IDENTIFIKASI ASAM AMINO

Irma Mulyani
1313031073
Jurusan Pendidikan Kimia
Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam
Universitas Pendidikan Ganesha

ABSTRAK
Asam amino adalah molekul organik dengan massa molekul rendah yang mengandung minimal satu
gugus karboksil (-COOH) dan satu gugus amino (-NH2). Gugus karboksil dalam asam amino memberi sifat
asam dan gugus amina memberi sifat basa. Perbedaan antara asam-asam amino satu dengan lainnya
disebabkan oleh perbedaan rantai sampingnya. Adanya perbedaan pada gugus R ini menyebabkan asam amino
memiliki sifat-sifat yang khas. Sebaliknya dari sifat-sifat ini pula dapat diketahui gugus R yang terkandung
dalam asam amino tersebut. Tujuan dari praktikum ini adalah, pertama untuk mengidentifikasi asam-asam
amino yang terdapat pada larutan protein melalui uji millon, uji hopkins-cole, dan uji ninhidrin. Kedua adalah
untuk mengidentifikasi asam amino sistein dengan uji PbS dan uji nitroprusida. Serta ketiga adalah untuk
mengidentifikasi jenis asam amino yang terdapat dalam sampel unknown melalui uji reaksi asam amino.
Masing–masing uji memiliki karakteristik tertentu sehingga dapat mengidentifikasi asam α-amino yang terdapat
dalam sampel. Hasil yang diperoleh dari praktikum ini adalah pada sampel C dalam struktur senyawanya
mengandung asam a-amino bebas, larutan albumin telur positif terhadap semua uji asam amino, larutan glisin
mengandung asam α-amino bebas, larutan triptofan pada struktur senyawanya mengandung cincin indol dan
asam a amino bebas, larutan tirosin pada struktur senyawanya mengandung gugus fenol dan asam a-amino
bebas, larutan fenilalanin mengandung asam a-amino bebas, dan larutan sistein dalam senyawanya
mengandung unsur S (Belerang).

Kata kunci: uji asam amino, uji kualitatif, uji protein.

ABSTRACT
Amino acids are organic molecules with low molecular mass containing at least one carboxyl group (-
COOH) and an amino group (-NH2). Carboxyl group of the amino acid to give the nature of the acid and amine
groups provide alkalinity. The difference between the amino acids from each other due to the differences in side
chains. Differences in the causes of the R groups of amino acids have distinctive traits. Instead of these
properties also can be seen the R groups contained in the amino acids. The purpose of this lab is the first to
identify the amino acids contained in the protein solution through millon test, test-cole hopkins, and ninhydrin
test. The second is to identify amino acid cysteine with PbS test and test nitroprusside. As well as the third is to
identify the types of amino acids contained in the unknown sample through the test amino acid reaction. Each
test has certain characteristics that can identify α-amino acids contained in the sample. The results of this lab is
the sample C in the structure of compounds containing acid a-amino-free, solution of egg albumin positively to
all tests amino acid, a solution of glycine containing acid α-amino-free, solution of tryptophan in the structure
of compounds containing a ring indole acid and a free amino, tyrosine solution on the structure of the
compound containing a phenol group and a-amino acid-free, phenylalanine solution containing a-amino acid-
free, and in the cysteine solution of compounds containing the element S (sulfur).

Keywords: amino acid test, qualitative test ,test protein.

PENDAHULUAN Masing-masing jenis asam amino

Protein merupakan polimer panjang
yang tersusun atas asam-asam amino yang
terikat secara kovalen oleh ikatan-ikatan
peptida. Ikatan peptida yang menggabungkan
dua asam amino yang bersebelahan saat
sintesis protein adalah sebuah ikatan kovalen
yang kuat, dimana atom-atom berpasangan
melalui penggunaan bersama sebuah elektron.
berbeda dalam hal sifat rantai samping atau
radikal yang melekat ke karbon α-nya.
Misalnya, glisin memiliki rantai samping yang
paling sederhana, terdiri dari sebuah atom
hidrogen (Whyranti, 2013).
Asam amino adalah molekul organik
dengan massa molekul rendah (antara 100-200
Da) yang mengandung setidak-tidaknya satu

1
gugus karboksil (-COOH) dan satu gugus
amino (-NH2). Gugus karboksil dalam asam
amino memberikan sifat asam dan gugus
amina memberikan sifat basa. Dalam bentuk
larutan asam amino bersifat amfoterik yaitu
cenderung bersifat asam pada larutan basa dan
menjadi basa pada larutan asam. Prilaku ini
terjadi karena asam amino mampu membentuk
zwitter-ion.

H2N C COOH

Gambar 1. Struktur Asam Amino

Salah satu fungsi asam amino yaitu Berdasarkan strukturnya, asam amino
sebagai penyusun protein dalam suatu dikelompokkan menjadi tujuh. Klasifikasi ini
organisme. Asam amino tersebut terdapat didasarkan pada sifat kimia gugus R-nya,
sebanyak 20 jenis, semua asam amino tersebut diantaranya yaitu:
merupakan asam α-amino kecuali prolin.

Tabel 1. Klasifikasi Asam Amino

Sifat Gugus R Contoh Asam Amino
Alifatik Glisin, Alanin, Valin, Leusin, Isoleusin
Aromatik Fenilalanin, Tirosin, Triptofan
Hidrosiklik Serin, Threonin
Karbosiklik Asam aspartat, Asam glutamat
Mengandung Sistein, Metionin
sulfur
Imino Prolin, Hidroksiprolin
Amino Lisin, Arginin
Amida Asparagin, Glutamin
(Tika, 2010)

Analisis suatu identifikasi asam amino
dapat dilakukan dengan metode kualitatif dan
kuantitatif. Metode kualitatif dilakukan untuk
mengetahui keberadaan asam amino dalam
suatu protein sedangkan lebih lanjut digunakan
analisis kuantitatif untuk mengetahui jumlah
suatu asam amino dalam suatu protein.
Analisis asam amino dengan cara metode
kualitatif dapat dilakukan dengan cara
melakukan uji-uji suatu reaksi yaitu:
Uji Millon
Pereaksi Millon adalah larutan merkuro
dan merkuri nitrat dalam asam nitrat. Apabila
pereaksi ini ditambahkan pada larutan protein
maka akan menghasilkan endapan putih yang
berubah menjadi merah karena pemanasan.
Pada dasarnya reaksi-reaksi ini positif untuk
fenol-fenol karena terbentuknya senyawa
merkuri dengan gugus hidroksifenil yang
berwarna. Tetapi khusus untuk proteoso dan
pepton secara langsung menghasilkan larutan
yang berwarna merah.
Uji Hopkins-Cole
Larutan protein mengandung triptofan
yang memiki cincin indol dalam strukturnya
dapat direksikan dengan pereaksi Hopkins-
Cole yang mengandung asam glioksilat
(HOOC-COH). Setelah dicampur dengan
pereaksi Hopkins-Cole dan asam sulfat yang
dituangkan secara perlahan-lahan sehingga
membentuk lapisan dibawah larutan protein.
Beberapa saat kemudian akan terjadi cincin
ungu pada batas kedua lapisan tersebut.
Uji Ninhidrin
Apabila ninhidrin (triketohidrin hidrat)
dipanaskan bersama asam amino, maka akan
terbentuk kompleks berwarna. Kompleks
warna yang terbentuk mengandung dua
molekul ninhidrin yang bereaksi dengan
amonia yang dilepaskan pada oksidasi asam

2
amino. Hasil uji positif pada uji ninhidrin
terlihat pada asam amino yang mengandung
asam α-amino dan peptida yang memiliki
asam-amino bebas.
Uji PbS
Belerang terdapat dalam asam amino
sistein dibebaskan sebagai ion sulfida dengan
kehadiran NaOH. Ion sulfida selanjutnya
bereaksi dengan ion Pb2+ membentuk endapan
berwarna hitam.
Uji Nitroprusida
Protein yang mengandung –SH bebas
(sisteina) memberikan warna kemerah-
merahan jika direaksikan dengan natrium
prusida, Na2Fe(CN)5NO.2H2O dalam larutan
amoniak. Beberapa protein yang memberikan
hasil negatif terhadap reaksi ini menjadi positif
setelah dipanaskan sampai mengalami
koagulasi atau denaturassi. Pada asam amino
lain dapat bereaksi dengan dengan natrium
nitropusida dalam amonia berlebih
menghasilkan kompleks berwarna merah.
Tujuan dari praktikum ini yaitu, pertama
untuk mengidentifikasi asam-asam amino
pada larutan albumin telur dan sampel
Unknown melalui uji millon, uji Hopkins-
Cole, uji Ninhidrin, uji PbS, dan uji
Nitroprusida. Kedua, untuk mengidentifikasi
larutan asam-asam amino melalui uji Millon,
uji Hopkins-Cole, dan uji Ninhidrin. Terakhir
untuk mengidentifikasi larutan sistein dengan
uji Pbs dan uji Nitroprusida.
METODE
Adapun praktikum ini dilakukan di
Laboratoriun Kimia Organik yang bertempat
di Kampus Tengah Universitas Pendidikan
Ganesha pada tanggal 1 Maret 2016. Metode
yang digunakan adalah metode kualitatif
untuk mengetahui asam amino yang terdapat
dalam sampel. Adapun reagen yang
digunakan dibuat sendiri oleh praktikan dan
segala alat dan bahan yang diperlukan
diperoleh dari Laboratorium Kimia Organik
Universitas Pendidikan Ganesha.
Alat dan Bahan
Alat dan bahan yang digunakan dalam
paktikum ini adalah tabung reaksi 1 set, pipet
tetes, corong, gelas kimia 25 mL 250 mL dan
100 mL, gelas ukur 10 mL, labu erlenmeyer
200 mL 250 mL, Spatula, Lampu Spirittus,
Korek Api, Kaca Arloji, Pipet Volume,
Penjepit Kayu, dan pemanas magnetik, larutan
albumin telur, larutan Pb(COOH)2, reagen
Millon, reagen Hopkin-Cole, larutan ninhidrin
0,1 %, larutan natrium nitroprusida 1%, larutan
amoniak 0,1 M, asam sulfat pekat, larutan
NaOH 0,1 N, larutan sistein, larutan
fenilalanin, larutan tripsin, larutan triptofan,
larutan glisin, sample unknown C, dan aquades.
Prosedur Kerja
Uji Millon
Sebanyak 5 tetes reagen Millon
ditambahkan ke dalam 3 mL larutan albumin
telur dan dipanaskan. Hal yang sama juga
dilakukan pada masing-masing larutan asam
amino (tirosin, phenilalanin, triptopan, dan
glisin) dan sampel unknown C.
Uji Hopkins-Cole
Sebanyak 2 mL larutan albumin telur
dimasukkan ke dalam tabung reaksi kemudian
ditambahkan 2 mL reagen Hopkins-Cole dan
ditambahkan H2SO4 pekat sedikit demi sedikit
melalui sisi tabung. Hal yang sama juga
dilakukan pada masing-masing larutan asam
amino (tirosin, phenilalanin, triptopan, dan
glisin) dan sampel unknown C.
Uji Ninhidrin
Sebanyak 0,5 mL larutan ninhidrin 0,1%
ditambahkan ke dalam 3 mL larutan albumin
telur dan dipanaskan hingga mendidih. Hal
yang sama juga dilakukan pada masing-
masing larutan asam amino (tirosin,
phenilalanin, triptopan, dan glisin) dan sampel
unknown C.
Uji PbS
Sebanyak 5 mL larutan albumin telur
ditambahkan 2 mL NaOH dan 2 tetes Pb asetat
kemudian dipanaskan di atas penangas air. Hal
yang sama juga dilakukan pada larutan sistein
dan sampel unknown C.
Uji Nitroprusida
Sebanyak 0,5 mL larutan natrium
nitroprusida 1 % dan 0,5 mL amonium
hidroksida ditambahkan ke dalam 5 mL
larutan Sistein.
3
HASIL DAN PEMBAHASAN Berdasarkan pada percobaan maka
didapatkan hasil sebagai berikut :
Hasil

Tabel 2. Hasil Pengamatan Identifikasi Asam Amino

Uji
Uji Uji Uji
Sampel Hopkins- Uji PbS
Millon Ninhidrin Nitroprusida
Cole
Albumin telur (+) (+) (+) (+) (-)
Glisin (-) (-) (+) (-) (-)
Triptofan (-) (+) (+) (-) (-)
Tirosin (+) (-) (+) (-) (-)
Fenilalanin (-) (-) (+) (-) (-)
Sistein (-) (-) (-) (+) (+)
Sampel C (-) (-) (+) (-) (-)

Uji Millon Saat larutan albumin telur ditambahkan

Uji Millon digunakan untuk
mengidentifikasi protein yang mengandung
tirosin dalam suatu sampel yang ditandai
dengan terbentuknya kompleks berwarna
merah. Pada uji ini, larutan albumin telur
menghasilkan cairan berwarna merah setelah
dipanaskan. Hasil percobaan menunjukkan
bahwa albumin telur mengandung gugus
tirosin. Hal ini dibuktikan ketika melakukan
uji Millon pada larutan tirosin juga
menghasilkan larutan berwarna merah setelah
dipanaskan.
dengan reagen Millon tidak terdapat
perubahhan warna, kemudian setelah
dipanaskan menghasilkan endapan merah.
pada larutan phenialanin, triptopan, dan
glisin, dan sampel Unknown C tidak
menunjukkan perubahan warna setelah
penambahan reagen Millon dan dipanaskan.
Hal ini karena larutan-larutan tersebut tidak
mengandung gugus fenol seperti yang terdapat
pada struktur tirosin.

(a) (b)
Gambar 2. a) Hasil positif terhadap uji Millon pada larutan albumin telur dan b) Hasil positif
terhadap uji Millon pada larutan tirosin

Uji Hopkins-Cole oksidator kuat, seperti senyawa H2SO4 yang

digunakan pada percobaan ini.
Uji Hopkins-Cole digunakan untuk
Pada uji ini, sampel yang positif adalah
menunjukan inti indol asam amino triptofan
larutan albumin telur yang ditandai dengan
yang ditandai dengan terbentuknya cincin
terbentuknya cincin ungu yang menandakan
berwarna ungu pada sampel percobaan.
bahwa pada albumin telur terdapat asam amino
Pereaksi Hopkins-Cole mengandung asam
triptofan. Hal ini dibuktikan ketika praktikan
glioksilat. Prinsip uji Hopkins-Cole adalah
melakukan uji pada larutan triptofan, terbentuk
kondensasi inti indol dengan aldehid jika
cincin ungu diantara dua lapisan ketika
terdapat asam kuat yang menyebabkan
direaksikan dengan reagen Hopkins-Cole dan
terbentuknya cincin ungu pada bidang batas.
penambahan asam sulfat secara perlahan-
Reaksi tersebut hanya akan berhasil jika ada
lahan. Cincin ungu yang terbentuk disebabkan
oleh adanya cincin indol yang hanya dimiliki

4
oleh triptofan. Cincin ungu yang tampak pada Fungsi penambahan asam sulfat dalam reaksi
pada bidang batas tabung reaksi adalah hasil ini adalah sebagai oksidator agar terbentuk
kondensasi triptofan dengan gugus aldehida cincin ungu pada larutan. Reaksinya adalah
dari asam glioksilat dalam suasana asam. sebagai berikut:

COOH
H
CH2 HC H H
HO O
NH2 COOH
C
+ C
+ H2O
N NH
N HO O
H H
H H
Triftofan asam glikosilat Asam 2,3,4,5 tetrahidro-
karbolin-karboksilat
Gambar 3. Reaksi Uji Hopkins-Cole

Sedangkan larutan phenilalanin, glisin, tirosin, Cole dan H2SO4 pekat. Hal ini karena larutan-
dan sampel C tidak menunjukkan perubahan larutan tersebut tidak mengandung cincin indol
warna setelah penambahan reagen Hopkins- seperti pada struktur triptofan.

gugus indol
NH
C CH
O
H2N C C

H OH

Gambar 4. Struktur Triptofan

(a) (b)

Gambar 5. a) Hasil Positif Uji Hopkins-Cole pada larutan albumin telur dan b) Hasil Positif Uji
Hopkins-Cole pada larutan triptofan

Uji Ninhidrin dan kompleks warna ungu yang bersal dari

Uji ninhidrin digunakan untuk asam amino selebihnya terkonvensi menjadi
identifikasi asam amino bebas yang terdapat aldehid dan karbon dioksida. Zat warna ungu
dalam sampel. Asam amino bebas adalah asam yang sama dihasilkan dari semua asam α-
amino yang gugus aminonya tidak terikat. amino dengan gugus amino primer dan
Ninhidrin adalah reagen yang berguna untuk intensitas warnanya berbanding lurus dengan
mendeteksi asam amino dan menetapkan konsentrasi asam amino yang ada.
konsentrasinya dalam larutan. Senyawa ini Pada uji ini, semua sampel diidentifikasi
merupakan hidrat dari triketon siklik dan bila baik sampel albumin telur, larutan asam-asam
bereaksi dengan asam amino akan amino, dan sampel unknown C. Dari
menghasilkan komples berwarna terutama percobaan ini menunjukan hasil yang positif
kompleks warna ungu. Hanya atom nitrogen yaitu membentuk kompleks warna ungu.

5
 Warna ungu yang dihasilkan oleh reduksi ninhidrin oleh asam α-amino berperan
larutan sampel disebabkan oleh adanya gugus dalam pembentukan kompleks berwarna antara
karboksilat dan gugus amino yang merupakan ninhidrin yang tereduksi dengan ninhidrin
gugus pokok penyusun dari suatu asam α- yang utuh. Reaksi yang terjadi adalah sebagai
amino. Amoniak yang terbebaskan dari reaksi berikut.
O O
R
OH HO
OH
+ H2N C COOH NH3 + CO2 + RCHO +
H
H
O O
Ninhidrin asam -amino ninhidrin tereduksi

j
O O O O

OH H H HO
+ N + N + H2O
OH H
H
O O O O
kompleks berwarna ungu

Gambar 6. Reaksi Uji Ninhidrin

Uji positif yang didapatkan Pemanasan yang dilakukan pada tiap uji
menandakan bahwa terdapat asam α-amino percobaan bertujuan untuk koagulasi protein
bebas pada semua sampel. Semakin banyak sehingga tidak dapat larut dalam air dan
ninhidrin pada zat uji yang dapat bereaksi, terbentuknya endapan.
semakin pekat warnanya.

(a) (b)

Gambar 7. a) Hasil positif uji Uji Ninhidrin pada larutan albumin telur, dan b) Hasil positif uji Uji
Ninhidrin pada sampel C

Uji PbS telur dan sistein dengan dihasilkan endapan

berwarna hitam setelah dipanaskan dalam
Uji PbS dilakukan untuk
penangas air.
mengidentifikasi unsur belerang yang terdapat
Dalam proses pemanasan Pb-asetat
dalam senyawa asam amino. Protein memiliki
bereaksi dengan asam-asam amino tersebut
ikatan disulfida yang merupakan jenis ikatan
dan membentuk endapan berwarna hitam yang
kovalen lain yang dimiliki oleh peptida dan
merupakan garam PbS. Penambahan NaOH
asam amino didalamnya.Sistein merupakan
dalam percobaan ini adalah untuk
asam amino yang mengandung atom S pada
mendenaturasikan protein sehingga ikatan
molekulnya.
yang menghubungkan atom S dapat terputus
Pada uji ini praktikan hanya oleh Pb-asetat membentuk PbS, sedangkan Pb
mengindifikasi belerang dari larutan sistein, berfungsi sebagai donor Pb+. Hasil percobaan
larutan protein, dan sampel unknown C. Uji tersebut menunjukkan bahwa larutan tersebut
ini menunjukkan hasil positif pada albumin mengandung asam amino yang rantainya

6
samping mempunyai senyawa belerang.
Reaksi belerang:
S2+(aq) + Pb2+(aq)  PbS(s)
Percobaan yang dilakukan terhadap
larutan unknown C ternyata memberikan hasil
negatif terhadap uji PbS. Hal itu dibuktikan
(a)
Gambar 8. a) Uji PbS pada larutan albumin telur dan b) Uji PbS pada larutan sistein.
Uji Nitroprusida
Larutan yang diidentifikasi pada uji ini
yaitu hanya larutan sistein dan menghasilkan
larutan berwarna merah. Hal ini disebabkan
karena pada larutan tersebut mengandung
gugus sulfidril (-SH) bebas (sisteina)
memberikan warna kemerah-merahan jika
direaksikan dengan natrium prusida,
Na2Fe(CN)5NO. 2H2O dalam larutan amoniak.
(a)
Gambar 9. Hasil positif terhadap uji Nitroprusida pada larutan sistein
SIMPULAN
Berdasarkan pembahasan diatas dapat
disimpulkan bahwa:
a. Larutan albumin telur positif
terhadapsemua uji asam amino.
b. Larutan glisin positif pada uji ninhidrin
yang berarti larutan ini mngendung asam
alfa amino bebas. Larutan triptophan positif
terhadap uji Hopkins-cole dan ninhidrin
yang berarti larutan ini pada struktur
senyawanya mengandung cincin indol dan
asam a amino bebas. Larutan Tirosin positif
pada uji millon dan ninhidrin yang berarti
larutan ini pada struktur senyawanya
dengan tidak menghasilkan endapan hitam
pada sampel C setelah pemanasan, melainkan
warna dari sampel tersebut tetap bening. Hal
tersebut membuktikan bahwa sampel unknown
C tidak mengandung unsur belerang.
(b)
Penambahan amonia pada pengujian ini
berfungsi sebagai kation kompleks yang
nantinya menggantikan posisi Na+ sebagai
kation. Warna merah ini dihasilkan dari reaksi
antara gugus –SH dari sistein dengan
natriumprusida dalam larutan amoniak. Hal ini
menunjukkan uji positif terhadap reaksi
nitroprusida.
mengandung gugus fenol dan asam a amino
bebas. Fenilalanin hanya positif terhadap
uji ninhidrin yang berarti senyawanya
mengandung asam a amino bebas. Larutan
sistein positif terhadap uji PbS yang berarti
senyawa ini mengandung unsur S
(Belerang) dalam strukturnya.
c. Sampel C positif terhadap uji ninhidrin
yang berarti dalam larutan ini mengandung
asam a amino bebas.
7
UCAPAN TERIMA KASIH DAFTAR PUSTAKA
Penulis mengucapkan terima kasih I Wayan Muderawan, dkk. 2012. Buku Ajar
kepada dosen pengampu mata kuliah Kimia Organik II. Singaraja. Universitas
praktikum biokimia yakni Dr. I Nyoman Tika, Pendidikan Ganesha
M.Si beserta asistennya I Made Wirahadi Redhana, I Wayan. 2004. Biokimia Jilid 2.
Kusuma atas bimbingan yang sudah diberikan Jakarta: Erlangga.
pada saat penulis melakukan praktikum serta Tika, I Nyoman. 2010. Penuntun praktikum
staf laboran Jurusan Pendidikan Kimia yang Biokimia. Singaraja: Universitas
telah membantu dalam penyediaan alat dan Pendidikan Ganesha
bahan yang diperlukan dalam praktikum.