Gangguan neurodegeneratif (NDD) telah menjadi kesehatan global umum

beban selama beberapa dekade terakhir. Menurut Organisasi Kesehatan Dunia

(WHO), a

30 juta orang akan terpengaruh oleh penyakit Alzheimer di Eropa dan Amerika

USA pada tahun 2050. Terapi efektif dalam bidang yang kompleks ini
mempertimbangkan banyak sekali

gejala yang terkait dengan indikasi NDD, belum ditemukan. Berdasarkan hasil

studi terkait NDD, pencegahan tampaknya menjadi alternatif yang menjanjikan.

Antioksidan dan

sifat anti-inflamasi dihipotesiskan untuk fenolik alami, sekelompok tanaman

produk sekunder yang dapat berdampak positif terhadap penyakit

neurodegeneratif. Dalam hal ini

studi, ekstrak kaya fenolik dari spesies buah yang kurang umum: Blue honeysuckle
(Lonicera

edulis, Turcz. ex. Freyn), berry Saskatoon (Amelanchier alnifolia Nutt.), Dan Cina

Hawthorn (Crateagus pinnatifida Bunge) diperoleh dan dianalisis untuk

mendeteksi

konten zat neuroprotektif dan membangun nilai terapeutik potensial. Tinggi

kromatografi cair kinerja dengan deteksi elektrokimia dioptimalkan dan

selanjutnya diterapkan pada analisis ekstrak spesies buah yang kurang umum.
Diamati

bahwa ekstrak hawthorn Cina dan honeysuckle Biru adalah sumber potensial
perlindungan saraf

antioksidan fenolik. Sesuai hasil, tampaknya buah atau diformulasikan

produk mungkin memiliki potensi untuk pencegahan penyakit neurodegeneratif.

Baru-baru ini, banyak minat telah dihasilkan dalam penemuan dan pengembangan
obat dari kemajuan dipropagasi global gangguan neurodegenerative (NDD).
Jumlah penderita neurologis gejala sisa gangguan nutrisi dan neuropati (352 juta)
dan gejala sisa neurologis sekunder cedera (170 juta) juga menambah beban di atas
secara substansial. Tren ini, tercatat selama

beberapa dekade terakhir [1], telah mengarah pada percepatan dalam pencarian
perawatan terapeutik, karena tidak ada

strategi konvensional, atau obat-obatan baru (HST, CEI) telah mengubah kompleks

masalah dengan meningkatnya jumlah pasien yang diobati dengan NDD.

Sistem saraf, termasuk otak, sumsum tulang belakang, dan saraf tepi, kaya akan
keduanya

lemak tak jenuh (yang rentan terhadap oksidasi) dan zat besi [2]. Kandungan lemak
yang tinggi dari jaringan saraf,

ditambah dengan aktivitas metabolik (aerobik) yang tinggi, membuatnya sangat

rentan terhadap oksidatif

kerusakan [3]. Tingginya kadar zat besi otak dapat menyebabkan stres oksidatif
melalui pengurangan zat besi yang dikatalisis

hidrogen peroksida menjadi radikal hidroksil yang sangat reaktif [4, 5]. Telah
terbukti reaktif itu

spesies oksigen (ROS) adalah mediator penting dari peristiwa pensinyalan sel
seperti inflamasi

reaksi (superoksida) dan pemeliharaan tonus pembuluh darah (oksida nitrat) [6-8].
Produksi berlebihan

ROS, melampaui mekanisme pertahanan antioksidan endogen, disebut sebagai

stres oksidatif

[9]. Overproduksi ROS telah dikaitkan dengan patogenesis berbagai

neurodegenerative
gangguan seperti kegagalan kognitif pada penyakit Alzheimer (AD) [10-15],
degenerasi retina,

iskemik demensia [6, 7, 9], penyakit Parkinson (PD) [16], dan amyotrophic lateral
sclerosis (ALS,

Molekul 2008, 13 2825

"Penyakit Lou Gehrig") [17]. Meskipun hubungan yang signifikan antara

kerusakan oksidatif dan

proses neurodegenerative telah diidentifikasi atau diduga, jalur penting dari

hubungan

antara produksi β-amiloid dan paparan neuron hippocampal terhadap serangan

ROS belum

diperjelas [18-21], Pengurangan stres oksidatif dan peradangan menunjukkan cara

terapi baru

strategi untuk menghambat kaskade patogenetik yang terkait dengan banyak gejala
seperti

atrofi otak, hemodinamik serebrovaskular, penurunan kognitif, apoptosis yang

diinduksi peradangan,

metabolisme lipid dyshomeostasis, dan deposisi amiloid dan lainnya. Situasi telah
menunjukkan

perlunya pencegahan penyakit. Pentingnya diet neuroprotektif telah diterima oleh

publik baru-baru ini. Sebaliknya, strategi terapi saat ini sedang diselidiki untuk AD
termasuk inhibitor

produksi Ap, senyawa yang mencegah oligomerisasi dan fibrilasi, anti-inflamasi

obat-obatan, inhibitor sintesis kolesterol, antioksidan, faktor neurorestoratif dan

vaksin [22,23].

Radikal bebas adalah molekul organik atau anorganik reaktif dengan satu atau
lebih elektron tidak berpasangan,
umumnya terbentuk di dalam tubuh sebagai hasil dari proses metabolisme yang
biasanya dihilangkan oleh

garis antioksidan dari sistem pertahanan tubuh [24]. Pemulung radikal bebas
adalah senyawa yang

mampu menyumbangkan elektron atau atom hidrogen untuk menghambat reaksi

radikal bebas [2]. Sejumlah in

model vitro [25, 26], diikuti oleh penelitian in vivo [27-29], telah menunjukkan
bahwa antioksidan, keduanya

endogen dan diet, dapat melindungi sistem neurocerebral terhadap stres oksidatif
[30, 31]. Sebagai tambahan,

penelitian menunjukkan bahwa senyawa fenolik yang ditemukan terutama dalam

buah-buahan seperti beri, dapat digunakan

perlindungan terhadap defisit terkait NDD dalam fungsi kognitif dan motorik [20,
22, 23, 26].

Bukti epidemiologis yang cukup menunjukkan bahwa konsumsi buah dan sayuran
secara teratur

mengurangi risiko mengembangkan beberapa gangguan neurodegenerative. Juga

telah ditunjukkan bahwa

aktivitas antioksidan bervariasi dengan jenis senyawa fenolik yang ada dalam
buah. Jenis tertentu

senyawa fenolik menunjukkan aktivitas antioksidan lebih besar daripada yang lain
[32, 33]. Spesies buah yang kurang umum

atau tanaman buah alternatif dicirikan oleh ketahanan terhadap faktor abiotik dan
biotik suatu

lingkungan dan komposisi biokimia buah yang berharga [34-38]. Kurangnya data
dalam makanan

Komposisi menyebabkan kesulitan dalam mengukur asupan polifenol harian.

Metode untuk menghitung
total kandungan polifenol dari produk makanan nabati baru-baru ini diusulkan [39-
53]. Sangat luar biasa

penting untuk mengembangkan metode yang efektif untuk mendapatkan peluang

baru untuk pencegahan NDD melalui

penyaringan setiap target tunggal dari bidang kompleks keragaman kimia zat
tanaman. Tinggi

Analisis kromatografi cair kinerja paling umum digunakan untuk mengidentifikasi

antioksidan dalam

sampel minuman menggunakan deteksi UV dan untuk mengukurnya [54-57].

Deteksi yang jauh lebih rendah

batas telah dicapai dengan deteksi elektrokimia [40, 58-61].

Asam galat (3,4,5-trihydroxybenzoic acid, (GA, Gambar 1) adalah semut yang

terbentuk secara alami.

Penelitian ini difokuskan pada penentuan fenol tanaman neuroprotektif (rutin,

quercitrin,

asam galat dan asam 4-aminobenzoat, Gambar 1) dalam buah-buahan dari tiga
spesies tanaman yang kurang diteliti: Biru

honeysuckle (Lonicera edulis, Turcz. ex. Freyn), Saskatoon berry (Amelanchier

alnifolia Nutt.) dan

Chinese hawthorn (Crateagus pinnatifida Bunge) (Gambar 2). Analit target telah
dilaporkan ke

memiliki banyak aktivitas biologis, termasuk anti alergi, antiinflamasi, antivirus,

aktivitas antiproliferatif, dan antikarsinogenik dengan efek menguntungkan pada

metabolisme mamalia

[80-82], aktivitas antioksidan dan antiinflamasi dalam sistem neurocerebral

berkontribusi pada aktivitas tersebut

bioavailabilitas dan dosis [78]. Mencegah urutan kondisi yang melibatkan usus
transportasi serta mekanisme spesifik struktural untuk penyerapan target [83] dan
mobilitasnya

melalui aliran darah, kemampuan untuk menembus penghalang hematoencephalic

memainkan peran kunci

efek neuroprotektif [63,64]. Asam galat, beberapa turunan pABA, rutin dan
quercitrin memenuhi ini

Persyaratan.

Hasil dan Diskusi

Antioksidan diketahui berperan dalam mengurangi reaksi. Zat tanpa elektrokimia

aktivitas adalah aktivitas antioksidan kurang, di sisi lain, aktivitas tersebut

diharapkan dari jenisnya

zat yang membuang level rendah dalam sinyal setengah bergelombang. Karena ada
hubungan yang signifikan dalam

antara aktivitas antioksidan zat dan kemampuan untuk memberikan sinyal

elektrokimia

[32,78,84,85], deteksi elektrokimia selektif dan sensitif digabungkan dengan

kinerja tinggi

liquid chromatography (HPLC-ED) menghadirkan alat analitik yang optimal untuk

pendeteksiannya.

Identifikasi dan kuantifikasi senyawa fenolik dalam buah-buahan dengan

menggunakan HPLC-ED

Terutama kami fokus pada studi perilaku elektrokimia dasar senyawa yang
menarik

(rutin, quercitrin, asam galat dan asam 4-aminobenzoat - pABA). Melalui

hidrodinamik

voltammogram kami mengkarakterisasi sinyal oksidatif dan frekuensi optimal pH

fase gerak
untuk penentuan sensitif antioksidan fenolik. Kami menerapkan potensi dari 100
mV hingga 950 mV

(per 50 mV) untuk mengerjakan elektroda karbon kaca. Kami mengamati sinyal
oksidatif yang terkait dengan

(Lonicera edulis Turcz. Ex. Frein) var.

Goluboje vereteno ‘

Buah Saskatoon Amelnchier alnifolia Hawthorn (Crataegus pinnatifida)

(Lonicera edulis Turcz. Ex. (Frein)

var. ‚Altaj‘

Molekul 2008, 13 2828

konversi elektrokimia kelompok hidroksil dari molekul target [40,86]. Sinyal

muncul

sudah mencapai 200 mV. Untuk mendapatkan sensitivitas yang memadai kami
memilih 950 mV untuk percobaan berikut

(Gambar 3A).

Gambar 3. (A) Kromatogram HPLC-ED khas dari rutin, quercitrin, asam galat dan
4-

asam aminobenzoat, dan asam salisilat. (B, C) Kromatogram HPLC-ED khas

ekstrak tumbuhan.

Pemisahan molekul target dilakukan pada kolom Restek Allure C18 dengan fase
terbalik

elusi. Larutan metanol - 60% dan (0,065 M) asam asetat - 40% (v / v) digunakan
sebagai seluler

tahap. Kondisi diberikan: kolom dan suhu detektor 55 ° C, laju aliran fase gerak
1 mL / menit, potensial elektroda yang bekerja 950 mV. Dalam kondisi ini kami
menganalisis ekstrak dari

Crataegus pinnatifida, Lonicera edulis dan Amelanchier alnifolia (Gambar 3B, C).
Dalam ekstrak

Chinese Hawthorn (Crataegus Sp.) Kami menentukan bahwa kandungan asam

galat hampir tiga kali lipat

lebih tinggi, dibandingkan dengan pABA dan rutin (Tabel 1), sedangkan quercitrin
tidak terdeteksi. In vivo

quercitrin dapat menjadi antioksidan dan agen pelindung saraf yang lebih penting
daripada quercetin

ketersediaan hayati yang tinggi di saluran pencernaan [26].

Sebuah kromatogram HPLC-ED khas ekstrak dari Crataegus pinnatifida

ditunjukkan pada Gambar

3C. Kandungan quercitrin yang lebih tinggi terdeteksi pada buah Lonicera edulis
dan Amelanchier alnifolia di Indonesia

puluhan mg per 100 g berat segar. Quercitrin telah ditemukan di berbagai macam
beri seperti

whortleberry (158 mg / kg berat segar), lingonberry (74 dan 146 mg / kg),

cranberry (83 dan 121)

mg / kg), chokeberry (89 mg / kg), rowan manis (85 mg / kg), rowanberry (63 mg /
kg), berry buckthorn laut

(62 mg / kg) dan crowberry (53 dan 56 mg / kg) [54]. Selain itu, konten tertinggi di
Lonicera edulis

dan Amelanchier alnifolia terbuat dari asam galat (Tabel 1). Menurut Pokorna dan
Matuskovic tingkat

dari aglikon rutin yang diperoleh pada beberapa genotipe Lonicera Sp. tidak
melampaui level 300
mg / kg [87]. asam para-Aminobenzoic membantu tubuh menghasilkan nutrisi
penting seperti vitamin K,

asam folat dan tiamin melalui stimulasi bakteri usus, memungkinkan mereka untuk
menghasilkan asam folat,

membantu dalam pembentukan sel darah merah yang membawa oksigen ke

jaringan otak sensitif dan ke semua bagian

tubuh. Dosis terapi khas pABA adalah 300 hingga 400 mg setiap hari [88]. Dari
sudut pandang

pandangan total konten fenolik, buah-buahan Crataegus pinnatifida memiliki

hampir empat kali lebih tinggi

Kandungan fenolat neuroprotektif, dibandingkan dengan spesies tanaman lain yang

kami selidiki. Ini bisa

menjelaskan aktivitas antioksidan yang cukup besar dari spesies tanaman ini.

Eksperimental

Bahan kimia

Standar flavonoid untuk HPLC: asam galat dan asam 4-aminobenzoat (Sigma
Aldrich Corp., USA),

rutin trihydrate dan quercitrin dihydrate (Roth GmbH, Karlstruhe, Jerman)

digunakan. Metanol

(> 99,9%; v / v), asam asetat, asam format untuk HPLC dan semua bahan kimia
lain yang digunakan dibeli dari

Sigma Aldrich.

Molekul 2008, 13 2830

Kromatografi cair kinerja tinggi dengan deteksi elektrokimia (HPLC-ED)

Instrumen yang digunakan terdiri dari pompa pengiriman pelarut (ESA Inc., Model
582, Chelmsford, MA,
USA), sel penjaga (ESA Inc., Model 5020), fase balik Metachem Restek Allure

kolom kromatografi (150,0 × 4,6 mm, ukuran partikel 5 μm, Kanada), dan
elektrokimia

detektor. Detektor elektrokimia mencakup satu sel analitik flow-through volume

rendah (ESA)

Inc., Model 5040), yang terdiri dari elektroda karbon yang berfungsi seperti kaca,
hidrogen-paladium

elektroda sebagai elektroda referensi dan elektroda karbon tambahan, dan

Coulochem III sebagai kontrol

modul. Sampel (5 μL) diinjeksi menggunakan autosampler (ESA Inc., Model 540
Microtiter

HPLC). Data yang diperoleh dirawat oleh perangkat lunak CSW 32 (Versi 1.2.4,
Data Apex, Czech

Republik). Potensi sel pelindung ditetapkan sebagai 0 V. Elektroda karbon kaca

dipoles secara mekanis

dengan 0,1 μm alumina (ESA Inc.) dan disonikasi pada suhu kamar selama 5 menit
menggunakan Sonorex Digital

10 P Sonicator (Bandelin, Berlin, Jerman) di 40 W.

Bahan biologis

Sampel buah berikut dianalisis untuk evaluasi konten neuroprotektif: i) satu

genotipe

dari Blue Honeysuckle (Lonicera edulis, Turcz. Ex. Freyn). Buah dipanen pada
pertengahan Mei dan

disimpan pada suhu -18 ºC selama tujuh bulan. ii) Satu varietas berry Saskatoon
(Amelanchier alnifolia Nutt.).

Buah dipanen pada bulan Juli; setelah panen, buah disimpan pada suhu -18 ºC,
selama lima bulan. aku aku aku)
Satu varietas (Crateagus pinnatifida Bunge). Buah dipanen pada awal Oktober dan
disimpan di -

18 ºC, selama tiga bulan.

(Lonicera edulis Turcz. Ex. Frein) var. “Goluboje vereteno“. Varietas ini sebagai
bibit diperoleh

dari penyerbukan gratis berawal di kebun "Sady Sibiri". Semak bercabang lemah
bulat

berbentuk bulat dan pertumbuhan tunasnya cepat. Tingkat resistensi es tinggi.

Berry panjang dengan

bubur lunak itu manis, asam, dan agak pahit. Hasilnya 2,5 kg.

(Lonicera edulis Turcz. Ex. Frein) var. "Altaj" adalah varietas hibrida yang
diperoleh dari pengembangbiakan

Lonicera kamtschatica × Lonicera turczaninowii. Semak padat ini menunjukkan

pertumbuhan dinamis dan a

tingkat ketahanan beku yang tinggi. Berry lindung nilai berbentuk silinder, biru
tua, dengan rata-rata 1,05 g

nilai berat. Daging buahnya berair, manis dan asam, dengan aroma yang kuat.
Masa panen datang sangat

dini; semak memberikan hasil sekitar 2,8 kg.

Berry Saskatoon (Amelnchier alnifolia). Amelanchier alnifolia Nutt. adalah pohon

atau semak menyediakan

hasil yang baik dari ungu, biru tua atau buah hitam yang disebut juga Juneberry.
Mungkin ada banyak

level dalam ukuran buah, berkisar rata-rata dari 0,6-1,6 mm. Buah yang dikupas
tipis sangat manis dan

juicy, mirip dengan blueberry yang biasa ditanam. Umumnya, buah Amelanchier
diketahui digunakan oleh
tabib dalam pengobatan tradisional.

Hawthorn (Crataegus pinnatifida). Chinese Hawthorn milik keluarga Rosacea,

yang menunjukkan a

kandungan konstituen tanaman fenolik yang tinggi. Ukuran buah sekitar 40 mm,
berbiji merah dengan 4-5 biji

bubur kuning. Buah Crataegus digunakan untuk menjadi sangat populer dalam
pengobatan tradisional dan sering digunakan

saat ini oleh tabib di bagian timur Asia.

Molekul 2008, 13 2831

Persiapan sampel

Buah-buahan dari spesies yang dianalisis dicairkan pada suhu kamar. Berat buah-
buahan (sekitar

6 g) dipindahkan ke mortar, dan nitrogen cair ditambahkan. Sampel beku digiling

selama 5

min. Kemudian, 80% metanol (10 mL) ditambahkan ke dalam mortar, dan sampel
ditumbuk selama 10 menit.

Homogenat dipindahkan ke tabung reaksi dan dihomogenisasi dengan

mengguncang Vortex – 2 Genie

(Industri Ilmiah, New York, AS) pada 4 ° C selama 30 menit. Homogenat

disentrifugasi (14.000

g) selama 30 menit pada suhu 4 ° C menggunakan Universal 32 R centrifuge

(Hettich-Zentrifugen GmbH, Tuttlingen,

Jerman). Sebelum analisis, supernatan disaring melalui filter membran (0,45 μm

Nylon

disk filter, Millipore, Billerica, Mass., USA). Filtrate (150 μL) diencerkan 1: 400-
1.080 dengan 80%

metanol.
Statistik deskriptif

Data diproses menggunakan Microsoft Excel® (USA). Hasil dinyatakan sebagai

rata-rata ± standar

deviasi (S.D.), kecuali dinyatakan sebaliknya.

Ucapan Terima Kasih

Dukungan keuangan dari QH82232 melalui proyek NAZV sangat diakui