Estimation of alkaline phosphatase in the gingival crevicular fluid during orthodontic tooth

movement in premolar extraction cases to predict therapeutic progression

Abstract
Tujuan: Mengestimasi kadar alkaline phosphatase (ALP) dalam cairan sulkus gingiva (GCF) selama tahap
retraksi enmasse dari pergerakan gigi ortodontik.

Bahan dan Metode: 10 pasien dalam kelompok usia 15-20 tahun berpartisipasi dalam penelitian ini.
Sampel GCF diambil dari permukaan distal kaninus dan permukaan mesial gigi premolar kedua pada hari
ke 0, 1, 7, 14, 21, dan 28 perawatan pasca ortodontik. Hasil: Penurunan yang nyata pada tingkat ALP
terbukti setelah penerapan gaya. Tren penurunan progresif aktivitas ALP pada aspek distal kaninus dan
aspek mesial dari gigi premolar kedua diamati. Penurunan ALP lebih banyak terjadi pada gigi kaninus
aspek distal jika dibandingkan dengan aspek mesial gigi premolar kedua.

Kesimpulan: Pengukuran aktivitas ALP di GCF dapat menjadi indikator perubahan biokimia dan seluler
dalam perombakan tulang dan karenanya menilai jumlah pergerakan gigi setelah aplikasi gaya
ortodontik.

PENGANTAR
Tekanan terus menerus pada gigi yang menyebabkan remodeling tulang alveolar adalah prinsip dasar di
balik pergerakan gigi ortodontik (OTM). Keseimbangan konstan antara pembentukan tulang (di situs
ketegangan) dan resorpsi (di situs tekanan) memfasilitasi remodeling positif. [1] Namun, respon biologis
dari perombakan tulang dapat bervariasi antar individu. Cairan sulkus gingiva (GCF) adalah eksudat
inflamasi yang dimediasi secara osmotik yang ada di sulkus gingiva. [2] Kekuatan ortodontik
menyebabkan reaksi inflamasi akut dan perubahan vaskular pada periodonsium yang menyebabkan
perubahan komposisi GCF. [3] Oleh karena itu, analisis sampel GCF dapat memberikan informasi berharga
tentang proses inflamasi / remodeling periodontal sebagai konsekuensi OTM. Selain itu dengan
memantau perombakan tulang seseorang berdasarkan analisis GCF, jumlah penerapan gaya dapat
dioptimalkan. Beberapa biomarker potensial seperti prostaglandin, [4] Osteoprotegerin, [5] tumor necrosis
factor-α, [6] dan interleukin-8 [7] dilaporkan dalam GCF selama OTM. Sementara studi histokimia telah
menyarankan alkaline phosphatase (ALP) sebagai zat penting yang muncul selama OTM, dan memang
pembentukan tulang dikaitkan dengan aktivitas ALP yang lebih tinggi. [2-9] Oleh karena itu, dalam
penelitian ini, kami memperkirakan tingkat ALP di GCF sebagai sarana untuk menilai perkembangan
setelah perawatan ortodontik (tahap retraksi massal) dan memodifikasi jumlah kekuatan yang
diperlukan berdasarkan tingkat ALP sebagai penanda perombakan tulang.

BAHAN DAN METODE

Penelitian ini melibatkan 10 pasien (5 laki-laki dan 5 perempuan) berusia 15-20 tahun, tanpa penyakit
sistemik dan riwayat pengobatan. Semua pasien memiliki masalah crowding sedang dan membutuhkan
terapi alat cekat, yang melibatkan pencabutan gigi premolar satu rahang atas. Sebelum dimulainya
penelitian ini, scaling dan root planning dilakukan, dan instruksi kebersihan mulut diberikan kepada
semua pasien. Persetujuan yang diinformasikan diperoleh dari setiap pasien sebelum perawatan. Pasien
diinstruksikan untuk tidak menggunakan obat anti-inflamasi atau obat kumur yang mengandung
klorheksidin selama periode tersebut penelitian. [10]

Kesehatan periodontal pasien dicatat dengan kriteria sebagai berikut:

1. Skor plak mulut penuh <20%,

2. Skor perdarahan mulut penuh <20%,
3. Kantung periodontal <4 mm,
4. Tidak ada kehilangan tulang radiografi yang terlihat pada ortopantomogram.

Alat edgewise yang telah disetel sebelumnya dengan celah 0,018 diikat ke gigi bawah dan gigi bawah.
Setelah menyelesaikan leveling dan aligning, retraksi dilakukan pada archwire stainless steel 0,017 ×
0,025 dan rantai elastomer, dengan gaya retraksi sekitar 150 g pada setiap sisinya. Gaya diukur
menggunakan pengukur gaya digital.

Pengambilan sampel dan pemrosesan cairan sulkus gingiva

Gigi yang akan diuji dibersihkan dengan cotton roll dan dikeringkan menggunakan air steam yang lembut
sebelum pengambilan sampel. Sampel GCF dikumpulkan dari permukaan distal gigi kaninus dan
permukaan mesial gigi premolar kedua pada setiap interval waktu dari kuadran pertama [Gambar 1].
GCF diambil sampelnya pada hari ke 0 (leveling dan dicatat sebagai baseline), 1, 7, 14, 21, dan 28 hari.

Strip filter kertas precut (Whatmann no 1) dengan ukuran 2 mm × 8 mm digunakan. [11] Strip
ditempatkan dalam tabung Eppendrof dan ditimbang sebelum dan sesudah pengambilan sampel
menggunakan timbangan elektronik digital. Strip dimasukkan ke dalam celah gingiva dengan interval 5
detik, dimasukkan sampai resistensi ringan dirasakan, dan disimpan posisi yang sama selama 60 detik
untuk meningkatkan volume GCF yang dikumpulkan. [12] Setelah pengumpulan GCF, strip filter segera
ditempatkan kembali ke dalam tabung dan ditimbang. Sampel dikumpulkan pada pagi hari untuk seluruh
kelompok pasien dan diberikan motivasi kebersihan mulut pada setiap kunjungan. 50 μl garam dengan
buffer fosfat ditambahkan ke setiap sampel dan dicampur dengan cyclomixer. Teknik elusi sentrifugal
digunakan untuk memulihkan sampel GCF dari potongan kertas. Potongan kertas dari masing-masing
situs ditempatkan dalam kerajinan plasto dan disentrifugasi dua kali pada 3000 rpm selama 2 menit.
Sampel ini disimpan pada suhu -80 ° C sampai prosedur selanjutnya dilakukan, aktivitas ALP ditentukan
dengan menggunakan metode kinetik para nitrofenil fosfat (PNPP).

Kit uji kinetik fosfatase alkali

Alkali fosfatase mengkatalisis hidrolisis PNPP menjadi paranitrophenol dan fosfat. Paranitrophenol
berwarna kuning, seiring dengan berlangsungnya reaksi, laju absorbansi meningkat, yang sebanding
dengan aktivitas sampel ALP. Reaksi ini dilakukan dalam medium basa dengan adanya ion magnesium.
Reagen yang digunakan adalah buffer dan substrat 2-amino-2-metilpropanol (PNPP). Perubahan
absorbansi diukur pada panjang gelombang 405 nm sesuai petunjuk dalam kit.

Analisis statistic

Data dianalisis menggunakan paket perangkat lunak Paket Statistik untuk Penelitian Ilmu Sosial (SPSS)
(SPSS Inc., Versi 16.0, Chicago). Statistik deskriptif, termasuk mean, deviasi standar, dan nilai probabilitas
dihitung untuk kelompok yang diuji. Data statistik dianalisis dengan uji ANOVA dan uji t Student. Tingkat
signifikansi statistik ditetapkan pada P <0,05.

HASIL
Aktivitas alkali fosfatase berubah secara signifikan pada berbagai titik waktu setelah aplikasi gaya
ortodontik [Tabel 1]. Hasil aktivitas ALP pada hari ke 0, 1, 7, 14, 21, 28, menunjukkan tren penurunan
pada aspek distal gigi kaninus dan aspek mesial gigi premolar kedua [Tabel 1]. Penurunan aktivitas ALP
lebih banyak terjadi pada aspek distal gigi kaninus jika dibandingkan dengan aspek mesial gigi premolar
kedua [Tabel 2 sampai 7]. Jadi, menunjukkan aktivitas osteoklastik yang lebih tinggi pada aspek distal
kaninus Gambar 1: Pengumpulan sampel cairan sulkus gingiva dibandingkan dengan aspek mesial dari
gigi premolar kedua.
DISKUSI
Studi kami menunjukkan bahwa ALP terlibat dalam reaksi tulang terhadap gaya ortodontik yang
diterapkan, sebuah efek yang dipicu oleh aktivitas sel osteoblas yang mengarah ke sekresi ALP selama
pembentukan tulang. [13] Oleh karena itu, dengan memantau aktivitas ALP, kami dapat memeriksa
perjalanan waktu perombakan tulang setelah prosedur ortodontik. Penelitian sebelumnya menunjukkan
bahwa pengerahan tenaga oleh rantai elastomer membantu gigi anterior untuk bergerak ke arah distal;
gerakan ini merupakan kombinasi dari gerakan tubuh dan jungkir balik . [14] Akibatnya, terjadi penurunan
tegangan murni dan area kompresi di sekitar gigi. Karenanya, pembentukan tulang bersamaan serta
resorpsi diamati di sekitar gigi yang digerakkan secara ortodontik. Meskipun keterlibatan ALP dalam
mineralisasi tulang sudah diketahui dengan baik, beberapa penelitian telah mengimplikasikan ALP dalam
sintesis dan hanya berbaring dari matriks organik. [15-17] Menariknya, aktivitas ALP jauh lebih tinggi di
ligamen periodontal dibandingkan di penelitian lain. jaringan ikat . [18] Aktivitas ALP menurun dengan
bertambahnya gaya tekan. Dengan demikian, penurunan aktivitas mungkin disebabkan oleh gaya
ortodontik yang lebih berat daripada rentang fisiologis. Pola ALP selama tahap retraksi massal
menggambarkan perubahan biokimia yang terjadi pada tulang yang menyelimuti aspek distal gigi
kaninus dan aspek mesial gigi premolar kedua. Pola diferensial dari resorpsi dan pembentukan tulang
ketika gaya diterapkan pada gigi di tempat yang sama telah dilaporkan sebelumnya . [19] Diasumsikan
bahwa selama OTM, terjadi penurunan pembentukan tulang sedangkan resorpsi tulang meningkat, yang
mungkin merupakan konsekuensi dari penerapan paksa. Menariknya, penurunan pembentukan tulang
dan peningkatan resorpsi tulang pada gigi yang digerakkan secara ortodontik di sekitar permukaan gigi
dapat diperkirakan dengan mengukur tingkat aktivitas ALP. Memang beberapa penelitian sebelumnya
telah mengulangi tren ini. [20-22]

Perubahan biokimiawi pada tulang yang menyelimuti di sekitar gigi taring tercermin dalam pola ALP
selama tahap retraksi kaninus. Dengan demikian menunjukkan bahwa pembentukan tulang terjadi di
tempat ketegangan serta di tempat tekanan. [14]

Pembentukan tulang terjadi lebih banyak di permukaan mesial daripada di permukaan distal, yang
memfasilitasi pelestarian morfologi soket gigi asli. [12,23] Namun demikian, jumlah pembentukan tulang
pada waktu tertentu berkorelasi dengan jumlah ekspresi aktivitas ALP di GCF. Studi kami mendukung
konsep ini dan menekankan kegunaan memperkirakan level ALP di GCF untuk memantau kemajuan
terapi periodontal.

Studi ini memiliki batasan tertentu, ukuran sampel dan waktu pemantauan yang digunakan sangat
minimal, yang menjamin kebutuhan untuk mengonfirmasi temuan penelitian kami menggunakan ukuran
sampel yang lebih besar dan tindak lanjut yang lebih lama.
KESIMPULAN
Analisis biokimiawi GCF dapat memberikan informasi berharga tentang perubahan mendasar dalam
periodonsium. Estimasi ALP mungkin bisa menjadi indikator perubahan yang terjadi pada tulang dan
oleh karena itu menilai jumlah pergerakan gigi, setelah aplikasi paksa. Variasi yang signifikan dalam
aktivitas ALP di GCF di sisi yang mengalami retraksi diamati dengan penurunan yang nyata pada tingkat
ALP melebihi 150 g penerapan gaya.

REFERENSI
1. King GJ, Keeling SD. Orthodontic bone remodeling in relation to appliance decay. Angle Orthod
1995;65:129-40.
2. Barbieri G, Solano P, Alarcón JA, Vernal R, Rios-Lugo J. Biochemical markers of bone metabolism
in gingival crevicular fluid during early orthodontic tooth movement. Angle Orthod 2013;83: 63-
9.
3. Alfaqeeh SA, Anil S. Lactate dehydrogenase activity in gingival crevicular fluid as a marker in
orthodontic tooth movement. Open Dent J 2011;5:105-9.
4. Grieve WG 3rd, Johnson GK, Moore RN, Reinhardt RA, DuBois LM. Prostaglandin E (PGE) and
interleukin-1 beta (IL-1 beta) levels in gingival crevicular fluid during human orthodontic tooth
movement. Am J Orthod Dentofacial Orthop 1994;105:369-74.
5. Toygar HU, Kircelli BH, Bulut S, Sezgin N, Tasdelen B. Osteoprotegerin in gingival crevicular fluid
under long-term continuous orthodontic force application. Angle Orthod 2008;78: 988-93.
6. Karacay S, Saygun I, Bengi AO, Serdar M. Tumor necrosis factoralpha levels during two different
canine distalization techniques. Angle Orthod 2007;77:142-7.
7. Tuncer BB, Ozmeriç N, Tuncer C, Teoman I, Cakilci B, Yücel A, et al. Levels of interleukin-8 during
tooth movement. Angle Orthod 2005;75:631-6.
8. Stucki U, Schmid J, Hämmerle CF, Lang NP. Temporal and local appearance of alkaline
phosphatase activity in early stages of guided bone regeneration. A descriptive histochemical
study in humans. Clin Oral Implants Res 2001;12:121-7.
9. Krishnan V, Davidovitch Z. Cellular, molecular, and tissue-level reactions to orthodontic force.
Am J Orthod Dentofacial Orthop 2006;129:469.e1-32.
10. Kyrkanides S, O’Banion MK, Subtelny JD. Nonsteroidal anti-inflammatory drugs in orthodontic
tooth movement: Metalloproteinase activity and collagen synthesis by endothelial cells. Am J
Orthod Dentofacial Orthop 2000;118:203-9.
11. Griffiths GS, Moulson AM, Petrie A, James IT. Evaluation of osteocalcin and pyridinium crosslinks
of bone collagen as markers of bone turnover in gingival crevicular fluid during different stages
of orthodontic treatment. J Clin Periodontol 1998;25:492-8.
12. Asma AA, Rohaya MA, Hisham ZA. Crevicular alkaline phosphatase activity during orthodontic
tooth movement, canine retraction stage. J Med Sci 2008;8:228-33.
13. Intan ZZ, Hisham ZA, Rohaya MA, Sahidan S, Zaidah ZA. Osteoclast and Osteoblast development
of musculus haemopoietic mono-nucleated cells. J Biol Sci 1995;25:223-34.
14. Batra P, Kharbanda O, Duggal R, Singh N, Parkash H. Alkaline phosphatase activity in gingival
crevicular fluid during canine retraction. Orthod Craniofac Res 2006;9:44-51.
15. Fedarko NS, Bianco P, Vetter U, Robey PG. Human bone cell enzyme expression and cellular
heterogeneity: Correlation of alkaline phosphatase enzyme activity with cell cycle. J Cell Physiol
1990;144:115-21.
16. Tuncay OC, Ho D, Barker MK. Oxygen tension regulates osteoblast function. Am J Orthod
Dentofacial Orthop 1994;105:457-63.
17. Leung KS, Fung KP, Sher AH, Li CK, Lee KM. Plasma bone-specific alkaline phosphatase as an
indicator of osteoblastic activity. J Bone Joint Surg Br 1993;75:288-92.
18. Yamaguchi M, Shimizu N, Shibata Y, Abiko Y. Effects of different magnitudes of tension-force on
alkaline phosphatase activity in periodontal ligament cells. J Dent Res 1996;75:889-94.
19. Bonafe-Oliveira L, Faltin RM, Arana-Chavez VE. Ultrastructural and histochemical examination of
alveolar bone at the pressure areas of rat molars submitted to continuous orthodontic force. Eur
J Oral Sci 2003;111:410-6.
20. Perinetti G, Paolantonio M, D’Attilio M, D’Archivio D, Tripodi D, Femminella B, et al. Alkaline
phosphatase activity in gingival crevicular fluid during human orthodontic tooth movement. Am
J Orthod Dentofacial Orthop 2002;122:548-56.
21. Perinetti G, Varvara G, Salini L, Tetè S. Alkaline phosphatase activity in dental pulp of
orthodontically treated teeth. Am J Orthod Dentofacial Orthop 2005;128:492-6.
22. Isik F, Sayinsu K, Arun T, Unlüçerçi Y. Bone marker levels in gingival crevicular fluid during
orthodontic intrusive tooth movement: A preliminary study. J Contemp Dent Pract 2005;6:27-
35.
23. Insoft M, King GJ, Keeling SD. The measurement of acid and alkaline phosphatase in gingival
crevicular fluid during orthodontic tooth movement. Am J Orthod Dentofacial Orthop 1996;109:
287-96.