjadi.
Pada uji Ninhidrin 0,5 mL larutan
Ninhidrin 0,1% ke dalam 5 mL larutan
albumin telur. Kemudian campuran
dipanaskan hingga mendidih, dan diamati
perubahan warna yang terjadi. Percobaan ini
diulangi kembali terhadap larutan asam
amino seperti tirosin, fenilalanin, tritopan,
glisin dan sampel uknown.
Pada uji Hopkins-Cole 2 mL reagen
Hopkins-Cole ditambahkan ke dalam 2 mL
larutan albumin telur, kemudian larutan
H2SO4 ditambahkan dikit demi sedikit
melalui sisi tabung. Tabung reaksi
digoyangkan secara perlahan agar terjadi
perubahan warna, dan perubahan tersebut
diamati. Percobaan ini diulangi untuk
larutan asam amino seperti tirosin,
fenilalanin, tritopan, glisin dan sampel
uknown.
Pada uji Pb-asetat yaitu 2 mL larutan
NaOH dan 2 tetes Pb-asetat ditambahkan ke
dalam 5 mL larutan albumin telur.
Kemudian campuran tersebut dipanaskan
diatas pemanas air, jika positif akan berubah
menjadi warna coklat yang akhirnya
menjadi warna hitam. Dilakukan langkah-
langkah yang sama pada larutan sistein dan
sampel uknown.
Pada uji Nitroprusida Kristal sistein
hidroklorida dilarutkan ke dalam 5 mL air.
Kemudian ditambahkan 0,5 mL larutan
natrium nitroprusida 1%. Serta 0,5 mL
ammonium hidroksida juga ditambahkan.

HASIL DAN PEMBAHASAN

Tabel 1. Hasil Pengamatan
Sampel Uji Uji Uji Uji Uji
Millon Ninhidrin Hopkins-Cole PbS Nitroprusida
Albumin Telur + + + + -
Glisin - + - - -
Tiptofan - + + - -
Tirosin + + - - -
Fenilalanin - + - - -
Sistein - - - + +
Sampel - + - - -
Uknown

Pada uji Millon khusus digunakan Pada tabel 1 dapat dilihat bahwa albumin
untuk identifikasi asam amino yang telur menghasilkan uji positif pada uji
mengandung fenol, dimana terbentuknya millon, karena sampel albumin telur
endapan merah yang menandakan uji positif. menghasilkan endapan berwarna merah
setelah dipanaskan. Selain itu pada
percobaan sampel tirosin juga menghasilkan
uji positif pada saat uji millon, sehingga hal
tersebut menunjukan bahwa pada albumin
telur mengandung gugus tirosin. Karena
tirosin merupakan asam amino yang
mengandung gugus fenol. Sedangkan pada
Gambar 1. Reaksi Uji Millon
Pada uji Hopkins-Cole reagen
Hopkins-Cole akan bereaksi dengan protein
yang mengandung triptofan. Cincin indol
akan bereaksi dengan asam glioksilik
dengan katalis asam kuat membentuk
produk berwarna ungu. Pada tabel 1
menunjukan bahwa albumin telur dan
triptofan menghasilkan uji positif pada uji
Hopkins-Cole karena terbentuknya cincin
warna ungu dimana triptofan berkondensasi
Gambar 2. Reaksi Uji Hopkins-Cole
Pada uji PbS ini dapat
mengidentifikasi adanya belerang pada asam
amino. Pada protein juga memiliki ikatan
disulfida dan asam amino yang mengandung
atom S yaitu sistein. Uji positif PbS ditandai
dengan terbentuknya endapan berwarna
hitam. Dari tabel 1 yang merupakan hasi
pengamatan dari PbS dapat dilihat albumin
telur dan sistein menghasilkan uji positif
terhadap uji PbS. Albumin telur saat
dipanaskan menghasilkan endpaan berwarna
hitam, hal ini dikarenakan ion sulfida yang
hasil pengamatan glisin, triptofan,
fenilalanin, sistein dan sampel uknown
menunjukan uji negatif pada uji millon yang
artinya pada glisin, triptofan, fenilalanin,
sistein dan sampel uknown tidak memiliki
gugus fungsi fenol seperti tirosin.
dengan aldehid dalam suasana asam sulfat.
Asam sulfat digunakan dalam uji ini
bertujuan sebagai oksidator yang kuat untuk
membantu reaksi yang terjadi. Sehingga
pada uji ini dapat dilihat bahwa albumin
telur mengandung triptofan. Sedangkan pada
glisin, tirosin,fenilalanin, sistein dan sampel
uknown menunjukan uji negatif yang artinya
sampel ini tidak mengandung gugus indol.
bereaksi dengan ion Pb2+ dengan
membentuk endapan hitam. Penambahan
dari NaOH bertujuan untuk
mendenaturasikan protein sehingga ikatan
yang menghubungkan atom S dapat terputus
oleh Pb-asetat membentuk PbS, sedangkan
Pb berfungsi sebagai donor Pb+. Untuk
sampel uknwon menghasilkan uji negatif
pada uji PbS karena tidak menghasilkan
endapan hitam pada saat dipanaskan, ini
berarti sampel uknown tidak memiliki atom
S pada strukturnya.
 Gambar 3. Reaksi Disulfida
Pada uji nitroprusida spesifik untuk
asam amino sistein yang memiliki gugus
sulfihidril (SH) pada keadaan basa
membentuk produk berwarna merah. Dan
dilihat dari tabel 1 dimana sistein
menghasilkan uji positif pada uji
nitroprusida karena pada sistein
mengandung gugus sulfidril (-SH) bebas
Gambar 4. Reaksi Uji Nitroprusida
Ninhidrin merupakan reagen yang
berfungsi untuk mendeteksi asam amino dan
menetapkan konsentrasinya dalam larutan.
Senyawa ini merupakan hidrat dari triketon
siklik dan bila bereaksi dengan asam amino
akan menghasilkan kompleks berwarna
terutama kompleks warna ungu. Pada uji
ninhidrin senyawa yang memiliki gugus
amino dan gugus karboksilat bebas dapat
bereaksi dengan ninhidrin membentuk
(sisteina) memberikan warna kemerah-
merahan jika direaksikan dengan natrium
prusida, Na2Fe(CN)5NO.2H2O dalam
larutan amoniak. Fungsi dari pemberian
amoniak yaitu sebagai kation kompleks
yang nantinya menggantikan posisi Na+
sebagai kation.
produk yang berwarna biru ungu. Dari tabel
1 dapat dilihat bahwa semua sampel kecuali
sistein menghasilkan uji positif pada uji
ninhidrin. Asam amino dan protein yang
memiliki gugus amino dan karboksilat yang
terikat pada α-karbon yang memberikan
hasil positif pada uji ini. Dan pada
percobaan ini dilihat bahwa sampel uknown
juga menghasilkan uji positif.
 Gambar 5. Reaksi Uji Ninhidrin
SIMPULAN
Sampel albumin telur menghasilkan
uji positif pada semua uji asam amino,
sampel larutan glisin positif pada uji
ninhidrin yang artinya larutan ini
mngendung asam alfa amino bebas. Sampel
larutan triptofan menghasilkan uji positif
terhadap uji Hopkins-cole dan ninhidrin
yang artinya struktur senyawanya
mengandung cincin indol dan asam a amino
bebas. Sampel larutan tirosin positif pada uji
millon dan ninhidrin yang berarti larutan ini
pada struktur senyawanya mengandung
gugus fenol dan asam α amino bebas.
Fenilalanin menghasilkan uji positif
terhadap uji ninhidrin yang artinya
senyawanya mengandung asam α amino
bebas. Larutan sistein positif terhadap uji
PbS yang berarti senyawa ini mengandung
unsur S dalam strukturnya. Dan pada
sampel uknown menunjukan uji positif pada
uji ninhidrin yang artinya mengandung asam
α amino bebas.
DAFTAR PUSTAKA
Hart, H. 1990. Kimia Organik Ahli Bahasa:
Sumanir Ahmadi. Jakarta:
Erlangga.
Haryanto, 2004. Penuntun Praktikum
Biokimia Program Studi Teknologi
Hasil Pertanian.Samarinda:
Fakultas Pertanian Universitas
Mulawarman.
Tika, I Nyoman. 2010. Penuntuan
Praktikum Biokimia. Singaraja:
Universitas Pendidikan Ganesha.