Pattern of Crevicular Alkaline Phosphatase During Orthodontic

Tooth Movement: Leveling and Alignment Stage

(Corak Alkalin Fosfatase Krevikel Semasa Pergerakan Gigi Ortodontik:
Peringkat Penyusunan Gigi)
ASMA ALHUSNA ABANG ABDULLAH*, ROHAYA MEGAT ABDUL

WAHAB & SHAHRUL HISHAM BIN ZAINAL ARIFFIN

ABSTRACT
Pembentukan tulang telah dikaitkan dengan adanya enzim yang disebut alkaline phosphatase (ALP).
Studi longitudinal ini dilakukan untuk mengamati aktivitasnya dalam gingival crevicular fluid (GCF)
selama tahap leveling dan alignment perawatan alat cekat ortodontik. Empat belas pasien berusia
antara 15 dan 27 tahun dengan kepadatan segmen labial atas sedang direkrut dari klinik ortodontik
pascasarjana. GCF dari situs mesial dan distal gigi kaninus atas dikumpulkan menggunakan titik kertas
endodontik sebelum pemasangan alat cekat (minggu 0). Tingkat dasar ALP (minggu 0) bertindak sebagai
kontrol. Pengambilan sampel GCF diulangi pada minggu ke-1, ke-2 dan ke-3 selama perawatan
ortodontik. Aktivitas ALP diukur menggunakan spektrofotometer (405 nm). Uji-t sampel berpasangan
digunakan untuk menilai signifikansi perbedaan selama 3 minggu. Meskipun hasil penelitian
menunjukkan pola aktivitas ALP pada gigi uji selama 3 minggu tahap leveling dan alignment, namun
hasilnya tidak signifikan (p> 0,05) jika dibandingkan dengan kontrol. Oleh karena itu, tidak ada pola yang
signifikan dari aktivitas ALP di GCF pada pasien yang menjalani tahap leveling dan alignment pada
perawatan ortodontik.

PENGANTAR
Pergerakan gigi ortodontik didasarkan pada prinsip bahwa gaya yang diberikan pada gigi akan
menyebabkan gigi tersebut berpindah ke posisi yang diinginkan. Kebanyakan alat ortodontik cekat
kontemporer menggunakan gaya kontinu ringan yang berasal dari kombinasi braket kawat lengkung.
Gaya ringan yang terus menerus ini akan memungkinkan gigi menjadi sejajar di lengkung gigi tanpa
menyebabkan kerusakan iatrogenik seperti resorpsi akar. Penerapan gaya kontinyu menghasilkan
resorpsi dan pembentukan tulang bersamaan pada area tekanan dengan aktivitas yang meningkat dari
osteoklas positif-fosfatase asam yang resisten tartrat (TRAP) dan osteoblas (Bonafe-Oliveira et al. 2003).

Peningkatan aktivitas osteoblas selama pembentukan tulang akan disertai dengan peningkatan ekspresi
enzim yang disebut alkaline phosphatase (ALP) (Intan et al. 2008). Untuk mengetahui pola remodeling
tulang berdasarkan aktivitas ALP selama perawatan ortodontik, cairan tubuh seperti saliva dapat
digunakan (Shahrul Hisham et al. 2010). Selain dari saliva, sumber ALP juga dapat diperoleh dari cairan
bening yang dikeluarkan dari celah gingiva gigi. Transudat bening ini dikenal sebagai cairan sulkus
gingiva (GCF). Ini mencerminkan respons tubuh biologis terhadap penyembuhan periodontal pada
pasien periodontitis kronis (Perinetti et al. 2008) atau rangsangan mekanis seperti gaya ortodontik
(Batra et al. 2006; Perinetti et al. 2002; Perinetti et al. 2004). GCF dapat dengan mudah dikumpulkan
menggunakan beberapa metode seperti mikropipet atau strip kertas (Ozmeric 2004). Metode ini telah
diuji dan terbukti dapat direproduksi, dapat diandalkan dan tidak menyebabkan kerusakan iatrogenik
pada pasien (Insoft et al. 1996). Saat ini belum ada studi klinis yang menggunakan GCF sebagai sumber
ALP untuk mengetahui pola remodeling tulang selama tahap leveling dan alignment perawatan
ortodontik.

Beberapa penelitian telah melihat aktivitas ALP selama pergerakan gigi aktif menggunakan kekuatan
yang lebih tinggi dari 100-150 gram pada retraksi anjing (Asma et al. 2008; Insoft et al. 1996; Perinetti et
al. 2004). Ditemukan bahwa situs mesial dan distal gigi yang diuji menunjukkan peningkatan aktivitas
ALP yang signifikan bila dibandingkan dengan baseline (Perinetti et al. 2002). Lebih lanjut, ditemukan
bahwa situs tegangan menunjukkan aktivitas ALP lebih banyak jika dibandingkan dengan situs kompresi
(Batra et al. 2006; Perinetti et al. 2002; Perinetti et al. 2004). Dengan memantau aktivitas enzimatik ALP
selama perawatan ortodontik, penerapan kekuatan ortodontik dapat disesuaikan dengan kebutuhan
biologis pasien. Oleh karena itu, tujuan dari studi longitudinal ini adalah untuk melihat pola ALP pada
perawatan ortodontik tahap pertama yaitu tahap leveling dan alignment.

BAHAN DAN METODE

SELEKSI PASIEN

Empat belas pasien direkrut setelah mendapat persetujuan dari klinik ortodontik pascasarjana, Fakultas
Kedokteran Gigi, UKM. Kriteria inklusi tercantum di bawah ini:

1. Pasien datang dengan crowding sedang (4-8 mm)

2. Sehat tanpa penyakit sistemik (seperti yang dinyatakan oleh pasien)
3. Tidak hamil (sesuai keterangan pasien)
4. Sehat secara berkala menurut kriteria sebagai berikut:
a. Skor plak mulut penuh (FMPS) kurang dari 20%
b. Skor perdarahan mulut penuh (FMBS) kurang dari 20%
c. Kantung periodontal kurang dari 4 mm
d. Tidak ada kehilangan tulang radiografi yang terlihat pada OPG

Instruksi kebersihan mulut dan penskalaan dan pemolesan dilakukan sebelum penelitian untuk
memastikan pemeliharaan kesehatan mulut yang baik. Kebersihan mulut dan status periodontal setiap
subjek dipantau selama penelitian ini. Pasien tidak akan diikutsertakan dalam penelitian ini jika
kebersihan mulut dan status periodontal mereka memburuk. Selama periode penelitian ini, semua
pasien disarankan untuk tidak menggunakan obat antiinflamasi yang berpengaruh pada pergerakan gigi
ortodontik (Kyrkanides et al. 2000) atau obat kumur klorheksidin yang dapat mengubah tingkat ALP-GCF
(Paolantonio et al. al. 2008). Studi ini telah disetujui oleh komite Etika Fakultas.

ALAT ORTODONTIK DAN GIGI TERUJI

Alat ortodontik yang telah disesuaikan sebelumnya (0,056 cm x 0,071 cm) diikat ke gigi atas. Pita
disemen ke molar pertama atas. Tidak ada ekstraksi yang dilakukan sebelum pengikatan. Sebuah kawat
lengkung titanium nikel bulat berukuran 0,030 cm digunakan untuk tahap perataan. Instruksi kebersihan
mulut diberikan setelah prosedur ikatan. Pasien ditinjau setiap minggu hingga minggu ke-3. Gigi taring
dipilih sebagai gigi yang diuji dan tingkat ALP pada minggu ke 0 (baseline) sebelum penerapan gaya
bertindak sebagai kontrol.

PENGAMBILAN SAMPEL GINGIVAL CRE VICULAR FLUID (GCF)

Sampel GCF diambil sebelum prosedur bonding (minggu 0), minggu 1, 2 dan 3 dari lokasi mesial dan
distal gigi yang diuji (Gambar 1). Gigi dibersihkan dengan cotton pellet untuk menghilangkan plak
supragingiva, diisolasi menggunakan cotton roll dan dikeringkan menggunakan aliran udara yang
lembut. Tiga titik kertas endodontik standar (ukuran 30) dimasukkan 1 mm ke dalam celah selama 30
detik dengan selang waktu 90 detik per pengambilan sampel. Segera, 3 titik kertas yang dicelupkan (per
situs) ditempatkan dalam tabung eppendorf 1,5 mL yang berisi 700 μL larutan garam fisiologis.

Tabung eppendorf yang berisi 3 titik kertas yang dicelupkan per lokasi disentrifugasi
menggunakan mesin sentrifugasi (MicroCentaur, UK) selama 5 menit pada 2000 g untuk mengelusi
komponen GCF sepenuhnya. Poin kertas telah dihapus dan supernatan disimpan pada suhu -40oC
sampai dianalisis selama maksimal 1 minggu.
UJI ALKALINE HOSPHATASE (ALP)

Aktivitas ALP ditentukan dengan menggunakan spektrofotometer (Model 6330, Jenway UK) pada
panjang gelombang 405 nm. Sekitar 50 μL buffer karbonat 40 mM pH 9,8 dengan 3 mM MgCl 2 dipipet ke
dalam tabung reaksi menggunakan mikropipet (Eppendorf). Selanjutnya, 50 μL sampel GCF dan 50 μl 3
mM ρ-nitrofenil fosfat ditambahkan ke dalam tabung yang sama. Sampel kemudian diinkubasi pada
suhu 37oC selama 30 menit. Reaksi enzimatik dihentikan dengan menambahkan 50 μL natrium
hidroksida 0,6 M dan absorbansi segera diukur pada 405 nm. Jumlah ρ-nitrophenol yang terbentuk
diukur dengan menggunakan kurva standar yang dibuat dari substrat fosfatase (Sigma 104®, Sigma-
Aldrich, St Louis, USA). Aktivitas ALP disajikan dalam enzyme unit (U). U didefinisikan sebagai jumlah ρ-
nitrophenol yang dilepaskan (μmol) per menit pada 37 oC.

ANALISIS STATISTIK

Paket Statistik untuk program Ilmu Sosial (SPSS® Inc., Chicago, IL USA) versi 15.0 digunakan untuk
menganalisis data. Data diuji normalitas menggunakan uji Shapiro-Wilk. Uji-t berpasangan digunakan
untuk menilai perbedaan signifikan dari tingkat awal (minggu 0) selama 3 minggu karena data
terdistribusi normal. Sebuah p <0,05 dianggap signifikan.

HASIL
KARAKTERISTIK PASIEN

Sepuluh perempuan dan empat laki-laki dipilih dengan usia berkisar antara 13 sampai 27 tahun. Tujuh
pasien mengalami maloklusi Kelas II divisi 1, enam pasien mengalami maloklusi Kelas I dan satu pasien
mengalami maloklusi Kelas II divisi 2. (Tabel 1)
AKTIVITAS ALKALINE PHOSPHATASE SELAMA TAHAP LEVELING DAN ALIGNMENT

Aktivitas ALP dari minggu 0 sampai minggu ke 3 ditunjukkan pada Tabel 2. Pada baseline (minggu 0),
ketika tidak ada gaya ortodontik yang diterapkan pada gigi, bagian mesial dan distal gigi uji menunjukkan
tingkat aktivitas ALP yang sama. Setelah 1 minggu penerapan gaya, tingkat ALP di situs mesial dan distal
masing-masing meningkat menjadi 0.12U dan 0.14U. Pada minggu ke-2, tingkat ALP di situs mesial telah
meningkat lebih lanjut sedangkan situs distal dipertahankan dari minggu sebelumnya. Pada minggu
terakhir penelitian ini (minggu ke-3), sedikit penurunan tingkat ALP dapat diamati di situs distal
sementara tingkat situs mesial dipertahankan.

Pola ALP selama tahap leveling dan alignment pada setiap interval mingguan jika dibandingkan
dengan level baseline (minggu 0) ditunjukkan pada Gambar 2. Persentase aktivitas ALP dari setiap
minggu dihitung dengan membandingkan kenaikan setiap minggu dengan baseline ( minggu 0). Pada
minggu ke-1, situs mesial dan distal mengalami peningkatan level ALP dari baseline masing-masing 12%
dan 21%. Pada minggu ke 2, sisi mesial mengalami peningkatan kadar ALP sebesar 18% sedangkan pada
sisi distal mengalami sedikit peningkatan sebesar 4% dari minggu sebelumnya (minggu 1). Pada minggu
ke-3, tingkat ALP di situs mesial dipertahankan hingga 31% dari tingkat baseline. Namun, situs distal
menunjukkan penurunan level ALP menjadi 18% dari basal dan 7% dari minggu sebelumnya (minggu 2).
Dengan menggunakan uji-t berpasangan, semua perubahan dalam aktivitas ALP selama penelitian ini
tidak signifikan secara statistik (p> 0,05) seperti yang ditunjukkan pada Tabel 2 & 3.
 Secara keseluruhan, tingkat ALP di situs mesial dan distal telah meningkat secara bertahap dari
minggu 0 sampai minggu 2. Namun, pada minggu ke-3, tingkat ALP di situs mesial dipertahankan tetapi
penurunan lebih lanjut dari tingkat ALP diamati di situs distal.

DISKUSI

Ini adalah studi longitudinal pertama yang dilakukan untuk mengamati aktivitas ALP yang diekspresikan
dalam GCF selama 3 minggu pertama tahap leveling dan alignment perawatan ortodontik. Perataan dan
penyelarasan adalah tahap pertama dari rangkaian perawatan ortodontik. Selama tahap ini, archwire
fleksibel biasanya kawat nikel titanium (NiTi) diikat ke slot braket. Archwire NiTi memberikan gaya
kontinyu ringan antara 30 dan 60 g ke gigi untuk meratakan dan menyelaraskan gigi. Gerakan jungkit
dihasilkan melalui kombinasi sistem braket-archwire dalam alat ortodontik cekat. Akibatnya, gigi akan
cenderung berputar di sekitar pusat resistansinya menekan ligamen periodontal di dekat puncak akar
pada sisi yang sama dengan gaya yang diberikan. Di sisi lain, PDL di sekitar puncak tulang alveolar akan
tertekan.

Selama pembentukan tulang, osteoblas ditemukan mengekspresikan ALP (Intan et al. 2008).
Oleh karena itu, berdasarkan temuan tersebut, kami berasumsi bahwa ALP yang terdeteksi di GCF
berasal dari aksi osteoblas selama pembentukan tulang di sekitar gigi uji. Akibatnya, dengan memantau
pola ALP, pergantian tulang di sekitar gigi yang digerakkan secara ortodontik dapat diamati.

Setelah 1 minggu aplikasi paksa, tingkat ALP di bagian distal dan mesial gigi uji meningkat sekitar
10-20%. Bonafe-Oliveira dkk. (2003) dalam studi mereka menemukan bahwa baik pembentukan tulang
maupun resorpsi tulang terjadi di masing-masing tempat ketegangan atau kompresi. Setelah gaya
ortodontik diterapkan, tulang akan terbentuk pada kecepatan yang lebih tinggi untuk bekerja secara
bersamaan dengan resorpsi tulang untuk menjaga integritas tulang alveolar yang menahan gigi.
Penemuan kami juga menunjukkan bahwa level ALP pada sisi distal lebih tinggi dari pada sisi mesial pada
minggu ke-1. Fenomena ini dapat disebabkan oleh fitur sistem braket. Braket untuk anjing pada alat
yang telah disetel sebelumnya memiliki sistem bawaan dengan ujung mesial 11 ° -13 °. Ketika archwire
dimasukkan ke dalam slot braket, gigi dipaksa untuk miring ke arah mesial di sekitar centroidnya. Ini
akan menghasilkan area kompresi yang dibuat di situs mesial dan area ketegangan di situs distal di
sekitar serviks gigi. Fenomena ini tercermin dalam temuan kami di mana pada minggu 1, aktivitas ALP di
situs distal lebih dari situs mesial. Penelitian lain juga menemukan hasil yang serupa di mana ada
peningkatan aktivitas ALP di situs tegangan (Perinetti et al. 2002; Perinetti et al. 2004).

Pola ALP pada situs mesial dan distal meningkat hingga minggu ke-2. Batra et al. (2006) dalam
studi retraksi anjingnya juga menemukan peningkatan aktivitas ALP baik di situs mesial maupun distal
dengan level puncak pada minggu ke 2. Namun, pada minggu berikutnya (minggu ke-3), level ALP
dipertahankan di situs mesial. tetapi menurun di situs distal. Tingkat ALP pada minggu ke-3 lebih banyak
di situs mesial daripada di bagian distal. Situs pembentukan tulang tampaknya bergerak dari bagian
distal ke situs mesial. Hal ini dapat dijelaskan dengan gerakan menegakkan gigi yang memindahkan area
ketegangan dari lokasi distal ke mesial.
 Keseluruhan aktivitas enzim yang dihasilkan dalam penelitian ini tidak signifikan dan lebih kecil
dibandingkan penelitian serupa lainnya (Asma et al. 2008; Batra et al. 2006; Perinetti et al. 2004).
Pembacaan kecil aktivitas enzimatik mungkin disebabkan oleh gaya yang lebih rendah yang diberikan
pada gigi selama tahap perataan dan penjajaran dibandingkan dengan penelitian lain yang
menggunakan gaya yang lebih tinggi untuk mencabut gigi (Asma et al.2008; Batra et al.2006; Perinetti
dkk. 2004). Perekrutan pasien yang memenuhi semua kriteria inklusi dengan batasan waktu menjadi
batasan untuk penelitian ini. Dengan lebih banyak waktu, variasi biologis subjek dapat dihilangkan
dengan merekrut lebih banyak subjek.

Ekspresi ALP mencerminkan perubahan biokimia yang terjadi pada jaringan pendukung setelah
penerapan gaya ortodontik (Dhopatkar et al. 2005). Oleh karena itu, dengan memantau perubahan
aktivitas enzimatik ALP, penerapan gaya selama perawatan ortodontik dapat disesuaikan dengan
kebutuhan pasien.

KESIMPULAN

Oleh karena itu, studi longitudinal ini memberikan wawasan baru tentang reaksi tulang terhadap gaya
ortodontik yang dicerminkan oleh kadar alkali fosfatase. Gaya rendah dan sedikit pergerakan gigi selama
tahap perataan dan penyejajaran dapat berkontribusi pada rendahnya tingkat ALP. Akibatnya, ALP bisa
menjadi biomarker pembentukan tulang yang menjanjikan untuk memantau perubahan biologis yang
terjadi selama perawatan ortodontik. Di masa depan, respons tulang terhadap berbagai jenis gaya
ortodontik dapat diamati.

UCAPAN TERIMA KASIH

Apresiasi terbesar kami sampaikan kepada Bapak Tarmidi Sailan atas pengetahuan biokimia, Dr Mohd
Mizalazrin dan Dr Noorunisa yang telah menyumbangkan pasiennya, kepada departemen laboratorium
khususnya Bapak Mohd Rohani, Bapak Salim dan Ibu Kiftiah atas bantuannya dalam prosedur
laboratorium. Proyek penelitian ini didanai oleh Kementerian Sains, Teknologi, dan Inovasi (02-01-02-
SF0245) dan Universiti Kebangsaan Malaysia (DD 001 2005 dan UKM-OUP-SK-19/2007).

REFERENSI

Asma, A.A.A., Rohaya, M.A.W. & Shahrul Hisham, Z.A. 2008. Crevicular alkaline phosphatase activity
during orthodontic tooth movement: canine retraction stage. Journal of Medical Sciences 8 (3):
228-233.

Batra P., Kharbanda O.P., Duggal R., Singh N. & Prakash H. 2006. Alkaline phosphatase activity in gingival
crevicular fluid during canine retraction. Orthodontics and Craniofacial Research 9: 44-51.

Bonafe-Oliveira L., Faltin R.M. & Arana-Chavez V.E. 2003. Ultrastructural and histochemical examination
of alveolar bone at the pressure areas of rat molars submitted to continuous orthodontic force.
European Journal of Oral Sciences 111: 410-416.
Dhopatkar, A.A., Sloan, A.J., Rock, W.P., Cooper, P.R. & Smith, A.J. 2005. A novel in vitro culture model to
investigate the reaction of the dentine-pulp complex to orthodontic force. Journal of
Orthodontic 32: 122-132.

Insoft M., King G.& Keeling S. 1996. The measurement of acid and alkaline phosphatase in gingival
crevicular fluid during orthodontic tooth movement. American Journal of Orthodontics and
Dentofacial Orthopedics 109: 287-296.

Intan Z.Z.A, Shahrul H., Rohaya M.A.W, Sahidan S. & Zaidah Z.A. 2008. Osteoclast and osteoblast
development of Mus musculus haemopoietic mononucleated cells. Journal of Biological Sciences
8(3): 506-516.

Kyrkanides S., O’Banion M.K. & Subtelny J.D. 2000. Non-steroidal anti-inflammatory drugs in orthodontic
tooth movement; Metalloproteinase activity and collagen synthesis by endothelial cells.
American Journal of Orthodontics and Dentofacial Orthopedics 118: 203-209.

Ozmeric N. 2004. Advances in periodontal disease markers. Clinica Chimica Acta 343(1-2): 1-16.

Paolantonio M., Dolci M., Perfetti G., Sammartino G., D’ Archivio D., Spoto G., Ciampoli C., De Amicis D.
& Tete S. 2008. Effect of a subgingival chlorhexidine chip on the clinical parameters and the
levels of alkaline phosphatase activity in gingival crevicular fluid during the non-surgical
treatment of periodontitis. Journal of Biological Regulators & Homeostatic Agents 22(1): 63-72.

Perinetti G., Paolantinio M., D’Attilio M., D’Archivio D., Tripodi D., Femminella B., Festa F. & Spoto G.
2002. Alkaline phosphatase activity in gingival crevicular fluid during human orthodontic tooth
movement. American Journal of Orthodontics and Dentofacial Orthopedics 122: 548-56.

Perinetti G., Paolantonio M., Femminella B., Serra E.& Spoto G. 2008. Gingival crevicular fluid alkaline
phosphatase activity reflects periodontal healing/recurrent inflammation phases in chronic
periodontitis patients. Journal of Periodontology 79(7): 1200-7.

Perinetti G., Paolantonio M., Serra E., D’Archivio D., D’Ercole S., Festa F. & Spoto G. 2004. Longitudinal
monitoring of subgingival colonization by Actinobacillus actinomycetemcomitans, and crevicular
alkaline phosphatase and aspartate aminotransferase activities around orthodontically treated
teeth. Journal of Clinical Periodontology 31: 60-67.

Shahrul Hisham Z.A., Mohd Faiz E., Rohaya M.A.W., Yosni B. & Sahidan S. 2010. Profiles of Lactase
Dehydrogenase, Tartrate Resistant Acid Phosphatase and Alkaline Phosphatase in saliva during
Orthodontic Treatment. Sains Malaysiana 39 (3): 405-412

Asma Alhusna Abang Abdullah* & Rohaya Megat

Abdul Wahab

Department of Orthodontic

Faculty of Dentistry

Universiti Kebangsaan Malaysia

Jln Raja Muda Abdul Aziz

50300 Kuala Lumpur

Malaysia

Shahrul Hisham Zainal Ariffin

Faculty of Science and Technology

Universiti Kebangsaan Malaysia

43600 UKM Bangi

Selangor, Malaysia

*Corresponding author; email: asmaabdullah@yahoo.com

Received: 15 July 2010

Accepted: 21 October 2010