KEGIATAN2

DASAR - DASAR TEKNIK MIKROBIOLOGI

A. TUJUAN

1. Mempelajari cara pembuatan media dan syarat-

syarat yang dibutuhkan oleh suatu media untuk
pertumbuhan mikroba.
2 Mempelajari macam-macam teknik sterilisasi
3. Mempelajari cara-cara pemindahan mikroba
secara aseptis.
4. Mempelajari teknik-teknik isolasi dan penanaman
mikroba.
5. Mempel
ajari teknik pembuatan pulasan bakteri
untuk pengecatan/pewarnaan bakteri
6. Mengenal bermacam-macam mikroba di alam
B. DASAR TEORI
1. Media dan Cara Pembuatan Media
Pembiakan mikrobia di laboratorium memerlukan
media yang berisi zat hara serta lingkungan pertumbuhan
yang sesuai bagi mikroba. Media adalah suatu bahan yang
digunakan untuk menumbuhkan mikroba yang

PETUNJUK PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI DAN

PARASITOLOGI FARMASI 0111 FARMASI

Dipindai dengan
CamScanner
 nutrisi atau zat- zat makanan . . . tas ca1npuran
terdin a buhkan mikroba, media dapat juga
Selain untuk menum . b ak ..
k isolasi, memper any , penguJian
d' unokan untu
ig . fi . 1 gis dan perhitungan jumlah mikroba sifat-
sifat JSIO 0
1994· Jutono dkk, 1980).
(Lay, ,
Syarat media yang baik untuk pertumbuhan
mikroba adalah lingkungan kehidupannya harus sesuai
dengan lingkungan pertumbuhan mikroba tersebut, yaitu
: susunan makanannya (media harus mengandung air untuk
menjaga kelembaban dan untuk pertukaran zat/metabolisme,
juga mengandung sumber karbon, mineral, vitamin dan gas),
tekanan osmose yaitu harus isotonik, derajat keasaman/pH
umumnya netral tapi ada
jugayang alkali, temperatur harus sesuai dan steril. Media harus
mengandung semua kebutuhan untuk pertumbuhan milcroba,
yaitu: sumber energi ( contoh: gula), sumber nitrogen, juga ion
inorganik essensial dan kebutuhan yang khusus, seperti vitamin
(Jawetz dkk, 1996).
Berdasarkan komposisi kimianya, media dapat
dibedakan
I
· d. .
merua media sintetik yaitu media yang
susunan kimian dik .
.
ya etahu1 dengan pasti, medium iru
PETuNJUK PRAKTI
PARASITOLOGI F KUM
MIKROBIOLOGI DAN ARMASI
0111 FARMASI
Dipindai dengan
CamScanner
biasanya digunakan untuk mempelajari kebutuhan
makanan mikroba. Media non sintetik (kompleks)
yaitu media yang susunan kimianya tidak dapat diketahui
dengan pasti, medi ini digunakan untuk menumbuhkan dan
mempelajari taksonomi rnikroba Berdasarkan ko~istensinya
mediadapat dibedakan menjadi : media cair, media padat, dan
media padat yang dapat-dicairkan (Lay, 1994~ Jutono dkk,
1980; Jawetz dkk, 1996).
Dalam pemeriksaan laboratorium mikrobiologi, penggunaan
media sangat penting untuk isolasi, identifikasi, maupun
diferensiasi. Media dapat dianggap sebagai kumpulan zat-zat
organik maupun anorganik yang digunakan untuk
menumbuhkan bakteri dengan syarat-syarat tertentu. Untuk
memberikan kondisi hidup yang cocok bagi pertumbuhan
bakteri, ~a.ka media harus memenuhi dalam:

Kandungan
1. 5. Sterilisasi
nutrient
2. Tekanan osmosis
3. Derajat keasaman (pH)
4. Temperatur

PETUNJUK PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI DAN

PARASITOLOGI FARMASI DIII FARMASI

Dipindai dengan CamScanner

 Kandungan nutrient suatu media yang digunakan untuk
pertumbuhan harus mengandung: air, sumber karbon,
sumber nitrogen, mineral, vitamin, gas.

C.PROSEDUR
KERJA l. Alat & Baban
a. Alat
l. Tabung reaksi
2. Labu Erl enmeyer
3. BekergJass
4. Pipet
5 · Gelas
ukur 6. pH
meter
7
· Cawan petri
8. Batang pengaduk
9. Pipet volume
,
10. Erlenmeyer,
11. Penangasl 1
e emen
pemanas
b.12. Autoklaf
Baban
1. Agar
PETlJNJUK PRA
PAAASITO
LOG~:A~:~~
?BIOLOGI
DAN
FARMASI Dipindai dengan
CamScanner
 2. Berbagai macam media
3. Media Nutrien Agar (NA) (Oxoid)
4. Media Nutrien Broth (NB) (Oxoid)
5. Aquades

l. Cara Kerja

1. Pembuatan media kaldu natricnt (nutrient

broth)
a Timbang kaldu nutrient sesuai yang
dibutuhkan ( 13 g/liter)
b. Larutkan dalam aquades (10 mi)
c. Bagi dalam tabung reaksi, tutup dengan
kapas berbalut kasa dan alumuniurn foil
d. Sterilkan dengan autoklaf (T: 121 ° C~ t:
15 menit)
2 Pembuatan media nutrient agar miring
a Timbang media nutrient broth sesuai yang
dibutuhkan
b. Larutkan dengan aquades dalam
erlenmeyer
( 10 mi)
c. Tambah agar sebanyak 1 ~%

PETUNJUK PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI DAN

PARASITOLOGI FARMASI DIII FARMASI

Dipindai dengan
CamScanner
 d. l,arUtkan agar sampai larut, jika J)etlu
dipanaskan
e. Bagi dalam tabung reaksi, tutup dengan
kapas berbalut kasa dan alumunium foiJ
f. Sterilkan dengan autoklaf (T: J2J~C; t: 15
menit)
g. Setelah disterilkan, media dibekukan
dengan cara tabung dimiringkan
3. Pembuatan media nutrient agar
a Timbang media nutrient broth sesuai yang
dibutuhkan
b. Larutkan dengan aquades dalam
erlenmeyer (40 mi)
c. Tambah agar sebanyak 1,5%
d tutup dengan kapas berbal ut kasa dan
alumunium foil
e, Sterilkan dengan autoklaf (T: 12 I °C; t: 15
menit)

f. Simpan dalam refrigerator, jika akan

digunakan dicairkan kembali dan bagi
dalam petri disk steril.
PETuNJUK PRA
PARASITOLOG~AKUM
MIKROBIOLOGI DAN
RMASI 0111 FARM4~1
Dipindai dengan
CamScanner
 Atau
L Timbang media NA (Oxoid) dan NB (Oxoid) sesuai
prosedur di kemasan. (Catatan : Buatlah 50 mi media NA
untuk setiap kelompok kecil praktikum dan 50 mi media
NB untuk satu golongan pra'.ktikum ). Penimbangan media
dilakukan secara teliti dan cepat, kemudian serbuk media
dimasukkan secara hati-hati ke dalam erleruneyer.
2 Tambahkan aquades dan aduk sampai merata dengan
batang pengaduk

3. Panaskan dengan hati- menggunakan

hati
penangas/elemen pemanas sampai media tercampur
homogen ( ditunjukkan dengan warna yang kuning jernih).
Perhatian : pada saat pemanasan jangan sampai terbentuk
buih berlebiha n sampai meluap!
4. Sebelum diautoklaf, tuangkan media NA dengan
volume tertentu menggunakan pipet volume : 5ml ke dalam
tabung reaksi untuk NA miring, 10 mi ke dalam tabung
reaksi untuk NA tegak, 15 mi untuk NA dalam cawan petri
untuk percobaan 4b (metode
isolasi pour plate ), sisanya untuk NA dalam cawan
3. 1

PETUNJUK PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI DAN

PARASITOLOGI FARMASI 0111 FARMASI

Dipindai dengan
CamScanner
 petri untuk percobaan 6 (pengenalan
mikro
alam). Tutup tabung reaksi dengan
badi
tabung (penutupan jangan terlalu rapatf)
penutup
- Sebelum diautoklaf tuangkan NB ke dalam
).

tabung reaksi untuk 6 ke1ompok praktikum dalam 1

golongan. Masing· masing tabung reaksi @ 8 ml Tutup tabung
reaksi dengan kapas atau penutup tabung (penutupan jangan
terlalu rapat!)
6 Sterilkan seluruh media dalam tabung reaksi
tersebut dengan menggunakan autokJaf selama 15 menit,
tekanan I atm 121 ° C. Pelajari cara mcngopcrasikan autoklaf
dengan benar!
7. Setelah diotoklaf : media NA 10 mi dalam
tabung reaksi diletakkan tegak pada rak tabung dan biarkan
mcmadat, media NA 5 mi inkubnsikan miring dan biarkan
mcmadat. Media sisa NA tuangkan dalam cawan petri dan
biarkan memadat (untuk percobaan 6
. : pengenalan mikroba di alam). Media NA 15 mi dibiarkan
sampai suhu 45-50° C (untuk percobaan
4b : metode isolasi pour plate ).

PETUNJUK PRAKTI
PARAslTOLOG KUM MIKROBIOLOGI DAN
I FARMASI DIII FARMASI

Dipindai dengan
CamScanner
 8. Media NB dalam tabung reaksi biarkan dingin.
Seluruh media NA dan NB ini akan digunakan untuk
percobaan selanjutnya.

2 Teknik - Teknik Pemindaban Kullur Mikroba Setelah

mengikuti praktikum ini, mahasiswa diharapkan dapat:
1. Memindahkan biakan dari satu media ke
media lain
2. Melakukan kerja aseptis
Untuk mencegah tercemamya biakan mumi, perlu diadakan
teknik aseptik pada waktu memindahkan mikroba. Dalam
percobaan-percobaan ini akan dipelajari cara-cara
memindahkan biakan murni dengan cara aseptik.
Biakan mumi (pure culture) sangat diperlukan dalam
kegiatan mikrobiologi, misalnya untuk keperluan diagnostik,
karakteristik mikroorganisme, industri mikrobiologi, dJI. Untuk
mendapatkan kultur yang mumi selain nutnsi dan lingkungan
yang menunjang pertumbuhan rnikroorganisrne tersebut juga
perlu

PETUNJUK PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI DAN

PARASITOLOGI FARMASI 0111 FARMASI

Dipindai dengan CamScanner

 kontaminan dalam biakan. Untuk r'tu 1
dicegah adanya ,
diperlukan suatu teknik aseptis.
Teknik aseptis sangat diperlukan untuk 1
memindahkan biakan dari satu ke tempat yang lain .. Dengan
teknik aseptis seorang mikrobiologis berusaha mencegah
terjadinya kontaminasi pada biakan. Untuk ! menyempurnakan
kerja aseptis, hal yang perlu 1
diperhatikan adalah:
l. Area tempat bekerja dibersihkan terlebih dahulu
l Alat-alat untuk keperluan kerja aseptis ,
disterilkan terlebih dahulu
3. Pekerjaan dikerjakan secara cepat dan efisien.

Alat &
Bahan 1.
Alat
- Lampu S · ·
pmtus /Larnpu bunsen
-Ose
- Jarum inokulasi
- Vortex mixer

2
• Baban
- Nutrien agar · .
miring
PETUNJUK PRAKTIK
PARASITOLOGI
FA~= MIKROBIOLOGI
DAN ASI DIII

---- FARMASI
Dipindai dengan
CamScanner
-