Assessment of acid phosphatase and alkaline phosphatase

in gingival crevicular fluid in growing and adult orthodontic

patients An in vivo study
Smitha V. Shetty1, Anand K. Patil2, Sanjay V. Ganeshkar3

Abstract

Pendahuluan: Perawatan ortodontik telah diterima secara luas di kalangan orang dewasa di tahun-tahun
ini. Telah didalilkan bahwa gigi pergerakan lebih cepat pada anak-anak jika dibandingkan dengan orang
dewasa. Ini bisa dinilai lebih akurat dengan penilaian penanda gen bertanggung jawab untuk
perombakan tulang di cairan sulkus gingiva (GCF). Tujuan dari penelitian ini adalah untuk menilai
hubungan level aktivitas asam dan alkali fosfatase di GCF dengan bertambahnya usia selama pergerakan
gigi. Bahan dan Metode: Sekelompok 14 tumbuh dan pasien dewasa yang membutuhkan terapi
ortodontik cekat dipilih. Gigi taring rahang atas ditarik pada kedua kelompok menggunakan koil mata
air. Sampel GCF dikumpulkan sebelum aktivasi pegas dan pengambilan sampel selanjutnya dilakukan
setelah aktivasi hingga minggu ke-6. Kadar basa dan asam fosfatase kemudian dibandingkan. Hasil:
Sebagai perbandingan, kadar fosfatase alkali lebih banyak lebih tinggi pada anak-anak pada awal dan
tetap tinggi yang menunjukkan peningkatan aktivitas osteoblas. Kadar asam fosfatase lebih tinggi pada
anak-anak pada semua interval waktu, menunjukkan peningkatan aktivitas osteoklastik. Kesimpulan:
Peningkatan aktivitas enzimatik pada anak selama pergerakan gigi dibandingkan dengan orang dewasa
sebagian mendukung hipotesis pergerakan gigi yang lebih cepat pada anak-anak.

Pengantar

Dalam ortodontik, tekanan yang diterapkan pada gigi selama pergerakan gigi menimbulkan berbagai
biokimia dan mikrostruktur respon yang menunjukkan remodeling tulang yang mendasari. Karena
tekanan mekanis, perubahan makroskopis dan mikroskopis yang luas terlihat pada jaringan gigi dan
paradental. [1,2] Renovasi tulang yang terjadi selama pergerakan gigi ortodontik adalah proses biologis
yang melibatkan respons inflamasi akut pada jaringan periodontal untuk memahami dan
mengembangkan logaritma biologis untuk merangsang pergerakan gigi di tulang, mekanisme kompleks
yang mendasari resorpsi dan aposisi tulang harus dipahami secara rinci. Proses perombakan tulang yang
kompleks dan aktif ini melibatkan pembentukan tulang oleh osteoblas dan resorpsi oleh osteoklas. [3]
Osteoklas memiliki aktivitas asam fosfatase yang tinggi dan osteoblas memiliki aktivitas fosfatase alkali.
[4-6] Pemantauan aktivitas fosfatase dalam cairan sulkus gingiva (GCF) bisa menjadi sugestif dari
perubahan jaringan yang terjadi selama pergerakan gigi ortodontik. [7-9 ]

Kemajuan terbaru dalam teknik klinis dan perubahan kesadaran pasien terhadap maloklusi telah
meningkatkan permintaan perawatan ortodontik di kalangan orang dewasa. Perbedaan struktur
anatomi dan respon jaringan terhadap pergerakan gigi ortodontik pada kelompok umur yang berbeda
harus dipertimbangkan. Telah ditemukan bahwa jumlah pergerakan gigi secara signifikan lebih besar
pada individu yang lebih muda dibandingkan pada orang dewasa. [10,11] Namun, pengaruh usia terhadap
laju pergerakan gigi masih belum jelas. Sebagian besar penelitian yang dilakukan sebelumnya, untuk
memperkirakan faktor yang bertanggung jawab atas perombakan tulang telah dilakukan dengan teknik
invasif dan dengan mengorbankan hewan percobaan. [12,13] Penilaian penanda gen di GCF telah menjadi
topik penelitian terdepan dalam konteks yang sama. Pemahaman tentang mekanisme biokimia dan
molekuler yang memungkinkan sel-sel tulang beradaptasi dengan perubahan dalam lingkungan
mekanisnya sangat penting untuk praktik ortodontik klinis. Selanjutnya, dengan memantau perombakan
tulang pasien dan menghubungkannya dengan usia pasien, kekuatan optimal dapat diterapkan, yang
memenuhi kebutuhan pasien. Belum ada penelitian yang dilakukan untuk menganalisis pengaruh usia
terhadap kadar asam fosfatase dan alkali fosfatase di GCF, yang mungkin merupakan bukti langsung
untuk memahami perbedaan mendasar perombakan tulang pada anak-anak dan orang dewasa. Ini studi
memantau aktivitas asam dan alkali fosfatase di GCF dan menghubungkannya dengan kelompok usia
yang berbeda sehingga memungkinkan untuk memantau secara biologis dan memprediksi hasil dari
kekuatan ortodontik berdasarkan respons jaringan individu.

Bahan dan Metode

Kelompok studi yang terdiri dari 14 pasien yang sedang tumbuh (kelompok usia rata-rata 11 ± 4 tahun)
dan 14 orang dewasa (kelompok usia rata-rata 25 ± 5 tahun) yang membutuhkan terapi ortodontik cekat
dengan ekstraksi premolar pertama rahang atas bilateral dipilih. Semua pasien diperiksa status
periodontal, dan mereka yang memiliki riwayat penyakit sistemik atau riwayat konsumsi obat dalam 3
bulan terakhir dikeluarkan dari penelitian. Penelitian ini dilakukan sesuai dengan Deklarasi Helsinki
setelah mendapat persetujuan etik dari Institutional Review Board, SDM College of Dental Sciences and
Hospital, Dharwad, India.

Setelah mendapatkan informed consent, terapi ortodontik cekat dimulai pada semua pasien. Setelah
tahap perataan dan penyelarasan dan pembukaan gigitan yang memadai, gigi taring eksperimental
ditarik satu per satu pada anak-anak dan orang dewasa menggunakan pegas kumparan Titanium Nikel
(perusahaan kawat Orthoforce G4, G, dan H) pada kawat bundar baja tahan karat 0,018 (Special plus, AJ
Wilcock, Whittle sea, Australia) memberikan kekuatan 150 gram. Gaya diukur menggunakan alat
pengukur Dontrix. Namun, penjangkaran diperkuat dengan menggunakan lengkungan transpalatal pada
molar.

Pengumpulan cairan sulkus gingiva

Plak supra gingiva telah dihilangkan dari gigi kaninus kanan atas (gigi percobaan); daerah itu dibilas
dengan air dan dikeringkan dengan udara. Isolasi gigi dilakukan dengan retraktor penahan diri, suction,
dan cotton roll.

Dari setiap lokasi pengujian, volume standar 2 μl dikumpulkan menggunakan kalibrasi pada pipet
mikrokapiler volumetrik berkode warna putih 1–5 μl (Sigma - Aldrich Chemical Company, St. Louis, MO,
USA) menggunakan pendekatan ekstrakrevicular yang tidak distimulasi.

Mikropipet dimasukkan pada pintu masuk sulkus gingiva dan volume standar 2 µl GCF dikumpulkan dari
sisi distal kaninus rahang atas (T0) sebelum aktivasi pegas retraksi [Gambar 1].
Pengambilan sampel selanjutnya dilakukan setelah alat diaktifkan dengan menggunakan alat ukur
Dontrix yaitu pada hari ke 7 (T1), hari ke 21 (T2), dan hari ke-42 (T3) [Gambar 2]. GCF kemudian
diencerkan dalam larutan garam buffer fosfat dan disimpan pada suhu -20 ° C sampai uji biokimiawi. Uji
biokimia dilakukan untuk semua sampel menggunakan penganalisis biokimia semi-otomatis dengan
menggunakan kit yang tersedia secara komersial.

Analisis statistic

Perubahan yang signifikan pada tingkat asam dan alkali fosfat antara periode pengobatan yang berbeda
dievaluasi dengan menggunakan uji-t berpasangan. Tingkat asam dan alkali fosfat pada anak-anak dan
kelompok dewasa dibandingkan dengan menggunakan uji-t tidak berpasangan.

Interpretasi Hasil
Alkali fosfatase
Ketika tingkat alkali fosfatase di GCF pada awal (T0) dibandingkan antara kelompok dewasa dan anak-
anak [Tabel 1], tidak ada signifikansi statistik antara kelompok. Pada minggu pertama (T1), terjadi
peningkatan pada kedua kelompok (P = 0,0001), dengan peningkatan yang signifikan pada anak-anak
dibandingkan dengan orang dewasa. Namun, pada minggu ke-3 (T2), kadar alkali fosfatase tetap
meningkat secara signifikan (P = 0,0001) pada anak-anak dibandingkan pada orang dewasa. Pada akhir
minggu ke-6 (T3), kadar tersebut masih tetap meningkat pada kelompok anak-anak dibandingkan
dengan kelompok dewasa, secara signifikan (P = 0,0006).
Asam fosfatase
Ketika kadar asam fosfatase di GCF pada awal (T0) dan setelah minggu pertama sama antara kelompok
dewasa dan anak-anak, tidak ada signifikansi statistik [Tabel 2]. Namun pada minggu ke-3 (T2), kadar
asam fosfatase menunjukkan peningkatan yang signifikan (P = 0,0000) pada kelompok anak-anak
dibandingkan dengan kelompok dewasa. Pada minggu ke-6, peningkatan kadar asam fosfatase
dipertahankan pada kedua kelompok yang serupa dengan minggu ke-3 (T2), tetapi secara signifikan
lebih tinggi (P = 0,0000) pada kelompok anak-anak dibandingkan dengan kelompok dewasa.

Diskusi
Tulang adalah jaringan yang sangat labil yang terus-menerus direnovasi sepanjang hidup. Hipotesis yang
banyak terbukti dan dipercaya bahwa tekanan yang berkepanjangan pada gigi mengakibatkan
remodeling tulang alveolar, yang terdiri dari deposisi dan resorpsi tulang, masih merupakan platform
utama untuk penelitian lebih lanjut. [1,2]

Molekul yang aktif secara biologis seperti fosfatase disekresikan oleh sel-sel matriks tulang pada waktu
tertentu yang ditentukan untuk mengatur proses pemodelan ulang yang sedang berlangsung. [3]
Penanda biokimia ini diekspresikan sebagai eksudat. GCF adalah salah satu eksudat yang mewakili
wahana non-invasif yang kuat, karena mengandung serangkaian faktor biokimia dan seluler yang
berfungsi sebagai penanda biologis dari keadaan periodonsium. [14,15]

Dengan demikian, pemantauan dan analisis aktivitas biokimia dari tulang alveolar di GCF dapat menjadi
sugestif dari perubahan jaringan yang terjadi selama pergerakan gigi ortodontik. [16,17] Analisis ini dapat
memberi kita gambaran yang jelas tentang remodeling tulang yang mendasari. Proses remodeling tulang
dapat menunjukkan perubahan penanda biokimia yang tepat waktu, terutama aktivitas fosfatase selama
berbagai pergerakan gigi. [17-25]

Selama beberapa dekade terakhir, permintaan akan terapi ortodontik orang dewasa meningkat pesat. Di
bidang kedokteran, penelitian luar biasa telah dilakukan untuk membedakan tingkat pergantian tulang
pada anak-anak dan orang dewasa. [26] Namun, pengetahuan kami tentang efisiensi pergerakan gigi
orang dewasa masih kurang lengkap. Meskipun dilaporkan bahwa pergerakan gigi terjadi pada tingkat
yang lebih besar dan pada tingkat yang lebih tinggi pada individu yang lebih muda daripada pada orang
dewasa, tidak ada bukti ilmiah yang konklusif untuk hal yang sama. [27-31] Dengan demikian, penelitian
ini dilakukan sebagai upaya untuk mengisi gigi. kekosongan ini dengan menggunakan penelitian
molekuler tingkat lanjut saat ini. Dalam penelitian kami, kami menilai dan menghubungkan dua
biomarker pergantian tulang, asam, dan alkali fosfatase, di GCF. Biomarker tersebut kemudian
dibandingkan antara kelompok usia yang berbeda, sehingga memungkinkan bagi ortodontis untuk
memantau dan memprediksi hasil pengobatan berdasarkan individu respon jaringan terhadap kekuatan
ortodontik.

Lamanya penelitian ini adalah 42 hari (6 minggu) dan interval waktu pengambilan GCF diprogramkan
untuk mengidentifikasi dan memahami perubahan enzimatik yang terjadi selama fase pergerakan gigi
ortodontik.

Perbandingan perbedaan kadar asam dan alkali fosfatase pada orang dewasa dan anak Alkali
fosfatase
Dalam studi ini, kadar alkali fosfatase di GCF hampir sama pada kedua kelompok pada baseline (T0).
Namun 1 minggu setelah retraksi anjing aktif menggunakan pegas koil NiTi (T1), terdapat peningkatan
yang signifikan (P = 0,005) pada tingkat alkali fosfatase di GCF pada kedua kelompok, dengan tingkat
yang lebih tinggi secara statistik pada anak-anak (P = 0,0001) dibandingkan dengan orang dewasa. Hal ini
bertepatan dengan temuan pada penelitian sebelumnya, yang juga menunjukkan peningkatan aktivitas
enzim selama minggu pertama pergerakan gigi ortodontik aktif. [3,4,10,25] Peningkatan aktivitas enzim ini
dapat dijelaskan oleh fakta bahwa ada kemoattraksi osteoblas atau prekursornya ke tempat
pembentukan tulang atau ke tempat peradangan selama pergerakan gigi ortodontik. Tingkat alkali
fosfatase, bagaimanapun, tetap konstan pada akhir minggu ke-3 (T2) pada kedua kelompok. Nilai
konstanta ini dapat menjadi penunjuk kelangsungan pergerakan gigi ortodontik fase kedua. Pada akhir
minggu ke-6 (T3), aktivitas enzim menunjukkan penurunan tajam pada kelompok dewasa hampir
mencapai nilai baseline. Pada kelompok anak-anak, aktivitas enzim terus meningkat dibandingkan
dengan orang dewasa (P = 0,0006) bahkan pada akhir minggu ke-6 menunjukkan aktivitas penyimpanan
tulang yang berkepanjangan dari osteoblas pada anak-anak.

Dalam kasus anak-anak, fase pembalikan gerakan gigi ortodontik oleh osteoblas untuk mengisi
kekosongan yang tercipta selama fase resorpsi diperpanjang. Peningkatan aktivitas enzim yang
berkepanjangan menunjukkan bahwa terjadi deposisi tulang secara bersamaan dengan resorpsi tulang
bahkan setelah 3 minggu aplikasi paksa. Ini sebagian dapat menjelaskan hipotesis pergerakan gigi lebih
cepat pada anak-anak dibandingkan dengan orang dewasa.

Asam fosfatase
Tingkat asam fosfatase dalam GCF pada baseline (T0) pada kelompok dewasa dan kelompok anak-anak
hampir sama. Tidak ada peningkatan yang signifikan pada kadar asam fosfatase pada kedua kelompok
pada akhir minggu pertama (T1). Hal ini dapat dikaitkan dengan perekrutan osteoklas ke lokasi
ketegangan setelah 5-8 hari aplikasi gaya ortodontik. Beberapa literatur biologi pergerakan gigi yang lalu
telah menunjukkan periode awal yang ditandai dengan resorpsi tulang yang lebih banyak diikuti oleh
periode selanjutnya ketika pembentukan tulang adalah yang utama. [2,4] Kadar fosfatase asam meningkat
secara signifikan pada minggu ke-3 (T2) ) pada kedua kelompok: Pada kelompok dewasa (P = 0,0001)
dan pada kelompok anak-anak (P = 0,0000) dibandingkan dengan baseline (T0). Peningkatan ini bisa
menggambarkan fase kedua dari pergerakan gigi ortodontik, dimana terjadi pengangkatan jaringan
nekrotik dan resorpsi tulang dari ruang sumsum yang berdekatan oleh osteoklas. Ada hubungan positif
dengan jumlah osteoklas aktif dan kecepatan pergerakan gigi. Pada minggu ke-6 (T3), peningkatan kadar
asam fosfatase dipertahankan pada kedua kelompok sama dengan minggu ke-3 (T2), tetapi tetap lebih
tinggi secara signifikan (P = 0,0000) pada kelompok anak-anak dibandingkan dengan kelompok dewasa.
kelompok. Hal ini menunjukkan bahwa aktivitas osteoklas meningkat pada kedua kelompok setelah
minggu ke-3 tetapi pada anak-anak levelnya telah mencapai nilai yang lebih tinggi, yang menunjukkan
peningkatan daya tanggap osteoklas di lokasi kompresi dan resorpsi frontal selama pergerakan gigi aktif
pada anak-anak.

Baik, tingkat alkali dan asam fosfatase lebih banyak pada anak-anak dibandingkan dengan orang dewasa
pada setiap interval waktu yang diteliti. Hal ini menunjukkan bahwa terdapat peningkatan aktivitas sel
utama perombakan tulang, yaitu osteoblas dan osteoklas, selama pergerakan gigi ortodontik pada anak.
Data ini konsisten dengan penelitian sebelumnya tentang pengaruh usia pada pergerakan gigi
ortodontik. [31-33] Perubahan dalam aktivitas proliferasi sel-sel remodeling dianggap berkaitan dengan
fenomena biologis yang terkait dengan penuaan. Aktivitas proliferasi berbagai sel di jaringan periodontal
umumnya menurun seiring dengan penuaan.

Pada kelompok usia yang lebih muda, membran periodontal kaya akan komponen seluler, puncak tulang
alveolar dilapisi dengan jaringan osteoid yang tidak dikalsifikasi, dan area kanselus diisi dengan jaringan
fibrosa yang longgar, yang umumnya tidak terjadi pada orang dewasa. [34] Pada orang dewasa,
penurunan kecepatan perombakan tulang mungkin terkait dengan respons seluler yang lemah terhadap
gaya ortodontik yang diterapkan. Selain itu, kepadatan tulang lebih rendah pada individu yang lebih
muda dibandingkan dengan orang dewasa. [26] Renovasi tulang selama pergerakan gigi juga dapat
dipengaruhi oleh kinetika sel, beberapa faktor sistemik dan lokal, neurotransmiter, dan piezoelektrik, dll.
Jelas, mungkin ada beberapa faktor yang dapat mempengaruhi kecepatan pergerakan gigi pada
kelompok usia yang berbeda.
Saat merancang studi diagnostik yang baik, tantangan utama adalah harus ada definisi yang akurat
tentang variabel hasil dan hasilnya harus diukur. Dalam penelitian kami, gigi taring eksperimental telah
digerakkan secara fisik dengan gaya konstan yang telah ditentukan sebelumnya, sehingga hasilnya lebih
dapat diandalkan. Hasil kami juga menegaskan perbedaan dalam aktivitas proliferasi sel ligamen
periodontal antara kelompok muda dan dewasa selama fase pergerakan gigi yang berbeda,
menunjukkan bahwa perubahan penuaan terutama mempengaruhi reaksi seluler awal pada
periodonsium yang terkena rangsangan eksternal. Dengan demikian, dapat disimpulkan bahwa
perombakan tulang dapat dipantau melalui ekspresi alkali fosfatase dan asam fosfatase dalam GCF
selama pergerakan gigi ortodontik pada kelompok umur yang berbeda.

Kesimpulan
 Tingkat alkali fosfatase meningkat pada kedua kelompok sejak minggu pertama dan tetap
meningkat hingga minggu ke-3. Ini bisa menjadi petunjuk dari prevalensi deposisi tulang yang
terus menerus. Ada penurunan level yang signifikan selama minggu ke-6 pada kelompok
dewasa. Namun, pada anak-anak, levelnya tetap tinggi yang menunjukkan aktivitas
penyimpanan tulang yang berkepanjangan dari osteoblas selama fase postlag. Makanya,
pergerakan gigi lebih cepat pada anak
 Peningkatan yang signifikan pada tingkat asam fosfatase pada anak-anak dibandingkan dengan
orang dewasa selama semua periode waktu menunjukkan peningkatan respon dari osteoklas di
tempat kompresi dan resorpsi frontal pada anak-anak.
 Dengan demikian, hasil tersebut mengkonfirmasi hipotesis pergerakan gigi yang lebih cepat
pada anak-anak dibandingkan dengan orang dewasa karena peningkatan aktivitas asam dan
alkali fosfatase di GCF yang mencerminkan peningkatan laju remodeling tulang pada anak-anak.

Referensi
1. Masella RS, Meister M. Current concepts in the biology of orthodontic tooth movement. Am J
Orthod Dentofacial Orthop 2006;129:458-68.
2. Krishnan V, Davidovitch Z. Cellular, molecular, and tissue-level reactions to orthodontic force.
Am J Orthod Dentofacial Orthop 2006;129:469.e1-32.
3. Hill PA. Bone remodelling. Br J Orthod 1998;25:101-7.
4. Keeling SD, King GJ, McCoy EA, Valdez M. Serum and alveolar bone phosphatase changes reflect
bone turnover during orthodontic tooth movement. Am J Orthod Dentofacial Orthop
1993;103:320-6.
5. King GJ, Keeling SD. Orthodontic bone remodeling in relation to appliance decay. Angle Orthod
1995;65:129-40.
6. Wahabi RM, Ariffin SH, Aiziera N, Marzuki N, Sahidan, Ariffin ZZ. Preliminary study of acid
phosphatase in Saliva during teeth movements. Malays Appl Biol 2007;36:79-81.
7. Insoft M, King GJ, Keeling SD. The measurement of acid and alkaline phosphatase in gingival
crevicular fluid during orthodontic tooth movement. Am J Orthod Dentofacial Orthop
1996;109:287-96.
8. Asma AA, Rohaya MA, Hisham ZA. Crevicular Alkaline phosphatase activity during orthodontic
tooth movement: Canine retraction stage. J Med Sci 2008;8:228-33.
9. Perinetti G, Paolantonio M, D’Attilio M, D’Archivio D, Tripodi D, Femminella B, et al. Alkaline
phosphatase activity in gingival crevicular fluid during human orthodontic tooth movement. Am
J Orthod Dentofacial Orthop 2002;122:548-56.
10. Kyomen S, Tanne K. Influences of aging changes in proliferative rate of PDL cells during
experimental tooth movement in rats. Angle Orthod 1997;67:67-72.
11. Bridges T, King G, Mohammed A. The effect of age on tooth movement and mineral density in
the alveolar tissues of the rat. Am J Orthod Dentofacial Orthop 1988;93:245-50.
12. Lilja E, Lindskog S, Hammarström L. Histochemistry of enzymes associated with tissue
degradation incident to orthodontic tooth movement. Am J Orthod 1983;83:62-75.
13. Takimoto K, Deguchi T, Mori M. Histochemical detection of acid and alkaline phosphatases in
periodontal tissues after experimental tooth movement. J Dent Res 1968;47:340.
14. Uitto VJ. Gingival crevice fluid – An introduction. Periodontol 2000 2003;31:9-11.
15. Griffiths GS. Formation, collection and significance of gingival crevice fluid. Periodontol 2000
2003;31:32-42.
16. Dannan A, Darwish MA, Sawan MN. Effect of orthodontic tooth movement on gingival crevicular
fluid infiltration; a preliminary investigation. J Dent 2009;6:109-15.
17. Kavadia-Tsatala S, Kaklamanos EG, Tsalikis L. Effects of orthodontic treatment on gingival
crevicular fluid flow rate and composition: Clinical implications and applications. Int J Adult
Orthodon Orthognath Surg 2002;17:191-205.
18. Yamaguchi M, Shimizu N, Shibata Y, Abiko Y. Effects of different magnitudes of tension -force on
alkaline phosphatase activity in periodontal ligament cells. J Dent Res 1996;75:889-94.
19. King GJ, Latta L, Rutenberg J, Ossi A, Keeling SD. Alveolar bone turnover and tooth movement in
male rats after removal of orthodontic appliances. Am J Orthod Dentofacial Orthop
1997;111:266-75.
20. van den Bos T, Beertsen W. Alkaline phosphatase activity in human periodontal ligament: Age
effect and relation to cementum growth rate. J Periodontal Res 1999;34:1-6.
21. Noxon SJ, King GJ, Gu G, Huang G. Osteoclast clearance from periodontal tissues during
orthodontic tooth movement. Am J Orthod Dentofacial Orthop 2001;120:466-76.
22. Rody WJ Jr, King GJ, Gu G. Osteoclast recruitment to sites of compression in orthodontic tooth
movement. Am J Orthod Dentofacial Orthop 2001;120:477-89.
23. Vandana KL, Savitha B. Role of alkaline phosphatase in fibrogenesis or fibrolysis. J Oral
Maxillofac Pathol 2004;8:70-2.
24. Isik F, Sayinsu K, Arun T, Unlüçerçi Y. Bone marker levels in gingival crevicular fluid during
orthodontic intrusive tooth movement: A preliminary study. J Contemp Dent Pract
2005;6:27-35.
25. Batra P, Kharbanda O, Duggal R, Singh N, Parkash H. Alkaline phosphatase activity in gingival
crevicular fluid during canine retraction. Orthod Craniofac Res 2006;9:44-51.
26. Saraf SK, Allgoo VK, Rastogi A, Gulati AK. Rate of bone turnover among Indians and its
relationship with age – A tetracycline fluorescence study. Indian J Orthop 2001;35:200-5.
27. Stoker NG, Epker BN. Age changes in endosteal bone remodeling and balance in the rabbit. J
Dent Res 1971;50:1570-4.
28. Takano-Yamamoto T, Kawakami M, Yamashiro T. Effect of age on the rate of tooth movement in
combination with local use of 1,25(OH) 2D3 and mechanical force in the rat. J Dent Res
1992;71:1487-92.
29. Tanne K, Yoshida S, Kawata T, Sasaki A, Knox J, Jones ML. An evaluation of the biomechanical
response of the tooth and periodontium to orthodontic forces in adolescent and adult subjects.
Br J Orthod 1998;25:109-15.
30. Kanekawa M, Shimizu N. Age-related changes on bone regeneration in midpalatal suture during
maxillary expansion in the rat. Am J Orthod Dentofacial Orthop 1998;114:646-53.
31. Ren Y, Maltha JC, Van’t Hof MA, Von Den Hoff JW, Kuijpers-Jagtman AM, Zhang D. Cytokine
levels in crevicular fluid are less responsive to orthodontic force in adults than in juveniles. J Clin
Periodontol 2002;29:757-62.
32. Shimpo S, Horiguchi Y, Nakamura Y, Lee M, Oikawa T, Noda K, et al. Compensatory bone
formation in young and old rats during tooth movement. Eur J Orthod 2003;25:1-7.
33. Iwasaki LR, Crouch LD, Tutor A, Gibson S, Hukmani N, Marx DB, et al. Tooth movement and
cytokines in gingival crevicular fluid and whole blood in growing and adult subjects. Am J Orthod
Dentofacial Orthop 2005;128:483-91.
34. Ren Y, Kuijpers-Jagtman AM, Maltha JC. Immunohistochemical evaluation of osteoclast
recruitment during experimental tooth movement in young and adult rats. Arch Oral Biol
2005;50:1032-9.