Food Chemistry 194 (2016) 410-415

daftar isi yang tersedia di ScienceDirect

food Chemistry

journalhomepage: www. elsev yaitu r. com / loca te / foodchem

aktivitas antibakteri unggul nanoemulsion dari Thymus daenensis minyak

esensial terhadap E. coli
Sebuah Sebuah Sebuah.⇑ b c
Roya Moghimi , Lida Ghaderi , Hasan Rafati , Atousa Aliahmadi , David Julian McClements
a Departemen Fitokimia & Teknik Kimia, Tanaman Obat dan Obat Research Institute, Universitas Shahid Beheshti, Teheran, Iran
c
b Departemen Biologi, Tanaman Obat dan Obat Research Institute, Universitas Shahid Beheshti, Teheran, Iran Departemen Ilmu Pangan, Universitas Massachusetts, Amherst, MA
01003, USA

articl ei nfo abstrak

Pasal sejarah: pengawet alami sedang banyak diteliti untuk potensi aplikasi industri mereka dalam makanan dan produk lainnya. Dalam
Menerima Maret 2015 23 karya ini, minyak esensial (Thymus daenensis) dirumuskan sebagai nanoemulsion air terdispersi (diameter = 143 nm)
Diterima dalam bentuk direvisi 13 Juli 2015 menggunakan intensitas tinggi USG. Aktivitas antibakteri minyak esensial dalam bentuk murni dan nanoemulsion diukur
Diterima 30 Juli 2015 Tersedia online 31
melawan bakteri patogen makanan-ditanggung penting, Escherichia coli. Aktivitas antibakteri ditentukan dengan mengukur
Juli 2015
konsentrasi minimum penghambatan (MIC) dan konsentrasi bakterisida minimum (MBC). Aktivitas antibakteri minyak atsiri
terhadap E. coli ditingkatkan jauh ketika itu diubah menjadi nanoemulsion, yang dikaitkan dengan akses yang lebih mudah
senyawa kimia dipelajari dalam artikel ini:
dari minyak esensial ke sel bakteri. Mekanisme aktivitas antibakteri diselidiki dengan mengukur kalium, protein, dan
Tween 80 (pubchem CID: 52.811.955) Span 80
kebocoran asam nukleat dari sel-sel, dan mikroskop elektron. Evaluasi kinetika penonaktifan mikroba menunjukkan bahwa
(pubchem CID: 5.385.498) Glutaraldehid
(pubchem CID: 3485) nanoemulsion membunuh semua bakteri di sekitar 5 menit, sedangkan hanya pengurangan 1-log diamati untuk minyak
esensial murni. nanoemulsion muncul untuk memperkuat aktivitas antibakteri minyak atsiri terhadap E. coli dengan
Kata kunci: meningkatkan kemampuan mereka untuk mengganggu integritas membran sel.
antimikroba alami
Mekanisme aksi
integritas membran 2015 Elsevier Ltd All rights reserved.
Ostwald pematangan
diameter partikel

1. Perkenalan
Keracunan makanan oleh Escherichia coli merupakan masalah yang
berkembang di kedua negara berkembang dan dikembangkan. Banyak
konsumen con-berkeberatan terhadap potensi efek samping dari
menggunakan antimikroba sintetik dalam makanan, dan lebih memilih untuk
menggunakan makanan yang pra-dilayani menggunakan pendekatan yang
lebih alami untuk mencegah dan kontrol-ling mikroorganisme patogen (Cakir,
Kordali, Kilic, & Kaya, 2005; Goni et al., 2009). Oleh karena itu,
pengembangan aman dan agen antibakteri alami menjadi semakin penting.
Minyak atsiri adalah komponen volatil aromatik, yang dihasilkan oleh
metabolisme sekunder tanaman herbal, dan dapat digunakan sebagai
antimikroba alami (Diao, Hu, Feng, Li, & Xu, 2013). Ada banyak laporan
tentang aktivitas antimikroba dari minyak esensial, dan penggunaan minyak
esensial sebagai agen antimikroba dalam produk makanan (Burt, 2004;
Sagdic, Karahan, Ozcan, & Ozkan, 2003; Salgueiro, Martins, & Correia,
2010). timus daenensis adalah spesies dari genus
⇑ Sesuai penulis di: Departemen Teknik Kimia, Tanaman Obat dan Obat Research Institute,
Universitas Shahid Beheshti, GC, Evin, 1983963113 Teheran, Iran.
Timus yang umum ditemukan di Iran, yang digunakan untuk kedua sifat
aromatik dan obat (Nickavar, Mojab, & Dolat-Abadi, 2005). Minyak esensial
yang diekstrak dari T. daenensis merupakan sumber berlimpah timol dan
carvacrol, yang keduanya telah dilaporkan memiliki aktivitas antioksidan kuat
(Ghasemi Pirbalouti, Hashemi, & Ghahfarokhi, 2013; Moazeni, Khajeali,
Izadi, & Mahdian 2014). Hal ini juga digunakan sebagai komponen makanan,
tehnya-bal, dan tanaman obat untuk sifat terapeutik terkenal nya (Alizadeh,
Alizadeh, Amari, & Zare, 2013; Gourama & Bullerman, 1995). Ada sejumlah
tantangan teknologi potensial terkait dengan menggabungkan minyak esensial
ke dalam produk makanan karena rendah air-kelarutan, stabilitas kimia
miskin, dan vola-genteng alam (Sugumar et al., 2013). Enkapsulasi minyak
fungsional dalam nanopartikel telah diteliti sebagai strategi potensial untuk
meningkatkan pemanfaatannya, stabilitas, dan kemanjuran (Donsì,
Annunziata, Sessa, & Ferrari, 2011; Qian & McClements, 2011; Rao &
McClements 2011). Di antara sistem nanoencapsulation saat ini sedang
digunakan untuk pengiriman komponen bioaktif, nanoemulsions telah
dilaporkan menjadi sangat sesuai untuk pemanfaatan dalam produk makanan,
karena kemudahan persiapan dan atribut fungsional yang diinginkan
(McClements & Rao, 2011; Silva, Cerqueira, & Vicente 2012). Ukuran
partikel kecil mungkin

Alamat email: H_Rafati@sbu.ac.ir (H. Rafati).

http://dx.doi.org/10.1016/j.foodchem.2015.07.139 0308-
8146 / 2015 Elsevier Ltd All rights reserved.
 R. Moghimi et al. / Food Chemistry 194 (2016) 410-415
meningkatkan interaksi antara senyawa aktif dengan membran biologi-kal,
serta transfer mereka melalui mereka. Selain itu, nanoemulsions dapat
dirancang untuk memiliki stabilitas kinetik yang baik dan kekeruhan rendah,
yang sesuai untuk berbagai aplikasi komersial (Rosario, Izquierdo, Nolla,
Azemar, & Garcia-Celma 2005), termasuk sebagai pengawet dalam makanan,
minuman (Rao & McClements 2012), Kosmetik, dan farmasi (Quintão,
Tavares, Vieira-Filho, Souza, & Santos, 2013). Beberapa teknik telah
diterapkan untuk memproduksi nanoemulsions, termasuk berbagai energi
rendah dan energi tinggi metode. Ultrasonic emulsifikasi adalah metode
energi tinggi yang cepat dan efisien mampu mempersiapkan nanoemulsions
dengan diameter droplet kecil dan distribusi ukuran yang sempit (Ghosh,
Mukherjee, & Chandrasekaran, 2013; Manchun, Dass, & Sriamornsak 2014).
nanoemulsions minyak esensial memiliki sebelumnya dilaporkan menjadi
perawatan antibakteri yang efektif (Chang, McLandsborough, & McClements
2012; Hamouda & Baker, 2000; Liang et al, 2012.; Zhang, Vriesekoop, Yuan,
& Liang, 2014; Ziani, Chang, McLandsborough, & McClements 2011);
Namun, pengetahuan tentang modus tindakan terhadap microorgan-isme saat
ini terbatas. Tujuan dari penelitian ini adalah karena itu untuk menghasilkan
nanoemulsions stabil dari T. daenensis menggunakan sonikator, dan
kemudian menyelidiki mekanisme aksi mereka terhadap E. coli. Tujuan ini
dicapai dengan mengukur kinetika penonaktifan bakteri, pelepasan konstituen
sel (protein, asam nukleat dan kalium), dan perubahan struktur mikro bakteri
(scanning mikroskop elektron). Studi ini memberikan informasi baru yang
penting tentang modus tindakan dari nanoemulsions antimikroba berdasarkan
minyak esensial pada spesies bakteri yang penting.
2. Bahan dan metode
2.1. bahan tanaman dan bahan kimia
Tween 80, Span 80 dan glutaraldehida dibeli dari Merck Millipore
(Darmstadt, Jerman). Bagian udara dari cul-tivated T. daenensis dikumpulkan
pada bulan April 2014 dari wilayah Dehloran dari Ilame di Iran.
2.2. isolasi minyak atsiri
Minyak esensial dari semua sampel udara kering dibuat dengan
menggunakan hidro-distilasi selama 3 jam dan Clevenger-jenis alat Lab
PANAS (SAF Warmetechnik, Mörlenbach, Jerman). minyak essen-esensial
yang diekstrak dikeringkan dengan natrium sulfat anhidrat dan disimpan
dalam botol dalam kondisi gelap di 4 LC sebelum digunakan.
2.3. persiapan nanoemulsion
nanoemulsions minyak esensial dibuat dari campuran T. daenensis
minyak (2% b / b), Tween 80 (2% b / b), air (96% b / b) dan lesitin (0,001% b
/ b) sebagai pematangan inhibitor. Formulasi ini dipilih untuk studi seperti itu
persiapan yang paling stabil dari ser-ies dari percobaan awal.
2.4. pengukuran ukuran tetesan
Pengukuran ukuran tetesan dan distribusi ukuran partikel dari
nanoemulsions dilakukan dengan menggunakan Dynamic Light Hamburan
(DLS) instrumen (Nanophox Sympatec GmbH, Claushtal, Jerman). Sampel
diencerkan dengan air deionisasi untuk memiliki kisaran jumlah partikel yang
ditentukan, antara 200 dan 2000 kCPS.
2.5. stabilitas nanoemulsion
analisis stabilitas dipercepat nanoemulsions dilakukan dengan
menggunakan sentrifugasi pada 3500 rpm selama 30 menit (Shafiq &
Shakeel, 2010) dan kemudian mengukur setiap pemisahan fase dan perubahan
ukuran partikel. Selain itu, ukuran partikel dan distribusi ukuran dipantau
selama enam bulan.
2.6. aktivitas antimikroba
2.6.1. Penentuan MIC dan MBC
Konsentrasi hambat minimum (MIC) dari minyak esensial murni dan
emul-sified diselidiki menggunakan metode pengenceran agar. Aliquots
sampel berurutan diencerkan dalam 96 piring dengan baik mengandung
Mueller Hinton Broth (MHB) media untuk menghasilkan berbagai
konsentrasi ,0078-32 mg / ml untuk minyak esensial murni dan ,00078-3,2
mg / ml minyak esensial emulsi. Final concen-trasi dari E. coli ATCC 25922
6 1
telah disesuaikan untuk 5 10 CFU ml . Untuk mengevaluasi MIC untuk
minyak esensial murni, solusi 0,5% v / v Tween 80 ditambahkan ke medium.
Pelat diinkubasi pada 37 LC selama 24 jam dan konsentrasi terendah aditif
yang tidak menunjukkan pertumbuhan mikroba terlihat ditentukan. Untuk
mencegah-tambang Minimum bakterisida Konsentrasi (MBC), 100ll kaldu
dari sumur yang tidak mengandung pertumbuhan yang berlapis ke Mueller
Hinton Agar (MHA) dan diinkubasi pada 37 LC selama 24 jam. MBC adalah
konsentrasi terendah yang bisa membunuh 99,9% dari sel trea-ted E. coli.
2.6.2. Membunuh kinetika assay
Kegiatan minyak esensial murni dan emulsi terhadap E. coli diselidiki
dengan mengukur penurunan num-bers dari CFU per mililiter lebih 1 jam.
Untuk tujuan ini, 5 ml budaya ditumbuhkan selama 24 jam dalam kaldu
nutrisi (NB) menengah dan kemudian dipindahkan ke 150 ml budaya dan
diinkubasi pada 37 LC bawah agita-tion sampai OD 600 suspensi bakteri
1
mencapai 0.5- 0,6 cm , Yang sesuai dengan fase eksponensial pertumbuhan
bakteri. Setelah itu, 4,5 ml media bakteri ditambahkan ke 0,5 ml larutan steril
yang normal saline (0,085%) yang mengandung nilai-nilai MIC dari
nanoemulsion minyak esensial dan jumlah setara minyak esensial murni. The
saline normal untuk minyak esensial murni yang terkandung 0,5% b / b
Tween 80. Semua sampel dipertahankan pada 37 LC bawah kondisi agitasi.
Setelah 0, 5, 10, 15, 30, 45, 60 menit dari waktu inkubasi, 100 ll bagian telah
dihapus dari masing-masing tabung untuk analisis dan diencerkan beberapa
kali untuk menghitung koloni.
2.6.3. Integritas membran sel
Integritas sel strain E. coli didirikan dengan mengukur pelepasan
konstituen sel ke dalam supernatan sesuai dengan metode yang dijelaskan
oleh Sugumar et al. (2013), Dengan beberapa modifi-kation. 5 ml kultur
ditumbuhkan selama 24 jam dalam media NB, dan kemudian media NB
tambahan ditambahkan untuk membuat 150 ml budaya. Sistem ini kemudian
diinkubasi pada 37 LC bawah agitasi sampai OD600 suspensi bakteri
1
mencapai 0,5-0,6 cm (Fase exponen-esensial bakteri). media itu kemudian
dikumpulkan dan cen-trifuged selama 10 menit pada 4000g, dicuci tiga kali
dengan normal saline steril (0,085% NaCl), dan akhirnya kembali
ditangguhkan dalam 50 ml steril normal saline. Dalam situasi ini, jumlah
12 13
bakteri adalah sekitar 10 -10 CFU / ml. 5 ml dari suspensi sel mikroba (0,5
ml suspensi bakteri + 4,5 ml saline normal) mengandung minyak esensial
murni atau emulsi kemudian diinkubasi pada 37 LC bawah agitasi selama 1
jam. Untuk minyak esensial murni, 0,5% Tween ditambahkan ke saline
normal untuk memiliki komposisi yang mirip dengan nanoemulsion tersebut.
Pemeriksaan dilakukan pada konsentrasi MIC untuk mengetahui konsentrasi
konstituen dirilis. Untuk membandingkan minyak esensial murni dan emulsi,
konsentrasi setara minyak esensial yang hadir di MIC
412 R. Moghimi et al. / Food Chemistry 194 (2016) 410-415
konsentrasi nanoemulsion itu digunakan. Ini sesuai dengan menggunakan 1 /
10th jumlah minyak esensial sebagai nanoemulsion tersebut. Oleh karena itu,
untuk penentuan sel rilis konstituen di hadapan minyak esensial diperiksa
pada 1 / 10th MIC con-centrations. Campuran disentrifugasi selama 10 menit
pada 4000g dan
10 ll supernatan digunakan untuk mengukur serapan UV di
260 nm menggunakan spektrofotometer UV-tampak (Bio-fotometer,
Eppendorf AG, Hamburg, Jerman).
2.6.4. Penentuan rilis protein
Untuk percobaan ini, semua langkah untuk menentukan sel rilis con-
stituent diulang dan absorbansi UV pada 280 nm diukur menggunakan
spektrofotometer UV-tampak (Bio-fotometer, Eppendorf AG, Hamburg,
Jerman). Jumlah protein dirilis dihitung dari kurva standar menggunakan
BSA sebagai standar.
2.6.5. Kalium rilis assay
Konsentrasi ion kalium gratis di bakteri sus-pensiun ditentukan seperti
yang dijelaskan sebelumnya (Bouhdid et al., 2010) dengan beberapa
modifikasi. 60 ml kultur ditumbuhkan di media NB dan diinkubasi pada 37
1
LC bawah agitasi sampai OD 600 bakteri mencapai sekitar 0,5 cm . media itu
kemudian dikumpulkan dan disentrifugasi selama 10 menit pada 4000g,
dicuci tiga kali dengan larutan salin normal steril (0,085% NaCl), dan
diresuspensi dalam 6 ml budaya NB. Suspensi sel disiapkan dengan
mencampurkan 1 ml suspensi bakteri dengan 9 ml larutan garam normal
mengandung baik murni atau minyak esensial emulsi. Dalam kasus minyak
essen-esensial murni, 0,5% Tween ditambahkan ke saline normal. 10 ml
suspensi sel kemudian diinkubasi pada 37 LC bawah agitasi selama 1 jam,
dengan konsentrasi minyak esensial sama dengan kontrol dan MIC.
Konsentrasi kalium dalam supernatan adalah mea-sured menggunakan
spektrofotometer serapan atom (Analytik Jena, ContrAA700, Jena, Jerman).
Parameter berperan adalah sebagai berikut: kalium lampu berongga katoda,
panjang gelombang 766,5 nm, band pass dari 0,5 nm, api udara-asetilen.
2.6.6. Pemindaian mikroskop elektron (SEM)
Untuk mengevaluasi efek dari minyak esensial murni atau emulsi pada
morfologi E. coli, SEM dilakukan. minyak esensial murni atau emulsi
ditambahkan ke budaya bekerja pada konsentrasi MIC dari E. coli. Setelah
inkubasi selama 5 menit dan 1 jam pada 37 LC, 1 ml bagian telah dihapus
dari masing-masing tabung dan disentrifugasi selama 10 menit pada 4000g di
4 LC. Sampel kemudian dicuci dua kali dengan PBS (pH = 7,4), dan
diresuspensi dalam 1 ml PBS. Pada langkah berikutnya, 10 ll suspensi dilapisi
ke slide kaca (1 cm 1 cm). Sampel kemudian ditempatkan dalam fiksatif
(2,5% glutaraldehid [v / v] di PBS) semalam dan dehidrasi dalam solusi air-
alkohol di berbagai alkohol con-centrations (70%, 80%, 90% dan 100%).
Sampel kemudian tetap pada dukungan SEM dan disemprot dengan Au-Pd
sebelum pengamatan menggunakan mikroskop lapangan emisi scanning
electron gun (SEM, Hitachi, Tokyo, Jepang).
2.7. analisis statis
Setiap percobaan dilakukan dalam rangkap tiga dan semua nilai-nilai
dilaporkan sebagai mean ± standar deviasi (SD) oleh Microsoft Excel. Data
dianalisis secara statistik dengan analisis satu arah varians (ANOVA). Nilai p
kurang dari 0,05 dianggap signifikan secara statistik.
sampel MIC (mg / ml)
nanoemulsion 0,4
3. Hasil dan diskusi
3.1. Fabrikasi dan karakterisasi nanoemulsions
The nanoemulsion minyak esensial diproduksi menggunakan 15 menit
dari intensitas tinggi sonikasi. Tween 80 dimanfaatkan sebagai surfaktan
untuk memfasilitasi pembentukan nanoemulsion dan stabilitas, dan lesitin
digunakan sebagai inhibitor pematangan untuk mencegah pertumbuhan
tetesan. Ostwald pematangan adalah fenomena yang terjadi pada emulsi dan
nanoemulsions di mana fase minyak memiliki beberapa kelarutan dalam fase
air sekitarnya. Minyak diangkut dari kecil ke tetesan besar melalui fase cair
sekitarnya karena air-kelarutan minyak mengelilingi tetesan kecil lebih tinggi
dari sekitarnya tetesan yang lebih besar (Tadros, Izquierdo, Esquena, &
Solans 2004). pematangan Ostwald adalah masalah utama di nanoemulsions
minyak dalam air yang mengandung minyak esensial karena mereka memiliki
kelarutan air yang relatif tinggi (McClements 2004). Pertumbuhan tetesan
dapat terbelakang dengan menambahkan inhibitor pematangan ke fase minyak
(McClements & Rao, 2011). Sebuah inhibitor pematangan bekerja melalui
entropi pencampuran efek, dan mungkin lipid tidak larut air (seperti kedelai,
jagung, atau minyak bunga matahari) atau surfaktan tidak larut air (seperti
lesitin). Penggunaan lipid tidak larut dalam air seperti pematangan inhibitor
telah terbukti berlaku pada perlambatan Ostwald pematangan, tetapi juga
dapat mengurangi aktivitas antimikroba dari minyak atsiri (Chang et al.,
2012). Oleh karena itu, lesitin diselidiki sebagai surfaktan tidak larut air alami
untuk menghambat pematangan Ostwald dalam penelitian ini. Pengukuran
diameter partikel rata-rata untuk nanoemul-keputusan selama enam bulan
menunjukkan peningkatan diabaikan dari 143,2 ± 2,6 nm ke 149,6 ± 1,0 nm
yang tidak signifikan (p <0,001). Hal ini menunjukkan bahwa nanoemulsion
itu stabil untuk coa-lescence dan Ostwald pematangan. Selain itu, tidak ada
pemisahan fase diamati setelah nanoemulsions disentrifugasi (35.000 rpm),
menunjukkan bahwa mereka mengandung partikel-partikel kecil yang stabil
untuk creaming.
3.2. aktivitas antimikroba nanoemulsion
MIC diukur dari minyak esensial murni dan emulsi menunjukkan efek
penghambatan yang berbeda terhadap E. coli (Tabel 1). nanoemulsion
dipamerkan efek penghambatan tinggi dengan MIC 0,4 mg / ml. The
nanoemulsion minyak esensial memiliki aktivitas 10 kali lebih antibakteri dari
minyak esensial murni, yang menunjukkan bahwa konversi minyak esensial
untuk partikel nano-skala sangat meningkat aktivitas bakterisida nya. Hasil ini
sesuai dengan studi terbaru lain yang menunjukkan bahwa konversi rasa atau
minyak esensial ke dalam nanoemulsions sangat meningkat aktivitas
antibacte-rial mereka, misalnyaD-limonene (Zhang et al., 2014) Dan minyak
oregano (Bhargava, Conti, da Rocha, & Zhang, 2015). Percobaan yang per-
dibentuk dengan menggunakan (E. coli) model bakteri gram negatif untuk
mendapatkan pemahaman taruhan-ter dari mekanisme aktivitas antibakteri
dari minyak esensial.
3.2.1. Membunuh kinetika assay
Sebuah uji kinetika pembunuhan digunakan untuk membangun perubahan
melalui-bility dari E. coli pada interaksi dengan minyak esensial murni atau
emulsi selama periode waktu yang singkat (Gambar. 1). Tidak ada sel yang
layak diamati
Tabel 1
aktivitas antibakteri murni dan minyak esensial emulsi (Thymus daenensis) terhadap E. coli.
Aktivitas antibakteri dinyatakan sebagai konsentrasi minimum penghambatan (MIC) atau
konsentrasi bakterisida minimum (MBC).
MBC (mg / ml)
0,4
minyak murni 4.0 4.0
 R. Moghimi et al. / Food Chemistry 194 (2016) 410-415
Gambar. 1. Kinetika pembunuhan bakteri setelah pengobatan dengan kontrol sampel, minyak
esensial murni, dan nanoemulsion minyak esensial selama periode 60 menit. The nanoemul-sion
sangat efektif membunuh bakteri dalam jangka waktu yang singkat, sedangkan jumlah yang
sama minyak esensial murni jauh kurang efektif.
setelah 5 menit interaksi nanoemulsion dengan E. coli. Hasil ini sesuai dengan
laporan sebelumnya yang menunjukkan nanoemul-keputusan dapat
menyebabkan pengurangan cepat dalam sel bakteri hidup (Ghosh et al, 2013.;
Sugumar et al., 2013). Hasil aktivitas antibakteri jelas menunjukkan bahwa
nanoemulsion minyak esensial lebih efektif di menonaktifkan bakteri dari
minyak esensial murni. Hal ini menunjukkan bahwa nanoemulsion
mengandung minyak esensial T. daenensis mungkin memiliki potensi besar
sebagai pengawet alami dalam aplikasi makanan.
3.2.2. Pelepasan 260 bahan nm menyerap
Salah satu strategi untuk menentukan modus dari aksi antimicro-bials
terhadap bakteri makanan-ditanggung adalah untuk mengukur pelepasan 260
bahan nm menyerap dari filtrat E. coli (Meja 2). Zat yang menyerap pada
panjang gelombang ini termasuk protein dan asam nukleat, dan merupakan
indikasi dari gangguan membran sel dan pelepasan konstituen sel internal.
Sebuah peningkatan yang signifikan dalam konstituen sel melepaskan
dibandingkan dengan kontrol diamati ketika sel-sel E. coli diperlakukan
dengan nanoemulsion minyak esensial pada konsentrasi MIC. Berikut 60
menit pengobatan dengan baik minyak esensial murni atau emulsi ada sekitar
2,8 dan 10 kali lipat peningkatan kepadatan optik dari bakteri sel cul-ture
filtrat dibandingkan dengan sampel kontrol, masing-masing.
3.2.3. Pelepasan protein
Informasi tambahan tentang potensi gangguan membran sel dan pelepasan
isi sel internal yang diperoleh dengan mengukur pelepasan protein (tabel 3).
Konsentrasi protein dirilis untuk nanoemulsion minyak esensial adalah jauh
lebih tinggi daripada untuk kontrol dan minyak esensial murni. Sebagai
contoh, rilis protein dari kelompok kontrol hanya 0,2 ppm, sementara itu
meningkat menjadi 5.20 ± 0.09 ppm untuk nanoemulsion tersebut. Ada
peningkatan
Meja 2
Penentuan nukleat rilis asam sebagaimana ditentukan dengan mengukur absorbansi dari larutan
air yang mengelilingi bakteri pada 260 nm (OD260 nm).
OD
sampel 260 nm
Kontrol 0,37 ± 0,062
nanoemulsion 3,75 ± 0,372
minyak murni 1,05 ± 0,113
Catatan: Perbedaan antara kontrol dan kelompok perlakuan yang signifikan (p <0,005).
tabel 3
Pengukuran pelepasan protein dari bakteri setelah dirawat selama 60 menit dengan kontrol,
nanoemulsion minyak esensial, atau minyak esensial murni (digunakan pada MICs mereka).
OD
sampel 280 nm konsentrasi protein (ppm)
Kontrol 0,12 ± 0.002 0,2 ± 0.008
nanoemulsion 1,24 ± 0,123 2.0 ± 0,131
minyak murni 0. 65 ± 0.064 1.2 ± 0,08
Catatan: Perbedaan antara kontrol dan kelompok perlakuan yang signifikan (p <0,005).
densitas optik untuk sampel pada kelompok kontrol, yang dapat dikaitkan
dengan kematian dari beberapa bakteri dalam siklus kehidupan normal
1
mereka, karena ini menyebabkan pelepasan protein (OD 280 = 0,12 cm ) Dan
1
pelepasan asam nukleat (OD260 = 0,37 cm ). Hasil ini menunjukkan bahwa
membran sel E. coli rusak, yang menyebabkan kerugian konstituen internal
yang sel sehingga meningkatkan kematian sel.
3.2.4. Penentuan kebocoran kalium
Perubahan permeabilitas membran sel dapat menyebabkan kebocoran-usia
ion kalium dari interior sel. Akibatnya, konsentrasi ekstraseluler kalium
diukur dengan menggunakan spektrofotometri serapan atom (Gambar. 2).
Kalium con-centration akibat kebocoran dari kelompok kontrol adalah
1,87 ± 0,03 ppm, butthisvalueincreasedsignificantlyto
3,64 ± 0,05 ppm untuk nanoemulsion minyak esensial. Beberapa kebocoran
potas-sium diamati pada kelompok kontrol, yang presum-cakap terkait
dengan kematian beberapa bakteri selama siklus kehidupan normal mereka
mengarah ke lisis sel. Ekstraseluler Concentra-tion kalium dalam suspensi
bakteri diobati dengan nanoemulsion minyak esensial secara signifikan lebih
tinggi daripada minyak esensial murni (p <0,001) dan untuk kelompok
kontrol (p <0,001). Hasil ini menunjukkan bahwa peningkatan permeabilitas
membran merupakan faktor penentu dalam mekanisme aktivitas antibakteri.
Evaluasi kebocoran kalium dari bakteri diobati dengan nanoemulsions belum
dilaporkan dalam studi sebelumnya, dan hasil dari penelitian ini menyoroti
potensi pentingnya rilis kalium pada aktivitas antibakteri dari minyak
esensial.
3.2.5. pengamatan SEM
Pemindaian mikroskop elektron (SEM) digunakan untuk memberikan
infor-masi tentang perubahan morfologi bakteri setelah
Gambar. 2. Kalium kebocoran dari suspensi sel E. coli setelah dirawat selama 60 menit dengan
kontrol, nanoemulsion minyak esensial, atau minyak esensial murni (digunakan pada MICs
mereka). Catatan: Perbedaan antara kontrol dan nanoemulsion yang signifikan (p <0,001), dan
perbedaan antara kelompok minyak esensial murni dan emulsi (p <0,001) secara statistik
signifikan.
414 R. Moghimi et al. / Food Chemistry 194 (2016) 410-415
. Gambar 3. Scanning mikrograf elektron dari E. coli sel: Control (A), diobati dengan minyak murni esensial (B), diperlakukan dengan nanoemulsion minyak esensial (C) yang digunakan pada tingkat
yang sama dengan MIC dari nanoemulsion yang (jumlah yang setara minyak esensial murni digunakan). Perawatan dilakukan untuk baik 5 menit (B1, C1) atau 60 menit (B2, C2). Pembesaran sampel
adalah baik 30.000 atau 50.000 kali.
pengobatan dengan minyak esensial murni atau emulsi. Suspensi bakteri E.
coli diperlakukan dengan murni atau emulsi minyak esensial pada konsentrasi
MIC, dan kemudian mikro itu evalu-diciptakan setelah pengobatan 5 dan 60
menit, masing-masing (Gambar. 3). Perubahan morfologi yang signifikan
diamati dalam sel mikroba trea-ted dengan nanoemulsion yang (Gambar 3C)
dibandingkan dengan sel utuh (Gambar 3A) dan sel diperlakukan dengan
minyak esensial murni (Gambar 3B). sel-sel bakteri yang tidak diobati
memiliki bentuk batang-seperti dengan permukaan utuh halus (Gambar 3A),
sedangkan sel-sel bakteri diobati dengan nanoemulsion minyak esensial
selama 5 menit (Gambar 3C1) menunjukkan derajat yang berbeda deformasi
dan gangguan. Tidak ada morfologi alter-negosiasi yang signifikan yang
diamati pada permukaan strain dirawat setelah 5 menit pengobatan dengan
minyak esensial murni (Gambar 3B1). Bahkan setelah 60 pengobatan menit
(Gambar 3B2) perubahan morfologi adalah negligi-ble, meskipun beberapa
sel melakukan pameran penyusutan. Pengamatan ini adalah dalam perjanjian
dengan uji kinetika pembunuhan dan menunjukkan bahwa nanoemulsions
bisa membunuh semua bakteri dalam 5 menit, dan jauh lebih efektif daripada
minyak esensial murni.
4. Kesimpulan
Berdasarkan penelitian ini, konversi minyak esensial (T. daenensis) ke
nanoemulsion sebuah sangat ditingkatkan aktivitas antibakteri terhadap
makanan-ditanggung bakteri patogen penting (E. coli). nanoemulsion yang
dihasilkan dipamerkan baik fisik sta-bility, dengan sedikit bukti dari
pemisahan fasa atau pertumbuhan partikel selama periode 6 bulan.
Berdasarkan hasil penelitian kami, dapat diusulkan bahwa mekanisme kerja
untuk nanoemulsion antimikroba terhadap E. coli yang terlibat membawa
minyak esensial ke dalam dekat PROXIM-ity dengan membran sel. Hal ini
memungkinkan hidrofobik mol-Cules dalam minyak esensial untuk
mengganggu membran sel, mungkin dengan mengubah integritas bilayer
fosfolipid atau dengan antar-fering dengan protein transpor aktif tertanam
dalam lapisan ganda fosfolipid. Perubahan permeabilitas membran sel
terganggu menyebabkan kebocoran asam nukleat, protein, dan kalium dari
interior sel, yang menyebabkan kematian sel dalam waktu 5 menit. Sebuah
com-parison dari aktivitas antibakteri minyak essen-esensial murni dan
emulsi menunjukkan bahwa nanoemulsion itu jauh lebih efektif. Agaknya, hal
ini karena partikel lipid kecil dalam
nanoemulsion mampu membawa minyak esensial ke permukaan sel mem-
brane, sedangkan minyak murni (yang memiliki air solubil-ity rendah) tidak
bisa dengan mudah berinteraksi dengan membran sel. Kemampuan
nanoemulsion antimikroba untuk mengganggu morfologi E. coli jelas
ditunjukkan oleh mikroskop elektron. Kesimpulannya, nanoemulsions
mungkin sistem pengiriman sangat efektif untuk minyak esensial karena
kemampuan mereka untuk memfasilitasi antimikroba applica-tion dan
meningkatkan efikasi antimikroba.
Ucapan Terima Kasih
Karya ini telah didukung oleh Shahid Beheshti University Research
Council dan penulis syukur acknowl-edge dukungan yang diberikan oleh
MPDRI. Para penulis ingin mengucapkan terima kasih Dr J. Hadian untuk
menyediakan bahan tanaman.
Referensi
Alizadeh, A., Alizadeh, O., Amari, G., & Zare, M. (2013). Komposisi minyak esensial, Total
konten fenolik, aktivitas antioksidan dan sifat antijamur Iran Timus daenensis subsp.
daenensis Celak. seperti dalam dipengaruhi oleh ontogenetical variasi. Journal of Oil
Bantalan Tanaman Atsiri, 16 (1), 59-70.
Bhargava, K., Conti, DS, da Rocha, SR, & Zhang, Y. (2015). Penerapan suatu oregano
nanoemulsion minyak untuk kontrol bakteri bawaan makanan pada selada segar.
Mikrobiologi Makanan, 47, 69-73.
Bouhdid, S., Abrini, J., Amensour, M., Zhiri, A., Espuny, M., & Manresa, A. (2010). perubahan
fungsional dan ultra di Pseudomonas aeruginosa dan sel Staphylococcus aureus yang
disebabkan oleh Cinnamomum verum minyak esensial. Journal of Applied Microbiology,
109 (4), 1139-1149.
Burt, S. (2004). minyak esensial: sifat antibakteri mereka dan potensi aplikasi dalam makanan-
review. International Journal of Food Microbiology, 94 (3), 223-253.
Cakir, A., Kordali, S., Kilic, H., & Kaya, E. (2005). sifat antijamur minyak esensial dan ekstrak
kasar Hypericum linarioides Bosse. Biokimia Sistematika dan Ekologi, 33 (3), 245-256.
Chang, Y., McLandsborough, L., & McClements, DJ (2012). sifat fisik dan khasiat antimikroba
dari nanoemulsions minyak thyme: Pengaruh pematangan inhibitor. Jurnal Pertanian dan
Pangan Kimia, 60 (48), 12.056-12.063.
Diao, W.-R., Hu, Q.-P., Feng, S.-S., Li, W.-Q., & Xu, J.-G. (2013). Komposisi kimia dan
aktivitas antibakteri minyak atsiri dari Huajiao hijau (Zanthoxylum schinifolium) terhadap
patogen bawaan makanan yang dipilih. Jurnal Pertanian dan Food Chemistry, 61 (25),
6044-6049.
Donsì, F., Annunziata, M., Sessa, M., & Ferrari, G. (2011). Nanoencapsulation dari minyak
esensial untuk meningkatkan aktivitas antimikroba mereka dalam makanan. Ilmu LWT-
Food dan Teknologi, 44 (9), 1908-1914.
 R. Moghimi et al. / Food Chemistry 194 (2016) 410-415
Ghasemi Pirbalouti, A., Hashemi, M., & Ghahfarokhi, FT (2013). minyak esensial dan
komposisi kimia liar dan dibudidayakan Thymus daenensis Celak dan Timus vulgaris L ..
Tanaman Industri dan Produk, 48, 43-48.
Ghosh, V., Mukherjee, A., & Chandrasekaran, N. (2013). Ultrasonic emulsifikasi formulasi
nanoemulsion food grade dan evaluasi bakterisida nya aktivitas. Ultrasonics
Sonochemistry, 20 (1), 338-344.
Goni, P., López, P., Sánchez, C., Gómez-Lus, R., Becerril, R., & Nerin, C. (2009). aktivitas
antimikroba dalam fase uap dari kombinasi kayu manis dan cengkeh minyak esensial. Food
Chemistry, 116 (4), 982-989.
Gourama, H., & Bullerman, LB (1995). Aspergillus flavus dan Aspergillus parasiticus: jamur
Aflatoxigenic perhatian dalam makanan dan feed: review A. Journal of Food Perlindungan,
58 (12), 1395-1404.
Hamouda, T., & Baker, J. (2000). Mekanisme antimikroba tindakan surfaktan persiapan lipid di
enterik basil Gram-negatif. Journal of Applied Mikrobiologi, 89 (3), 397-403.
Liang, R., Xu, S., Shoemaker, CF, Li, Y., Zhong, F., & Huang, T. (2012). fisik dan sifat
antimikroba dari nanoemulsions minyak peppermint. Jurnal dari Pertanian dan Food
Chemistry, 60 (30), 7548-7555.
Manchun, S., Dass, CR, & Sriamornsak, P. (2014). merancang nanoemulsion template untuk
pembuatan nanopartikel dekstrin melalui emulsi cross-linking teknik. Polimer karbohidrat,
101, 650-655.
McClements, DJ (2004). emulsi makanan: Prinsip, praktik, dan teknik (kedua ed.). Taylor &
Francis.
McClements, DJ, & Rao, J. (2011). nanoemulsions food grade: Formulasi, fabrikasi, sifat,
kinerja, nasib biologi, dan potensi toksisitas. Kritis Ulasan di Ilmu Pangan dan Gizi, 51 (4),
285-330.
Moazeni, N., Khajeali, J., Izadi, H., & Mahdian, K. (2014). komposisi kimia dan bioaktivitas
Timus daenensis Celak (Lamiaceae) minyak esensial terhadap dua lepidopteran serangga
disimpan-produk. Journal of Esensial Penelitian Minyak, 26 (2), 118-124.
Nickavar, B., Mojab, F., & Dolat-Abadi, R. (2005). Analisis minyak esensial dari dua spesies
timus dari Iran. Food Chemistry, 90 (4), 609-611.
Qian, C., & McClements, DJ (2011). Pembentukan nanoemulsions distabilkan oleh Model
emulsifier food grade dengan menggunakan tekanan tinggi homogenisasi: Faktor
mempengaruhi ukuran partikel. Makanan Hydrocolloids, 25 (5), 1000-1008.
Quintão, FJO, Tavares, RSN, Vieira-Filho, SA, Souza, GHB, & Santos, Odh (2013). ekstrak
hydroalcoholic dari Vellozia squamata: Studi yang nanoemulsions untuk farmasi atau
aplikasi kosmetik. Revista Brasileira de Farmacognosia, 23 (1), 101-107.
Rao, J., & McClements, DJ (2011). Food grade mikroemulsi, nanoemulsions dan emulsi:
Fabrikasi dari monopalmitate sukrosa & minyak lemon. Makanan Hydrocolloids, 25 (6),
1413-1423.
Rao, J., & McClements, DJ (2012). pelarutan minyak lemon di campuran surfaktan solusi:
Rasionalisasi mikroemulsi & pembentukan nanoemulsion. Makanan Hydrocolloids, 26 (1),
268-276.
Sagdic, O., Karahan, A., Ozcan, M., & Ozkan, G. (2003). Catatan: Pengaruh beberapa rempah-
rempah ekstrak pada penghambatan bakteri. Ilmu dan Teknologi Pangan Internasional, 9
(5), 353-358.
Salgueiro, L., Martins, A., & Correia, H. (2010). Bahan baku: Pentingnya kualitas dan
keamanan. Sebuah ulasan. Peralatan Medis Journal, 25 (5), 253-271.
Shafiq, S., & Shakeel, F. (2010). Stabilitas dan self-nanoemulsification efisiensi ramipril
nanoemulsion mengandung labrasol dan plurol oleique. Riset klinikal dan Regulatory
Affairs, 27 (1), 7-12.
Silva, HD, Cerqueira, M. Â., & Vicente, AA (2012). Nanoemulsions untuk makanan aplikasi:
Pengembangan dan karakterisasi. Makanan dan Bioproses Teknologi, 5 (3), 854-867.
Rosario, C., Izquierdo, P., Nolla, J., Azemar, N., & Garcia-Celma, M. (2005). nanoemulsi. Opini
saat ini di koloid & Antarmuka Sains, 10 (3), 102-110.
Sugumar, S., Nirmala, J., Ghosh, V., Anjali, H., Mukherjee, A., & Chandrasekaran, N. (2013).
formulasi nanoemulsion berbasis bio, karakterisasi dan antibakteri aktivitas terhadap
patogen makanan-ditanggung. Jurnal Dasar Mikrobiologi, 53 (8), 677-685.
Tadros, T., Izquierdo, P., Esquena, J., & Solans, C. (2004). Pembentukan dan stabilitas nano-
emulsi. Kemajuan dalam koloid dan Ilmu Interface, 108, 303-318.
Zhang, Z., Vriesekoop, F., Yuan, T., & Liang, H. (2014). Efek dari nisin pada aktivitas
antimikroba D-limonene dan nanoemulsion nya. Food Chemistry, 150, 307-312.
Ziani, K., Chang, Y., McLandsborough, L., & McClements, DJ (2011). Pengaruh dari biaya
surfaktan pada khasiat antimikroba minyak thyme surfaktan-stabil nanoemulsions. Jurnal
Pertanian dan Pangan Kimia, 59 (11), 6247-6255.