14 J. Nat. Melecut.

2007, 70, 14-18

Kehamilan Bioaktif dari Nerium oleander

Pengapuran Bai, † Liyan Wang †, Ming Zhao, † Asami Toki, † Toshiaki Hasegaw † Sebuah, §, Hirotsugu Ogura ⊥, Takao Kataoka ⊥,
Katutoshi Hirose 3, Junichi Saka ‡ saya, Jiao Bai †, dan Masayoshi Ando, ‡ *

Sekolah Pascasarjana Sains dan Teknologi dan Departemen Kimia dan Teknik Kimia, Ni V. igeartsaityU, nIki arashi, 2-8050,
Niigata 950-2181, Jepang, Mitsubishi Gas Chemical Company Inc., Niigata Research Laboratory, 182, Shinwari, Tayuhama, Niigata 950-3112, Jepang, Center for Biological Resources and
Informatics, Tokyo Institute of Technology, 4259 Nagatsuta-cho, Midori- ku, Yokohama 226-8501, Jepang, KNC Laboratories Co., Ltd., 3-2-34 Takatsukadai, Nishi-ku, Kobe Hyogo 651-2271,
Jepang

Terima V. i ed 28 Juni 2006

Tiga kehamilan baru, 21-hydroxypregna-4,6-diene-3,12,20-tr 1 i) o, n2e0 R (-hydroxypregna-4,6-diene-3,12-dion 2 e), (dan

16 Sebuah, 17 Sebuah- epoksi-12 Sebuah- hydroxypregna-4,6-diene-3,20-dion 3 e), (diisolasi dari Nerium oleande, r bersama dengan dua senyawa yang
diketahui, 1 Sebuah 2-hidroksipregna-4,6,16-triene-3,20-dione (neridienone 4) Aa, nd 20 S, 21-dihydroxypregna-4,6- diene-3,12-dione (neridienone 5 B),
Struktur senyawa 1-s 3 ditetapkan atas dasar spektroskopi mereka
data. Aktivitas anti-inflamasi in vitro kompoun 2 d- s 4 diperiksa atas dasar aktivitas penghambatan terhadap
induksi molekul adhesi interseluler-1 (ICAM-1), dan komponen 4 tidak aktif. Aktivitas sitotoksik senyawa 1-5 dievaluasi terhadap empat baris sel manusia, sel
fibroblast manusia normal (WI-38), sel tumor ganas yang diinduksi dari WI-38 (VA-13), sel tumor hati manusia (HepG2), dan sel karsinoma paru manusia (A-549) .
Senyawa 4 menunjukkan penghambatan pertumbuhan sel yang signifikan dari sel VA-13 dan HepG2. Aktivitas pembalikan MDR senyawa 1-5 dievaluasi berdasarkan
jumlah calcein yang terakumulasi dalam sel kanker ovarium manusia MDR 2780AD dengan adanya setiap senyawa. Compou 1 n, d 2 s, dan 5 menunjukkan efek
signifikan pada akumulasi calcein.

Nerium oleander L. (sinonim: Nerium indicum; Nerium odorum) ( Apocyaceae) adalah pohon
berbunga cemara berukuran sedang dengan tinggi 2-5 m dan ditanam di seluruh Jepang
sebagai taman dan pohon pinggir jalan. Spesies ini awalnya didistribusikan di wilayah
Mediterania, Asia subtropis, dan anak benua Indo-Pakistan dan telah digunakan sebagai obat
tradisional karena sifat antibakteri, antikanker, penawar racun, antileprotik, dan kardiotoniknya. 1.
Abe dan Yamauchi melaporkan isolasi lima kehamilan dari kulit akar pla ini 2 nR

t. baru-baru ini, kami punya

menyelidiki konstituen triterpenoid dari daun N. dari

oleande.r 3 Dalam makalah ini, kami melaporkan hasil investigasi fitokimia dan biologis
kehamilan dari kulit kayu dan ranting tanaman ini.

Hasil dan Diskusi

Ekstrak metanol dari kulit kayu dan ranting yang dikeringkan dengan udara N dari. oleander
dipartisi berturut-turut dengan heksana, etil asetat, dan butanol. Bagian yang larut dalam etil
asetat dipisahkan dengan kromatografi kolom silika gel dan HPLC fase normal dan fase
terbalik. Tiga kehamilan baru, 21-hydroxypregna-4,6-diene-3,12,20-trio 1 n), e 2 (0 R-

hydroxypregna-4,6-diene-3,12-dion 2 e), (dan 16 Sebuah, 17 Sebuah- epoksi-12 Sebuah-

hydroxypregna-4,6-diene-3,20-dion 3 e), (diisolasi bersama dengan dua turunan yang
diketahui, 1 Sebuah 2-hidroksipregna-4,6,16-triene-3,20-dione (neridienone A, 4) 2,4 dan 20 S,
21-dihydroxypregna-4,6-diene-3,12dione (neridienone B 5,). 2
dienon kromofor [265 nm (lo ε g 4.23)]. Itu 13 Spektrum C NMR menampilkan 21 sinyal karbon.
Tiga sinyal karbon karbonil muncul di δ 198.7, 210.8, dan 211.6 dan empat karbon olefin
Senyawa 1 memberi komposisi unsur 21 C H 26 HAI 4, yang
ditentukan oleh kombinasi analisis resonansi HREIMS berada δ di124.8 (d), 129.2 (d), 137.7 (d), dan
dan 1 H dan 13 C data NMR. Spektrum IR o 1 f menunjukkan karbonil terkonjugasi (1663, 161.1 (s). Sinyal untuk satu oksigen pembawa karbon diamati di
1), karbonil (1709 cm - 1), dan
adanya hidroksil (3500 cm δ 69,5 (t). Dilihat dari spektrum DEPT dan HMQC, resonansi karbon yang tersisa adalah dua
1630, dan 1618- 1 c) mgroups. UV metil karbon, lima
spektrum 1 konsisten dengan adanya karbon metilen terkonjugasi, empat karbon metin, dan dua kuartener
karbon. Itu 1 Spektrum NMR H menunjukkan dua methy singlet δ ls1 (.07
dan 1,20). Konektivitas karbon terprotonasi (C-1 ke C-2; C-6 ke C-7, C-7 ke C-8, C-8 ke
* Kepada siapa korespondensi harus ditujukan. Telp dan + Fa8x1: -

25-262-7326. E-mail: mando@eng.niigata-u.ac.jp. C-9, C-9 ke C-11; C-8 untuk C-14, C-14 sampai C-15, C-15 sampai C-16) ditentukan dari t 1 hHe-
† Sekolah Pascasarjana Sains dan Teknologi, Universitas Niigata.
1 H
‡ Jurusan Kimia dan Teknik Kimia, Universitas Niigata- spektrum COZY. Eksperimen HMBC digunakan untuk menentukan sity.

§ Mitsubishi Gas Chemical Company, Inc. koneksi karbon-karbon melalui karbon nonprotonasi
⊥
Institut Teknologi Tokyo. atom [Korelasi HMBC: C-10 δ ( 36.2) dengan H. 2- 1, H. 2- 2, H-4, H-9, H. 2- 11, Me-19;
3 Kobe Natural Products and Chemicals Co., Ltd.
C-13 δ ( 59.1) dengan H-11 R, H-14, H. 2- 15, H. 2-

10.1021 / np068030o CCC: $ 37,00 © 2007 American Chemical Society dan American Society of Pharmacognosy. Diterbitkan di Web
23/12/2006
Bioakti V. e Pregnanes dari Nerium oleander Jurnal Produk Alami, 2007, Vol. 70, N 1 Hai 5. 1

Tabel 1. 13 C Data Spektroskopi NMR dari Compoun 1 d- s3

(125 MHz, δ dalam ppm, CDC 3 l)

posisi 1 2 3

1 33,6 (t) 33,5 (t) 33,5 (t)

2 33,6 (t) 33,6 (t) 33,9 (t)
3 198.7 198,8 199,3
4 124,8 (d) 124,7 (d) 124,3 (d)
5 161.1 (s) 161,4 (s) 162,4 (s)
6 129,2 (d) 129.0 (d) 129.1 (d)
7 137,7 (d) 138.1 (d) 138.1 (d)
8 36,6 (d) 36,3 (d) 34,9 (d)
9 51,5 (d) 51.0 (d) 48,6 (d)
10 36,2 36,2 36.0 (s)
11 37,2 (t) 37,4 (t) 28,7 (t)
12 211.6 (s) 216.6 72,2 (d)
13 59.1 (s) 57.7 (s) 49.7 (s)
14 54,2 (d) 52,7 (d) 58,2 (d)
15 23,0 (t) 22,9 (t) 28,4 (t)
16 23,5 (t) 24,8 (t) 67,1 (d)
17 49,5 (d) 50,7 (d) 74,8 (s) Gambar 1. Korelasi NOE pada cincin D dan senyawa rantai samping C-17 2.
18 13,5 (q) 12.1 (q) 10.1 (q)
19 15,9 (q) 15,9 (q) 16,0 (q)
20 210,8 68.0 (d) 208.2 (s) di δ 57,7 dengan H-11 R, H-15 R, H-16 R, H-17, dan Me-18; dan karbon metin
21 69,5 (t) 23.1 (q) 25,3 (q)
terhidroksilasi δ at68.0 dengan proton Me-21
( δ 1.17) dan metin proton di C-17 δ, ( 2.03)] menunjukkan yang satu itu

16, H-17, Me-18]. Interpretasi dari hasil ini menunjukkan bahwa karbon karbonil dan satu karbon metin terhidroksilasi adalah senyawa berlokasi 1 memiliki cincin steroid A, B, C, dan D. 5 SH
. Korelasi MBC di C-12 dan C-20, masing-masing, dan rantai samping asetil adalah
[karbon karbonil di δ 198.7 dengan H-1 Sebuah dan H 2- 2; itu terhubung di C-17. Jadi, struktur planar 2 wofas didirikan
karbon olefin tidak tersubstitusi a δ t 161.1 dengan H-1 Sebuah, Me-19, dan sebagai 20-hydroxypregna-4,6-diene-3,12-dio 2 n) e. C (majemuk 2 menunjukkan

proton olefin H-4, H-6, dan H-7] digunakan untuk menempatkan korelasi NOESY karbonil yang mirip 1 kecuali untuk H-20 dan Me-
kelompok di C-3 dan ikatan rangkap terkonjugasi di C-4 dan C-621 dari rantai samping di C-17. Jadi, Sebuah 1-M 0e, 8 Sebuah- H, 9 R- H, 13 Sebuah-

posisi. Korelasi HMBC lebih lanjut [karbon karbonil δ di Saya, 14 R- H, dan 17 Sebuah- konfigurasi hidroksietil dalam 2 bisa jadi
211.6 dengan H-11 R dan Me-18; karbon karbonil δ at210.8 dengan dikonfirmasi. Korelasi NOESY tambahan di sekitar H-20
proton metilen teroksigenasi di C- δ 214. (27 dan 4.58) dan [H-20 dengan Me-18 dan H-1 Sebuah 6; Me-21 dengan H-16 R, Sebuah] menunjukkan itu

proton metin di C-17 δ, ( 3.30)] menunjukkan bahwa dua karbonil konfigurasi C-20 adalah R ( Gambar 1). Jadi, struktur
karbon dan satu karbon primer beroksigen terletak di senyawa C-12 2 ditentukan sebagai 2 R 0-hidroksipregna-4,6-diena-3, -
C-20, dan C-21, masing-masing, dan rantai samping hidroksi asetil adalah 12-dion.
terhubung di C-17. Jadi, struktur planar 1 wofas didirikan Senyawa 3 diberi komposisi molekuler 2 n 1 HC 26 HAI 4,
sebagai 21-hydroxypregna-4,6-diene-3,12,20-trio 1 n) e. ( ditentukan oleh HREIMS dan dari th 1 eH dan 13 C NMR spektro-
Eksperimen NOESY NMR digunakan untuk tugas data skopik. Data IR dan UV serupa diperoleh untuk konfigurasi relatif senyawa 1. Korelasi NOESY [H- Sebuah 2dengan
3 dibandingkan dengan compoun 1 dsand 2. Itu 1 H dan 13 C NMR spektrum
Saya-19; Me-19 dengan H-8 dan H-1 Sebuah 1; H-8 dan H-11 Sebuah dengan Me-18; dari 3 juga mirip dengan o 1 f, dengan perbedaan yang diamati pada
Me-18 dengan H-15 Sebuah dan H-16 Sebuah; H-14 dengan H-17 dan H-1 R 5; H-15 R nilai untuk H- dan C-12, 16, 17, dan 21. Korelasi HMBC
dengan H-16 R; H-21a dengan H-17; H-21b dengan Me-18 dan H-17; H-9 [karbon metin terhidroksilasi pada C-1 δ 2 7 (2.2) dengan H. 2- 11,
dengan H-11 R] menunjukkan stereostruktur penuh dari molekul tersebut 1 le H-14, dan Me-18; karbon kuaterner di C- δ 1349 (.7) dengan H-8,
Jadi, 10 Sebuah- Saya, 8 Sebuah- H, 9 R- H, 13 Sebuah- Saya, 14 R- H, dan 17 Sebuah- hidroksi- H-11 R, H-14, H. 2- 15, dan Me-18; karbon tersier beroksigen
substituen asetil dikonfirmasi f 1 atau di C-17 ( δ 74.8) dengan H-15 Sebuah, Me-18, dan Me-21; yang teroksigenasi
Senyawa 2 telah diberi kompositio unsur 2 n 1 HC
28 HAI 3,
metin karbon di C-16 δ ( 67.1) dengan H-14 dan H-1 Sebuah 5; karbonil tersebut
yang ditentukan dari HRFABMS a 1 nHd dan 13 C NMR karbon di δ 208.2 dengan Me-21 (asetil metil)] digunakan untuk menempatkan
data spektroskopi. Data IR dan UV serupa diperoleh untuk satu gugus hidroksil di C-12, satu gugus karbonil di C-20, dan satu gugus 2 dibandingkan dengan compoun 1 d. Itu 13 C NMR
spektrum kelompok epoksi antara posisi C-16 dan C-17. Jadi, planar
menampilkan 21 sinyal karbon dengan dua karbonil karbonil yang terletak pada struktur 3 ditugaskan sebagai 16,17-epoxy-12-hydroxypregna-4,6-
δ 198,8 dan 216,6, satu karbon metin terhidroksilasi 6t8.0,
δ Sebuah diene-3,20-dione 3 (). Senyawa 3 menunjukkan NOESY yang sangat mirip
dan empat karbon olefin a δ t 124.7 (d), 129.0 (d), 138.1 (d), dan korelasi dengan o 1 f kecuali untuk H-12, H-16, dan Me-21 dari
161,4 (s). Seperti yang dinilai dari spektrum DEPT dan HMQC, rantai samping di C-17. Korelasi NOESY [H- R 11 untuk H-12; Resonansi karbon H-14 yang tersisa adalah tiga metil
karbon, lima dengan H-12 dan H-15 R; H-15 R dengan H-16; H-16 dengan Me-21] karbon metilen, empat karbon metin, dan dua kuarterner menunjukkan stereostruktur penuh o 3 f.
Demikianlah struktur karbon. Itu 1 Spektrum H NMR menunjukkan dua singlet metil δ s (
senyawa 3 ditentukan sebagai 1 , 17 Sebuah-
Sebuah 6 epoksi-12 Sebuah- hidroksipreg-

1,18 dan 1,21) dan satu doublet shabu δ yl1 (.17). na-4,6-diene-3,20-dione.
Senyawa 2 menunjukkan sangat mirip 13 C dan 1 H NMR spektra sampai Aktivitas antiinflamasi in vitro dari isolat 2 d- 4 dulu
orang-orang dari 1 kecuali di sekitar rantai samping di C-17 (Tabel diperkirakan dengan penghambatan induksi ICAM 6-- 1 9 menggunakan manusia

1 dan 2). Konektivitas karbon terprotonasi menentukan garis sel kultur A549, model sel endotel manusia in vitro,
dengan analisis 1 H- 1 Spektrum H COZY dan karbohidrat- ocnarbon.dll dan hasilnya dinyatakan sebagai 50 IvCalues. Kelangsungan hidup sel adalah
koneksi melalui atom karbon nonprotonated ditentukan diukur dengan uji MTT (Tabel 3). Compo 4 ampuh tak terbayangkan
oleh percobaan HMBC menunjukkan perusahaan itu 2 nhdas a pregna- aktivitas penghambatan melawan induksi ICAM-1 dengan lemah
Struktur 4,6-diena-3,12-dione lik 1 e. Pergeseran kimiawi C-1 aktivitas penghambatan terhadap pertumbuhan sel sel A549 (Gambar 2).
13 eC NMR spektrum 2 itu
melalui C-11, C-15, dan C-19 di th Aktivitas sitotoksik senyawa 1 s- 5 dievaluasi
superimposable pada mereka o 1, f dengan perbedaan yang diamati di terhadap tiga garis sel manusia, WI-38, VA-13, dan HepG2.
nilai C-20 dan C-21. Korelasi HMBC [Senyawa karbonil karbon 4 menunjukkan penghambatan pertumbuhan yang signifikan dari VA-13 dan
di δ 216.6 dengan H-9, H 2- 11, H-17, dan Me-18; sel HepG2 karbon kuaterner. Menarik untuk dicatat bahwa sitotoksisitas 4 otfo
16 Jurnal Produk Alami, 2007, Vol. 70, No. 1 Bai et al.

Meja 2. 1 H Data Spektroskopi NMR dari Compoun 1 d- s 3 ( 500 MHz, δ dalam ppm dan J dalam Hz, CDCl 3)

posisi 1 2 3

1 R 1,76 (1H, m) R 1,74 (1H, ddd, 13,9, 13,5, 5,4) R 1,75 (1H, m)
Sebuah 1,89 (1H, ddd, 13,2, 5,4, 2,2) Sebuah 1,88 (1H, ddd, 13,5, 5,4, 2,2) Sebuah 2,00 (1H, ddd, 13,4, 5,4, 2,2)
2 R 2,47 (1H, m) R 2,47 (1H, m) R 2,45 (1H, brdd, 18.1, 4.4)
Sebuah 2,60 (1, hh, Sebuah 2.58 (1H, ddd, Sebuah 2,56 (1H, ddd,
13.9, 13.9, 5.4) 13.9, 12.7, 5.4) 18.1, 14.4, 5.4)
4 5.75 (1H, dtk) 5.75 (1H, dtk) 5.68 (1H, dtk)
6 6.21 (1H, dd, 9.8, 2.7) 6.21 (1H, dd, 9.8, 2.7) 6.12 (1H, dd, 9.8, 2.7)
7 6.12 (1H, brd, 9,8) 6.14 (1H, dd, 9.8, 1.5) 5.93 (1H, dd, 9.8, 1.7)
8 2,65 (1H, brt, 10,0) 2,65 (1H, brt, 10,8) 2,19 (1H, m)
9 1,65 (1H, ddd, 13.6, 10.0, 4.4) 1,64 (1H, m) 1,32 (1H, ddd, 13.3, 9.6, 4.2)
11 R 2.33 (1H, dd, 13.7, 4.4) R 2.37 (1, dd, 14.2, 4.4) R 1,91 (1H, ddd, 13.2, 4.4, 4.2)
Sebuah 2.56 (1H, dd, 13.7, 13.6) Sebuah 2.56 (1H, dd, 14.2, 13.9) Sebuah 1.57 (1H, ddd, 13.2, 13.2, 11.0)
12 R 4.29 (1H, br dd, 11.0, 4.4)
14 1,68 (1H, m) 1.62 (1H, dd, 12.0, 6.1) 1,94 (1H, dd, 12,7, 5,6)
15 R 2.07 (1H, m) R 1,99 (1H, m) R 2,15 (1H, m)
Sebuah 1,69 (1H, m) Sebuah 1,58 (1H, m) Sebuah 1,71 (1H, m)

16 R 1,84 (1H, m) R 1,84 (1H, m) 3,91 (1 jam, dtk)

Sebuah 2,31 (1H, m) Sebuah 1,34 (1H, m)

17 3,3 (1H, dd, 9,3, 9,5) 2.03 (1H, dd, 9.8, 9.8)
18 1.07 (3H, dtk) 1,18 (3H, dtk) 0,99 (3 jam, dtk)
19 1,20 (3H, dtk) 1,21 (3H, dtk) 1.09 (3H, dtk)
20 3,55 (1H, m)
21 4,27 (1H, d, 19,8) 1,17 (3H, d, 6.11) 2.04 (3H, dtk)
4,58 (1H, d, 19,8)

Tabel 3. Pengaruh Senyawa 2-4 tentang Induksi ICAM-1 dan Viabilitas Sel untuk protein pembuangan obat ini 1.1-13 Senyawa 1, 2, dan 5 menunjukkan aktivitas pembalikan MDR
yang signifikan terhadap sel-sel ini dibandingkan dengan kontrol (Tabel 4). Sejak compoun 1 d, s 2, dan

2 3 4 5 menunjukkan aktivitas sitotoksik yang sangat lemah atau tidak ada sama sekali, senyawa ini
menjanjikan sebagai senyawa timbal sebagai modulator MDR (Tabel 5).
ICAM-1 IC 50 ( µ M) Sebuah > 300 > 100 7.0
IC MTT 50 ( µ M) b > 300 > 100 53.1
Sebuah Sel A549 diberi perlakuan awal dengan berbagai konsentrasi uji Bagian eksperimental
senyawa selama 1 jam dan kemudian diinkubasi dengan adanya R IL-fo1r 6 jam
Absorbansi pada 415 nm diukur setelah pengobatan sel dengan Prosedur Eksperimental Umum. Titik lebur tidak dikoreksi.
antibodi primer dan sekunder serta penambahan substrat enzim Nilai rotasi optik diukur menggunakan Horiba Sepa-200 Percobaan dilakukan dalam kultur rangkap tiga b sel eAs5.49 itu
polarimeter. Spektrum IR direkam pada Shimadzu FTIR-4200
diinkubasi dengan pengenceran senyawa secara serial selama 24 jam. Spektrometer inframerah viabilitas sel. Spektrum UV diukur menggunakan JASCO V-530
(%) diukur dengan uji MTT dan digunakan untuk penentuan spektrometer UV / vis 1. H dan 13 C NMR spektrum diukur dengan IC 50 nilai-nilai. Percobaan dilakukan dalam kultur rangkap
tiga.
Instrumen Varian Unity-plus pada 500 dan 125 MH 1 zH. Penugasan NMR-
waktu ditentukan b 1 yH- 1 Eksperimen H COZY. 13 Penugasan C NMR ditentukan
menggunakan eksperimen DEPT, HMQC, dan HMBC. HRFABMS direkam pada instrumen
JEOL JMS-HX110, dan HREIMS direkam pada instrumen JEOL GC mate-BU20 dan JEOL
JMS-HX110. Gel silika (-
70230 mesh) dulu
digunakan untuk kromatografi kolom dan silika gel (- 243000 mesh)
untuk kromatografi kolom flash. Pemisahan HPLC dilakukan
Hai

× na
Kolom
Instrumen
baja tahan
HPLCkarat
Hitachi
250L-6200
mm dandengan
Inertsil
Inertsil
Prep-ODS
Prep-sil
GLG10 × L 10
Kolom baja tahan karat 250 mm dan dipantau oleh detektor UV Hitachi L-7400 dan detektor
Shodex SE-61 RI.
Bahan Tanaman. Kulit kayu dan ranting Nerium oleander dikumpulkan di Kota Niigata,
Provinsi Niigata, Jepang, pada November 2001. Tanaman itu diidentifikasi oleh Dr. K.
Yonekura, Jurusan Biologi, Fakultas Sains, Universitas Tohoku, Sendai, Jepang. Sebuah
spesimen voucher (2001-11-10) disimpan di Departemen Kimia dan Teknik Kimia,
Universitas Niigata.

Gambar 2. Pengaruh senyawa 4 pada induksi ICAM-1 sebagai respons terhadap IL- R Ekstraksi dan Isolasi. Kulit kayu dan ranting yang dikeringkan dengan udara (19,5 kg)
1. Lingkaran terbuka mewakili ekspresi ICAM-1 digabungkan dan diekstraksi dengan MeOH (85 L) selama 20 hari. Itu
(rata-rata (SD kultur rangkap tiga). Viabilitas sel diukur dengan uji MTT (lingkaran terisi). M
Titik data mewakili m ( eaSnD dari × Ekstrak
1,0 L). eOH
Air (1,3
di konsentratod
L) ditambahkan
4t Lkedan
lapisan
diekstraksi
MeOH,dengan
diekstraksi
heksana
dengan
(8
budaya rangkap tiga. EtOAc (3 × 3,0 L), dikeringkan (Na 2 BEGITU 4), dan dipekatkan untuk menghasilkan bahan berminyak
(96,5 g). Ini dipisahkan dengan kromatografi kolom [silika
sel WI-38 normal orang tua (4 µ . 9g / mL) kurang dari itu gel (1,1 kg), campuran gradien heksana, EtOAc, dan MeOH] menjadi lima fraksi, AE.
VA-13 (Tabel 4). Pecahan B [heksan- eEtOAc (1: 1), EtOAc], fraksi C cMeOH (1: 1)]
(EtOAc), dan fraksi D [EtOA- diberikan pada pengeringan kental
Salah satu mekanisme yang mendasari multidrug resistance (MDR) in
sel tumor mamalia telah dianggap berasal dari pengangkatan minyak yang ditingkatkan, dengan berat masing-masing 29,58, 23,33, dan 32,14 g. Fraksi B tadinya
dilarutkan dalam EtOAc (110 mL), diaduk selama 1 jam, disaring, dan dipekatkan
obat karena kelebihan protein transporter limbah, seperti untuk memberikan minyak kental (30 g). Ini dipisahkan menjadi sembilan fraksi P-glikoprotein (Pgp), protein
PT) h.us,
multidrug-resistance (MR 10
(B1-B9) dengan kromatografi kolom [silika gel (1,5 kg), gradien
agen yang menghambat fungsi protein ini dapat mengatasi campuran heksana, EtOAc, dan MeOH]. Pecahan B5 [hex- anEetOAc
Efek MDR. Calcein yang diturunkan dari calcein AM secara endogen (4: 6)] diberikan pada pengeringan minyak kental (0,670 g). Pecahan B6 dan B7
esterase digunakan sebagai probe fluoresen fungsional yang mudah dioperasikan [EtOAc (100%)] yang diberikan pada pengeringan minyak kental tambahan (B6, 13,39 g;
Bioakti V. e Pregnanes dari Nerium oleander Jurnal Produk Alami, 2007, Vol. 70, N 1 Hai 7. 1

Tabel 4. Pengaruh Senyawa 1-5 Tentang Akumulasi Calcein pada Sel MDR 2780 AD dan Aktivitas Sitotoksik Senyawa terhadap Sel WI-38, VA-13, dan HepG2

Sebuah, l b)
akumulasi calcein (% dari kontrol sitotoksisitas IC 50 ( µ g / mL) c

senyawa 0.25 µ g / mL 2.5 µ g / mL 25 µ g / mL WI-38 VA-13 HepG2

1 110 105 140 48.1 87.7 94.9

2 ( 1) 100 122 136 66.4 57.4 49.2
2 ( 2) 116 127 138
3 103 108 99 51.1 73.1 62.1
4 109 92 107 4.9 0.68 2.5
5 110 154 148 73.5 > 100 > 100
Sebuah Jumlah calcein yang terakumulasi dalam sel kanker ovarium manusia yang resisten multidrug 2780 AD ditentukan relatif terhadap kontrol dengan adanya 0,25, 2,5, dan 2. µ 5 g / mL
V.
setiap senyawa uji b
. alues adalah jumlah relatif calcein yang terakumulasi dalam sel dibandingkan dengan
eksperimen kontrol dan mewakili cara determina rangkap tiga c tIiC di 50 s. nilai mewakili cara penentuan duplikat.

Tabel 5. Pengaruh Senyawa 2 dan 5 tentang Akumulasi Calcein dalam Sel 2780 AD Multidrug-Resistant

akumulasi calcein Sebuah n

evaluasi
b
konsentrasi rata-rata verapamil maks. verapamil%
senyawa ( µ g / mL) (hitung / baik) % dari kontrol c l aktivitas d (%) e konsentrasi

2 ( 2) 0.25 3937 116 + 120 P. f

2.5 4327 127 + 117 120
25 4679 138 ++ 93 0.25 µ g / mL
5 0.25 3743 110 ( 113 P. f
2.5 5240 154 +++ 141 141
25 5019 148 ++ 100 2.5 µ g / mL
verapamil 0 (kontrol) 3395 100
0.25 3298 97 ( 100
2.5 3701 109 ( 100
25 5034 148 ++ 100
Sebuah Jumlah calcein yang terakumulasi dalam sel kanker ovarium manusia yang resisten multidrug 2780 AD ditentukan relatif terhadap kontrol dengan adanya 0,25, 2,5, dan µ 2g5 / mL
kehamilan b. Nilai mewakili sarana determinati rangkap tiga c oVnasl.ues adalah jumlah relatif calcein yang terakumulasi dalam sel dibandingkan dengan eksperimen kontrol
d eInndt.ices diekspresikan pada skala empat dengan kisaran relatif

jumlah akumulasi calcein dibandingkan dengan eksperimen kontrol + (%+ )+:,> 151%; ++, 131-150%; +, 111-130%; (, 91-110%; -,
Pra
< 90%. e Nilai dinyatakan sebagai jumlah relatif akumulasi calcein dalam sel dibandingkan dengan ve f
, ppaomsiitli.ve: the
aktivitas lebih kuat daripada verapamil (verapami> l% 100%).

B7, 2,61 g). Fraksi B5 diberikan kompoun 3 d (34,2 mg, 0,00018%) 20 R- Hydroxypregna-4,6-diene-3,12-dione (2): mikro tak berwarna
- nEetOAc (4: 6)], dan selanjutnya
dengan pemisahan menggunakan HPLC [silica gel, hexa kristal; tl 16- 7170 ° C; [ R] 20 D + 85.3 ( c 0,346, CHC 3 l); UV (CHCl 3)
pemisahan fraksi kedua memberi 404 mg oleh HPLC [ODS, λ maks ( catatan ε) 278 (4,19) nm; IR (CHC 3 l) ν maks 3416, 1694, 1663, 1653,
MeOH-MeCN-H 2 O (1: 9: 10)]. Fraksi B6 dilakukan kromatografi kolom silika gel [silika gel 1618 cm- 1; 1 H (CDCl 3) dan 13 C NMR (CDCl 3, 125 MHz), lihat Tabel 1 dan 2; HRFABMS m
(700 g), gradien heksana, / z 329.2133 [M + H] + (dihitung untuk
EtOAc, dan MeOH] menghasilkan tujuh fraksi, B-6B 167 [heksana - EtOAc C 21 H 29 HAI 3, 329.2117).
(1: 1), B64 (11.5 g)], dan B64 dipisahkan menggunakan HPLC [ODS,
16 Sebuah, 17 Sebuah- Epoksi-12 Sebuah- hydroxypregna-4,6-diene-3,20-dione (3) c: ol-
MeOH-MeCN-H 2 O (1: 6: 9)] memberikan subfraksi B642 (827 mg). Subfraksi ini
kristal mikro tanpa bijih; tl 16 - 9172 ° C; [ R] 20 D - 2.4 ( c 0,415, CHC 3 l);
selanjutnya dipisahkan oleh HPLC [ODS, Me-OMHeCN-
UV (CHCl 3) λ maks ( catatan ε) 276 (3,98) nm; IR (KBr) ν maks 3440, 1694,
H 2 O (1: 9: 10)] memberikan B6422 (283 mg), yang kemudian dimurnikan dengan HPLC [ODS,
1650, 1615 cm - 1; 1 H (CDCl 3) dan 13 C NMR (CDCl 3, 125 MHz) data,
MeOH-MeCN-H 2 O (1: 6: 9.3)] menghasilkan B64222 (180 mg)
lihat Tabel 1 dan 2; HREIMS m / z 342.1831 (dihitung untuk C 21 H 26 HAI 4
dan kemudian dengan tambahan HPLC [ODS, MeO-HMeCN-H 2 O (1: 9: 10)] untuk memberi 4 ( 131,4
342.1831).
mg, 0,00067%). Fraksi C dipisahkan dengan HPLC
[silika gel, heksan- eEtOAc (1:59)] menjadi enam pecahan, C- 1C6, dan C3 12 Sebuah- Hydroxypregna-4,6,16-triene-3,20-dione (neridienone A, 4).
(9,32 g) dipisahkan dengan HPLC [silica gel, hex-aE netOAc (3: 7)] ke Struktur compoun 4 d dikonfirmasi oleh analisis spektrum NMR-nya 1 ( H NMR, 13 C NMR,
empat pecahan selanjutnya, C3- 1C34. Fraksi C33 (4,10 g) dipisahkan HH COZY, DEPT, HMQC, HMBC,
oleh HPLC [ODS, MeOH-MeCN-H 2 O (1: 6: 9)] menghasilkan 13 pecahan (C33-1-C33-13), dan NOESY), dan data fisik dan spektroskopi secara umum sesuai dengan yang dilaporkan
dengan 1 ( 55,9 mg, 0,00029%) diperoleh dari C33-4 dalam literat 2 uT reh.e 13 C data NMR dari
tanpa pemurnian lebih lanjut. Fraksi C33-9 (950 mg) lebih lanjut 4 telah dilaporkan 4 ddengan beberapa tugas yang salah 13: C NMR
dipisahkan oleh HPLC [ODS, MeO-HMeCN-H 2 O (4: 4: 9)] untuk memberi 2 (CDCl 3, 125 MHz) δ 199,4 (C-3), 198,9 (C-20), 162,7 (C-5), 155,2 (C-17), 149,0 (C-16),
(43,0 mg, 0,00022%). Fraksi D (30,66 g) dilarutkan dalam EtOAc 138,6 (C-7), 129,1 (C-6), 124,3 (C-4), 73,2 (C-
(75 mL) dan disaring. Filtrat memberikan pengeringan minyak kental (17.06 12), 52.8 (C-13), 51.6 (C-14), 49.0 (C-9), 36.1 (C-10), 34.8 (C-8), 33.9 (C-2), 33.6 (C-1 ),
g), yang dipisahkan dengan kromatografi kolom [silika gel, 620 g; 31,7 (C-15), 28,6 (C-11), 26,8 (C-21), 16,2 (C-19),
gradien CHC 3 l dan MeOH; CHC 3 l-MeOH (98: 2) menjadi MeOH (100%)] menghasilkan 12 11.5 (C-18).
pecahan (D- 1D12). Pecahan D4 [CHC 3 l-MeOH (98: 2),
20 S, 21-dihydroxypregna-4,6-diene-3,12-dione (neridienone B, 5).
1,66 g] selanjutnya dipisahkan dengan HPLC [silica gel, EtOAc (100%)] menjadi
Struktur compoun 5 d dikonfirmasi oleh analisis spektrum NMR-nya 1 ( H NMR, 13 C NMR,
berikan enam pecahan (D41- D46). Fraksi D45 (667 mg) dipisahkan
HH COZY, DEPT, HMQC, HMBC, dan NOESY), dan data fisik dan spektroskopi 5 aw
oleh HPLC [ODS, MeOH-MeCN- H 2 O (4: 4: 10)] untuk menghasilkan enam pecahan
sering berada di
tambahan (D45- 1 D456), dan D452 memberi 5 ( 164,5 mg,
persetujuan yang baik dengan yang dilaporkan dalam litera 2 tuTreh.e 13 C NMR
0,00084%).
data dari 5 belum dilaporkan 13: C NMR (CDCl 3, 125 MHz) δ
21-Hydroxypregna-4,6-diene-3,12,20-trione (1): mikro tak berwarna
216.8 (C-12), 198.7 (C-3), 161.2 (C-5), 137.9 (C-7), 129.1 (C-6), 124.7
kristal; tl 16- 1163 ° C; [ R] 24 D + 90.6 ( c 0,223, MeOH); UV (CHC 3 l)
(C-4), 72.1 (C-20), 65.9 (C-21), 57.6 (C-13), 52.5 (C-9), 51.0 (C-14),
λ maks ( catatan ε) 265 (4,23) nm; IR (CHC 3 l) ν maks 3500, 1709, 1663, 1630,
1618 cm- 1; 1 H (CDCl 3, 500 MHz) dan 13 C NMR (CDCl 3, 125 MHz), lihat Tabel 1 dan 2; 44.9 (C-17), 37.3 (C-11), 36.3 (C-8), 36.2 (C-10), 33.6 (C-2), 33.5 (C-1), 23.8 (C-16), 22.9
HREIM m S / z 342.1832 (dihitung untuk C (C-15), 15.9 (C-19), 12.2 (C-18).
21 H 26 HAI 4

342.1831); HRFABMS m / z 343.1906 [M + H] + (dihitung untuk C 21 H 27 HAI 3, Aktivitas Penghambatan pada Induksi ICAM-1. Detail eksperimental
r, 9 s, 1.4
343.1909). sudah dijelaskan pada pap sebelumnya 3 e ,8
18 Jurnal Produk Alami, 2007, Vol. 70, No. 1 Bai et al.

Aktivitas Hambatan Pertumbuhan Sel ke WI-38, VA-13, dan HepG2 (6) Kawai, S .; Kataoka, T .; Sugimoto, H .; Nakamura, A .; Kobayashi,
in Vitro. Rincian percobaan telah dijelaskan di makalah sebelumnya 3., 14,15 T .; Arao, K .; Higuchi, Y .; Ando, M .; Nagai, K I. imunofarmakologi
2000, 48, 129-135.
Akumulasi Seluler Calcein. Detail eksperimental telah (7) Sugimoto, H .; Kataoka, T .; Igarashi, M .; Hamada, M .; Takeuchi,
dijelaskan di pape sebelumnya 1 r 4 s, 1.5 T .; Nagai, K. Biochem. Biofis. R V. e . Komun. 2000, 277, 330-
333.
Referensi dan Catatan (8) Yuuya, S .; Hagiwara, H .; Suzuki, T .; Ando, M .; Yamada, A .; Suda,
K .; Kataoka, T .; Nagai, K. J. Nat. Melecut. 1999, 62, 22-30.
(1) Chopra, RN; Nayara, SL; Chopra, I. C G.losarium dari Indian
(9) Higuchi, Y .; Shimoma, F .; Koyanagi, R .; Suda, K .; Mitui, T .;
Tanaman obat; Dewan Riset Ilmiah: New Delhi, 1956; hlm 175-177.
Kataoka, T .; Nagai, K .; Ando, M J .. Nat. Melecut. 2003, 66, 588-594.

(2) Abe, F .; Yamauchi, T P. . hytokimia 1976, 15, 1745-1748. (10) Wortelboer, HM; Usta, M .; van Zanden, JJ; van Bladeren, PJ;
(3) (a) Fu, L .; Zhang, S .; Li, N .; Wang, J .; Zhao, M .; Sakai, J .; Hasegawa, Rietjens, IMCM; Cnubben, NH P B.iochem. Pharmaco 2 l. 005,
T .; Mitsui, T .; Kataoka T .; Oka, S .; Kiuchi, M .; Hirose, K .; Ando, 69, 1879-1890.
M. J. Nat. Melecut. 2005, 68, 198-206. (b) Chao, M .; Zhang, S .; Fu, (11) Eneroth, A .; Åst¨r̈m o, E .; Hoogstraate, J .; Schrenk, D .; Conrad, S .;
L .; Li, N .; Bai, J .; Sakai, J .; Wang, L .; Tang, W .; Hasegawa, T .; Ogura, H .; Kataoka T .; Kauffmann, HM; Gjellan, K. Eur. J. Pharm. Sci 2 . 001, 12, 205-
Oka, S .; Kiuchi, M .; Hirose, K .; Ando, J M .. 214.
Nat. Melecut. 2006, 69, 1164-1167. (12) Tsuruo, T .; Iida-Saito, H .; Kawabata, H .; Oh-hara, T .; Hamada, H .;
(4) Huq, MM; Jabbar, A .; Rashid, MA; Hasan, C. M; Ito, C .;
Utakoji, T. Jpn. J. Res kanker. (Ga) nn 1986, 77, 682-692.
Furukawa, H. J. Nat. Melecut. 1999, 62, 1065-1067. (5) (a) Wang, SK; Dai, CF; Duh, C. Y J
(13) Jonsson, B .; Liminga, G .; Csoka, K .; Fridborg, H .; Dhar, S .; Nygren,
.. Nat. Melecut. 2006, 69, 103-
P .; Larsson, R. Oka, S E.ur. J. Kanker 1996, 32A, 883-887.
106. (b) Ahmed, AF; Hsieh, YT; Wen, ZH; Wu, YC; Sheu,
JH J. Nat. Melecut. 2006, 69, 1275-1279. (c) Struktur neridienone B 5 () ditentukan secara (14) Wu, J .; Li, N .; Hasegawa, T .; Sakai, J .; Kakuta, S .; Tang, W .; Oka,
pasti oleh Abe dan Yamau 2 chi. S .; Kiuchi, M .; Ogura, H .; Kataoka, T .; Tomida, A .; Tsuruo, T .; Ando,
13 C Penugasan NMR o 1 f dan 5 ditetapkan seperti yang ditunjukkan pada Tabel 1 dan Bagian M. J. Nat. Melecut. 2005, 68, 1656-1660.
Eksperimental dengan analisis 1 Ho- f 1 H COZY, (15) Li, N .; Wu, J .; Hasegawa, T .; Sakai, J .; Wang, L .; Kakuta, S .; Furuya,
Korelasi HMQC, dan HMBC dalam laporan ini 1 t 3. C data NMR dari 5 Y .; Tomida, A .; Tsuruo, T .; Ando, M. J. Nat. Melecut. 2006, 69,
setuju dengan itu 1 oefxcept C-20. Sejak struktur 5 ditentukan menjadi 2 234-239.
S, 021-dihydroxypregna-4,6-diene-3,12-
dione, skeleto kehamilan-4,6-diene-3,12-dione 1 nisofapparent. NP068030O