i

TUGAS AKHIR

IDENTIFIKASI SIDIK JARI FITOKIMIA EKSTRAK ETANOL

DAUN UBI JALAR (Ipomoea batatas L.) VARIETAS
SAWENTAR DENGAN METODE KLT-
SPEKTROFOTODENSITOMETRI

PUTU NANDYA NANDITA

1508505010

PROGRAM STUDI FARMASI

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

UNIVERSITAS UDAYANA

2019

i
 ii

Lembar Pengesahan

IDENTIFIKASI SIDIK JARI FITOKIMIA EKSTRAK ETANOL

DAUN UBI JALAR (Ipomoea batatas L.) VARIETAS
SAWENTAR DENGAN METODE KLT-
SPEKTROFOTODENSITOMETRI

TUGAS AKHIR

Tugas Akhir ini diajukan sebagai syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Farmasi
(S.Farm.) di Program Studi Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam
Universitas Udayana

Oleh

PUTU NANDYA NANDITA

Menyetujui:

Pembimbing I Pembimbing II

Dr. rer. nat. I Made Agus Gelgel Wirasuta, M.Si., Apt. Ni Made Widi Astuti, S.Farm., M.Si., Apt.
NIP.196804201994021001 NIP.1987091620110222001

Mengesahkan,
Koordinator Program Studi Farmasi
Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam

Dewa Ayu Swastini, S.F., M.Farm., Apt.

NIP.197905162006042002

ii
 iii

LEMBAR PERNYATAAN ORISINALITAS

Tugas Akhir ini adalah hasil karya saya sendiri,

dan semua sumber baik yang dikutip maupun dirujuk
telah saya nyatakan dengan benar.

Nama : Putu Nandya Nandita

NIM : 1508505010
Tanggal :
Tanda Tangan :

iii
 iv

KATA PENGANTAR

Puji syukur penulis panjatkan kehadapan Tuhan Yang Maha Esa, karena

atas berkat dan rahmat-Nya penulis dapat menyelesaikan tugas akhir yang

berjudul “Identifikasi Sidik Jari Fitokimia Ekstrak Etanol Daun Ubi Jalar

(Ipomoea batatas L.) Varietas Sawentar dengan Metode KLT-

Spektrofotodensitometri” tepat pada waktunya. Penyusunan tugas akhir ini

tidak terlepas dari dukungan, saran, dan bimbingan berbagai pihak. Maka dari itu,

pada kesempatan ini penulis ingin pengucapkan terima kasih kepada:

1. Ida Sang Hyang Widhi Wasa, Tuhan Yang Maha Esa yang selalu memberikan

kesehatan, petunjuk, semangat, kemudahan, dan keberuntungan kepada

penulis mulai dari awal hingga akhir sehingga tugas akhir ini selesai dengan

baik dan tepat waktu.

2. Drs. Ida Bagus Made Suaskara, M.Si., selaku Dekan Fakultas Matematika dan

Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Udayana yang selalu memfasilitasi

penulis dengan pengetahuan dalam penyusunan tugas akhir ini.

3. Dewa Ayu Swastini, S.F., M.Farm., Apt. selaku ketua Program Studi Farmasi

Udayana yang dengan penuh perhatian telah memberikan motivasi, semangat,

bimbingan, dan saran dengan sabar selama penulis mengikuti pendidikan di

Program Studi Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam

Universitas Udayana, khususnya dalam penyusunan tugas akhir ini.

4. Dr. rer. nat. I Made Agus Gelgel Wirasuta, M.Si., Apt. selaku dosen

pembimbing I yang dengan penuh perhatian telah memberikan motivasi,

semangat, bimbingan, dan saran dengan sabar selama penulis mengikuti

pendidikan di Program Studi Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu

iv
 v

Pengetahuan Alam Universitas Udayana, khususnya dalam penyusunan tugas

akhir ini.

5. Ni Made Widi Astuti, S.Farm., M.Si., Apt. selaku dosen pembimbing II yang

dengan penuh perhatian telah memberikan motivasi, semangat, bimbingan,

dan saran dengan sabar selama penulis mengikuti pendidikan di Program

Studi Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas

Udayana, khususnya dalam penyusunan tugas akhir ini.

6. Seluruh dosen dan staf pegawai di Program Studi Farmasi Fakultas

Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Udayana yang telah

memberikan bantuan kepada penulis selama penyusunan tugas akhir ini.

7. Keluarga, yaitu orang tua yang sangat penulis sayangi dan cintai, Ibu, Bapak,

dan Adik yang penulis kasihi. Terima kasih atas dukungan doa dan semangat

yang telah diberikan baik moral maupun material dalam penyusunan tugas

akhir ini.

8. Teman-teman tersayang “Quinze Galen” yang selalu memberikan semangat

dan membantu saat dalam kesulitan serta yang selalu menemani dari awal

kuliah hingga saat ini.

9. Keluarga besar Analisis Farmasi Udayana yang selalu memberikan motivasi

dan semangat saat penulis menghadapi kesulitan.

10. Semua pihak yang terlibat dan telah membantu penulis dalam penyusunan

tugas akhir ini yang tidak dapat penulis sebutkan satu per satu, tidak ada

ucapan terspesial karena setiap dukungan adalah spesial bagi penulis.

Penulis menyadari bahwa penyusunan tugas akhir ini masih jauh dari

sempurna. Untuk itu penulis mengharapkan kritik dan saran dari semua pihak

v
 vi

yang bersifat membangun, sehingga di masa yang akan datang dapat menjadi

lebih baik. Penulis berharap semoga tugas akhir ini dapat bermanfaat bagi semua

pihak yang membacanya.

Bukit Jimbaran, 10 Januari 2019

Penulis

vi
 vii

DAFTAR ISI

Halaman
HALAMAN JUDUL ........................................................................... . i

LEMBAR PENGESAHAN .................................................................. . ii

LEMBAR PERNYATAAN ORISINALITAS ...................................... iii

KATA PENGANTAR ......................................................................... iv

DAFTAR ISI ....................................................................................... vii

DAFTAR GAMBAR ........................................................................... x

DAFTAR TABEL ............................................................................... xi

DAFTAR ISTILAH ............................................................................. xii

DAFTAR SINGKATAN ..................................................................... xiii

DAFTAR LAMPIRAN ........................................................................ xiv

ABSTRAK .......................................................................................... xv

ABTRACT .......................................................................................... xvi

BAB I. PENDAHULUAN ................................................................ 1

1.1 Latar Belakang ............................................................... 1

1.2 Rumusan Masalah........................................................... 3

1.3 Tujuan ............................................................................ 3

1.4 Manfaat .......................................................................... 3

BAB II. TINJAUAN PUSTAKA ....................................................... 4

2.1 Deskripsi Tanaman Ubi Jalar Varietas Sawentar ............. 4

2.2 Identifikasi Sidik Jari Fitokimia ..................................... 5

2.3 Senyawa Fitokimia ......................................................... 6

2.3.1 Alkaloid................................................................ 6

vii
 viii

2.3.2 Flavonoid ............................................................. 7

2.3.3 Triterpenoid .......................................................... 7

2.3.4 Tanin .................................................................... 7

2.3.5 Saponin ................................................................ 8

2.3.6 Polifenol ............................................................... 8

2.3.7 Steroid .................................................................. 8

2.3.8 Minyak Atsiri ....................................................... 9

2.4 Ekstraksi dengan Sonikasi .............................................. 9

2.5 Identifikasi Sidik Jari Fitokimia dengan Metode KLT-

Spektrofotodensitometri ................................................. 10

BAB III. METODE PENELTIAN ........................................................ 12

3.1 Rancangan Penelitian...................................................... 12

3.2 Lokasi dan Waktu Penelitian........................................... 12

3.3 Alat dan Bahan Penelitian ............................................... 13

3.3.1 Alat Penelitian ....................................................... 13

3.3.2 Bahan Penelitian .................................................... 13

3.4 Prosedur Penelitian ......................................................... 14

3.4.1 Determinasi Daun Ubi Jalar Varietas Sawentar ...... 14

3.4.2 Pengumpulan dan Preparasi Sampel ....................... 14

3.4.3 Ekstraksi Sampel Daun Ubi Jalar Varietas Sawentar 14

3.4.4 Penguapan Ekstrak untuk Uji Skrining Fitokimia ... 15

3.4.5 Uji Skrining Fitokomia Ekstrak Etanol Daun Ubi

Jalar Varietas Sawentar .......................................... 15

viii
 ix

3.4.6 Identifikasi Sidik Jari Fitokimia Ekstrak Etanol

Daun Ubi Jalar Varietas Sawentar.......................... 17

3.5 Analis Data ..................................................................... 18

3.6 Skema Penelitian ............................................................ 19

BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN ............................................. 20

4.1 Determinasi Sampel Tanaman Ubi Jalar Varietas

Sawentar ........................................................................ 20

4.2 Pengumpulan dan Preparasi Sampel ................................ 20

4.3 Ekstraksi Daun Ubi Jalar Varietas Sawentar ................... 21

4.4 Skrining Fitokimia Ekstral .............................................. 21

4.5 Identifikasi Sidik Jari Fitokimia Ekstrak Etanol Daun Ubi

Jalar Varietas Sawentar .................................................. 23

4.5.1 Sidik Jari Fitokimia Golongan Flavonoid .............. 23

4.5.2 Sidik Jari Fitokimia Golongan Polifenol ............... 28

4.5.3 Sidik Jari Fitokimia Golongan Tanin .................... 32

4.5.4 Sidik Jari Fitokimia Golongan Saponin ................. 36

4.5.5 Sidik Jari Fitokimia Golongan Triterpenoid .......... 41

BAB V. PENUTUP ............................................................................ 46

5.1 Kesimpulan .................................................................... 46

5.2 Saran .............................................................................. 46

DAFTAR PUSTAKA .......................................................................... 47

LAMPIRAN ........................................................................................ 49

ix
 x

DAFTAR GAMBAR

Halaman
Gambar 1 Tanaman Ubi Jalar Varietas Sawentar ............................. 4

Gambar 2 Kromatogram Golongan Flavonoid ................................. 24

Gambar 3 Profil Kromatogram Hasil Densitometer Golongan

Flavonoid ....................................................................... 26

Gambar 4 Spektrum Golongan Flavonoid........................................ 27

Gambar 5 Kromatogram Golongan Polifenol .................................. 29

Gambar 6 Profil Kromatogram Hasil Densitometer Golongan

Polifenol......................................................................... 31

Gambar 7 Spektrum Golongan Polifenol ......................................... 32

Gambar 8 Kromatogram Golongan Tanin........................................ 33

Gambar 9 Profil Kromatogram Hasil Densitometer Golongan Tanin 35

Gambar 10 Spektrum Golongan Tanin .............................................. 36

Gambar 11 Kromatogram Golongan Saponin .................................... 37

Gambar 12 Profil Kromatogram Hasil Densitometer Golongan

Saponin .......................................................................... 40

Gambar 13 Spektrum Golongan Saponin........................................... 41

Gambar 14 Kromatogram Golongan Triterpenoid ............................. 42

Gambar 15 Profil Kromatogram Hasil Densitometer Golongan

Triterpenoid ................................................................... 44

Gambar 16 Spektrum Golongan Triterpenoid .................................... 45

x
 xi

DAFTAR TABEL

Halaman
Tabel 1 Fase Gerak untuk Identifikasi Sidik Jari Fitokimia .............. 10

Tabel 2 Pereaksi Pendeteksi Umum................................................. 11

Tabel 3 Fase Gerak Penentu Sidik Jari Fitokimia............................. 17

Tabel 4 Hasil Skrining Fitokimia ..................................................... 22

Tabel 5 Hasil Identifikasi Senyawa Flavonoid ................................. 25

Tabel 6 Hasil Identifikasi Senyawa Polifenol .................................. 30

Tabel 7 Hasil Identifikasi Senyawa Tanin ....................................... 34

Tabel 8 Hasil Identifikasi Senyawa Saponin .................................... 38

Tabel 9 Hasil Identifikasi Senyawa Triterpenoid ............................. 43

xi
 xii

DAFTAR ISTILAH

Derivatisasi : Proses kimiawi untuk mengubah suatu senyawa dengan

menggunakan pereaksi yang sesuai

Determinasi : Suatu cara untuk membandingkan suatu tumbuhan

dengan tumbuhan lain yang sudah dikenal sebelumnya

Ekstrak : Sediaan kering, kental, atau cair dibuat dengan cara

menyari simplisia atau bahan tanaman menurut cara

yang cocok, di luar pengaruh cahaya matahari langsung

Supernatan : Substansi hasil sentrifugasi yang memiliki bobot jenis

yang lebih rendah

Varietas : Sekelompok tanaman dari suatu jenis atau spesies yang

ditandai oleh bentuk tanaman, pertumbuhan tanaman,

daun, bunga, buah, biji, dan ekspresi karakteristik

genotip yang dapat membedakan dari jenis atau spesies

yang sama oleh sekurang-kurangnya satu sifat yang

menentukan dan apabila diperbanyak tidak mengalami

perubahan

xii
 xiii

DAFTAR SINGKATAN

FHI :Farmakope Herbal Indonesia

GF : Gypsum Fluoresence

KLT : Kromatografi Lapis Tipis

Rf : Retardation factor

TLC : Thin Layer Chromatography

UV-Vis : Ultra Violet-Visual.

xiii
 xiv

DAFTAR LAMPIRAN

Halaman
Lampiran 1 Pereaksi Pendeteksi Penentuan Sidik Jari Fitokimia ..... 49

Lampiran 2 Cara Pembuatan Fase Gerak` ........................................ 50

Lampiran 3 Cara Pembuatan Pereaksi Warna .................................. 52

Lampiran 4 Surat Keterangan Determinasi ...................................... 54

Lampiran 5 Sampel Daun Ubi Jalar Varietas Sawentar .................... 55

Lampiran 6 Hasil Ekstraksi dengan Metode Sonikasi ...................... 55

Lampiran 7 Hasil Uji Skrining Fitokimia......................................... 56

xiv
 xv

ABSTRAK

Ubi jalar varietas Sawentar (Ipomoea batatas L. var Sawentar) merupakan

jenis ubi jalar yang baru ditemukan di Indonesia. Penelitian terkait ubi jalar
varietas Sawentar masih sangat jarang dilakukan. Identifikasi sidik jari fitokimia
ekstrak etanol ubi jalar varietas Sawentar bertujuan untuk memperoleh profil
kromatogram sebagai parameter standarisasi menggunakan metode KLT-
Spektrofotodensitometri. Larutan sampel ekstrak etanol daun ubi jalar varietas
Sawentar ditotolkan pada plat KLT silica gel GF 254, dielusi dengan fase gerak
sesuai dengan golongan senyawa. Plat divisualisasi di bawah sinar putih, UV 254
nm, dan 366 nm dengan TLC Visualizer. Kemudian plat dipindai pada panjang
gelombang 210 nm, puncak maksimiumnya, dan 366 nm. Tiap-tiap puncak
dipindai pada panjang gelombang UV-Vis 200-700 nm. Masing-masing puncak
diidentifikasi dengan pereaksi yang sesuai dengan golongan senyawa. Sidik jari
fitokimia ekstrak etanol daun ubi jalar varietas Sawentar diporoleh sebagai
golongan flavonoid menghasilkan 12 puncak senyawa. Puncak yang diduga
senyawa flavonoid berada pada Rf 0,48; 0,73; dan 0,84. Sidik jari fitokimia
golongan polifenol menghasilkan 3 puncak senyawa. Puncak yang diduga
senyawa polifenol berada pada Rf 0,01. Sidik jari fitokimia golongan tanin
menghasilkan 3 puncak senyawa. Puncak yang diduga senyawa tanin berada pada
Rf 0,01. Sidik jari fitokimia golongan saponin menghasilkan 10 puncak senyawa.
Puncak yang diduga senyawa saponin berada pada Rf 0,03 and 0,08. Sidik jari
fitokimia golongan triterpenoid menghasilkan 5 puncak senyawa. Puncak yang
diduga senyawa triterpenoid berada pada Rf 0,70. Ekstrak etanol daun ubi jalar
varietas Sawentar mengandung senyawa flavonoid, polifenol, tanin, saponin, dan
triterpenoid dengan pola kromatogram spesifik sebagai parameter standarisasi.

Kata Kunci : daun ubi jalar varietas Sawentar, sidik jari fitokimia, KLT-
Spektrofotodensitometri.

xv
 xvi

ABSTRACT

Sawentar varieties of sweet potato (Ipomoea batatas L. var Sawentar) is a

type of sweet potato new was discovered. Related research of Sawentar sweet
potato varieties are still very rare. Phytochemical fingerprint identification
ethanol extract of sweet potato varieties Sawentar aims to obtain a chromatogram
profile as standardization parameters for using TLC-Spektrofotodensitometri.
Sample solution of ethanol extract of sweet potato leaf varieties Sawentar was
applied on the TLC silica gel GF 254, eluted with a mobile phase according to the
class of compounds. The plates were visualized under white light, UV 254 nm,
and 366 nm with TLC Visualizer. Then the plate is scanned at a wavelength of
210 nm, the maximum peak, and 366 nm. Each peak is scanned at a wavelength
of 200-700 nm UV-Vis. Each peak is identified with a suitable reagent with the
compound. Phytochemical Fingerprints ethanol extract of leaves of sweet potato
varieties Sawentar as flavonoid compound produces 12 peaks. The highlight of
the alleged flavonoids are at Rf 0.48; 0.73; and 0.84. Phytochemical fingerprints
class of polyphenols produce compound 3 peak. The highlight alleged phenol
compound is at Rf 0.01. Fingerprints produce tannin phytochemical class 3
compound peaks. The highlight of the alleged tannin are at Rf 0.01.
Phytochemical fingerprints group produces 10 peaks compound saponin. The
highlight of the alleged saponins are at Rf 0.03 and 0.08. Fingerprints group
phytochemical compounds triterpenoids produce 5 peaks. The highlight alleged
triterpenoid compounds are at Rf 0.70. Ethanol extract of Sawentar varieties
sweet potato leaves contain flavonoids, polyphenols, tannins, saponins, and
triterpenoids with specific chromatogram patterns as standardization parameters.

Keywords: Sawentar variety sweet potato leaves, phytochemical fingerprints,

TLC-Spectrophotodensitometry.

xvi
 1

BAB I

PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Indonesia merupakan salah satu negara dengan keanekaragaman hayati

yang melimpah. Terdapat banyak tumbuhan tropis sebagai sumber kekayaan

potensial. Ubi jalar merupakan salah satu tumbuhan tropis sebagai sumber

kekayaan potensial di Indonesia. Telah ditemukan sebanyak 24 jenis varietas

unggul ubi jalar hingga tahun 2016 (Balitkabi, 2016). Salah satu kelompok

varietas baru ubi jalar yang ditemukan yaitu ubi jalar varietas Sawentar (Ipomoea

batatas L. var. Sawentar). Ubi jalar varietas Sawentar merupakan persilangan

bebas dari induk betina Mantang Merah (var lokal asal Jawa Barat) pada

polycross nursery (Balitkabi, 2016). Tumbuhan ini memiliki helai daun berwarna

hijau, tulang daun berwarna ungu, umbi berbentuk elip membulat, kulit umbi

berwarna merah, dan daging umbi berwarna krem (Balitkabi, 2016).

Bagian tumbuhan ubi jalar varietas Sawentar yang menjadi target utama

penelitian adalah daunnya. Ubi jalar varietas Sawentar memiliki daun berwarna

hijau dengan tulang daun berwarna ungu. Warna ungu pada daun ubi jalar varietas

Sawentar menandakan terdapat banyak senyawa kimia penting yang memiliki

aktivitas farmakologi. Penelitian tekait ubi jalar varietas Sawentar (Ipomoea

batatas L. var. Sawentar) masih sangat jarang dilakukan. Sampai saat ini belum

ada penelitian yang menjelaskan komponen senyawa kimia pada ubi jalar varietas

Sawentar. Komponen senyawa kimia tersebut dapat dijadikan pedoman dalam

1
 2

bidang kesehatan terkait aktivitas farmakologi yang diberikan oleh ubi jalar

varietas Sawentar.

Senyawa kimia pada suatu tumbuhan dapat diketahui dengan identifikasi

sidik jari fitokimia. Senyawa kimia yang diidentifikasi berupa senyawa metabolit

sekunder pada tumbuhan seperti alkaloid, flavonoid, tanin, saponin, polifenol,

terpenoid, glikosida, minyak atsiri dan steroid. Sidik jari fitokimia ditunjukkan

dengan profil kromatogram berupa spot, densitogram, dan spektrum (Reich and

Blatter, 2004). Pola sidik jari fitokimia dapat dijadikan acuan dalam standarisasi

herbal. Beberapa metode yang dapat digunakan untuk identifikasi sidik jari

fitokimia yaitu dengan metode HPLC (Hight Performance Liquid

Chromatography) dan KLT (Kromatografi Lapis Tipis). Identifikasi sidik jari

dengan metode KLT dipiih karena lebih cepat, fleksibel, dapat menganalisis

banyak sampel, efisien, dan tidak memerlukan banyak pelarut dibandingkan

dengan metode HPLC.

Identifikasi sidik jari fitokimia dengan metode KLT juga harus

mempertimbangkan metode ekstraksi dan pelarut yang digunakan. Penelitian ini

dilakukan ekstraksi menggunakan pelarut etanol. Etanol merupakan pelarut yang

universal sehingga diharapkan dapat menarik semua komponen kimia yang

terdapat pada tumbuhan. Pemilihan fase diam dan fase gerak mengacu pada

penelitian yang dikembangkan oleh Reich and Blatter (2004). Identifikasi

senyawa juga dilakukan dengan pereaksi pendeteksi yang sesuai. Terkait latar

belakang tersebut, maka penelitian ini dilakukan identifikasi sidik jari fitokimia

daun ubi jalar varietas Sawentar (Ipomoea batatas L. var. Sawentar). Hal tersebut

dilakukan untuk mengetahui kandungan senyawa kimia yang berpengaruh

2
 3

terhadap aktivitas farmakologi yang diberikan. Identifikasi sidik jari fitokimia

dilakukan dengan metode KLT-Spektrofotodensitometri. Hasil sidik jari fitokimia

ditunjukkan dengan profil kromatogram berupa spot, densitogram, dan spektrum

sebagai acuan standarisasi herbal.

1.2 Rumusan Masalah

Bagaimana sidik jari fitokimia ekstrak etanol daun ubi jalar varietas

Sawentar (Ipomoea batatas L. var. Sawentar) dengan metode KLT

Spektrofotodensitometri?

1.3 Tujuan Penelitian

Mengetahui sidik jari fitokimia ekstrak etanol daun ubi jalar varietas

Sawentar (Ipomoea batatas L. var. Sawentar) dengan metode KLT-

Spektrofotodensitometri.

1.4 Manfaat Penelitian

Penelitian ini diharapkan dapat memberikan acuan berupa sidik jari

fitokimia ekstrak etanol daun ubi jalar varietas Sawentar (Ipomoea batatas L. var.

Sawentar) sebagai standarisasi herbal.

3
 4

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Deskripsi Tanaman Ubi Jalar Varietas Sawentar

Tanaman ubi jalar varietas Sawentar merupakan kelompok tanaman ubi

jalar yang memiliki klasifikasi sebagai berikut:

Kingdom : Plantae

Divisi : Spermatophyta

Sub divisi : Angiospermae

Kelas : Dicotyledone

Ordo : Convolvulales

Famili : Convolvulaceae

Genus : Ipomoea L.

Spesies : Ipomoea batatas (L.)

(Rukmana, 1997).

a. b.
Gambar 1. Tanaman Ubi Jalar Varietas Sawentar. a: Umbi b: Daun
(Balitkabi, 2016).

4
 5

Ubi jalar varietas Sawentar merupakan salah satu ubi jalar varietas baru di

Indonesia. Ubi jalar ini merupakan persilangan bebas dari induk betina Mantang

Merah (var lokal asal Jawa Barat) pada polycross nursery (Balitkabi, 2016). Ubi

jalar varietas Sawentar baik tumbuh pada lahan sawah dan tegalan di daerah

pegunungan dengan ketinggian tempat minimal 1000 m dpl (Balitkabi, 2016).

Varietas Sawentar memiliki kerangka daun berbentuk hati, daun berwarna hijau

dengan tulang daun berwarna ungu, bentuk umbi bulat, kulit umbi berwarna

merah, dan daging umbi berwarna krem. Masa panen ubi dalam 6 bulan

(Balitkabi, 2016). Ubi jalar varietas Sawentar memiliki kadar protein 1,94%,

kadar serat 5,34%, kadar gula total 5,23%, dan kadar betakaroten 350,12 μg/100 g

sehingga sangat baik untuk dikonsumsi (Balitkabi, 2016).

2.2 Identifikasi Sidik Jari Fitokimia

Aktivitas farmakologi suatu tumbuhan sangat dipengaruhi oleh kandungan

senyawa fitokimia dalam tumbuhan tersebut. Identifikasi sidik jari fitokimia

merupakan pemeriksaan kandungan kimia secara kualitatif untuk mengetahui

golongan senyawa yang terkandung dalam suatu tumbuhan. Senyawa kimia yang

terkandung pada tumbuhan dapat ditampilkan dalam sidik jari kromatografi,

sehingga karakteristik kimia tumbuhan tersebut dapat digambarkan secara

menyeluruh (Liang et al., 2004). Identifikasi sidik jari dengan metode

kromatografi lapis tipis dilakukan karena hasil yang diperoleh dapat langsung

dievaluasi secara visual. Kontaminasi juga dapat dihindarkan karena sistem

kromatografi lapis tipis digunakan hanya sekali dalam pengembangan (Liang et

al., 2004). Hasil sidik jari fitokimia ditunjukkan dengan profil kromatogram

5
 6

berupa spot, densitogram, dan spektrum dari masing-masing golongan senyawa

yang ingin diidentifikasi.

2.3 Senyawa Fitokimia

Fitokimia berasal dari kata phyto (tumbuhan) yang berarti senyawa kimia

yang terdapat pada tumbuhan (Saxena, 2013). Secara umum fitokimia merupakan

metabolit sekunder yang dihasilkan oleh tanaman. Senyawa tersebut meliputi

polifenol, alkaloid, flavonoid, terpenoid, tanin, minyak atsiri, glikosida, steroid,

dan saponin (Saxena, 2013). Senyawa fitokimia dihasilkan terbatas pada

tumbuhan tertentu, sehingga kandungannya berbeda-beda pada setiap tumbuhan.

Banyak penelitian melaporkan bahwa senyawa fitokimia memiliki peran penting

dalam mencegah atau melawan beberapa penyakit. Beberapa senyawa fitokimia

yang umum terdapat pada tumbuhan adalah sebagai berikut.

2.3.1 Alkaloid

Alkaloid adalah golongan senyawa organik yang mengandung paling

sedikit satu atom N yang bersifat basa pada umumnya (Endarini, 2016). Alkaloid

berupa padatan kristal tidak larut, tidak berwarna, tetapi beberapa senyawa

merupakan kompleks aromatik berwarna (beberin berwarna kuning dan betanin

berwarna merah). Basa bebas alkaloid hanya larut dalam pelarut organik, dan

beberapa pseudoalkalod serta protoalkaloid larut dalam air. Garam alkaloid dan

alkaloid quartener sangat larut dalam air (Endarini, 2016). Alkaloid pada beberapa

penelitian dilaporkan memberikan aktivitas farmakologi sebagai anti-bakteri, anti-

kanker, anti-malaria, dan analgesik (Saxena, 2013).

6
 7

2.3.2 Flavonoid

Flavonoid merupakan senyawa polifenol sehingga memiliki sifat agak

asam dan dapat larut dalam basa. Flavonoid juga merupakan senyawa polihidroksi

(gugus hidroksil) sehingga bersifat polar dan dapat larut dalam pelarut polar

seperti metanol, etanol, aseton, air, butanol, dimetil sulfoksida, dimetil formamida

(Li et al., 2009). Flavonoid juga mudah larut dalam air karena adanya gugus

glikosida yang terikat pada gugus flavonoid. Senyawa flavonoid umumnya

memberikan warna merah, ungu, biru, dan kuning pada tumbuhan (Endarini,

2016). Flavonoid dilaporkan berperan memberikan aktivitas farmakologi sebagai

anti-mikroba, anti-inflamasi, anti-oksidan, anti-alergi, dan anti-diabetik (Li et al.,

2009).

2.3.3 Triterpenoid

Triterpenoid adalah senyawa yang kerangka karbonnya berasal dari enam

satuan isoprena dan secara biosintesis diturunkan dari hidrokarbon C-30 asiklik,

yaitu skualena. Senyawa ini tidak berwarna, berbentuk kristal, bertitik leleh tinggi

dan bersifat optis aktif (Harborne, 1987). Triterpenoid memiliki struktur siklik

yang rumit, kebanyakan berupa alkohol, aldehid atau atom karboksilat, dan larut

dalam pelarut organik dan eter (Endarini, 2016). Triterpenoid dilaporkan berperan

memberikan aktivitas farmakologi sebagai anti-karsinogenik, anti-malaria, anti-

mikroba, diuretik, dan anti-kanker (Saxena, 2013).

2.3.4 Tanin

Tanin adalah kelompok senyawa polifenol dengan berat molekul tinggi.

Senyawa tersebut membentuk ikatan reversibel dan kompleks ireversibel dengan

protein, polisakarida, alkaloid, asam nukleat, dan mineral (Saxena, 2013). Tanin

7
 8

secara umum memiliki gugus fenol dan bersifat koloid. Semua jenis tanin dapat

larut dalam air, kelarutannya besar dan akan bertambah besar apabila dilarutkan

dalam air panas dan pelarut organik seperti metanol, etanol, aseton serta pelarut

organik lainnya. Tanin dilaporkan berperan memberikan aktivitas farmakologi

bakteristatik dan fungistatik.

2.3.5 Saponin

Saponin adalah metabolit sekunder membentuk busa stabil dalam larutan

berair seperti sabun. Secara kimia, saponin termasuk kelompok senyawa

glikosilasi steroid, triterpenoids, dan alkaloid steroid (Saxena, 2013). Saponin

memiliki sifat larut dalam air dan etanol (Endarini, 2016). Saponin dilaporkan

berperan memberikan aktivitas farmakologi sebagai anti-jamur, anti-virus, dan

antioksidan (Saxena, 2013).

2.3.6 Polifenol

Polifenol memiliki tanda khas yaitu memiliki banyak gugus fenol dalam

molekulnya. Polifenol dalam air bersifat sebagai asam lemah jadi mengion, karena

itu fenol dapat bereaksi dengan basa dan membentuk garam fenolat. Senyawa

fenolik memiliki kelarutan agak larut dalam air dan berperan memberikan

aktivitas sebagai anti-mikroba (Saxena, 2013).

2.3.7 Steroid

Steroid merupakan senyawa organik lemak sterol tidak terhidrolisis yang

merupakan hasil reaksi dari turunan terpena atau skualen. Steroid memiliki

kelarutan larut dalam pelarut organik dan eter (Endarini, 2016). Steroid dilaporkan

berperan memberikan aktivitas farmakologi sebagai anti-karsinogenik, anti-

malaria, anti-mikroba, diuretik, dan anti-kanker (Saxena, 2013).

8
 9

2.3.8 Minyak Atsiri

Minyak atsiri adalah kelompok besar minyak nabati yang berwujud cairan

kental pada suhu ruang namun mudah menguap sehingga memberikan aroma

yang khas. Minyak atsiri yang baru diekstrak biasanya tidak berwarna atau

berwarna kekuningan. Minyak atsiri umumnya larut dalam alkohol dan pelarut

organik lainnya. Minyak atsiri dilaporkan berperan memberikan aktivitas

farmakologi sebagai anti-alergi, anti-inflamasi, dan analgesik (Saxena, 2013).

2.4 Ekstraksi dengan Sonikasi

Ekstraksi adalah metode penarikan senyawa kimia yang dapat larut

sehingga terpisah dari bahan yang tidak dapat larut dengan pelarut cair. Prinsip

ekstraksi adalah melarutkan senyawa polar dalam pelarut polar dan senyawa non

polar dalam senyawa non polar (like dissolves likes) (Depkes RI, 2000). Metode

ekstraksi yang digunakan mengacu pada metode Wicaksono dkk., (2016). Pada

penelitian tersebut proses ekstraksi dilakukan metode ekstraksi ultrasound-

assisted dengan sonikasi. Sonikasi memanfaatkan gelombang ultrasonik yang

dapat mempercepat waktu kontak antara sampel dan pelarut meskipun pada suhu

ruang. Gelombang ultrasonik akan merusak struktur dinding sel tanaman dan

mempercepat difusi pelarut melalui membran, sehingga sel menjadi lisis dan

menjadi mudah dalam pelepasan isi sel (Falleh et al., 2012). Pelarut yang

digunakan dalam metode ektraksi ini adalah etanol, karena berdasarkan sifat fisika

kimia dari senyawa-senyawa fitokimia sebagian besar larut pada etanol. Etanol

juga merupakan pelarut universal sehingga diharapkan mampu menarik semua

senyawa kimia yang terdapat pada tumbuhan

9
 10

2.5 Identifikasi Sidik Jari Fitokimia dengan Metode KLT-

Spektrodensitometri

KLT merupakan metode kromatografi planar yang digunakan untuk

memisahkan senyawa dalam multi komponen yang didasarkan pada prinsip

afinitas analit pada fase diam dan fase gerak. Metode KLT dikombinasikan

dengan spektrofotodensitometri dapat digunakan untuk identifikasi sidik jari

fitokimia. Data sidik jari fitokimia yang didapatkan menggunakan KLT-

Spektrofotodensitometri adalah berupa kromatogram, nilai Rf, spektrum, panjang

gelombang maksimum, dan spot dengan penampak bercak. Parameter tersebut

dapat dijadikan sebagai sidik jari untuk daun ubi Sawentar.

Identifikasi sidik jari yang digunakan mengacu pada metode yang telah

dikembangkan oleh Harbone (1987) dan Reich and Blatter (2004). Fase diam

yang umumnya digunakan untuk identifikasi sidik jari fitokimia adalah plat silika

gel (Reich and Blatter, 2004). Fase gerak yang umumnya digunakan untuk

penentuan sidik jari fitokimia yang terdapat di dalam tanaman dapat dilihat pada

Tabel 1.

Tabel 1. Fase Gerak untuk Identifikasi Sidik Jari Fitokimia (Harbone, 1987;
Reich and Blatter, 2004).
No Senyawa Fase Gerak
1. Alkaloid Toluena, etl asetat, dietil amin atau ammonia (70:20: 10)
2. Minyak Atsiri dan Etil asetat atau metanol dan toluen atau heksana dalam
Triterpenoid berbagai konsentrasi, atau diklorometana
3. Flavonoid Etil asetat, asam formit, asam asetat, akuades (100:
11:11:26) atau asam formit, akuades, etil asetat
4. Saponin Kloroform, metanol, akuades (70: 30: 4)
Asam asetat, akuades, 1-butanol (10:40:50) atau ammonia,
akuadet, etanol, etil astat (1:9:25:65)
5. Tanin dan Toluen, etil asetat (93:7)
Polifenol
6. Steroid Etil asetat atau metanol dan toluen atau heksana dalam
berbagai konsentrasi, atau diklorometana

10
 11

Tabel 2. Pereaksi Pendeteksi Umum (Harbone, 1987; Reich and Blatter, 2004).

No Pereaksi Golongan Senyawa

1 Asam Sulfat Pereaksi umum: Terpenoid, saponin, steroid,
iridoid, flavonoid, senyawa lifofilik
2 Anisaldehid/vanillin Sama seperti asam sulfat, tetapi biasanya
dengan asam sulfat menunjukkan lebih banyak zona warna
atau fosfat
3 Fast blue salt B Fenol, tanin, kumarin, flavonol, asam karbonik,
kanabinoid, amina
4 Pereaksi alami Flavonoid, karbohidrat (gula), antosianin
5 Uap amonia Alkaloid, flavonoid, opiat, misotoksin, senosid,
valepotriat, antrasen
6 Reagent dragendorff Alkaloid, senyawa nitrogen heterosiklik,
karotenoid
7 Anilin-difenilamin- Gula, glikosida
asam fosfat
8 FeCl3 Polifenol, flavonoid, tanin, asam, alkaloid

11
 12

BAB III

METODE PENELITIAN

3.1 Rancangan Penelitian

Penelitian ini akan dilakukan identifikasi sidik jari fitokimia terhadap

ekstrak etanol dari daun ubi jalar varietas Sawentar (Ipomoea batatas L. var.

Sawentar) dengan metode KLT-Spektodensitometri. Tahapan penelitian ini

meliputi determinasi tanaman ubi jalar varietas Sawentar, pengumpulan sampel,

penyiapan sampel, ekstraksi sampel menggunakan sonikasi dengan pelarut etanol

95% dan asam sitrat 3% (85:15 v/v), penguapan pelarut dari ekstrak etanol daun

ubi jalar vaietas Sawentar untuk uji skrining fitokimia, uji skrining fitokimia

ektrak etanol daun ubi jalar varietas Sawentar, penotolan ekstrak etanol daun ubi

jalar varietas Sawentar pada plat KLT, pengelusian menggunakan fase gerak yang

sesuai dengan golongan fitokimia yang positif pada uji skrining fitokimia,

penambahan pereaksi penampak bercak sebagai tahap uji identifikasi fitokimia,

analisis data kromatogram dari sidik jari fitokimia menggunakan analisis

deskriptif sebagai hasil sidik jari fitokimia sampel daun ubi jalar varietas Sawentar

(Ipomoea batatas L. var. Sawentar).

3.2 Lokasi dan Waktu Penelitian

Determinasi dilakukan di BALITKABI (Balai Penelitian Tanaman Aneka

Kacang dan Umbi), Malang, Jawa Timur. Proses ekstraksi, analisis sidik jari

fitokimia ekstrak etanol daun ubi jalar varietas Sawentar, dan analisis data

12
 13

dilakukan di UPT Laboratorium Toksikologi Forensik, Lembaga Forensik Sains

dan Kriminologi Universitas Udayana. Penelitian ini dilakukan selama 4 bulan.

3.3 Alat dan Bahan Penelitian

3.3.1 Alat Penelitian

Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini meliputi vial 10 mL,

erlenmeyer 25 mL, 50 mL, dan 100 mL (Iwaki-Pyrex®), gelas ukur 500 mL dan

1000 mL (Iwaki-Pyrex®), gelas beaker 100 mL dan 500 mL (Iwaki-Pyrex®), labu

ukur 10 mL, 100 mL, dan 500 mL (Iwaki-Pyrex®), pipet ukur 5 mL dan 10 mL

(Iwaki-Pyrex®), timbangan analitik (Kern-Alj®), bulbfiller, aluminium foil, botol

timbang (Iwaki-Pyrex®), sonikator (Branson®), sentrifugasi, chamber ADC

(CAMAG), oven (Memmert®), Plat TLC silika gel GF254, spray, ATS (CAMAG),

TLC Visualizer (CAMAG) lampu UV (CAMAG), dan spektrofotodensitometer

CAMAG TLC Scanner 4.

3.3.2 Bahan Penelitian

Sampel tanaman yang digunakan adalah daun ubi jalar varietas Sawentar

(Ipomoea batatas L. var. Sawentar) yang diperoleh dari BALITKABI (Balai

Penelitian Tanaman Aneka Kacang dan Umbi), Malang, Jawa Timur. Bahan kimia

dan pelarut yang digunakan memiliki derajat kemurnian pro analisis. Bahan yang

digunakan untuk ekstraksi adalah asam sitrat P (Merck®). Bahan yang digunakan

untuk pembuatan pereaksi warna yaitu AlCl3 (Merck®), asam sitrat P (Merck®),

asam borat P (Merck®), FeCl3 (Merck®), vanillin P (Merck®), KI (Merck®), dan I2

(Merck®). Pelarut yang digunakan untuk ekstraksi adalah etanol P (Merck®).

Pelarut yang digunakan untuk fase gerak yaitu akuades (Bratacem®), etil asetat P

(Merck®), asam formit (Merck®), asam asetat glasial (Merck®), kloroform

 14

(Merck®), metanol (Merck®), toluen (Merck®), dan dietil amin (Merck®). Pelarut

yang digunakan untuk pembuatan pereaksi warna yaitu methanol P (Merck®),

Folin-Ciocalteu (Merck®), asam sulfat pekat P (Merck®), asam asetat glasial

(Merck®)

3.4 Prosedur Penelitian

3.4.1 Determinasi Daun Ubi Jalar Varietas Sawentar

Determinasi sampel daun ubi jalar varietas Sawentar dilakukan di

BALITKABI (Balai Penelitian Tanaman Aneka Kacang dan Umbi), Malang, Jawa

Timur.

3.4.2 Pengumpulan dan Preparasi Sampel

Sampel daun ubi jalar varietas Sawentar dikumpulkan yang tidak busuk,

tidak cacat, dan dalam kondisi baik. Kemudian sampel dicuci dengan air mengalir,

dipotong-potong kecil, dan di blender.

3.4.3 Ekstraksi Sampel Daun Ubi Jalar Varietas Sawentar

Metode ekstraksi yang digunakan mengacu pada metode Wicaksono dkk.,

(2016) dan Zhao and Li, (2015). Daun segar ubi jalar varietas Sawentar dipotong-

potong kecil dan ditimbang sebanyak 2,5 gram. Hasil penimbangan dimasukkan

ke dalam vial diekstraksi dengan 25 mL etanol 95% berbanding asam sitrat 3%

(85:15 v/v) lalu disonikasi selama 30 menit dan disentrifugasi kecepatan 4000

rpm selama 10 menit. Supernatan diambil dan dimasukkan ke dalam botol vial

sebagai ekstrak daun ubi jalar varietas Sawentar (Ipomoea batatas L. var.

Sawentar).
 15

3.4.4 Penguapan Ekstrak untuk Uji Skrining Fitokimia

Ekstrak etanol daun ubi jalar varietas Sawentar dimasukkan ke dalam

cawan porselen sebanyak 10 mL. Ekstrak tersebut kemudian diuapkan diatas

penangas air dengan suhu kurang dari 60°C sampai didapatkan ekstrak yang tanpa

pelarut.

3.4.5 Uji Skrining Fitokimia Sampel Daun Ubi Jalar Varietas Sawentar

A. Pembuatan Larutan Uji

Pembuatan larutan uji untuk skrining fitokimia dilakukan dengan

melarutkan 10 mg ekstrak tanpa pelarut dalam 25 ml etanol 70%, kemudian

diperoleh larutan uji untuk skrining fitokimia.

B. Pemeriksaan Alkaloid

Diuapkan 2 mL larutan uji hingga diperoleh residu. Residu kemudian

dilarutkan dengan 5 mL HCl 2N. Kemudian dibagi larutan yang didapat ke dalam

3 tabung reaksi. Tabung pertama sebagai blanko ditambahkan dengan HCl 2N.

Tabung kedua ditambahkan pereaksi Dragendroff sebanyak 3 tetes. Tabung ketiga

ditambahkan pereaksi Mayer sebanyak 3 tetes. Terbentuknya endapan jingga

dengan pereaksi Dragendroff dan endapan putih hingga kekuningan pereaksi

Mayer menunjukkanadanya senyawa golongan alkaloid (Jones dan Kinghorn,

2006).

C. Pemeriksaan Steroid dan Triterpenoid

Sebanyak 2 mL larutan uji diuapkan, residu yang diperoleh dilarutkan

dengan 0,5 mL kloroform, kemudian ditambah dengan 0,5 mL asam asetat

anhidrat. Selanjutnya campuran ini ditetesi dengan 12 mL asam sulfat pekat

melalui dinding tabung tersebut. Apabila terbentuk warna hijau kebiruan

 16

menunjukkan adanya steroid. Jika hasil yang diperoleh berupa cincin kecoklatan

atau violet pada perbatasan dua pelarut, menunjukkan adanya terpenoid (Jones

dan Kinghon, 2006).

D. Pemeriksaan Saponin

Sebanyak 10 mL larutan uji dalam tabung reaksi dikocok vertikal selama

10 detik kemudian dibiarkan selama 10 detik. Pembentukan busa setinggi 1-10 cm

yang stabil selama tidak kurang dari 10 menit menunjukkan adanya saponin. Pada

penambahan 1 tetes HCl 2N, busa tidak menghilang (Depkes RI, 1995).

E. Pemeriksaan Polifenol dan Tanin

Sebanyak 1 mL larutan uji direaksikan dengan larutan Fe (III) Klorida

10%, apabila terjadi warna biru tua, biru kehitaman atau hitam kehijauan

menunjukkan adanya senyawa polifenol dan tanin (Robinson, 1991; Jones dan

Kinghorn, 2006).

F. Pemeriksaan Flavonoid

Sebanyak 1 mL larutan ekstrak uji diuapkan hingga kering, sisanya

dibasahkan dengan aseton P, ditambahkan sedikit serbuk halus asam borat P

danserbuk halus asam oksalat P, dipanaskan secara hati-hati di atas tangas air dan

dihindari pemanasan yang berlebihan. Sisa yang diperoleh dicampur dengan 10

mL eter P. Diamati dengan sinar UV 366 nm, larutan berfluorosensi kuning

intensif atau biru menunjukkan adanya flavonoid (Depkes RI, 1995).

G. Pemeriksaan Minyak Atsiri

Sebanyak 1 mL larutan uji diuapkankan di atas cawan porselen hingga

diperoleh residu. Hasil positif minyak atsiri ditandai dengan aroma khas yang

dihasilkan dari residu tersebut (Ciulei, 1984).

 17

3.4.6 Identifikasi Sidik Jari Fitokimia Ekstrak Etanol Daun Ubi Jalar
Varietas Sawentar

Penelitian ini mengacu pada metode yang telah dikembangkan oleh

Harbone (1987) dan Reich and Blatter (2004). Fase diam yang digunakan adalah

plat KLT silika gel GF254 dan fase gerak yang digunakan disesuaikan dengan

kandungan kimia daun ubi jalar varietas Sawentar. Fase gerak yang dapat

digunakan dapat dilihat pada tabel 3.

Tabel 3. Fase Gerak Penentuan Sidik Jari Fitokimia (Harbone, 1984; Reich and
Blatter, 2004).

No. Golongan Senyawa Fase Gerak

Etil Asetat : Asam Formit : Asam Asetat : Air
1. Flavonoid
(100:11:11:26)
2. Tanin Toluen : Etil Asetat (93:7)
3. Polifenol Toluen : Etil Asetat (93:7)
4. Triterpenoid Kloroform : Metanol (10:1)
Toluen : Etil Asetat : Dietil Amin atau
5. Alkaloid
amonia (70: 20: 10)
6. Saponin Kloroform : Metanol : Akuades (70: 30: 4)
7. Glikosida Benzene P : etanol 95% (70: 30)
8. Steroid Kloroform : Metanol (10:1)
9. Minyak Atsiri N-Heksan : Etil Asetat (4:6)

Identifikasi sidik jari fitokimia ekstrak etanol daun ubi jalar varietas

Sawentar dilakukan dengan mencuci masing-masing plat silika gel GF254 dengan

metanol dan diaktivasi pada suhu 110 oC selama 10 menit. Sampel yang potitif

pada uji skrining ditotolkan pada plat dengan volume totolan 20 μL menggunakan

autosampler CAMAG Linomat 5. Plat dielusi dengan jarak elusi 8 cm dalam

chamber yang dijenuhkan dengan fase gerak. Setelah dielusi plat dikeluarkan dari

chamber dan dikeringkan dalam oven selama 5 menit pada suhu 50oC.
 18

Plat diamati secara visual di bawah sinar putih, sinar UV 254 nm, dan

sinar UV 366 nm dengan CAMAG TLC Visualizer. Kemudian plat KLT discan

pada panjang gelombang 210 nm, 366 nm, dan panjang gelombang maksimum

untuk masing-masing senyawa dengan spektrofotodensitometer CAMAG TLC

Scanner 4. Data puncak hasil densitogram kemudian di scan pada panjang

gelombang 200-700 nm untuk mendapatkan spektrum masing-masing puncak.

Plat KLT selanjutnya dideteksi dengan pereaksi pendeteksi sesuai dengan

Lampiran 1. Diamati kembali pada sinar putih, UV 254 nm dan 366 nm

menggunakan TLC Visualizer.

3.5 Analisis Data

Hasil identifikasi sidik jari dari ekstrak etanol daun ubi Sawentar (Ipomoea

batatas L. var. Sawentar) berupa densitogram, spot, dan spektrum. Analisis data

kromatogram dari sidik jari fitokimia menggunakan analisis deskriptif.

 19

3.6 Skema Penelitian

Determinasi tanaman ubi jalar varietas Sawentar

Pengumpulan dan preparasi sampel daun ubi jalar varietas Sawentar

Ekstraksi menggunakan sonikasi dengan pelarut etanol 95% dan

asam sitrat 3% (85:15 v/v)

Uji skrining fitokimia sampel daun ubi jalar varietas Sawentar

Pemilihan fase diam dan fase gerak sesuai dengan golongan

senyawa

Visualisasi dengan TLC Visualizer dan penentuan sidik jari

fitokimia dengan KLT-spektrofotodensitometri

Penentuan sidik jari berdasarkan kandungan senyawa

 20

BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Determinasi Sampel Tanaman Ubi Jalar Varietas Sawentar

Determinasi dilakukan untuk mengetahui kebenaran jenis tumbuhan yang

digunakan sebagai sampel. Sampel yang digunakan adalah daun ubi jalar varietas

Sawentar (Ipomoea batatas L. var Sawentar) yang langsung didatangkan dari

BALITKABI (Balai Penelitian Tanaman Aneka Kacang dan Umbi), Malang, Jawa

Timur. Proses determinasi dilakukan di BALITKABI (Balai Penelitian Tanaman

Aneka Kacang dan Umbi), Malang, Jawa Timur. Hasil determinasi diperoleh

bahwa tanaman yang digunakan dalam penelitian adalah benar daun ubi jalar

varietas Sawentar (Ipomoea batatas L. var Sawentar). Adapun hasil determinasi

dapat dilihat pada Lampiran 4.

4.2 Pengumpulan dan Preparasi Sampel

Sampel daun ubi jalar varietas Sawentar diperoleh dan dikumpulkan dari

BALITKABI (Balai Penelitian Tanaman Aneka Kacang dan Umbi), Malang, Jawa

Timur. Sampel daun yang didapatkan dicuci untuk menghilangkan pengotor yang

masih melekat pada daun agar tidak mengganggu proses ekstraksi dan identifikasi.

Setelah dicuci, daun dipotong-potong kemudian di belnder untuk memudahkan

proses ekstraksi sehingga didapatkan ekstrak yang lebih optimal.

20
 21

4.3 Ekstraksi Daun Ubi Jalar Varietas Sawentar

Ekstraksi sampel daun ubi jalar varietas Sawentar dilakukan dengan

metode ekstraksi ultrasound-assisted dengan sonikasi. Sonikasi memanfaatkan

gelombang ultrasonik yang dapat mempercepat waktu kontak antara sampel dan

pelarut meskipun pada suhu ruang. Gelombang ultrasonik akan merusak struktur

dinding sel tanaman dan mempercepat difusi pelarut melalui membran, sehingga

sel menjadi lisis dan menjadi mudah dalam pelepasan isi sel (Falleh et al., 2012).

Pelarut yang digunakan dalam ektraksi adalah etanol. Etanol merupakan pelarut

universal sehingga diharapkan mampu menarik semua senyawa kimia yang

terdapat pada sampel daun ubi jalar varietas Sawentar. Setelah sonikasi, dilakukan

proses sentrifugasi. Sentrifugasi dilakukan untuk mendapatkan supernatan yang

akan digunakan dalam identifikasi sidik jari fitokimia.

4.4 Hasil Skrining Fitokimia Ekstrak Etanol Daun Ubi Jalar Varietas
Sawentar

Skrining fitokimia dilakukan untuk mengetahui golongan senyawa kimia

yang terdapat dalam ekstrak daun ubi jalar varietas Sawentar. Golongan senyawa

kimia yang diperiksa yaitu alkaloid, glikosida, steroid, triterpenoid, saponin,

minyak atsiri, flavonoid, polifenol , dan tanin. Hasil skrining fitokimia ekstrak

etanol daun ubi jalar varietas Sawentar terdapat pada Tabel 4.

 22

Tabel 4. Hasil Skrining Fitokimia Ekstrak Etanol Daun Ubi Jalar Varietas
Sawentar.

Skrining
No Pustaka Hasil Kesimpulan
Fitokimia
1
1. Alkaloid Terbentuknya Larutan kuning tanpa (-) Alkaloid
endapan jingga membentuk endapan
(Pereaksi jingga
Dragendroff)
1
Terbentuk Larutan bening (-) Alkaloid
endapan putih kekuningan tanpa
kekuningan membentuk endapan
(Pereaksi Mayer) putih kekuningan
1
2. Steroid dan Terbentuk warna Terbentuk cincin (+) Triterpenoid
Triterpenoid hijau kebiruan kecoklatan pada
(steroid) atau perbatasan pelarut
cincin kecoklatan
atau violet
(triterpenoid)
4
3. Saponin Ada busa yang Terbentuk busa (+) Saponin
bertahan ± 10
menit setinggi 1-
10 cm
2
4. Polifenol dan Terjadi warna Terjadi warna hitam (+) Polifenol dan
Tanin biru tua, biru kehijauan Tanin
kehitanaman atau
hitam kehijauan
3
5. Minyak Atsiri Berbau khas Tidak berbau khas (-) Minyak Atsiri
aromatik aromatic
4
6. Flavonoid Fluoresensi Terdapat fluoresensi (+) Flavonoid
kuning itensif kuning intensif pada
pada UV 366 nm UV 366 nm
Keterangan: (1Jones dan Kinghon, 2006; 2Robinson, 1991; 3Ciulei, 1984; 4Depkes
RI, 1995)

Hasil skrining fitokimia menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun ubi jalar

varietas Sawentar positif mengandung senyawa golongan flavonoid, tanin,

saponin, polifenol dan triterpenoid. Kandungan senyawa pada daun ubi jalar ini

dapat dipengaruhi oleh beberapa faktor seperti genetik (bibit), umur tanaman

sewaktu panen, waktu panen, serta kondisi lingkungan tempat tumbuh termasuk

nutrisi dalam tanah, kandungan air, dan pH tanah (Depkes RI, 2010).
 23

4.5 Identifikasi Sidik Jari Fitokimia Ekstrak Etanol Daun Ubi Jalar
Varietas Sawentar

Identifikasi sidik jari fitokimia yang telah dilakukan didapatkan bahwa

senyawa kimia yang terdapat dalam ekstrak etanol daun ubi jalar varietas

Sawentar adalah senyawa golongan flavonoid, polifenol, saponin, tanin, dan

triterpenoid. Kelima golongan senyawa kimia tersebut diidentifikasi kembali

dengan melihat warna bercak dan Rf pada plat KLT di bawah sinar putih, sinar

UV 254 nm, sinar UV 366 nm, dan setelah dideteksi dengan pereaksi pendeteksi,

profil kromatogram, serta spektrumnya menggunakan KLT-

Spektrofotodensitometer.

4.5.1 Sidik Jari Fitokimia Golongan Flavonoid

Penentuan sidik jari fitokimia dari ekstrak etanol daun ubi jalar varietas

Sawentar untuk golongan senyawa flavonoid digunakan fase diam yaitu silika gel

GF254 dan fase gerak yang digunakan adalah etil asetat : asam formiat : asam

asetat : air (100:11:11:26). Untuk mengetahui golongan senyawa flavonoid pada

lempeng KLT, digunakan pereaksi pendeteksi yaitu uap ammonia, AlCl3, dan

sitoborat. Hasil positif terhadap golongan flavonoid dengan pereaksi pendeteksi

uap ammonia memberikan bercak berwarna kuning kehijauan di bawah sinar

putih. Hasil positif terhadap golongan flavonoid dengan pereaksi pendeteksi AlCl3

memberikan bercak berwarna kuning di bawah sinar putih. Hasil positif terhadap

golongan flavonoid dengan pereaksi pendeteksi sitoborat memberikan warna biru

di bawah UV 366 nm (Markham, 1988). Gambar kromatogram di bawah sinar

putih, UV 254 nm , UV 366 nm, dan setelah disemprot dengan pereaksi

pendeteksi dapat dilihat pada gambar 2.

 24

12

10

9
8

2
A B C D E F
Gambar 2. Kromatogram ekstrak etanol daun ubi jalar varietas Sawentar setelah
dielusi dengan fase diam silika gel GF254 dan fase gerak etil asetat :
asam formiat : asam asetat : air (100:11:11:26) di bawah sinar UV
254 nm (A), UV 366 nm (B), sinar putih (C), setelah disemprot
dengan pereaksi pendeteksi uap ammonia di sinar putih (D), setelah
disemprot dengan pereaksi pendeteksi AlCl3 di sinar putih (E), dan
setelah disemprot dengan pereaksi sitoborat di UV 366 nm (F)
Keterangan:
Angka pada gambar kromatogram di atas merupakan nomor dari bercak yang disesuaikan dengan
nomor bercak pada Tabel 2 dan apabila ada angka yang tidak tercantum pada gambar di atas, maka
bercak tersebut tidak tampak.

Profil kromatogram hasil pengamatan secara visual dibawah sinar putih,

sinar UV 254 nm, sinar UV 366 nm, dan setelah disemprot dengan pereaksi

pendeteksi uap ammonia, AlCl3, dan sitoborat pada plat KLT maka data berupa Rf

dan warna bercak yang terjadi dapat dilihat pada tabel 5.

 25

Tabel 5. Hasil Identifikasi Senyawa Flavonoid

Nilai Rf sesuai
dengan Hasil Pengamatan Visual
Densitometer
Bercak Setelah
Ke- UV dideteksi Setelah Setelah
210 346 366 Sinar
UV 254 nm 366 dengan disemprot disemprot
nm nm nm putih
nm uap AlCl3 sitoborat
ammonia
1 0,05 0,05 0,05 - - - - - -
2 0,09 0,09 0,09 - - biru - - -
3 0,16 0,16 - - - - - - -
4 0,23 0,23 0,23 - - biru - - -
5 0,29 0,29 0,29 - - - - - -
6 0,34 0,34 - - - - - - -
7 0,41 0,41 0,41 - - - - - -
8 - lembayung biru kuning kuning* biru*
0,48 0,48 0,48
gelap kehijauan*
9 - lembayung - kuning kuning* -
0,60 0,60 0,60
gelap kehijauan*
10 kuning lembayung biru kuning kuning* biru*
0,73 0,73 0,73
redup gelap kehijauan*
11 0,79 0,79 0,79 - - - - - -

12 kuning lembayung biru kuning kuning* biru*

0,84 0,84 0,84
redup gelap kehijauan*
Keterangan:
*= Diduga mengandung golongan senyawa flavonoid

Menurut Markham (1988), terjadinya bercak berwarna kuning kehijauan di

sinar putih setelah direaksikan dengan uap ammonia, terjadinya bercak berwarna

kuning di sinar putih setelah disenprot dengan AlCl3, dan terjadinya bercak

berwarna biru di UV 366 nm setelah disemprot pereaksi sitoborat menandakan

adanya golongan flavonoid pada plat KLT. Berdasarkan tabel 5, bercak ke-8, ke-

10, dank ke-12 menghasilkan positif golongan flavonoid dengan Rf masing-

masing 0,48, 0,73, dan 0,84. Hal ini menunjukkan pada bercak tersebut

kemungkinan mengandung golongan senyawa flavonoid.

Profil kromatogram hasil densitometer dapat dilihat pada gambar 3. Profil

kromatogram pada panjang gelombang 210 nm memberikan 12 puncak, pada

panjang gelombang 346 nm memberikan 12 puncak, dan pada panjang gelombnag

366 nm memberikan 10 puncak. Bentuk spektrum dari bercak ke-8, ke-10, dan ke-

12 dapat dilihat pada gambar 4.

 26

(A)

(B)

(C)

Gambar 3. Profil kromatogram hasil densitometer ekstrak etanol daun ubi jalar
varietas Sawentar dengan fase diam silica gel GF254 dan fase gerak
etil asetat : asam formiat : asam asetat : air (100:11:11:26) pada
panjang gelombang (A) 210 nm, (B) 346 nm, dan (C) 366 nm.

Keterangan:
Angka pada gambar profil kromatogram hasil densitometer di atas merupakan nomor dari bercak
yang disesuaikan dengan nomor bercak Tabel 5 dan apabila angka yang didapat tidak tercantum
pada gambar di atas, maka bercak tersebut tidak tampak.
 27

Gambar 4. Spektrum kromatogram pada bercak ke-8, ke-10, dann ke-12

menghasilkan positif golongan flavonoid dengan Rf masing-
masing 0,48, 0,73, dan 0,84.

Menurut Markham (1988), flavonoid memiliki spektrum khas yang terdiri

atas dua panjang gelombang maksimum yaitu pada rentang panjang gelombang

240-285 nm (pita II) dan 300-550 nm (pita I). Jika dibandingkan dengan panjang

gelombang maksimum dari bercak ke-8, ke-10, dan ke-12 memiliki dua panjang

gelombang maksimum yang sesuai. Bercak ke-8 memiliki dua panjang gelombang

yaitu pada 249 nm dan 326 nm. Bercak-10 memiliki dua panjang gelombang

maksimum yaitu 268 nm dan 346 nm. Bercak-12 memiliki dua panjang

gelombang maksimum yaitu 249 nm dan 327 nm. Jadi, bercak ke-8, ke-9, ke-10,

dan ke-12 dapat dikatakan golongan senyawa flavonoid.

Selanjutnya jika dilihat dari spektrum, jenis flavonoid flavon dan flavonol
umumnya flavonoid flavon memiliki dua puncak dengan rentang panjang
gelombang pada pita I 310-350 dan pita II pada rentang panjang gelombang 250-
280 sedangkan flavonoid flavonol (3-OH tersubstitusi) memiliki dua puncak
dengan rentang panjang gelombang pada pita I 330-360 dan pita II pada rentang
 28

panjang gelombang 250-280 (Markham, 1988). Berdasarkan rentangan spectrum

tersebut, kemungkinan jenis flavonoid yang ada pada bercak ke-8, ke-10, dan ke-
12 adalah flavonoid flavon.

4.5.2 Sidik Jari Fitokimia Golongan Polifenol

Penentuan sidik jari fitokimia ekstrak etanol daun ubi jalar varietas

Sawentar untuk golongan senyawa polifenol menggunakan fase diam yaitu silika

gel GF254 dan fase gerak adalah toluene : etil asetat (93:7). Untuk mengetahui

golongan senyawa polifenol pada plat KLT, digunakan pereaksi pendeteksi yaitu

FeCl3 2% dan Folin-Ciocalteu. Hasil positif terhadap golongan polifenol dengan

pereaksi penampak bercak FeCl3 2% akan memberikan warna hitam di sinar putih

dan hasil positif terhadap golongan polifenol dengan pereaksi penampak bercak

Folin-Ciocalteu akan memberikan warna biru kehitaman di sinar putih (Robinson,

1991). Untuk gambar dari kromatogram di bawah sinar UV 254 nm , UV 366 nm,

sinar putih, dan setelah disemprot dengan pereaksi pendeteksi dapat dilihat pada

gambar 5. Profil kromatogram hasil pengamatan secara visual dibawah sinar

putih, sinar UV 254 nm, sinar UV 366 nm, dan setelah disemprot dengan pereaksi

pendeteksi FeCl3 2% dan Folin-Ciocalteu pada plat KLT maka data berupa Rf dan

warna bercak yang terjadi dapat dilihat pada tabel 6.

Menurut Robinson (1991), terjadinya bercak berwarna hitam sinar putih

setelah direaksikan dengan FeCl3 2%, dan terjadinya bercak berwarna biru

kehitaman di sinar putih setelah disemprot pereaksi Folin-Ciocalteu menandakan

adanya golongan polifenol pada lempeng KLT. Berdasarkan tabel 6, bercak ke-1

menghasilkan positif dengan Rf masing-masing 0,01. Hal ini menunjukkan pada

bercak tersebut kemungkinan mengandung golongan senyawa polifenol. Profil

 29

kromatogram hasil densitometer dapat dilihat pada gambar sekilan. Profil

kromatogram pada panjang gelombang 210 nm memberikan 3 puncak, pada

panjang gelombang 330 nm memberikan 2 puncak, dan pada panjang gelombnag

366 nm memberikan 2 puncak. Bentuk spektrum dari bercak ke-1 dapat dilihat

pada gambar 7.

1
A B C D E
Gambar 5. Sidik jari fitokimia ekstrak etanol daun ubi jalar varietas Sawentar
setelah dielusi dengan fase diam silica gel GF254 dan fase gerak etil
toluene : etil asetat (93:7). di bawah sinar UV 254 nm (A), sinar UV
366 nm (B), sinar putih (C), setelah disemprot dengan pereaksi
pendeteksi FeCl3 2% di sinar putih (D), setelah disemprot dengan
pereaksi pendeteksi Folin-Ciocalteu di sinar putih (E)

Keterangan:
Angka pada gambar kromatogram di atas merupakan nomor dari bercak yang disesuaikan dengan
nomor bercak pada Tabel 6 dan apabila ada angka yang tidak tercantum pada gambar di atas, maka
bercak tersebut tidak tampak.
 30

Tabel 6. Hasil Identifikasi Senyawa Polifenol

Nilai Rf sesuai
dengan Hasil Pengamatan Visual
Densitometer
Bercak
Sinar Setelah Setelah
Ke-
210 330 366 Sinar Sinar UV UV dideteksi disemprot
nm nm nm putih 254 nm 366 dengan Folin-
nm FeCl3 2% Ciocalteu
Kunin lembayung Coklat
1 0,01 - 0,01 Biru Hitam*
g gelap kehitaman*
2 - 0,23 - - - - - -
3 0,62 - - - - - - -
4 0,76 0,76 0,76 - - - - -
Keterangan:
*= Diduga mengandung golongan senyawa polifenol

Menurut penelitian Hagerman (2002), panjang gelombang maksimum dari

golongan senyawa polifenol adalah pada 280 nm. Jika dibandingkan dengan

panjang gelombang maksimum dari bercak ke-1 yaitu pada 330 nm memberikan

panjang gelombang maksimum yang lebih panjang. Tidak tepatnya nilai panjang

gelombang maksimum pada pustaka dengan hasil penelitian yang didapat

kemungkinan disebabkan karena sampel yang dipisahkan masih berupa ekstrak

sehingga masih mengandung senyawa pengotor yang mengganggu selama proses

penentuan sidik jari fitokimia untuk golongan senyawa polifenol.

 31

(A)

(B)

(C)
Gambar 6. Profil kromatogram hasil densitometer ekstrak etanol daun ubi jalar
varietas Sawentar dengan fase diam silica gel GF254 dan fase gerak
toluene : etil asetat (93:7) pada panjang gelombang (A) 210 nm, (B)
330 nm, dan (C) 366 nm.
Keterangan:
Angka pada gambar profil kromatogram hasil densitometer di atas merupakan nomor dari bercak
yang disesuaikan dengan nomor bercak Tabel 6 dan apabila angka yang didapat tidak tercantum
pada gambar di atas, maka bercak tersebut tidak
 32

Gambar 7. Spektrum kromatogram pada bercak ke-1 menghasilkan positif

polifenol dengan Rf 0,01.

4.5.3 Sidik Jari Fitokimia Golongan Tanin

Penentuan sidik jari fitokimia dari ekstrak etanol daun ubi jalar varietas

Sawentar untuk golongan senyawa tanin digunakan fase diam yaitu silika gel

GF254 dan fase gerak yaitu toluene : etil asetat (93:7). Untuk mengetahui golongan

senyawa tanin pada plat KLT, digunakan pereaksi pendeteksi yaitu uap amonia

dan FeCl3 2%. Hasil positif terhadap golongan tanin dengan pereaksi pendeteksi

uap amonia akan memberikan warna ungu di bawah sinar UV 366 nm dan hasil

positif terhadap golongan polifenol dengan pereaksi pendeteksi FeCl3 2% akan

memberikan warna biru hingga coklat bawah di sinar putih (Robinson, 1991).

Untuk gambar dari kromatogram di bawah sinar UV 254 nm, UV 366 nm, sinar

putih, dan setelah disemprot dengan pereaksi pendeteksi dapat dilihat pada

gambar 8.
 33

1
A B C D E
Gambar 8. Sidik jari fitokimia ekstrak etanol daun ubi jalar varietas Sawentar
setelah dielusi dengan fase diam silica gel GF254 dan fase gerak etil
toluene : etil asetat (93:7). di bawah sinar UV 254 nm (A), sinar UV
366 nm (B), sinar putih (C), setelah direaksikan dengan pereaksi
pendeteksi uap amonia di bawah UV 366 nm (D), setelah disemprot
dengan pereaksi pendeteksi FeCl3 2% di sinar putih (E)

Keterangan:
Angka pada gambar kromatogram di atas merupakan nomor dari bercak yang
disesuaikan dengan nomor bercak pada tabel 7 dan apabila ada angka yang tidak
tercantum pada gambar di atas, maka bercak tersebut tidak tampak.

Profil kromatogram hasil pengamatan secara visual dibawah sinar putih,

sinar UV 254 nm, sinar UV 366 nm, dan setelah disemprot dengan pereaksi

pendeteksi uap amonia dan FeCl3 2% pada plat KLT maka data berupa Rf dan

warna bercak yang terjadi dapat dilihat pada tabel 7.

 34

Tabel 7. Hasil Identifikasi Senyawa Tanin

Nilai Rf sesuai
dengan Hasil Pengamatan Visual
Densitometer
Bercak Setelah
Sinar
Ke- dideteksi Setelah
210 336 366 Sinar Sinar UV UV
dengan disemprot
nm nm nm putih 254 nm 366
uap FeCl3 2%
nm
ammonia
0,0 Kunin lembayung
1 - 0,01 biru ungu* hitam*
1 g gelap
2 - 0,23 - - - - - -
2 - - - - - - - -
0,7
3 0,76 - - - - - -
6
Keterangan:
*= Diduga mengandung golongan senyawa tanin

Menurut Robinson (1991), terjadinya bercak berwarna hitam sinar putih

setelah direaksikan dengan FeCl3 2%, dan terjadinya bercak berwarna ungu di

bawah UV 366 nm setelah direaksikan dengan uap amonia menandakan adanya

golongan tanin pada plat KLT. Berdasarkan tabel 7, bercak ke-1 menghasilkan

positif dengan Rf masing-masing 0,01. Hal ini menunjukkan pada bercak tersebut

kemungkinan mengandung golongan senyawa tanin. Profil kromatogram hasil

densitometer dapat dilihat pada gambar sekilan. Profil kromatogram pada panjang

gelombang 210 nm memberikan 2 puncak, pada panjang gelombang 336 nm

memberikan 2 puncak, dan pada panjang gelombnag 366 nm memberikan 2

puncak. Bentuk spektrum dari bercak ke-1 dapat dilihat pada gambar 10.
 35

(A)

(B)

(C)

Gambar 9. Profil kromatogram hasil densitometer ekstrak etanol daun ubi jalar
varietas Sawentar dengan fase diam silica gel GF254 dan fase gerak
toluene : etil asetat (93:7) pada panjang gelombang (A) 210 nm, (B)
336 nm, dan (C) 366 nm.

Keterangan:
Angka pada gambar profil kromatogram hasil densitometer di atas merupakan nomor dari bercak
yang disesuaikan dengan nomor bercak Tabel 7 dan apabila angka yang didapat tidak tercantum
pada gambar di atas, maka bercak tersebut tidak tampak.
 36

Gambar 10. Spektrum kromatogram pada bercak ke-1 menghasilkan positif tanin

dengan Rf 0,01.

Menurut penelitian Robinson (1991), panjang gelombang maksimum dari

golongan senyawa tanin adalah pada 280 nm. Jika dibandingkan dengan panjang

gelombang maksimum dari bercak ke-1 yaitu pada 336 nm memberikan panjang

gelombang maksimum yang lebih panjang. Tidak tepatnya nilai panjang

gelombang maksimum pada pustaka dengan hasil penelitian yang didapat

kemungkinan disebabkan karena sampel yang dipisahkan masih berupa ekstrak

sehingga masih mengandung senyawa pengotor yang mengganggu selama proses

penentuan sidik jari fitokimia untuk golongan senyawa tanin.

4.5.4 Sidik Jari Fitokimia Golongan Saponin

Penentuan sidik jari fitokimia dari ekstrak etanol daun ubi jalar varietas

Sawentar untuk golongan senyawa saponin digunakan fase diam yaitu silika gel

GF254 dan fase gerak yaitu kloroform : methanol : akuades (70:30:4). Untuk

mengetahui golongan senyawa saponin pada plat KLT, digunakan pereaksi

pendeteksi yaitu Lieberman-Buchard dan vanillin 1%-asam posfat. Pereaksi

 37

pendeteksi Lieberman-Buchard akan memberikan hasil positif terhadap golongan

saponin jika memberikan warna hijau hingga biru dengan pemanasan 90 oC selama

10 menit di sinar UV 366 nm dan pereaksi pendeteksi vanillin 1%-asam posfat

akan memberikan hasil positif terhadap golongan saponin jika memberikan warna

abu hingga biru dengan pemanasan 120oC selama 10-20 menit di sinar UV 366

nm (Monghimipour and Handali, 2015). Untuk gambar dari kromatogram di

bawah sinar UV 254 nm , UV 366 nm, sinar putih, dan setelah disemprot dengan

pereaksi pendeteksi dapat dilihat pada gambar 11.

7
6

3
2
1
A B C D E
Gambar 11. Sidik jari fitokimia ekstrak etanol daun ubi jalar varietas Sawentar
setelah dielusi dengan fase diam silica gel GF254 dan fase gerak
kloroform : metanol : akuades (70:30:4). di bawah sinar UV 254 nm
(A), sinar UV 366 nm (B), sinar putih (C), setelah disemprot dengan
pereaksi pendeteksi Lieberman-Buchard di bawah UV 366 nm (D),
setelah disemprot dengan pereaksi pendeteksi vanillin 1%-asam
posfat di bawah UV 366 nm (E)
Keterangan:
Angka pada gambar kromatogram di atas merupakan nomor dari bercak yang disesuaikan dengan
nomor bercak pada Tabel 8 dan apabila ada angka yang tidak tercantum pada
gambar di atas, maka bercak tersebut tidak tampak.
 38

Profil kromatogram hasil pengamatan secara visual dibawah sinar putih,

sinar UV 254 nm, sinar UV 366 nm, dan setelah disemprot dengan pereaksi

pendeteksi uap amonia dan FeCl3 2% pada plat KLT maka data berupa Rf dan

warna bercak yang terjadi dapat dilihat pada tabel 8.

Tabel 8. Hasil Identifikasi Senyawa Saponin

Nilai Rf sesuai
dengan Hasil Pengamatan Visual
Densitometer
Bercak Setelah
Sinar Setelah
Ke- disempro
210 325 366 Sinar Sinar UV UV dideteksi
t vanillin
nm nm nm putih 254 nm 366 Lieberman
1%-asam
nm -Buchard
posfat
Lembayung
1 0,03 0,03 0,03 Kuning Biru biru* biru*
gelap
Lembayung
2 0,08 0,08 0,08 Kuning Biru biru* biru*
gelap
Lembayung
3 0,12 0,12 0,12 Kuning Biru - biru
gelap
4 0,19 0,19 0,19 - - - - -
5 0,33 0,33 - - - -
6 0,44 0,44 0,44 - - - biru -
Lembayung
7 0,54 0,54 0,54 - Biru - biru
gelap
8 0,56 0,56 0,56 - - - - -
9 0,76 0,76 - - - - - -
10 0,87 0,87 0,87 - - - - -
Keterangan:
*= Diduga mengandung golongan senyawa saponin

Menurut Moghimipour and Handali (2015), terjadinya bercak berwarna

hijau hingga biru dengan pemanasan 90 oC selama 10 menit di sinar UV 366 nm

setelah diberikan Liebermann-Buchard dan terjadinya bercak berwarna abu

hingga biru dengan pemanasan 120oC selama 10-20 menit di sinar UV 366 nm

setelah diberikan vanilin 1%-asam posfat menandakan adanya golongan senyawa

saponin pada lempengan KLT. Berdasarkan tabel 8, bercak ke-1, ke-2, dan ke-3

menghasilkan positif dengan Rf masing-masing 0,03, 0,08, dan 0,12. Hal ini
 39

menunjukkan pada bercak tersebut kemungkinan mengandung golongan senyawa

saponin. Profil kromatogram hasil densitometer dapat dilihat pada gambar sekilan.

Profil kromatogram pada panjang gelombang 210 nm memberikan 10 puncak,

pada panjang gelombang 336 nm memberikan 10 puncak, dan pada panjang

gelombnag 366 nm memberikan 8 puncak. Bentuk spektrum dari bercak ke-1

dapat dilihat pada gambar 13.

Menurut penelitian Magalhaes, et al. (2003) panjang gelombang

maksimum dari golongan senyawa saponin adalah pada 206 nm. Jika

dibandingkan dengan panjang gelombang maksimum dari bercak ke-1 dan ke-2

yaitu pada 325 nm memberikan panjang gelombang maksimum yang lebih

panjang. Tidak tepatnya nilai panjang gelombang maksimum pada pustaka dengan

hasil penelitian yang didapat kemungkinan disebabkan karena sampel yang

dipisahkan masih berupa ekstrak sehingga masih mengandung senyawa pengotor

yang mengganggu selama proses penentuan sidik jari fitokimia untuk golongan

senyawa saponin.
 40

(A)

(B)

(C)

Gambar 12. Profil kromatogram hasil densitometer ekstrak etanol daun ubi jalar
varietas Sawentar dengan fase diam silica gel GF254 dan fase gerak
kloroform : methanol : akuades (70:30:4) pada panjang gelombang
(A) 210 nm, (B) 336 nm, dan (C) 366 nm.
Keterangan:
Angka pada gambar profil kromatogram hasil densitometer di atas merupakan nomor dari bercak
yang disesuaikan dengan nomor bercak Tabel 8 dan apabila angka yang didapat tidak tercantum
pada gambar di atas, maka bercak tersebut tidak tampak.
 41

Gambar 13. Spektrum kromatogram pada bercak ke-1 dan ke-2 menghasilkan
positif saponin dengan Rf masing-masing 0,03 dan 0,08

4.5.5 Sidik Jari Fitokimia Golongan Triterpenoid

Penentuan sidik jari fitokimia dari ekstrak etanol daun ubi jalar varietas

Sawentar untuk golongan senyawa triterpenoid digunakan fase diam yaitu silika

gel GF254 dan fase gerak yaitu kloroform : metanol (10:1). Untuk mengetahui

golongan senyawa triterpenoid pada plat KLT, digunakan pereaksi pendeteksi

yaitu vanillin 1%-asam sulfat dan anisaldehid-asam sulfat. Pereaksi pendeteksi

vanillin 1%-asam sulfat akan memberikan hasil positif terhadap golongan

trterpenoid jika memberikan warna ungu setelah dipanaskan pada suhu 110oC

selama 5-10 diamati di sinar putih atau UV 366 dan pereaksi pendeteksi

anisaldehid-asam sulfat akan memberikan hasil positif terhadap golongan

triterpenoid jika memberikan warna merah keunguan di UV 366 setelah

dipanaskan pada suhu 100oC selama 5-10 menit di bawah sinar UV 366 nm

Harbone (1987). Untuk gambar dari kromatogram di bawah sinar UV 254 nm ,

UV 366 nm, sinar putih, dan setelah disemprot dengan pereaksi pendeteksi dapat

dilihat pada gambar 14.

 42

2
1
A B C D E
Gambar 14.Sidik jari fitokimia ekstrak etanol daun ubi jalar varietas Sawentar
setelah dielusi dengan fase diam silica gel GF254 dan fase gerak etil
kloroform : metanol (10:1). di bawah sinar UV 254 nm (A), sinar
UV 366 nm (B), sinar putih (C), setelah disemprot dengan pereaksi
pendeteksi vanillin 1%-asam sulfatdi bawah UV 366 nm (D), setelah
disemprot dengan pereaksi pendeteksi anisaldehid-asam sulfat di
sinar putih (E)

Keterangan:
Angka pada gambar kromatogram di atas merupakan nomor dari bercak yang disesuaikan dengan
nomor bercak pada Tabel 9 dan apabila ada angka yang tidak tercantum pada gambar di atas, maka
bercak tersebut tidak tampak.

Profil kromatogram hasil pengamatan secara visual dibawah sinar putih,

sinar UV 254 nm, sinar UV 366 nm, dan setelah disemprot dengan pereaksi

pendeteksi vanillin 1%-asam sulfat anisaldehid-asam sulfat pada plat KLT maka

data berupa Rf dan warna bercak yang terjadi dapat dilihat pada tabel 9.
 43

Tabel 9. Hasil Identifikasi Senyawa Triterpenoid

Nilai Rf sesuai
dengan Hasil Pengamatan Visual
Densitometer
Setelah
Bercak dideteksi Setelah
Sinar
Ke- dengan disemprot
210 264 366 Sinar Sinar UV UV
vanillin anisaldehid
nm nm nm putih 254 nm 366
1%- -asam
nm
asam posfat
sulfat
Lembayung
1 0,01 0,01 0,01 Kuning Biru - biru
gelap
2 - 0,03 0,03 - - Biru Ungu -
3 0,08 0,08 0,08 - - - - -
4 - 0,23 0,23 - - - ungu* merah*
5 0,31 0,31 -
6 - - 0,60
7 0,70 0,70 0,70
8 0,96 - -
Keterangan:
*= Diduga mengandung golongan senyawa triterpenoid

Menurut Harbone (1987), terjadinya bercak berwarna ungu setelah

dipanaskan pada suhu 110oC selama 5-10 diamati di sinar putih atau UV 366

setelah diberikan vanillin 1%-asam sulfat dan terjadinya bercak berwarna merah

keunguan di UV 366 setelah dipanaskan pada suhu 100oC selama 5-10 menit di

bawah sinar UV 366 nm setelah diberikan anisaldehid-asam sulfat menandakan

adanya golongan senyawa triterpenoid pada lempengan KLT. Berdasarkan tabel 9,

bercak ke-4 menghasilkan positif dengan Rf masing-masing 0,7. Hal ini

menunjukkan pada bercak tersebut kemungkinan mengandung golongan senyawa

triterpenoid. Profil kromatogram hasil densitometer dapat dilihat pada gambar

sekilan. Profil kromatogram pada panjang gelombang 210 nm memberikan 5

puncak, pada panjang gelombang 336 nm memberikan 6 puncak, dan pada

panjang gelombnag 366 nm memberikan 6 puncak. Bentuk spektrum dari bercak

ke-4 dapat dilihat pada gambar 16.

 44

(A)

(B)

(C)
Gambar 15. Profil kromatogram hasil densitometer ekstrak etanol daun ubi jalar
varietas Sawentar dengan fase diam silica gel GF254 dan fase gerak
toluene : etil asetat (93:7) pada panjang gelombang (A) 210 nm, (B)
264 nm, dan (C) 366 nm.
Keterangan:
Angka pada gambar profil kromatogram hasil densitometer di atas merupakan nomor dari bercak
yang disesuaikan dengan nomor bercak Tabel 9 dan apabila angka yang didapat tidak tercantum
pada gambar di atas, maka bercak tersebut tidak tampak.
 45

Gambar 16. Spektrum kromatogram pada bercak ke-4 menghasilkan positif

polifenol dengan Rf masing-masing 0,7.

Menurut penelitian Jain and Agrawal (2008) dan Mekuria, et al. (2005),

panjang gelombang maksimum dari golongan senyawa triterpenoid adalah pada

210 nm. Jika dibandingkan dengan panjang gelombang maksimum dari bercak ke-

4 yaitu pada 264 nm memberikan panjang gelombang maksimum yang lebih

panjang. Tidak tepatnya nilai panjang gelombang maksimum pada pustaka dengan

hasil penelitian yang didapat kemungkinan disebabkan karena sampel yang

dipisahkan masih berupa ekstrak sehingga masih mengandung senyawa pengotor

yang mengganggu selama proses penentuan sidik jari fitokimia untuk golongan

senyawa triterpenoid.
 46

BAB V

KESIMPULAN DAN SARAN

5.1 Kesimpulan

Sidik jari fitokimia golongan flavonoid menghasilkan 12 puncak senyawa.

Puncak yang diduga senyawa flavonoid berada pada Rf 0,48; 0,73; dan 0,84. Sidik

jari fitokimia golongan polifenol menghasilkan 3 puncak senyawa. Puncak yang

diduga senyawa polifenol berada pada Rf 0,01. Sidik jari fitokimia golongan tanin

menghasilkan 3 puncak senyawa. Puncak yang diduga senyawa tanin berada pada

Rf 0,01. Sidik jari fitokimia golongan saponin menghasilkan 10 puncak senyawa.

Puncak yang diduga senyawa saponin berada pada Rf 0,03 dan 0,08. Sidik jari

fitokimia golongan triterpenoid menghasilkan 5 puncak senyawa. Puncak yang

diduga senyawa triterpenoid berada pada Rf 0,70.

5.2 Saran

Diperlukan penelitian lebih lanjut untuk mengetahui jenis senyawa yang

dapat digunakan sebagai marker dari ekstrak daun ubi jalar varietas Sawentar.

46
 47

DAFTAR PUSTAKA

Balitkabi. 2016, Deskripsi Varietas Unggul Ubi Jalar 1997-2016, Balai Penelitian
Tanaman Aneka Kacang dan Umbi, Malang.

Ciulei, J., 1984,Metodology for Analysis of Vegetable and Drugs, Faculty of

Pharmacy, Bucharest.

Depkes RI. 1995, Farmakope Indonesia, Edisi IV, Departemen Kesehatan RI,
Jakarta.

Depkes RI. 2000, Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat, Cetakan
Pertama, Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan, Jakarta.

Depkes RI. 2010. Farmakope Herbal Indonesia Edisi I. Jakarta: Departemen

Kesehatan Republik Indonesia.

Endarini, L. H. 2016, Farmakognosi dan Fitokimia, Badan Pengembangan dan

Pemberdayaan Sumber Daya Manusia Kesehatan, Jakarta.

Falleh H., Riadh K., Marrie-Elizabeth L., Chedly A. and Christian M. 2012,
Ultrasound-Assisted Extraction: Effect of Extraction Time and Solvent
Power on The Levels of Polyphenols and Antioxidant Activity of
Mesembryanthemum Edule L. Aizoaceae Shoots, Tropical Journal of
Pharmaceutical Research, 11: 243-249

Harborne, J.B. 1987, Metode Fitokimia, Edisi ke Dua, ITB, Bandung

Jain, P.K. and Agrawal, R.K. 2008. High Performance Liquid Chromatographic
Analysis of Asiaticoside in Centella asiatica (L.) Urban. Chiang Mai J.
Sci. 35(3): 521-525.

Jones, W.P. dan Kinghorn, A.D. 2006, Extraction of plant secondary metabolites,
In: Sarker, S.D., Latif, Z. dan Gray, A.I., eds. Natural Products Isolation.
2nd Ed., Humana Press, New Jersey.

Li, F., Li, Q., Gao, D., Peng, Y. 2009, The Optimal Extraction Parameters and
Anti-Diabetic Activity of Flavonoids from Ipomoea batatas Leaf, Afr.
Journal Trad, 6: 195-202.

Liang., Xi-Zeng., P. Xie and K. Chen. 2004. Review: Quality Control of Herbal
Medicines. Journal of Chromatography. 812: 53-70.

Mabry, T.J., Markham, K .R., Thomas, M.B., 1970, The Systematic and
Identification of Flavonoid, Springer-Verlag, New York.

47
 48

Magalhaes, A.F., Goulart, A.M., Santos, C.C., Serrano, D.R., Magalhaes, E.M.Z.,
Magalhaes, E.G., and Magalhaes, L.A. 2003. Saponin from Swartzia
langsdorffii: Biological Activities. Mem Inst Oswaldo Cruz, Rio de
Jeneiro, Vol. 98(5): 713-718

Markham, K.R., 1988, Cara Mengidentifikasi Flavonoid, Penerbit ITB, Bandung.

Mekuria, D.B., Kashiwagi, T., Tebayashi, S., and Kim, C. 2005. Cucurbitane
Triterpenoid Oviposition Deterrent from Momordica charantia to The
Leafminer; Liriomyza trifolii. Biosci. Biotechnol. Biochem., 69 (9), 1706-
1710.
Moghimipour, E., Sadaghi-Nejad B., Handali S., Ameri A., Ramezani Z., Azemi
M.E. 2015, In Vitro Screening of Anti-Candida Activity of Saponins
Extracted from Glycyrrhiza Glabra and Quillaja Saponaria, Asian Journal
of Pharmaeutical and Clinical Research, 7: 160-162.

Reich, E. and A. Blatter. 2004, Modern TLC a Key Technique of Identification

and Quality Control of Botanical and Dietary Supplements, Journal
Association of Official Analytical Chemists International. 1: 16-17.

Robinson, T. 1991, Kandungan Organnik Tumbuhan Obat Tinggi, Diterjemahkan

oleh Kokasih Padmawinata, ITB, Bandung.

Rukmana, R. 1997, Ubi Jalar Budi Daya dan Pascapanen, Kanisius, Yogyakarta.

Saxena M., Jyoti S., Rajeev N., Dharmendra S. and Abhishek G. 2013,
Phytochemistry of Medicinal Plant, Journal of Pharmacognosy and
Phytochemistrys, 1: 168-182

Wagner, H. 1984, Plant Drug analysis a Thin Layer Chromatography Atlas,

Springer-Verlag, Berlin.

Wicaksono, L. A., Yunianta, and Tri D. W. 2016, Anthocyanin Extraction from

Purple Sweet Potato Cultivar Antin-3 (Ipomoea batatas L.) using
Maceration, Microwave Assisted Extraction, Ultrasonic Assisted
Extraction and Their Application as Anti-Hyperglycemic Agents in
Alloxan-Induced Wistar Rats, International Journal of Pharm Tech
Research, 9: 181-192.

Zhao, Z. And T. Li. 2015, Extraction and Purifucation of Pigment From Purple
Sweet Potato Wine Vinase, Advance Journal of Food Science and
Technologi, 7: 298-301.

48
 49

Lampiran 1. Pereaksi Pendeteksi Penentuan Sidik Jari Fitokimia

No. Golongan Jenis Pereaksi Hasil Positif

Senyawa Pendeteksi
a. Berwarna kuning kehiajaun
a. Uap Amonia (a)
di sinar putih
b. AlCl3 (b)
b. Berwarna kuning disinar
1 Flavonoid c. Reagen
putih
Sitoborat(b)
c. Berwarna biru di bawah UV
366
a. Berwarna ungu dibawah UV
a. Uap Amonia (e)
366 nm
2 Tanin b. FeCl3 2% (d)
b. Berwarna biru hingga coklat
disinar putih
a. Bercak berwarna hitam
a. FeCl3 2% (d)
disinar putih
3 Polifenol b. Folin (e)
b. Berwarna biru kehitaman
disinar putih
a. Berwarna ungu setelah
a. Vanilin 1% - dipanaskan pada suhu 110oC
Asam Sulfat P selama 5-10 diamati di sinar
(f)
putih atau UV 366
4 Triterpenoid
b. Anisaldehid- b. Bercak berwarna merah
asam sulfat (f) keunguan di UV 366 setelah
dipanaskan pada suhu 100oC
selama 5-10 menit
a. Bercak berwarna hijau hingga
a. Liebermann-
biru dengan pemanasan 90oC
Buchard (c)
selama 10 menit
5 Saponin b. Vanilin 1%-
b. Bercak berwarna abu hingga
asam fospat (c)
biru dengan pemanasan
120oC selama 10-20 menit

Keterangan : (a) Markham, 1988; (b) Mabry et.al., 1970; (c) Moghimipour and
Handali 2015; (d) Robinson, 1991; (e) Santos et.al., 1978; (f)
Wagner, 1984.

49
 50

Lampiran 2. Cara Pembuatan Fase Gerak

a. Fase Gerak Flavonoid (Etil Asetat : Asam Formit : Asam Asetat : Air

(100:11:11:26))

Dipipet 16,9 mL etil asetat, dimasukkan ke dalam labu ukur 25 mL.

Ditambahkan 1,85 mL asam formit, 1,85 mL asam asetat, dan 4,4 mL air ke

dalam labu ukur tersebut. Setelah itu digojog hingga homogen.

b. Fase Gerak Polifenol dan Tanin (Toluena : Etil ASetat (93:7))

Dipipet 23,3 mL toluena, dimasukkan ke dalam labu ukur 25 mL.

Ditambahkan 1,75 mL etil asetat ke dalam labu ukur tersebut dan digojog

hingga homogen.

c. Fase Gerak Triterpenoid dan Steroid (Kloroform Metanol (10:1))

Dipipet 22,8 mL kloroform, dimasukkan ke dalam labu ukur 25 mL.

Ditambahkan metanol 2,3 mL ke dalam labu ukur tersebut dan digojog

hingga homogen.

d. Fase Gerak Saponin (Kloroform : Metanol : Akuades (70:30:4))

Dipipet 16,9 mL kloroform, dimasukkan ke dalam labu ukur 25 mL.

Ditambahkan metanol 7,3 mL dan 0,96 akuades ke dalam labu ukur tersebut

dan digojog hingga homogen.

e. Fase Gerak Alkaloid (Toluena : Etil Asetat : Dietil amin (70:20:10))

Dipipet 17,5 mL toluena, dimasukkan ke dalam labu ukur 25 mL.

Dimasukkan 5 mL etil asetat dan 2,5 mL dietilamin ke dalam labu ukur

tersebut dan digojog hingga homogen.

50
 51

f. Fase Gerak Minyak Atsiri (N-Heksan : Etil Asetat (4:6))

Dipipet 10 mL n-heksan, dimasukkan ke dalam labu ukur 25 mL.

Dimasukkan 15 mL etil asetat ke dalam labu ukur tersebut dan digojog

hingga homogen.

51
 52

Lampiran 3. Cara Pembuatan Pereaksi Warna

a. Larutan AlCl3

Sebanyak 5 gram AlCl3 dilarutkan dalam metanol sebanyak 100 mL dan

digojog hingga homogen (Kemenkes RI, 2010).

b. Reagen Sitroborat

Sebanyak 5 gram asam sitrat P dan 5 gram asam borat P dilarutkan dalam

metanol hingga 100 mL. Kemudian digojog hingga homogen (Kemenkes

RI, 2010).

c. Larutan FeCl3

Sebanyak 10 gram FeCl3 dilarutkan dalam metanol sebanyak 100 mL dan

digojog hingga homogen (Kemenkes RI, 2010).

d. Reagen Folin-Ciocalteu

Sejumlah 1,25 mL larutan Folin-Ciocalteu dimasukkan ke dalam labu ukur

25 mL dan ditambahakn air hingga tanda batas. Kemudian digojog hingga

homogen.

e. Reagen Vanilin-Asam Sulfat

Sebanyak 5 gram vanilin P ditambahkan dengan asam sulfat 10% P hingga

100 mL (Kemenkes RI, 2010).

f. Reagen Anisaldehid-Asam Sulfat

Sejumlah 0,5 mL anisaldehid P, dimasukkan ke dalam labu ukur 100 mL.

Ditambahkan 10 mL asam asetat glasial P, 85 mL metanol P dan 5 mL asam

sulfat pekat P (Kemenkes RI, 2010).

52
 53

g. Reagen Liebermann Bouchard

Sejumlah 5 mL asam sulfat P dimasukkan ke dalam labu ukur 100 mL.

Dimasukkan etanol 95% ke dalam labu tersebut. Ditambahkan secara hati-

hati 5 mL asam asetat anhidrat ke dalam campuran tersebut, didinginkan

(Kemenkes RI, 2010).

h. Reagen Dragendorf

Sejumlah 20 mL larutan bismuth nitrat P 40% b/v dicampurkan dalam asam

nitrat dengan 50 mL larutan kalium iodida P 54,4% b/v. Diambkan sampai

memisah sempurna. Diambil larutan jernih dan encerkan dengan air

secukupnya hingga 100 mL (Kemenkes RI, 2010).

i. Reagen Wagner

Sebanyak 1,27 g I2 dan 2 g KI dilarutkan dalam 5 mL akuades. Larutan

kemudian diencerkan dengan akuades hingga 100 mL.

53
 54

Lampiran 4. Surat keterangan determinasi tanaman Ubi Jalar Varietas Sawentar

54
 55

Lampiran 5. Sampel Daun Ubi Jalar Varietas Sawentar

Lampiran 6. Hasil Ekstraksi dengan Metode Sonikasi

55
 56

Lampiran 7. Hasil Uji Skrining Fitokimia

Uji Alkaloid

Uji Steroid dan Triterpenoid

56
 57

Uji Saponin

Uji Polifenol dan Tanin

57
 58

Uji Flavonoid

Uji Minyak Atsiri

58