Jurnal Matematika dan Sains

Vol. 7 No. 2, Oktober 2002, hal 43 – 52

Isolasi Enterobacteriaceae Patogen dari Makanan Berbumbu dan

Tidak Berbumbu Kunyit (Curcuma longa L.) Serta Uji Pengaruh Ekstrak Kunyit
(Curcuma longa L.) Terhadap Pertumbuhan Bakteri Yang Diisolasi

Ernin Hidayati1), Nuryati Juli2), dan Erly Marwani2)

1)
Jurusan Biologi, FMIPA Universitas Nahdlatul Wathan-Mataram
2)
Departemen Biologi, FMIPA ITB-Bandung

Diterima tanggal 17 November 2001, disetujui untuk dipublikasikan 16 Agustus 2002

Abstrak
Telah dilakukan isolasi bakteri dari sampel makanan siap saji yang berbumbu kunyit dan tidak berbumbu kunyit.
Isolasi terutama ditujukan terhadap bakteri Enterobacteriaceae patogen. Pengambilan sampel makanan dilakukan
secara acak dari delapan warung nasi di salah satu pasar di Bandung Utara selama tiga musim berturut-turut
dalam enam bulan. Selanjutnya dilakukan ekstrak rimpang kunyit (Curcuma longa L.) secara bertahap
menggunakan tiga pelarut, yaitu n-heksan, etil asetat, dan etanol. Ekstrak yang diperoleh kemudian diuji
pengaruhnya terhadap empat isolat bakteri terpilih dengan tiga metode pendekatan, yaitu metode Kirby Bauer,
metode “cylinder”/”hole plate”, dan metode pengenceran (“dilution method”). Ditemukan delapan jenis bakteri
yang sama, baik pada musim kemarau, peralihan, dan penghujan. Pada musim penghujan ditemukan juga empat
jenis lainnya. Delapan diantaranya merupakan bakteri patogen. Frekuensi total ditemukannya bakteri pada sampel
makanan berbumbu lebih rendah dibandingkan makanan tidak berbumbu. Pada uji pengaruh ketiga macam ekstrak
terhadap empat isolat uji (Escherchia coli, Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa, dan Staphylococcus
aureus), ternyata ekstrak n-heksan konsentrasi 50.000 ppm dapat menghambat pertumbuhan Escherchia coli,
Klebsiella pneumoniae dan Staphylococcus aureus yang ditumbuhkan pada medium padat, sedangkan dalam
medium cair, konsentrasi 1000 ppm dapat menghambat keempat bakteri uji.

Kata kunci : isolasi, patogen, Enterobacteriaceae, ekstrak

Abstract
An isolation of pathogenic Enterobacteriaceae bacteria has been done on spiced foods with turmeric and without
turmeric ingredients. Food samples were taken randomly from 8 traditional food vendors at a traditional market in
north Bandung during three seasons for 6 months. Next step was extraction of turmeric rhizome with sequential
extraction method using n-hexane, ethyl acetate and ethanol. Those extracs were applied onto 4 chosen bacterial
isolates using Kirby Bauer method, cylinder/hole plate method, and dilution method. There were 8 bacterial isolates
which always present in all season. Also there were 4 isolates only found in rainy season. Eight isolates among them
were pathogens. Total frequency of bacteria in samples with turmeric ingredients was lower than that without
turmeric ingredients. The effect of extracts on all tested bacteria (Escherchia coli, Klebsiella pneumoniae,
Pseudomonas aeruginosa, and Staphylococcus aureus), showed that n-hexane extract could inhibit the growth of
Escherchia coli, Klebsiella pneumoniae and Staphylococcus aureus at concentration of 50.000 ppm on solid
medium. However in liquid medium, all tested bacteria were inhibited at the concentration of 1000 ppm.

Keywords : isolation, pathogen, Enterobacteriaceae, extract

1. Pendahuluan
Makanan merupakan kebutuhan utama
manusia. Makanan tersusun oleh senyawa kimia yang
merupakan sumber nutrien yang dibutuhkan juga oleh
mikroba untuk pertumbuhannya. Adanya mikroba
pada makanan dapat berasal dari berbagai sumber,
misalnya bahan baku, alat yang digunakan selama
proses pengolahan, tempat penyimpanan makanan,
orang yang terlibat dalam pengolahan, serta
lingkungan sekitarnya berupa tanah, air, dan udara 1)2).
Makanan dapat bertindak sebagai agensia penyebab
penyakit. Mikroba berbahaya dan toksin yang terdapat
pada makanan yang dikonsumsi dapat berpindah ke
dalam tubuh sehingga menyebabkan penyakit
terutama gangguan saluran pencernaan makanan atau
gastroenteritis. Di negara-negara berkembang seperti
Indonesia, penyakit yang disebabkan oleh infeksi
mikroba, termasuk gastroenteritis merupakan penyakit
yang paling sering ditemukan3). Jalur utama masuknya
bibit penyakit penyebab gastroenteritis adalah melalui
makanan atau minuman terkontaminasi yang
dikonsumsi4). Pengamatan kondisi higienis makanan
dapat dilakukan melalui analisis mikrobiologis,
misalnya dengan mengetahui jenis -jenis
Enterobacteriaceae patogen, karena kelompok bakteri
ini yang sering ditemukan sebagai kontaminan pada
makanan dan minuman.
Jumlah dan jenis mikroba berbahaya yang
terdapat pada makanan perlu dihilangkan. Berbagai
cara telah dilakukan untuk tujuan tersebut, misalnya
dengan pemanasan, penyimpanan pada suhu rendah,

43
44
penggaraman, pengasaman, penambahan zat kimia
tertentu, dan lain-lain. Bahan-bahan alami terutama
rempah-rempah juga digunakan dengan tujuan yang
sama selain tujuan utamanya sebagai bumbu atau
penambah cita rasa5). Oleh sebab itu, perlu diteliti
pengaruh lamanya pendedahan makanan pada
lingkungan dan perbedaan musim terhadap
keberadaan Enterobacteriaceae patogen pada makanan
berbumbu dan tidak berbumbu.
Kunyit (Curcuma longa L.) merupakan salah
satu tanaman rempah-rempah yang digunakan dalam
proses pengolahan makanan6). Penggunaan kunyit
dalam pengolahan makanan dapat membantu
memperlambat proses kerusakan makanan7). Beberapa
penelitian secara in vitro, membuktikan bahwa
senyawa aktif dalam rimpang kunyit mampu
menghambat pertumbuhan jamur, virus, dan bakteri
baik Gram positif maupun bakteri Gram negatif8)
seperti E. coli dan Staphylococcus aereus9), 10). Pada
penelitian ini juga dilihat efektivitas kunyit dalam
menghambat pertumbuhan beberapa jenis bakteri yang
diisolasi dari makanan.
2. Bahan dan Metode
2.1 Sampel makanan
Sampel makanan siap saji diperoleh dari
delapan warung nasi yang berada di salah satu pasar
tradisional di Bandung Utara. Pengambilan sampel
dilakukan selama tiga musim berturut-turut dalam
periode enam bulan, yaitu musim kemarau (12-24 Juli
2000), peralihan (11-23 November 2000), dan
penghujan (13-25 Februari 2001). Pengambilan
sampel makanan pada setiap musim dilakukan
sebanyak 3 kali selama 7 hari, terdiri dari pagi, siang,
dan sore hari. Sampel makanan yang diambil terdiri
dari 2 jenis yaitu berbumbu dan tidak berbumbu,
masing-masing terdiri dari 3 macam yaitu berupa
daging ayam, ikan, dan tahu. Jadi, total sampling
sebanyak 126 kali dalam satu musim, atau sebanyak
378 kali selama 3 musim. Ulangan pada masing-
masing sampel dilakukan sebanyak 2 kali (duplo).
2.2 Isolasi bakteri dari sampel makanan
Isolasi Enterobacteriaceae dari sampel
makanan dilakukan menggunakan medium “Eosin
Methylen Blue Agar” (EMB Agar), “Salmonella-
Shigella Agar” (SSA), dan “Selenith Broth”. Bakteri
yang berhasil diisolasi kemudian diidentifikasi melalui
serangkaian uji biokimia 11). Empat jenis isolat
kemudian dipilih untuk digunakan sebagai bakteri uji
dalam uji hayati. Pada langkah kerja ini juga
dilakukan penghitungan frekuensi ditemukannya
bakteri yaitu dengan cara menghitung keberadaan
bakteri pada setiap sampel makanan.
2.3 Ekstraksi senyawa dari rimpang kunyit
Ekstrak rimpang diperoleh dengan menimbang
1000 gram rimpang segar yang telah dibersihkan dan
dipotong kecil, kemudian dikering-anginkan di tempat
JMS Vol. 7 No. 2, Oktober 2002
yang terlindungi dari sinar matahari. Potongan yang
sudah lemas digerus sampai halus lalu dimaserasi
secara bertahap dengan pelarut n-heksan, etil-asetat,
dan etanol masing-masing selama 24 jam12)13).
2.4 Uji Hayati
Uji hayati pengaruh n-heksan, etil-asetat, dan
etanol hasil ekstraksi dari rimpang kunyit terhadap
pertumbuhan bakteri uji hasil isolasi dlakukan
menggunakan metode Kirby Bauer14), metode
“cylinder”/”hole plate”15), dan metode pengenceran
(“dilution method”)14).
2.4.1 Metode Kirby Bauer
Melalui proses aseptik, sebanyak 0,1 mL
biakan bakteri uji yang mengandung 1,00x106 sel
disebarkan pada medium “Nutrient Agar” yang telah
membeku dalam cawan petri dengan metode “spread
plate”.Terlebih dahulu dilakukan uji pendahuluan
untuk menentukan konsentrasi ekstrak yang dapat
menghambat pertumbuhan bakteri uji sehingga
diperoleh konsentrasi 500.000 ppm, 300.000 ppm, dan
100.000 ppm. Konsentrasi 500.000 ppm dibuat dengan
cara melarutkan 500 mg ekstrak kering dalam 1 mL
larutan pengekstrak. Konsentrasi 300.000 ppm dibuat
dengan melarutkan 300 mg ekstrak kering dalam 1 mL
larutan pengekstrak, sedangkan konsentrasi 100.000
ppm dibuat dengan melarutkan 100 mg ekstrak kering
dalam 1mL larutan pengekstrak.
Sebanyak 50 µL ekstrak diteteskan pada kertas
cakram berdiameter 6 mm lalu diuapkan dengan
“dryer” sehingga pelarut akan menguap dan yang
tersisa pada kertas cakram adalah residu ekstrak.
Volume 50 µL tersebut merupakan volume maksimal
yang dapat dis erap oleh kertas cakram. Kontrol negatif
dibuat dengan meneteskan 50 µL larutan pengekstrak
pada kertas cakram kemudian larutan tersebut
diuapkan dengan “dryer” sehingga diharapkan tidak
menghambat pertumbuhan bakteri uji. Sebagai kontrol
positif, digunakan sirup kloramfenikol (tanpa
pengenceran) dengan meneteskan 50 µL sirup pada
kertas cakram. Kertas cakram pada masing-masing
perlakuan kemudian diletakkan di atas medium
“Nutrient Agar” tadi. Diameter daerah hambatan yang
terbentuk kemudian diukur setelah diinkubasi selama
24 jam pada temperatur 280 C.
2.4.2 Metode “cylinder”/”hole plate”
Satu mililiter bakteri uji yang mengandung
1,00x106 sel dituangkan bersama 15 mL “Nutrient
Agar” ke dalam cawan petri dan dibiarkan membeku,
lalu dibuat silinder/sumur berdiameter 9 mm pada agar
dengan menggunakan pelubang agar. Konsentrasi
ekstrak 500.000 ppm, 100.000 ppm, dan 50.000 ppm
yang diujikan pada metode ini ditentukan melalui uji
pendahuluan. Konsentrasi tersebut dibuat dengan
melarutkan ekstrak dalam “Dimethyl Sulfoxide”
(DMSO). Sebanyak 50 µL konsentrasi ekstrak
diteteskan ke dalam sumur pada medium “Nutrient
JMS Vol. 7 No. 2, Oktober 2002
Agar” tadi. Sebagai kontrol negatif , digunakan
DMSO tanpa ekstrak sebanyak 50 µL yang diteteskan
ke dalam sumur, sedangkan kontrol positif
menggunakan Penisilin-G. Penisilin-G dilarutkan ke
dalam DMSO untuk membuat konsentrasi uji,
kemudian sebanyak 50 µL diteteskan ke dalam sumur.
Volume 50 µL ini disesuaikan dengan metode
sebelumnya. Diameter daerah hambatan yang
terbentuk kemudian diukur setelah diinkubasi selama
24 jam pada temperatur 280 C.
2.4.3 Metode pengenceran (“dilution method”)
Konsentrasi ekstrak 20.000 ppm, 10.000 ppm,
5.000 ppm, dan 1.000 ppm yang digunakan pada
metode ini ditentukan melalui uji pendahuluan dengan
mengacu pada metode sebelumnya. Konsentrasi
tersebut dibuat dengan melarutkan ekstrak dalam
DMSO. Sebanyak 50 µL “Nutrient Broth”, 100 µL
senyawa uji, dan 100 µL biakan bakteri dalam
“Nutrient Broth” yang mengandung 1,00x106 sel,
dimasukkan secara bersamaan ke dalam “micro well
plate”. Sebagai kontrol negatif, sebanyak 50 µL
“Nutrient Broth”, 100 µL Penisilin-G yang telah
dilarutkan dalam DMSO, dan 100 µL biakan bakteri
dalam “Nutrient Broth” yang mengandung 1,00x106
sel, dimasukkan ke dalam “micro well plate”. Sebagai
kontrol negatif, sebanyak 50 µL “Nutrient Broth”, 100
µL larutan DMSO, dan 100 µL biakan bakteri dalam
“Nutrient Broth” yang mengandung 1,00x106 sel,
dimasukkan secara bersamaan ke dalam “micro well
plate”. Inkubasi dilakukan selama 6 jam pada
temperatur 280 C. Pengamatan jumlah sel bakteri uji
dilakukan setiap 2 jam sekali. Sebanyak 12 mL kultur
dalam “micro well plate” diencerkan menggunakan
garam fisiologis 0,85%, lalu 0,1 mL enceran ditanam
pada “Nutrient Agar” yang telah membeku dalam
cawan petri dengan metode “spread plate”.
Perhitungan jumlah sel bakteri dilakukan setelah
diinkubasi selama 24 jam temperatur 280 C.
3. Hasil dan Pembahasan
3.1 Perolehan isolat bakteri
Bakteri yang berhasil diisolasi dari sampel
makanan ada sebanyak 8 jenis yang sama baik pada
musim kemarau, peralihan, dan penghujan sedangkan
pada musim penghujan saja ditemukan empat jenis
lainnya (Gambar 1). Di antara 12 jenis bakteri yang
berhasil diisolasi, delapan di antaranya merupakan
patogen, yaitu E. coli, P. vulgaris, K. oxytoca, P.
45
aeruginosa, E. agglomerans, S. aureus, dan S.
epidermidis16).
Pada umumnya, semua jenis bakteri yang
berhasil diisolasi merupakan bakteri yang dapat hidup
bebas di alam, terutama pada air, tanah, dan partikel
debu di udara 1). E. coli merupakan bakteri predominan
yang ditemukan pada ketiga musim pengambilan
sampel. Hal ini dapat disebabkan oleh kemampuan
bakteri ini beradaptasi dengan baik pada berbagai
habitat18) dan mampu tumbuh secara aktif pada
lingkungan perairan11)13) sehingga kontaminasi E. coli
pada makanan dapat terjadi melalui air yang tercemar.
E. coli yang hidup di tanah dapat mengkontaminasi
makanan melalui partikel debu yang diterbangkan
angin. Keberadaan P. vulgaris pada makanan dapat
berasal dari air dan tanah, terutama tanah yang
mengandung materi organik terdekomposisi13) yang
terdapat disekitar lokasi pengambilan sampel. Pada
musim peralihan, frekuensi ditemukan P. aeruginosa
lebih tinggi dibandingkan musim yang lain. Hal ini
disebabkan pada bulan November, rata-rata
temperatur dan kelembaban udara lebih tinggi
dibanding bulan yang lain (Tabel 4), sehingga kondisi
yang hangat basah tersebut sangat mendukung
pertumbuhan bakteri ini17). Empat jenis bakteri
ditemukan pada musim penghujan saja yaitu P.
alcaligenes, S. odorifera, S. epidermidis, dan S.
aureus. Hal ini terjadi karena pada musim penghujan,
mikroba yang terdapat di udara akan terjatuh bersama
air hujan sehingga populasinya di tanah dan air
menjadi tinggi dan kemungkinan menyebabkan
kontaminasi pada makanan juga tinggi.
3.2 Keberadaan bakteri pada sampel makanan
Frekuensi ditemukannya bakteri pada semua
jenis makanan uji yang berbumbu lebih rendah
dibandingkan pada makanan yang tidak berbumbu.
Hal ini dapat disebabkan oleh adanya beberapa bahan
bumbu yang digunakan dalam pengolahan makanan
mempunyai aktivitas menghambat pertumbuhan
bakteri13). Frekuensi ditemukannya bakteri pada
sampel tahu dan ikan lebih banyak dan paling sedikit
ditemukan pada sampel daging ayam (Gambar 2). Hal
ini dapat disebabkan oleh adanya perbedaan
komposisi kimia dan sifat fisik ketiga jenis makanan
tersebut.
46 JMS Vol. 7 No. 2, Oktober 2002

70

60
(kehadiran

50

40 Kemarau
bakteri/126 sampel)

Peralihan
30
Penghujan

20

10
Total Frekuensi

E.c K.p K.r E.a P.alc S.e

Jenis Bakteri

Gambar 1. Diagram batang total frekuensi ditemukannya bakteri selama pengambilan sampel.

Keterangan aksis :
E.c: E. coli, P.v: P. vulgaris, K.p: K. pneumonieae, K.o: K. oxytoca, K.r: K. rhinosleromatis, P.a: P. aeruginosa,
E.a: E. agglomerans, A.o: A. odorans, P.alc: P. alcaligenes, S.o: S. odorifera,
S.e: S. epidermis, S.a: S. aureus.
(kehadiran

60

50
bakteri/126 sampel)

40

30
Total Frekuensi

20

10

0
Kemarau Peralihan Penghujan
Musim
Daging ayam berbumbu Daging ayam tanpa bumbu
Ikan berbumbu Ikan tanpa bumbu
Tahu berbumbu Tahu tanpa bumbu
Gambar 2. Diagram batang total frekuensi semua jenis bakteri yang ditemukan pada setiap jenis sampel makanan
berbumbu dan tidak berbumbu selama pengambilan sampel.
JMS Vol. 7 No. 2, Oktober 2002 47

350

(kehadiran bakteri/378 sampel)

300

250

Total Frekuensi
200

150

100

50

Pagi Siang Sore

Waktu Pengambilan Sampel

Gambar 3. Diagram batang total frekuensi ditemukannya bakteri pada semua sampel makanan baik pagi, siang, dan
sore hari selama 3 musim pengambilan sampel.

Tabel 1. Diameter daerah hambatan (mm) bakteri uji yang dihasilkan oleh ekstrak n-heksan, etil asetat, dan etanol
dengan metode Kirby Bauer.

Bakteri Konsentrasi Konsentrasi Konsentrasi Kontrol

Ekstrak n-Heksana Ekstrak Etil Ekstrak Etanol Kontol negatif positif
(ppm) Asetat (ppm) (ppm) Syrup
Jam Chlor-
I II III I II III I II III A B C
Pengamatan amfenicol
E. coli 12 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
24 0 0 0 0 0 0 * 0 0 0 0 0 8
36 0 0 0 0 0 0 * 0 0 0 0 0 8
48 8,75 0 0 0 0 0 * 0 0 0 0 0 8
60 8,75 0 0 0 0 0 * 0 0 0 0 0 8
P. aeruginosa 12 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
24 0 0 0 0 0 0 * 0 0 0 0 0 8
36 0 0 0 0 0 0 * 0 0 0 0 0 8
48 8,75 0 0 0 0 0 * 0 0 0 0 0 8
60 8,75 0 0 0 0 0 * 0 0 0 0 0 8
K. pneumoniae 12 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
24 0 0 0 0 0 0 * 0 0 0 0 0 7,5
36 0 0 0 0 0 0 * 0 0 0 0 0 7,5
48 8,75 0 0 0 0 0 * 0 0 0 0 0 7,5
60 8,75 0 0 0 0 0 * 0 0 0 0 0 7,5
S. aureus 12 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
24 0 0 0 0 0 0 * 0 0 0 0 0 8
36 0 0 0 0 0 0 * 0 0 0 0 0 8
48 11 0 0 0 0 0 * 0 0 0 0 0 8
60 11 0 0 0 0 0 * 0 0 0 0 0 8

Keterangan:
* terdapat daerah pertumbuhan/pemadatan koloni bakteri mengelilingi cakram,
I : 500.000 ppm, II : 300.000 ppm, III : 100.000 ppm
A : larutan n-keksan, B : larutan etil asetat, C : larutan etanol.
48
3.3 Keberadaan bakteri selama waktu pendedahan
makanan pada lingkungan
Lamanya waktu pendedahan pada lingkungan dapat
mempengaruhi kandungan bakteri yang terdapat pada
makanan (Gambar 3). Total frekuensi ditemukannya
bakteri pada pagi hari lebih sedikit dibanding siang
dan sore hari. Meskipun kontaminasi dari lingkungan
tetap ada, misalnya dari udara dan debu, tetapi relatif
lebih rendah pada pagi hari dibandingkan siang dan
sore hari. Hal ini disebabkan pada pagi hari, makanan
baru selesai dimasak dan pendedahan belum lama.
Adanya bakteri pada sampel makanan pagi hari dapat
berasal dari bahan bakunya. Banyaknya bahan yang
ditangani memungkinkan masih terdapat mikroba
yang tidak terbunuh dalam proses pengolahan1). Hal
ini juga tergantung pada jumlah populasi mikroba
awal pada bahan baku makanan dan ketahanan
mikroba tertentu terhadap panas.
Pada siang hari, frekuensi ditemukannya
bakteri lebih tinggi dibandingkan pagi hari karena
makanan terdedah lebih lama di lingkungan, sehingga
kemungkinan kontaminasi dari lingkungan lebih
banyak, terutama melalui udara dan debu. Selain itu,
bakteri kontaminan dalam makanan sudah
bereproduksi sehingga jumlah selnya meningkat. Pada
sore hari, terjadi sedikit penurunan frekuensi
ditemukannya bakteri dibandingkan siang hari. Bila
dihubungkan kebiasaan sebagian pedagang, menjelang
sore hari, makanan biasanya dipanaskan kembali
untuk kebutuhan makan sore dan malam hari, apalagi
musim penghujan yang dapat menyebabkan makanan
lebih cepat dingin sehingga pemanasan kembali sering
dilakukan. Adanya aktivitas pemanasan tersebut dapat
menyebabkan terbunuhnya bakteri yang ada pada
makanan sehingga pada sore hari frekuensi
ditemukannya lebih rendah dibandingkan siang hari.
3.4 Ektraksi yang diperoleh dari rimpang kunyit
Melalui proses maserasi selama 24 jam
terhadap rimpang kunyit menggunakan pelarut n-
heksan, etil asetat, dan etanol, diperoleh ekstrak kasar
(“crude extract”) yaitu sebanyak 7,69 gram ekstrak
semi padat n-heksan, 9,44 gram ekstrak padat etil
asetat, dan 18,76 gram ekstrak padat etanol.
3.5 Hasil uji aktivitas biologis ekstrak kasar
rimpang kunyit
3.5.1 Hasil uji menggunakan metode Metode
Kirby Bauer
Hasil yang diperoleh dengan metode Kirby
Bauer menunjukkan bahwa hanya ekstrak n-heksan
500.000 ppm yang dapat menghambat pertumbuhan
semua bakteri uji setelah inkubasi 48 jam (Tabel 1).
Hambatan terbesar terjadi pada S. aureus yaitu 11 mm
JMS Vol. 7 No. 2, Oktober 2002
dan hambatan terkecil pada K. pneumoniae yaitu 8,5
mm. Pada ketiga konsentrasi yang diujikan, ekstrak
etil asetat tidak dapat menghambat pertumbuhan
bakteri uji yang ditandai dengan tidak terbentuknya
daerah hambatan. Pada ekstrak etanol konsentrasi
500.000 ppm justru terbentuk daerah pertumbuhan
koloni yang terlihat sebagai daerah yang lebih
tebal/padat mengelilingi kertas cakram. Hal ini dapat
terjadi oleh adanya senyawa polar yang terdapat dalam
rimpang kunyit, misalnya mineral, vitamin, dan
karbohidrat sederhana8) yang tertarik atau terlarut
dalam etanol selama proses maserasi. Komponen-
komponen tersebut dapat memacu pertumbuhan
bakteri pada medium tempat tumbuhnya.
3.5.2 Hasil uji menggunakan metode
“Cylinder”/”Hole Plate”
Hasil yang diperoleh dengan metode ini,
menunjukkan bahwa ekstrak n-heksan 500.000
ppm,100.000 ppm, dan 50.000 ppm dapat
menghambat pertumbuhan bakteri uji (Tabel 2).
Daerah hambatan yang dihasilkan oleh ekstrak n-
heksan 500.000 ppm terbentuk pada jam ke-12 kecuali
pada K. pneumoniae yaitu setelah 24 jam. Kapsul
yang dimiliki oleh bakteri ini dapat meningkatkan
pertahanannya terhadap senyawa berbahaya dalam
lingkungan17). Bakteri Gram positif lebih peka
terhadap Penisilin-G dibandingkan bakteri Gram
negatif19), sehingga pada pengujian ini dapat dilihat
bahwa daerah hambatan yang terbentuk pada S.
aureus lebih besar dibanding E. coli, K. pneumoniae,
dan P. aeruginosa. Ekstrak n-heksan pada konsentrasi
100.000 ppm dan 50.000 ppm setelah inkubasi selama
12 jam dapat menghambat pertumbuhan S. aureus.
Hal ini dapat terjadi karena bakteri Gram positif tidak
mempunyai membran luar seperti halnya bakteri Gram
negatif, sehingga kehilangan permeabilitas terhadap
antibiotik dan zat kimia lainnya19).
3.5.3 Hasil uji menggunakan metode pengenceran
(“dilution method”)
Pertumbuhan E. coli dalam medium yang
mengandung ekstrak n-heksan dapat dihambat pada
konsentrasi 1000 ppm. Setelah inkubasi 4 jam, jumlah
sel menurun dari 1,00x106 sel/mL menjadi 1,09x105
sel/mL, sedangkan pada kontrol negatif menjadi
5,37x107 sel/mL. Jumlah sel yang paling rendah yaitu
1,00x103 sel/mL dihasilkan pada jam ke-4 dengan
konsentrasi 10.000 ppm (Tabel 3). Jumlah sel P.
aeruginosa dengan perlakuan ekstrak n-heksan 1000
ppm pada jam ke-4 sebesar 4,89x107 sel/mL dan pada
jam ke-6 sebesar 8,33x106 sel/mL. Jumlah tersebut
lebih rendah dibandingkan kontrol negatif pada
konsentrasi dan jam yang sama. Jumlah sel yang
dihasilkan pada perlakuan ekstrak n-heksan
JMS Vol. 7 No. 2, Oktober 2002 49

Tabel 2. Diameter daerah hambatan (mm) bakteri uji yang dihasilkan oleh ekstrak n-heksan dengan metode
“Cylinder”/”Hole Plate”.

Bakteri Kontol positif

Konsentrasi Konsentrasi Kontrol
Penisilin-G
Ekstrak n-Heksana (ppm) Ekstrak Etil Asetat (ppm) negatif
Jam (ppm)
DMSO
Pengamata I II III I II III 50
E. coli 12 15 0 0 0 0 0 50 0
24 17 15 17 0 0 0 16,5 0
36 17 15 17 0 0 0 16,5 0
48 17 15 17 0 0 0 16,5 0
P. aeruginosa 12 11 0 0 0 0 0 16,5 0
24 11 0 0 0 0 0 0 0
36 11,5 0 0 0 0 0 0 0
48 11,5 0 0 0 0 0 0 0
K. pneumoniae 12 0 0 0 0 0 0 0 0
24 11,5 11,5 11,5 0 0 0 0 0
36 11,5 11,5 11,5 0 0 0 0 0
48 11,5 11,5 11,5 0 0 0 0 0
S. aureus 12 12 10 12 0 0 0 20 0
24 12 10 15 0 0 0 30 0
36 12 10 15 0 0 0 35 0
48 12 10 15 0 0 0 35 0

I : 500.000 ppm
II : 100.000 ppm
III : 50.000 ppm
50 JMS Vol. 7 No. 2, Oktober 2002

Tabel 3. Jumlah sel bakteri uji setelah diberi ekstrak n-heksan dengan metode pengenceran (“dilution method”)

Bakteri Jumlah sel per milimeter

Kontol positif
Jam Kontrol
Konsentrasi ekstrak n-heksana (ppm) Penisilin -G
Pengamatan negatif
(ppm)
(DMSO)
20.000 10.000 5.000 1000 50
E. coli 0 1,00x10 6 1,00x10 6 1,00x10 6 1,00x10 6 1,00x10 6 1,00x10 6
2 1,89x10 7 3,43x10 6 5,00x10 8 6,53x10 8 2,49x10 6 2,28x10 7
4 3 4 5 6
4 3,71x10 1,00x10 4,88x10 1,09x10 2,52x10 5,37x10 7
6 1,63x10 3 2,27x10 4 1,02x10 4 3,56x10 6 2,91x10 6 1,52x10 8
6 6 6 6 6
P. aeruginosa 0 1,00x10 1,00x10 1,00x10 1,00x10 1,00x10 1,00x10 6
2 7,38x10 3 2,49x10 5 1,51x10 7 8,52x10 6 2,47x10 6 3,71x10 6
4 5,00x10 4 4,47x10 4 1,03x10 5 4,89x10 7 4,88x10 5 5,53x10 8
4 3 5 6 3
6 7,41x10 4,89x10 3,54x10 8,33x10 1,11x10 5,52x10 7
K. pneumoniae 0 1,00x10 6 1,00x10 6 1,00x10 6 1,00x10 6 1,00x10 6 1,00x10 6
4 6 6 6 5
2 2,19x10 7,79x10 3,47x10 4,73x10 5,19x10 6,87x10 6
4 8,70x10 6 6,61x10 6 5,21x10 7 8,08x10 7 1,02x10 5 3,10x10 7
7 6 8 6 6
6 2,00x10 5,68x10 4,91x10 5,39x10 8,07x10 1,29x10 8
S. aureus 0 1,00x10 6 1,00x10 6 1,00x10 6 1,00x10 6 1,00x10 6 1,00x10 6
2 4,09x10 4 7,87x10 5 7,56x10 6 5,10x10 7 7,79x10 4 3,00x10 6
3 3 6 7 5
4 5,13x10 5,99x10 1,38x10 2,29x10 1,41x10 6,16x10 8
6 2,67x10 5 5,62x10 5 5,12x10 6 7,43x10 6 3.03x10 5 1,44x10 6

Tabel 4. Rata-rata temperatur, curah hujan, kelembaban nisbi, dan kecepatan angin di kota Bandung

Rata-rata
Rata-rata curah hujan (mm) Rata-rata Rata-rata
Bulan Temperatur dan banyaknya hari kelembaban kecepatan angin
udara yang hujan nisbi (%) (Knot)
(Celcius)
Juli 2000 22,9 8,2 (10 hari) 73 4
Agustus 2000 23,0 6,6 (5 hari) 70 4
September 2000 23,2 5,6 (7 hari) 66 5
Oktober 2000 23,7 8,4 (15 hari) 78 4,3
November 2000 23,3 12,4 (26 hari) 83 3
Desember 2000 23,9 5,9 (15 hari) 73 5
Januari 2001 22,7 8,4 (27 hari) 82 4,6
Februari 2001 22,7 11,3 (23 hari) 79 5,7

Sumber: Data Klimatologi Badan Meteorologi dan Geofisika Stasiun Bandung.

JMS Vol. 7 No. 2, Oktober 2002
konsentrasi 10.000 ppm dan Penisilin-G terus
mengalami penurunan mulai jam ke-0 sampai inkubasi
jam ke-6. Pada perlakuan konsentrasi 20.000 ppm,
jumlah sel meningkat setelah inkubasi jam ke-4 dan
ke-6. Hal ini kemungkinan disebabkan pada
konsentrasi yang tinggi, senyawa yang terdapat dalam
ekstrak n-heksan akan berikatan secara acak dengan
lipida pada membran sehingga menyebabkan
kerusakan membran sel. Setelah jam ke-2, senyawa
aktif dalam medium akan menurun konsentrasinya
sehingga tidak cukup untuk menghambat pertumbuhan
sel yang masih hidup. Akibatnya sel akan
bereproduksi sehingga jumlahnya terus meningkat
mulai jam ke-4 sampai jam ke-6. Pada kontrol negatif,
jumlah sel P. aeruginosa menurun mulai jam ke-4
sampai pengamatan jam ke-6. Hal ini dapat
disebabkan oleh rendahnya konsentrasi oksigen dalam
“micro well”. Oksigen yang terlarut dalam medium
mungkin cukup untuk menunjang pertumbuhan
bakteri ini selama 4 jam, tetapi setelah itu, jumlah
oksigen semakin berkurang sehingga pertumbuhan
populasi menurun.
Ekstrak n-heksan dapat menghambat
pertumbuhan K. pneumoniae pada konsentrasi 1000
ppm. Setelah inkubasi 4 jam, jumlah sel menjadi
8,08x106 sel/mL, sedangkan pada kontrol negatif
menjadi 3,10x107 sel/mL. Seperti pada P. aeruginosa,
jumlah sel K. pneumoniae, yang paling rendah yaitu
2,19x104 sel/mL dihasilkan pada jam ke-2 dengan
konsentrasi 20.000 ppm (Tabel 3). Penisilin dapat
diinaktivasi oleh enzim penisilinase atau β-laktamase
dengan cara merusak cincin β-laktam. Pada bakteri
Gram negatif, β-laktamase dikode oleh gen kromosom
dengan melibatkan kontrol represor yang diinduksi
oleh adanya antibiotik β-laktam19). Oleh sebab itu,
bakteri yang tumbuh pada medium yang mangandung
Penisilin-G dapat terbunuh sebagian sehingga
populasinya menurun seperti yang terlihat pada K.
pneumoniae (inkubasi jam ke-2 sampai jam ke-4).
Setelah itu, dapat terjadi induksi dihasilkannya β-
laktamase oleh sel. Akibatnya, sel yang tidak terbunuh
pada jam sebelumnya akan bereproduksi sehingga
terjadi peningkatan jumlah sel pada jam ke-6.
Pada S.aureus, ekstrak n-heksan 1000 ppm
dapat menghambat pertumbuhan setelah inkubasi jam
ke-4 sebesar 2,29x107 sel/mL, sedangkan pada kontrol
negatif sebesar 6,16x108 sel/mL. Konsentrasi 10.000
ppm dan 20.000 ppm mungkin tinggi untuk bakteri
ini, sehingga mampu menghambat populasi dengan
jumlah sel paling rendah pada jam ke-4 bila
dibandingkan dengan perlakuan yang lain. Pada kedua
konsentrasi tersebut, terjadi peningkatan jumlah sel
pada inkubasi jam ke-6. Mekanisme ini kemungkinan
sama seperti yang terjadi pada bakteri uji sebelumnya.
Beberapa jenis bakteri Staphylococcus juga
51
menghasilkan enzim penisilinase. Oleh sebab itu, S.
aureus yang tumbuh pada medium yang mengandung
Penisilin-G dapat terbunuh sebagian sehingga
populasinya menurun seperti yang terlihat pada
inkubasi jam ke-2.
Pada kontrol negatif, jumlah sel S. aureus
menurun setelah jam ke-4 sampai pengamatan jam ke-
6. Hal ini dapat disebabkan oleh keterbatasan nutrien
dalam medium pertumbuhannya. Kultur S. aureus
dipelihara dalam 150 µL medium “Nutrient Broth”
dengan jumlah sel sebanyak 1,00x106 sel/0,1 mL. Hal
ini yang menyebabkan nutrien yang tersedia mungkin
cukup menunjang pertumbuhan bakteri ini selama 4
jam. Pertambahan jumlah sel yang pesat pada jam ke-
2 sampai jam ke-4 dapat menghabiskan nutrien
sehingga setelah jam ke-4 sebagian sel akan mati
karena kekurangan nutrien atau karena laju
pertumbuhannya lambat. Kondisi tersebut berbeda bila
melihat pertumbuhan bakteri ini pada kondisi ideal
yaitu sebanyak 1,00x106 sel/mL dipelihara dalam 150
mL medium “Nutrient Broth”.
Pada ketiga metode pengujian yang digunakan,
ekstrak n-heksan dapat menghambat pertumbuhan
bakteri uji pada konsentrasi yang sangat tinggi. Hal ini
dapat terjadi karena ekstrak yang diperoleh masih
berupa ekstrak kasar yang terdiri dari berbagai macam
senyawa. Satu atau lebih senyawa aktif yang terdapat
dalam ekstrak kasar tersebut kemungkinan bekerja
antagonis dalam menghambat pertumbuhan bakteri
uji.
4. Kesimpulan
Enterobacteriaceae patogen terdapat pada
makanan, baik yang berbumbu maupun yang tidak
berbumbu. Bakteri patogen yang berhasil diisolasi dari
makanan tersebut adalah E. coli, P. vulgaris, K.
pneumoniae, K. oxytoca, P. aeruginosa, E.
agglomerans, S. aureus, dan S. epidermidis. Selain itu,
adanya bumbu dan lamanya waktu pendedahan
makanan pada lingkungan mempengaruhi kehadiran
bakteri kontaminan. Bumbu kunyit berperan dalam
menghambat pertumbuhan bakteri, terbukti dari
ekstrak n-heksan yang diekstraksi dari rimpang kunyit
dapat menghambat pertumbuhan E. coli, K.
pneumoniae, P. aeruginosa, S. aureus.
Daftar Pustaka
1. Frazier, W.C. “Food Microbiology”, 2nd ed.,
McGraw-Hill Publishing Company LTD, New
Delhi, 36-176 (1974).
2. Christchurch City Council. “Food Poisoning
Microorganism”,
(http://www.ccc.govt.nz.com) (1998).
3. Andriani, R. “Uji Kehadiran Senyawa
Antimikroba di dalam Ekstrak Makanan
52
Tradisional Hasil Fermentasi Secara Asai
Mikrobiologi”. Skripsi.Fakultas Farmasi, Institut
Teknologi Bandung, 11 – 12 (1995).
4. Suharyono. “Diare Akut”, lembaga Penerbitan
Fakultas Ekonomi, Universitas Indonesia,
Jakarta.,66,67 (1986).
5. Afrida. Uji Aktivitas Antibakteri dan Antifungi
Minyak Atsiri Empat Jenis Tanaman Suku
Zingiberaceae”, Penelitian Tanaman Obat di
Beberapa Perguruan Tinggi di Indonesia, Edisi
X. Pusat Penelitian dan Pengembangan Farmasi,
Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan,
Departemen Kesehatan RI, Jakarta, 142 (2000).
6. Rukmana, R. “Kunyit”, Penerbit Kanisius,
Yogyakarta, 1-25 (1994).
7. Castleman, M. “The Healing Herb: The Ultimate
Guide to the Curative Power of Nature’s
Medicines”, Rodale Press, Emmaus. Pensylvania.
355-357 (1991).
8. Duke, J.A. “Chemicals and Their Biological
Activities in Curcuma longa (Zingiberaceae)”,
(http://www.chem.uwimona.com) (1992).
9. de-Padua, L.S., Bunyapraphatsara, N. and
Lemmens, R.H.M.J. “Plant Resources of South
East Asia: Medical and Poisonous Plant I”,
Backhuys Publishers, Leiden, 12:1, 210-213
(1999).
10. Budiarti, R. “Pengaruh Konsentrasi Ekstrak
Rimpang Kunyit (Curcuma domestica Val.) dan
Waktu Inkubasi terhadap Jumlah Koloni Bakteri
Escherichia coli”, Penelitian Tanaman Obat di
Beberapa Perguruan Tinggi di Indonesia, Pusat
Penelitian dan Pengembangan Farmasi, Badan
Penelitian dan Pengembangan Kesehatan,
JMS Vol. 7 No. 2, Oktober 2002
Departemen Kesehatan RI, Jakarta, 10, 141
(2000).
11. Black, J.G. “Microbiology: Principles and
Exploration”, 4th ed., Prentice Hall Internasional,
Inc. USA, 340-359, 638-663, A5-A8 (1999).
12. Harborne, J.B. “Metode Fitokimia: Penuntun Cara
Modern Menganalisis Tumbuhan”, Terjemahan
K. Padmawinata dan I.Soediro. Edisi Kedua.
Penerbit ITB, Bandung, 1-42 (1987).
13. Gitter, R.J., Robbit, J.M. dan Schwarting, AE.
“Pengantar Kromatografi”, Terjemahan
K.Padmawinata. Edisi Kedua. Penerbit ITB,
Bandung, 82-85 (1991).
14. Cappucino, J.G. and Sherman, N. “Microbiologi:
A Laboratory Manual”, 2nd ed., The Benyamin
Cumings Publishing Company, Inc. 128-181
(1987).
15. Gandjar, I. “Pedoman Praktikum Mikrobiologi
Dasar”, UI Press, 46,47 (1992).
16. Rollins, D.M. and Joseph, S.W. “Pathogenic
Microbiologi”, (http://www.life.umd.edu.com)
(2000).
17. Todar, K. “Antiphagocyte Defense”,
(http://bact.wisc.edu.com) (1997).
18. Imamuddin, H., Rahayu, R.D., Supriyati, D dan
Kartina, G. “Pola Penyebaran Bakteri Koliform di
Aliran Sungai Brantas, Jawa Timur”, Jurnal
Mikrobiologi Tropika, 2:1, 32-37 (1999).
19. Sherris, J.C. “Medical Microbiology an
Introduction to Infectious Diseases”, 2nd ed.,
Prentice Hall International, Inc., 275-287, 357-
380 (1990).