Diagnosis dapat ditegakkan berdasarkan tanda klinis, serologi, histopatologi, dan isolasi virus dari induk

babi dan / atau janin. Diagnosis berdasarkan tanda-tanda klinis sulit dicapai karena tanda-tanda variabel
dari babi ke babi dan dari peternakan ke peternakan. Infeksi bakteri sekunder juga dapat memperumit
diagnosis. Namun, PRRS harus dicurigai jika selama periode 2 minggu terdapat jumlah bayi lahir mati
yang abnormal (lebih dari 20% dari semua kelahiran mati), aborsi terlambat dan jauh lebih cepat
melebihi 8%, atau peningkatan kematian babi ≥ 25%. di minggu pertama kehidupan.

Urutan peristiwa yang dapat membantu dalam mendiagnosis penyakit ini telah dijelaskan. Beberapa gilt
dan / atau babi betina menjadi lesu dan anorektik dan mengembangkan penyakit pernapasan sedang
dan demam (hingga 107 F [41,6 C]). Babi lain di peternakan kemudian terpengaruh. Penyakit akut
bersifat sementara tetapi tampaknya mempengaruhi hewan untuk infeksi sekunder. Pada babi bunting,
pemulihan dari penyakit akut diikuti oleh komplikasi reproduksi yang serius, misalnya peningkatan
kelahiran mati dan kematian neonatal diikuti dengan peningkatan mortalitas pada janin dalam jangka
pendek dan peningkatan mumifikasi janin.

Tidak ada lesi besar yang terlihat pada nekropsi kecuali pada jantung yang membesar dan kelenjar getah
bening yang membesar (K. D. Rossow, tidak dipublikasikan). Untuk histopatologi, otak, jantung, paru-
paru, limpa, kelenjar getah bening, dan turbinat hidung adalah sampel yang baik. Pneumonia interstitial
yang ditandai dengan septa alveolar yang menebal dengan makrofag merupakan lesi kardinal pada
penyakit ini. Virus lain yang dapat menyebabkan pneumonia interstitial adalah swine influenza (strain
H1N1 dan H3N2), strain atipikal influenza, dan porcine pernapasan coronavirus. Infeksi lain yang dapat
disalahartikan sebagai sindrom ini adalah PRV, EMCV, PPV, PCMV, Leptospira pomona, dan L. bratislava.
Tes antibodi fluoresen langsung (DFA) pada bagian paru-paru yang beku juga dapat digunakan untuk
membuat diagnosis PRRS. Namun, jaringan janin tidak memberikan hasil yang memuaskan pada DFA (D.
A. Benfield, komunikasi pribadi).

Deteksi antibodi dalam cairan janin atau darah prekolostral babi yang lahir mati dan babi yang lemah
dan peningkatan titer antibodi dalam serum yang diambil dengan selang waktu 3 minggu merupakan
indikasi lain dari PRRS. Karena prevalensi babi akhir yang seropositif pada ternak yang terinfeksi tinggi,
ternak yang terinfeksi dapat diidentifikasi dengan menggunakan jumlah sampel yang relatif kecil,
terutama setelah wabah akut. Jadi, maksimum 12 sampel serum berpasangan dari babi akhir digunakan
di Inggris untuk membuat diagnosis. 'Untuk mencapai tingkat kepercayaan 95% ketika tingkat infeksi
adalah 30% dalam satu kawanan, minimal 9 sampel per kandang harus diuji dari kawanan itu. Akan
tetapi, mungkin tepat untuk mengambil sampel dalam jumlah yang lebih banyak daripada babi muda
karena babi betina memiliki seroprevalensi yang lebih rendah daripada babi finishing. Dianjurkan untuk
memiliki minimal 30 ekor babi betina per kandang.

Serokonversi dapat ditentukan dengan menggunakan tes SN, IFA, IPMA, atau ELISA. Titer IPMA
berkembang sedini 1-2 minggu pasca infeksi dan mencapai puncak 1: 40.000 pada 5-6 minggu pasca
infeksi. Antibodi bertahan hingga 1 tahun pada induk, dengan beberapa induk menjadi seronegatif
dalam 4-6 bulan. Namun, tes serologis saat ini untuk 1 galur virus tertentu mungkin tidak selalu sensitif
dalam mendeteksi galur lain. Selain itu, serologi tidak selalu dapat diandalkan untuk mendiagnosis
infeksi virus dan sering disalahgunakan. Misalnya, semua hewan tidak terinfeksi selama wabah. Dalam 1
kawanan, 8% dari induk betina tetap seronegatif. Demikian pula, babi dapat menjadi viremik tetapi
seronegatif pada tahap awal infeksi.

Untuk isolasi virus, banyak sampel dari babi dari berbagai umur harus diserahkan. Babi yang lemah atau
babi yang terinfeksi secara akut dengan tanda-tanda pernafasan di kandang farrowing adalah kandidat
yang baik untuk isolasi virus. Paru-paru, limpa, kelenjar getah bening, dan serum merupakan contoh
yang tepat untuk isolasi virus. Serum dan plasma lebih baik daripada sel buffy coat untuk isolasi virus.
PRRSV telah diisolasi. dari serum babi yang diinokulasi PRRSV hingga 41 dpi meskipun terdapat titer
antibodi yang tinggi (titer IFA ≥ 1: 1.280). Paru-paru, limpa, darah jantung, dan cairan dada dari janin
yang lahir mati dan yang diaborsi juga cukup untuk isolasi virus. Virus dapat diisolasi dari paru-paru,
serum, plasma, dan sel buffy coat selama 6-8 minggu setelah infeksi dan telah diisolasi dari jaringan yang
dibekukan selama 2-4 tahun.30 Janin yang diautolisis dan dimumikan tidak cocok untuk isolasi virus.

Virus dapat diperbanyak dalam PAM atau dalam sel CL2621, tetapi PAM tampaknya paling cocok untuk
isolasi banyak isolat PRRSV, terutama dari sampel serum. Kehadiran antibodi dapat meningkatkan
serapan virus oleh makrofag, karena mereka memiliki reseptor Fc. Garis kloning sel MA-104 juga
mendukung pertumbuhan PRRSV (H. S. Joo, komunikasi pribadi).
Porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) is characterised by reproductive failure
of sows and respiratory problems of piglets and growing pigs. The disease is caused by the
PRRS virus (PRRSV), a virus currently classified as a member of the order Nidovirales, family
Arteriviridae, genus Arterivirus. The primary target cells of the virus are differentiated
macrophages of the pig, mainly alveolar but also present in other tissues. Two major
antigenically different types of the virus exist: Type 1 (previously described as European – EU)
and Type 2 (previously North American – NA). Historically, Type 1 was restricted to Europe
and Type 2 to North America; currently they are spread globally. The virus is primarily
transmitted via direct contact but also by contact with faeces, urine, semen and fomites. The
possibility of insect vectors (houseflies and mosquitos) and aerogenic spread for short distances
has also been confirmed. PRRS occurs in most major pig-producing areas throughout the world.
The reproductive failure is characterised by infertility, late fetal mummification, abortions,
stillbirths, and the birth of weak piglets that often die soon after birth from respiratory disease
and secondary infections. Older pigs may demonstrate mild signs of respiratory disease, usually
complicated by secondary infections. In 2006, a highly pathogenic PRRSV strain emerged in
China (People’s Rep. of) causing high fever (40–42°C) in all age groups, abortions in sows and
high mortality in sucking piglets, weaners and growers.

Identification of the agent: Virological diagnosis of PRRSV infection is difficult; the virus can be
isolated from serum or organ samples such as lungs, tonsils, lymph nodes and spleen of affected
pigs. As porcine alveolar macrophages are one of the most susceptible culture systems for virus
of both types, these cells are recommended for virus isolation. Recent findings show that porcine
monocyte-derived macrophages can also be used for PRRSV isolation and propagation in
culture. MARC-145 (MA-104 clone) cells are suitable for isolation of PRRSV Type 2. There is
variability between batches of macrophages in their susceptibility to PRRSV. Thus, it is
necessary to identify a batch with high susceptibility, and maintain this stock in liquid nitrogen
until required. The virus is identified and characterised by immunostaining with specific antisera
or monoclonal antibody. Additional techniques, such as immunohistochemistry and in situ
hybridisation on fixed tissues and reverse-transcription polymerase chain reaction, have been
developed for laboratory confirmation of PRRSV infection.

Serological tests: A wide range of serological tests is currently available for the detection of
serum, oral fluid and meat juice antibodies to PRRSV. The immunoperoxidase monolayer assay
and immunofluorescence assay using alveolar macrophages or MARC-145 cells can be used for
the detection of antibodies specific to Type 1 or Type 2 PRRSV. Commercial or in-house
enzyme linked immunosorbent assays (ELISA) are now most often used for PRRSV diagnosis.
An indirect ELISA and a blocking ELISA have been described as well as a double ELISA, using
antigen from both Type 1 and Type 2 genotypes, that can distinguish between serological
reactions to the two types. There are also commercial ELISAs specifically designed for detection
of PRRSV seroconversion in oral fluid.
Requirements for vaccines: Vaccines can be of value as an aid in the prevention or control of
reproductive and respiratory forms of PRRS. Vaccination with modified live virus may result in
shedding of vaccinal virus in semen and vertical and horizontal transmission between sows and
piglets and between vaccinated and non-vaccinated pigs. Subsequent vaccine-virus-induced
adverse signs have been reported. Modified live virus vaccines can persist in vaccinated herds.
Whole virus inactivated vaccines are also available.
Pengambilan Sampel

Sampel darah dengan antikoagulan dikumpulkan dari 10 peternakan babi intensif dan peternakan
rakyat di Bali. Selanjutnya serum dikumpulkan untuk deteksi antibodi dan spesimen jaringan dan
darah untuk isolasi virus. Jumlah sampel serum dari babi yang secara klinis sehat per kandang
adalah 30. Sampel jaringan diambil dari babi yang secara klinis sakit. Babi dengan tanda-tanda
klinis dicurigai PRRS dinekropsi. Lesi pascamati dicatat dan jaringan seperti paru-paru, hati,
limpa, ginjal dan kelenjar getah bening superfisial organ alat reproduksi dikumpulkan dalam
wadah tanpa medium dan disimpan pada suhu -20°C untuk pemeriksaan virus, sebagian sampel
dikumpulkan pada wadah dengan formalin 10% untuk pemeriksaan histopatologi.

Deteksi Antibodi

Antibodi terhadap virus PRRS dideteksi menggunakan ELISA kit komersial Anigen PRRSV Ab
ELISA 2.0® (Anigen Animal Genetics Inc., Korea). Serum diencerkan 1:40 dengan larutan
pengencer yang telah tersedia. Serum yag telah diencerkan ditambahkan masingmasing ke dalam
sumuran mikroplate kode NHC dan PRRS yang sebelumnya telah dilapisi dengan antigen
rekombinan PRRS dan antigen NHC. Protokol yang sama dilakukan untuk kontrol positif dan
negatif. Mikroplate diinkubasikan pada suhu kamar selama 30 menit dan selanjutnya dicuci
sebanyak lima kali. Mikroplate ditambahkan anti-porcine-HRP dan diinkubasikan selama 30
menit. Mikroplate dicuci sebanyak lima kali. Substrat ditambahkan untuk setiap sumur dan
diinkubasikan selama 15 menit. Setelah itu stop solution ditambahkan 100 μL ke setiap sumur.
Nilai absorbansi dibaca dengan spektrometer pada panjang gelombang 450 nm dan panjang
gelombag referensi 620 nm. Validitas uji dinilai sesuai aturan pabrik. Cut-off criteria (S/P rasio)
dihitung sesuai dengan manual yag disediakan. Rasio S/P yang lebih besar atau sama dengan 0,4
dianggap positif, sedangkan rasio S/P yang kurang dari 0,4 diaggap negatif.

Deteksi Virus

Virus PRRS dideteksi dari sampel lapangan dengan menggunakan reverse-

transcriptasepolymerase chain reaction (RT PCR). Primer yang digunakan adalah NSP2-F5’-
AAAGACCAGATGGAGGAGGA-3’, NSP2-R 5’-GAGCTGAGTATTTTGGGCGTG-3’,
ORF5-F 5’- ATGTTGGGGAAGTGCTTGACC-3’, dan ORF5 –R
5’CTAGAGACGACCCCATTGTTCCGC-3’ (Feng et al., 2008). RNA genom diisolasi dari
serum atau jaringan menggunakan protokol ekstraksi Trizol (Invitrogen) setelah sampel jaringan
ditambahkan proteinase K dalam SDS 2%. RT-PCR untuk deteksi virus PRRS dilakukan dengan
menggunakan SuperScriptTMIII One-Step RT-PCR system dengan Platinum® Taq DNA
Polymerase (Invitrogen). Kondisi reaksi dilakukan dalam 0,2 mM dNTP, 1,6 mM MgSO4,
dengan konsentrasi masingmasing primer 600 μM. Setelah penambahan 1- 3 μL sampel RNA
dan enzim, tabung PCR dimasukkan ke dalam thermocycler (GenAmp PCR System 9700).
Siklus RT-PCR yang lengkap adalah selama 60 menit pada suhu 45OC, prapemanasan dan tahap
aktivasi Tagpolimerase pada suhu 95OC selama tujuh menit. Selanjut sebayak 40 siklus yang
masing-masing 45 detik pada suhu 94OC, selama 45 detik pada suhu 50-55OC, dan pada suhu
72OC selama 60 detik. Tahap sintesis akhir pada suhu 72OC selama lima menit. Setelah RT-
PCR, sebanyak 10-20% produk ditambahkan dengan 1-2 μL loading dye (Bromphenol-blue dan
Cyline Cyanol), kemudian dimasukkan ke dalam sumur cetakan gel agarose 1%, bersamaan
dengan sampel, DNA ladder 100 bp (Ivitrogen) juga ikut dielektroforesis. Gel agarose diwarnai
dengan 25μg/ml ethidium bromida. Produk divisualisasikan dalam kotak UV dan
didokumentasikan menggunakan Photodoc-TIHood.
Sindrom reproduksi dan pernapasan babi (PRRS) ditandai dengan kegagalan reproduksi babi
betina dan masalah pernapasan pada anak babi dan babi yang sedang tumbuh. Penyakit ini
disebabkan oleh virus PRRS (PRRSV), virus yang saat ini diklasifikasikan sebagai anggota ordo
Nidovirales, famili Arteriviridae, genus Arterivirus. Sel target utama virus adalah makrofag babi
yang dibedakan, terutama alveolar tetapi juga ada di jaringan lain. Ada dua jenis utama virus
yang berbeda secara antigen: Tipe 1 (sebelumnya disebut sebagai Eropa - UE) dan Tipe 2
(sebelumnya Amerika Utara - NA). Secara historis, Tipe 1 terbatas pada Eropa dan Tipe 2
hingga Amerika Utara; saat ini mereka tersebar secara global. Virus ini terutama ditularkan
melalui kontak langsung tetapi juga melalui kontak dengan feses, urin, air mani, dan makanan.
Kemungkinan vektor serangga (lalat rumah dan nyamuk) dan penyebaran aerogenik untuk jarak
pendek juga telah dikonfirmasi. PRRS terjadi di sebagian besar daerah penghasil babi utama di
seluruh dunia. Kegagalan reproduksi ditandai dengan kemandulan, mumifikasi janin terlambat,
aborsi, lahir mati, dan kelahiran anak babi yang lemah yang sering mati segera setelah lahir
akibat penyakit pernafasan dan infeksi sekunder. Babi yang lebih tua mungkin menunjukkan
tanda-tanda penyakit pernapasan ringan, biasanya dipersulit oleh infeksi sekunder. Pada tahun
2006, strain PRRSV yang sangat patogenik muncul di China (Rep. Rakyat) yang menyebabkan
demam tinggi (40–42 ° C) pada semua kelompok umur, aborsi pada induk babi, dan kematian
tinggi pada anak babi penghisap, penyapih, dan petani. Identifikasi agen: Diagnosis virologi dari
infeksi PRRSV sulit; virus dapat diisolasi dari sampel serum atau organ seperti paru-paru,
amandel, kelenjar getah bening dan limpa babi yang terkena. Karena makrofag alveolar babi
adalah salah satu sistem kultur yang paling rentan terhadap kedua jenis virus, sel-sel ini
direkomendasikan untuk isolasi virus. Temuan terbaru menunjukkan bahwa makrofag yang
diturunkan dari monosit babi juga dapat digunakan untuk isolasi dan perbanyakan PRRSV dalam
kultur. Sel MARC-145 (klon MA-104) cocok untuk isolasi PRRSV Tipe 2. Ada variabilitas
antara kumpulan makrofag dalam kerentanannya terhadap PRRSV. Jadi, perlu untuk
mengidentifikasi bets dengan kerentanan tinggi, dan mempertahankan stok ini dalam nitrogen
cair sampai diperlukan. Virus diidentifikasi dan ditandai dengan imunostaining dengan antisera
spesifik atau antibodi monoklonal. Teknik tambahan, seperti imunohistokimia dan hibridisasi in
situ pada jaringan tetap dan reaksi berantai polimerase transkripsi balik, telah dikembangkan
untuk konfirmasi laboratorium dari infeksi PRRSV. Tes serologis: Berbagai tes serologis saat ini
tersedia untuk mendeteksi serum, cairan oral dan antibodi sari daging terhadap PRRSV. Uji
imunoperoksidase monolayer dan uji imunofluoresensi menggunakan makrofag alveolar atau sel
MARC-145 dapat digunakan untuk mendeteksi antibodi yang spesifik untuk PRRSV Tipe 1 atau
Tipe 2. Tes imunosorben terkait enzim komersial atau in-house (ELISA) sekarang paling sering
digunakan untuk diagnosis PRRSV. ELISA tidak langsung dan ELISA pemblokiran telah
dijelaskan serta ELISA ganda, menggunakan antigen dari genotipe Tipe 1 dan Tipe 2, yang dapat
membedakan antara reaksi serologis untuk kedua jenis tersebut. Ada juga ELISA komersial yang
dirancang khusus untuk mendeteksi serokonversi PRRSV dalam cairan oral. Persyaratan untuk
vaksin: Vaksin dapat bermanfaat sebagai bantuan dalam pencegahan atau pengendalian bentuk
reproduksi dan pernapasan PRRS. Vaksinasi dengan virus hidup yang dimodifikasi dapat
mengakibatkan pelepasan virus vaksin dalam air mani dan penularan vertikal dan horizontal
antara babi betina dan babi serta antara babi yang divaksinasi dan yang tidak divaksinasi. Tanda-
tanda merugikan yang disebabkan oleh vaksin-virus telah dilaporkan. Vaksin virus hidup yang
dimodifikasi dapat bertahan dalam kawanan yang divaksinasi. Vaksin yang dilemahkan oleh
virus juga tersedia.
Serology Serology also has some limitations when used for the diagnosis of PRRS:

IFA antibodies usually appear within 2 weeks of exposure to PRRS virus and may be short-lived,
because some pigs become seronegative as soon as 3 months post exposure. ELISA antibodies
appear within 3 weeks of exposure and the duration of ELISA antibodies is not known.

SN antibodies usually do not appear until after clinical signs resolve at 4-5 weeks post exposure.

Positive serology can occur in young pigs that have not been infected with the virus because
passively acquired maternal antibodies usually persist to 6-8 weeks of age, but sometimes persist
up to 16 weeks of age. . Some laboratories offer a serological screening test for PRRSvirus at a
single serum dilution (usually 1: 20) that provides a positive or negative result. Other
laboratories provide serologicaltiters, which must be interpreted carefully. . Antibody titers from
a single (nonpaired) serum sample are difficult to interpret because some herds may
seroconvertto PRRS virus, but have no history of clinical disease associated with PRRS.
Pathogenicity among PRRS isolates appears to vary widely. Positive serology tests on these
farms implies previous exposure to PRRS virus, but does not confirm current virus infection.
Clinical disease in seropositive animals may be due to other pathogens,such as pseudorabies
virus or swine influenza virus. A change from seronegative to seropositive using a screening test
or a four-fold rise in titers between samples collected from the same animal at least 2 weeks
apart indicatesrecent PRRS virus infection.Remember, because sows are often infected during
the last trimester, they may be seropositive at farrowing and paired serology will probably not
show a four-fold increase at that time.