IDENTIFIKASI ASAM AMINO

Kadek Lia Widyanti

1813081010
Program Studi S1 Kimia
Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam
Universitas Pendidikan Ganesha

ABSTRAK

Asam amino adalah molekul organic dengan massa molekul rendah (antara
100-200 Da) yang mengandung setidak-tidaknya satu gugus karboksil (-COOH)
dan satu gugus amino (-NH2). Gugus karboksil dalam asam amino memberikan
sifat asam dan gugus amina memberikan sifat basa. Dalam protein terdapat 20
jenis asam amino standar, berdasarkan gugus R-nya akan dapat diramalkan sifat-
sifat asam amino. Sebaliknya, berdasarkan sifat-sifat yang terindentifikasi akan
dapat diketahui gugus R yang terkandung dalam asam amino tersebut akan
diketahui jenis asam aminonya. Praktikum ini dilakukan untuk mengidentifikasi
asam amino yang terdapat dalam protein melalui uji millon, uji Hopkins-cole, uji
ninhidrin serta mengidentifikasi asam amino sistina dan sistein dengan uji PbS dan
Uji nitroprusida dan yang terakhir untuk mengidentifikasi jenis asam amino pada
sampel unknown. dari praktikum ini diperoleh hasil yaitu pada sampel unknown
dalam struktur senyawanya mengandung asam a-amino bebas, larutan albumin
telur positif terhadap semua uji asam amino, larutan glisin mengandung asam α-
amino bebas, larutan triptofan struktur senyawanya mengandung cincin indol dan
asam a amino bebas, larutan tirosin pada struktur senyawanya mengandung gugus
fenol dan asam a-amino bebas, larutan fenilalanin mengandung asam a-amino
bebas, dan pada larutan sistein dalam senyawanya mengandung unsur S
(Belerang).

Kata Kunci : Asam amino, Uji asam amino, hasil uji

ABSTRACT

Amino acids are organic molecules with a low molecular mass (between 100-200
Da) containing at least one carboxyl group (-COOH) and one amino group (-NH2).
The carboxyl groups in amino acids give acidic properties and the amine groups
give them basic properties. In protein there are 20 types of standard amino acids,
based on the R group it can be predicted the properties of amino acids. On the other
hand, based on the identified properties, the R group contained in the amino acid
will know the type of amino acid. This practicum was carried out to identify amino
acids contained in proteins through the millon test, Hopkins-cole test, ninhydrin
test and to identify cystine and cysteine amino acids with the PbS test and
nitropruside test and the last one to identify the types of amino acids in unknown

1
 samples. From this practicum, the results obtained were that in the unknown sample
the compound structure contained free a-amino acids, egg albumin solution was
positive for all amino acid tests, glycine solution contained free α-amino acids,
tryptophan solution contained an indole ring and free a amino acid. , the tyrosine
solution in its compound structure contains phenol groups and free a-amino acids,
phenylalanine solutions contain free a-amino acids, and in the cysteine solution the
compounds contain the element S (sulfur).
Keywords: Amino acid, amino acid test, test result

PENDAHULUAN
Asam amino adalah molekul
organic dengan massa molekul rendah
(antara 100-200 Da) yang mengandung
setidak-tidaknya satu gugus karboksil (-
COOH) dan satu gugus amino (-NH2).
Gugus karboksil dalam asam amino
memberikan sifat asam dan gugus amina
memberikan sifat basa. Dalam bentuk
larutan, asam amino bersifat amfoterik
yaitu cendrung menjadi asam pada larutan
basa dan menjadi basa pada larutan asam,
perilaku ini terjadi karena asam amino
mampu membentuk zwitter ion.
Gambar 1. Struktur Asam amino
Seperti semua senyawa organik,
reaksi kimia asam amino mencirikan gugus
fungsional yang terkandung. Karena semua
asam amino mengandung gugus amino dan
karboksilat, senyawa ini akan memberikan
reaksi kimia yang akan mencirikan gugus
ini. Sebagai contoh gugus amino dapat
memeberikan reaksi asetilasi dan gugus
karboksil esterifikasi (Lehninger,1982).
Asam amino secara umum adalah
suatu atom C yang mengikat empat gugus
yaitu gugus amina (NH2), gugus karboksil
(-COOH), atom hydrogen (H), dan satu
gugus sisa (R) atau disebut juga rantai
samping yang membedakan satu asam
amino dengan asam amino lainnya. Atom C
pusat tersebut dinamai atom Cα ("C-alfa")
sesuai dengan penamaan senyawa bergugus
karboksil, yaitu atom C yang berikatan
langsung dengan gugus karboksil. Oleh
karena gugus amina juga terikat pada atom
Cα ini, senyawa tersebut merupakan asam
α-amino.
Asam-asam amino diperoleh dari
protein atau dari hasil degradasi protein di
dalam tubuh. Dalam protein terdapat 20
jenis asam amino standar, berdasarkan
gugus R-nya akan dapat diramalkan sifat-
sifat asam amino. Sebaliknya, berdasarkan
sifat-sifat yang terindentifikasi akan dapat
diketahui gugus R yang terkandung dalam
asam amino tersebut akan diketahui jenis
asam aminonya.
Dua buah molekul dari asam amino
dapat diikat secara kovalen melalui ikatan
amina subsitusi yang sering disebut dengan
ikatan peptida dan menghasilkan suatu
dipeptida. Ikatan ini terbentuk dengan
menarik unsur H2O dari gugus karboksil
pada suatu asam amino dan gugus ɑ-amino
dari molekul lain dengan adanya reaksi
kondensasi (Lehninger,1982).
Asam amino sendiri mempunyai
sifat-sifat yang penting yaitu asam amino

2
mempunyai sifat ampoter atau amfifrotik
yaitu sifat asam amino yang dapat bersifat
sebagai asam karena gugus -COOH dan
bersifat sebagai basa karena gugus NH2.
Asam amino juga bersifat sebagai zwiter
ion yaitu sifat asam amino yang
mempunyai 2 jenis muatan dalam
senyawanya jika dilarutkan dalam air, dan
sifat asam amino yang terakhir yaitu optis
aktif, asam amino yang dapat memutar
bidang cahaya terpolarisasi karena asam
amino memiliki atom karbon kiral (atom C
kiral) dimana atom C kiral ini dapat
mengikat empat gugus yang berbeda
kecuali glisin. Asam amino dibagi menjadi
3 jenis yaitu asam amino essensial, asam
amino non essensial, dan asam amino
essensual bersyarat.
Untuk mengidentifikasi asam amino
dapat dilakukan dengan uji kuantitatif dan
uji kualitatif. Metode kualitatif dilakukan
untuk mengetahui keberadaan asam amino
dalam suatu protein sedangkan metode
kuantitatif digunakan untuk mengetahui
jumlah suatu asam amino yang terdapat
didalam suatu protein dengan
menggunakan uji suatu reaksi yaitu:
Uji Millon
Pada uji millon digunakan pereaksi
millon yaitu larutan merkuro dan merkuri
nitrat didalam asam nitrat. Ketika pereaksi
ini ditambahkan pada larutan protein maka
akan menghasilkan endapan putih yang
dapat berubah warna menjadi merah oleh
adanya pemanasan. Reaksi ini positif untuk
fenol-fenol karena terbentuknya senyawa
merkuri dengan gugus hidroksifenil yang
berwarna. Khusus untuk proteoso dan
pepton secara langsung akan menghasilkan
larutan yang berwarna merah. Endapan
yang terbentuk tersebut merupakan garam
kompleks dari tirosin yang ternitrasi. Jika
suatu larutan protein yang akan dianalisis
ada dalam suasana basa maka terlebih dulu
harus dinetralisasi dengan asam (bukan
HCl). Jika tidak dinetralisasi ion merkuri
dari pereaksi akan mengendap sebagai
Hg(OH)2, ion Cl- dapat bereaksi dengan
asam nitrat menghasilkan klor dan radikal
ini dapat merusak kompleks berwarna.
Uji Hopkins-Cole
Larutan protein yang mengandung
triftofan dapat direaksikan dengan pereaksi
Hopkins-Cole yang mengandung asam
glioksilat (HOOC-CHO). Pereaksi terbuat
dari asam oksalat dengan serbuk
magnesium dalam air. Setelah
dilakukannya pencampuran dengan
pereaksi Hopkins-Cole asam sulfat
dituangkan secara perlahan-lahan sehingga
terbentuk lapisan dibawah larutan protein.
Beberapa saat kemudian akan terbentuk
cincin berwarna ungu pada batas antara
kedua lapisan.
Uji Ninhidrin
Pada uji ninhidrin apabila
dipanaskan bersama asam amino maka
akan membentuk kompleks berwarna.
Kompleks berwarna yang terbentuk
mengandung dua molekul ninhidrin yang
bereaksi dengan ammonia yang dilepaskan
pada oksidasi asam amino. Prolin dan
hidroksi prolin menghasilkan warna
kompleks yang berbeda dengan asam
amino lainnya. Kompleks warna yang
terbentuk mengandung dua ninhidrin yang
bereaksi dengan amonia yang dilepaskan
pada oksidasi asam amino.
Uji PbS
Belerang yang terdapat pada asam
amino sistein dibebaskan sebagai sulfida
dengan kehadiran NaOH. Ion sulfida
tersebut selanjutnya akan bereaksi dengan
3
ion Pb2+ dan membentuk endapan berwarna
hitam.
Uji Nitroprusida
Suatu protein yang mengandung
gugus -SH bebas (sisteina) memberikan
warna kemerah-merahan jika direaksikan
dengan natrium prusida di dalam larutan
amoniak.
METODE
Pada percoban ini dilakukan di lab
kimia organik Universitas Pendidikan
Ganesha secara uji kualitatif. Alat dan
bahan yang digunakan pada percobaan ini
diperolah dari Laboratorium Kimia
Organik Universitas Pendidikan Ganesha.
Analisis data dilakukan dengan
membandingkan dengan data pembanding.
ALAT DAN BAHAN
Adapun alat dan bahan yang
digunakan pada percobaan ini yaitu 1 rak
tabung reaksi, pipet tetes, corong, gelas
kimia 25 mL 100 mL dan 250 mL, pipet
volume, gelas ukur 10 mL, labu erlenmayer
100 mL dan 250 mL, spatula, batang
pengaduk,lampu spritus, korek api, dan
kaca arloji, albumin telur, larutan
Pb(CH3COO)2, sistein, sistina, reagen
millon, reagen Hopkins-Cole, reagen
Ninhidrin, larutan Natrium Nitroprusida,
larutan ammonia, asam sulfat pekat,
aquades, larutan phenilalanin,larutan
tripthopan, larutan glisin, larutan tyrosin
dan sampel unknown.
PROSEDUR KERJA
Uji Millon
Sebanyak 5 tetes reagen millon
ditambahkan ke dalam 3 mL larutan protein
dan campuran dipanaskan. Jika reagen yang
digunakan terlalu banyak maka warna akan
hilang. Hal yang sama juga dilakukan
terhadap larutan asam-asam amino.
Uji Hopkins-Cole
Sebanyak 2 mL reagen Hopkins-
Cole ditambahkan kedalam 2 mL larutan
protein dan ditambahkan H2SO4 pekat
sedikit demi sedikit kira-kira sebanyak 5
mL melalui sisi tabung. Warna yang
terbentuk antara pertemuan dua cincicn
diamati dan tabung diputar sampai
terbentuk cincin berwarna. Hal yang sama
juga dilakukan terhadap larutan asam-asam
amino.
Uji Ninhidrin
Sebanyak 0,5 mL larutan ninhydrin
0,1% ditambahkan kedalam 3 Ml larutan
protein dan dipanaskan hingga mendidih.
Percobaan ini diulang pada larutan asam-
asam amino lainnya.
Uji PbS
Sebanyak 2 ml larutan NaOH
ditambahkan kedalam 5 Ml larutan protein
dan ditambahkan sebanyak 2 tetes Pb-
Asetat kemudian dipanaskan diatas
pemanas, jika menunjukkan hasil positif
maka mula-mula larutan tersebut berwarna
kuning kemudian berubah menjadi coklat
dan akhirnya berwarna hitam.
Uji Nitroprusida
Beberapa kristal sistein
hidroklorida dilarutkan kedalam 5 Ml air
dan ditambahkan 0,5 mL larutan natrium
nitroprusida 1% kemudian ditambahkan 0,5
mL ammonium hidroksida.
HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil
4
Berdasarkan percobaan yang telah
dilakukan maka didapatkan hasil sebagai
berikut :

Tabel 1. Hasil Pengamatan Identifikasi Asam Amino

Sampel Uji Uji Uji Uji Reaksi
Millon Hopkins- Ninhidrin PbS Nitroprusida
Cole
Albumin (+) (+) (+) (+) (-)
Telur
Glisin (-) (-) (+) (-) (-)
Triftofan (-) (+) (+) (-) (-)
Tirosin (+) (-) (+) (-) (-)
Fenilalanin (-) (-) (+) (-) (-)
Sistein (-) (-) (-) (+) (+)
Unknown (-) (-) (+) (-) (-)

Uji Millon begitu juga pada uji yang dilakukan pada

Uji Millon merupakan uji yang sampel unknown.
digunakan untuk mengidentifikasi tirosin H H
O
H H
O
dengan dihasilkannya kompleks berwarna HO C C C Hg+(aq) OH Hg+
C C C
merah. Pada percobaan kali ini dengan -O
OH (aq)
menguji albumin telur, larutan albumin H N N H
(s)
telur setelah dipanaskan menghasilkan H H H H
warna merah hal ini menunjukkan bahwa
pada albumin telur terdapat tirosin. Hasil ini Tirosin
H H
O
diperkuat kembali pada saat dilakukannya
pengujian dengan uji millon pada larutan
HO C C C
+ Hg+ (aq) HNO3(aq) →
OH
H N
tirosin yang mana larutan tirosin yang telah
H H (aq)
dipanaskan menghasilkan warna merah.
Pada awalnya larutan albumin telur ketika H H
O
ditambahkan dengan reagen millon O2N C C C Hg2+
membentuk endapan putih, endapan ini O-
H N
merupakan hasil reaksi antara Hg+ dengan H H (s)
asam amino dan akan menghasilkan reaksi
lebih lanjut pada proses pemanasan. Pada
Gambar 2. Reaksi Uji Millon
proses pemanasan HNO3 yang bertindak
sebagai pelarut mengoksidasi Hg+ menjadi
Uji Hopkins-Cole
Hg2+. Endapan yang terbentuk merupakan
Pada Uji Hopkins-Cole merupakan
suatu garam kompleks tirosin yang
uji yang digunakan untuk menunjukkan inti
ternitrasi dan menghasilkan warna merah.
indol dari asam amino triftofan yang di
Uji millon yang dilakukan terhadap asam
tandai dengan adanya cincin berwarna
amino glisin, triftofan, fenilalanin, dan
ungu. Cincin ungu yang tampak pada
sistein menunjukan hasil yang negative
5
bidang batas anatara kedua cairan adalah kecuali sistein yang menghasilkan hasil
hasil kondensasi triftofan dengan gugus negative. Kompleks ungu ini disebabkan
aldehida dari asam glioksilat dalam suasana oleh adanya gugus karboksilat dan gugus
asam sulfat. Pada percobaan ini amino yang merupakan gugus penyusun
menunjukkan hasil yang positif pada pokok dari asam ɑ-amino.
pengujian yang dilakukan terhadap larutan
albumin telur dengan adanya cincin
berwarna ungu pada bidang batas, hal ini
dibuktikan dengan dilakukannya pengujian
terhadap larutan triftofan yang direaksikan
dengan reagen Hopkins-Cole dan
penambahan secara perlahan yang
membentuk cincin ungu pada bidang batas
antara kedua cairan.
Gambar 4. Reaksi Uji Ninhidrin
Pada reaksi tersebut di lepaskan
CO2 dan NH4 sehingga asam amino dapat
ditentukan secara kuantitatif dengan
mengukur jumlah CO2 dan NH3 yang
dilepaskan. Amoniak yang dilepaskan
berperan dalam pembentukan kompleks
berwarna anatara ninhydrin yang tereduksi
Gambar 3. Reaksi Uji Hopkins-Cole
dan ninhydrin yang masih utuh.
Uji Hopkins-Cole yang dilakukan
terhadap asam amino glisin, triftofan, Uji PbS
fenilalanin, dan sistein menunjukan hasil Uji PbS merupakan uji yang
yang negative begitu juga pada uji yang digunakan untuk mengidentifikasi belerang
dilakukan pada sampel unknown. yang berada pada sampel. Pada uji ini
larutan albumin telur dan sistein
Uji Ninhidrin
menunjukkan hasil yang positif dengan
Uji Ninhidrin merupakan uji yang
dihasilkannya endapan berwarna hitam
dilakukan untuk menentukan asam amino
setelah dipanaskan dengan penangas air.
bebas yang berada pada suatu sampel.
Endapan berwarna hitam yang terbentuk ini
Apabila ninhidrin dipanaskan bersama
merupakan garam PbS dimana garam ini
asam amino maka akan terbentuk kompleks
merupakan hasil reaksi dari Pb-Asetat
berwarna terutama kompleks berwarna
dengan asam amino. Pada pengujian ini
ungu. Asam amino dapat ditentukan dengan
dilakukan denaturalisasi protein dengan
cara kuantitatif dengan melihat intensitas
penambahan NaOH sehingga ikatan yang
warna yang terbentuk sebanding dengan
mengikat atom S dapat terputus oleh Pb-
konsentrasi dari asam amino tersebut. Pada
Asetat dan terbentuk PbS dan Pb sebagai
pengujian ini semua sampel yg
donor dari Pb+. Belerang yang terdapat
diidentifikasi yaitu sampel albumin, glisin,
dalam asam amino sistein dibebaskan
triftofan, fenilalanin dan sampel unknown
sebagai sulfida dengan kehadiran NaOH
menunjukkan hasil yang positif yaitu
yang selanjutnya ion sulfida ini akan
dengan adanya kompleks berwarna ungu
6
bereaksi membentuk ion Pb2+ membentuk
endapan hitam.
Pb2+ + S2- → PbS
Uji Nitroprusida
Pada reaksi Nitroprusida protein
yang mengandung gugus -SH bebas
(sisteina) memberikan warna kemerah-
merahan jika direaksikan dengan natrium
prusida dalam larutan ammonia. Pada
percobaan kali ini dilakukan pengujian
terhadap sistein dan menghasilkan hasil
yang positif. Protein yang mengandung
sistein dapat memberikan hasil positif hal
ini disebabkan selain adanya gugus -COOH
dan gugus -NH2 gugus R pada asam amino
yaitu gugus tiol (gugus sulfridil) atau
peptida (glutat ion).
cincin indol. Pada tirosin positif
terhadap uji millon dan uji
ninhydrin, fenilalanin postif
terhadap uji ninhidin. Pada sistein
positif terhadap uji PbS dan reaksi
nitroprusida karena adanya unsur S
3. Sampel unknown menunjukan
positif terhadap uji ninhydrin berarti
sampel unknown tersebut memiliki
asam ɑ-amino yang bebas
UCAPAN TERIMAKASIH
Penulis mengucapkan terimakasih kepada
dosen pengampu mata kuliah praktikum
biokimia yakni Dr. I Nyoman Tika, M.Si
serta dosen pengampu 2 yakni Made Vivi
Oviantari, S.Si.,M.Si yang telah
memberikan bimbingan dan pemahaman di
dalam praktikum yang dilaksanakan.

DAFTAR PUSTAKA

Tika, I Nyoman.2020.Penuntun Praktikum

Biokimia.Singaraja : Universitas
Pendidikan Ganesha
I Wayan Muderawan,dkk.2012.Buku Ajar
Gambar 5. Gugus SH pada reaksi
Kimia Organik II. Singaraja: Universitas
nitroprusida
Pendidikan Ganesha
Poedjiadi.2009.Dasar-dasar Biokimia.
SIMPULAN
Jakarta : Universitas Indonesia
Dari hasil percobaan dan pembahasan
Thenawijaya, Lehninger.1982.Dasar-dasar
tersebut maka dapat disimpulkan bahwa
Biokimia jilid 1. Erlangga : Jakarta
pada pengujian asam amino secara
kualitatif dapat disimpulkan bahwa :
1. Uji larutan albumin telur positif
terhadap uji asam amino.
2. Larutan glisin menunjukkan hasil
positif terhadap uji ninhidrin yang
berarti glisin mengandung asam ɑ-
amino. Larutan triftofan menujukan
hasil positif terhadap uji Hopkins-
Cole dan juga uji ninhydrin yang
berarti pada triftofan terdapat asam
ɑ-amino selain terdapat asam ɑ-
amino pada triftofan juga terdapat