PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

PENETAPAN KADAR KAPSAISIN DAN UJI AKTIVITAS

ANTIOKSIDAN FRAKSI TOLUEN-ETIL ASETAT BUAH CABAI RAWIT
(Capsicum frutescens L.) DENGAN METODE 2,2-DIFENIL-1-
PIKRILHIDRAZIL (DPPH)

SKRIPSI

Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat

Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)
Program Studi Farmasi

Oleh :

Regina Hiacinta Eva Angelista

NIM : 138114096

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SANATA DHARMA

YOGYAKARTA

2016
 PENETAPAN KADAR KAPSAISIN DAN UJI AKTIVITAS
ANTIOKSIDAN FRAKSI TOLUEN-ETIL ASETAT BUAH CABAI RAWIT
(Capsicum frutescens L.) DENGAN METODE 2,2-DIFENIL-1-
PIKRILHIDRAZIL (DPPH)

SKRIPSI

Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat

Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)
Program Studi Farmasi

Oleh :

Regina Hiacinta Eva Angelista

NIM : 138114096

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SANATA DHARMA

YOGYAKARTA

2016

i
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

ii
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

iii
 PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

HALAMAN PERSEMBAHAN

- Anonim -

Kupersembahkan karya ini untuk :

Tuhan Yesus Kristus
Papi Agus, Mami Lelly dan Adikku Yosha
Sahabat-sahabatku dan Almamaterku

iv
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

v
 PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

PRAKATA

Puji Syukur kepada Tuhan atas segala rahmat, berkat dan penyertaan-
Nya kepada penulis sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul
“PENETAPAN KADAR KAPSAISIN DAN UJI AKTIVITAS
ANTIOKSIDAN FRAKSI TOLUEN-ETIL ASETAT BUAH CABAI RAWIT
(Capsicum frutescens L.) DENGAN METODE 2,2-DIFENIL-1-
PIKRILHIDRAZIL (DPPH)” ini dengan baik sebagai syarat memperoleh gelar
Sarjana Strata 1 Program Studi Ilmu Farmasi (S.Farm.).
Dalam proses penyusunan hingga penyelesaian skripsi ini, penulis tidak
lepas dari bantuan dan dukungan dari berbagai pihak. Maka pada kesempatan ini
dengan segala kerendahan hati penulis mengucapkan terima kasih yang sebesar-
besarnya kepada:
1. Ibu Aris Widayati, M.Si., Ph.D., Apt. selaku Dekan Fakultas Farmasi
Universitas Sanata Dharma Yogyakarta yang telah memberikan
kesempatan kepada penulis untuk melakukan penelitian ini.
2. Ibu Dr. Erna Tri Wulandari, Apt. selaku Dosen Pembimbing yang telah
memberikan bantuan dan bimbingan selama pembuatan proposal skripsi
hingga penulisan naskah skripsi dengan kesabaran dan penuh perhatian.
3. Bapak Florentinus Dika Octa Riswanto, M.Sc. selaku Dosen Penguji yang telah
memberikan bimbingan, kritik dan saran sehingga skripsi ini dapat
terselesaikan.
4. Ibu Dr. Yustina Sri Hartini, Apt. selaku Dosen Penguji yang telah memberikan
bimbingan, kritik dan saran sehingga skripsi ini dapat terselesaikan.
5. Ibu Dita Maria Virginia, S.Farm., M.Sc., Apt. selaku Dosen Pembimbing
Akademik yang telah memberikan bimbingan dan saran.
6. Seluruh staff laboran Universitas Sanata Dharma terutama Mas Yohanes
Wagiran yang telah banyak memberi bantuan selama pengerjaan skripsi.
7. Tim Skripsi Selalu Hepi (Kevin Giovedi, Asti Aprilia Putri dan Edwin
Tesalonika) atas kerjasama, dukungan dan semangatnya selama pengerjaan
skripsi.

vi
8. Teman seperjuanganku (Cindy, Indri, Monita, Ronny) dan teman
sepermainanku (Ririn, Lia, Sara, Jessy dan Tika) atas saran, dukungan dan
semangatnya.
9. Teman-teman angkatan 2013 atas semua dukungannya dalam pengerjaan dan
penyelesaian skripsi
10. Semua pihak yang telah memberikan dukungan dan bantuan yang tidak dapat
disebutkan satu persatu
Akhir kata, penulis menyadari bahwa masih banyak kekurangan dalam
skripsi ini. Oleh karena itu, dengan segenap kerendahan hati, penulis
mengharapkan saran dan kritik yang membangun demi penyempurnaan skripsi
ini. Semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi perkembangan ilmu pengetahuan
selanjutnya khususnya dlam bidang farmasi dan kesehatan

Yogyakarta, 14 November 2016

Penulis
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

viii
 PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

DAFTAR ISI

HALAMAN JUDUL.................................................................................................i
HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING......................................................ii
HALAMAN PENGESAHAN................................................................................iii
HALAMAN PERSEMBAHAN.............................................................................iv
LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI...................................v
PRAKATA..............................................................................................................vi
PERNYATAAN KEASLIAN KARYA...............................................................viii
DAFTAR ISI...........................................................................................................ix
DAFTARTABEL.....................................................................................................x
DAFTAR GAMBAR..............................................................................................xi
DAFTAR LAMPIRAN..........................................................................................xii
ABSTRAK............................................................................................................xiii
ABSTRACT............................................................................................................xiv
PENDAHULUAN....................................................................................................1
METODE PENELITAN..........................................................................................2
Alat dan Bahan...........................................................................................2
Determinasi Tanaman................................................................................2
Pembuatan Simplisia..................................................................................2
Ekstraksi.....................................................................................................3
Pembuatan Larutan Standar Kapsaisin......................................................3
Fraksinasi...................................................................................................3
Validasi Metode Analisis Penetapan Kadar...............................................3
Penetapan Kadar Kapsaisin dalam Fraksi..................................................4
Uji Aktivitas Antioksidan..........................................................................4
Perhitungan Nilai IC50........................................................................................................................5
HASIL DAN PEMBAHASAN................................................................................5
KESIMPULAN DAN SARAN..............................................................................11
DAFTAR PUSTAKA............................................................................................11
LAMPIRAN...........................................................................................................13
BIOGRAFI PENULIS...........................................................................................39

ix
 DAFTAR TABEL
Tabel I. Hasil pengukuran akurasi dan presisi metode penetapan kadar..............8
Tabel II. Hasil penetapan kadar kapsaisin dalam fraksi.........................................9
Tabel III. Hasil perhitungan IC50 standar kapsaisin dan sampel fraksi...............10
 DAFTAR GAMBAR
Gambar 1. Hasil elusi ekstrak etanol cabai rawit dan standar kapsaisin.................7
Gambar 2. Kurva hubungan konsentrasi dengan absorbansi standar kapsaisin......8
Gambar 3. Mekanisme kapsaisin dengan radikal DPPH......................................11
Gambar 4. Buah cabai rawit segar........................................................................15
Gambar 5. Buah cabai rawit kering.......................................................................15
Gambar 6. Serbuk simplisia buah cabai rawit.......................................................15
Gambar 7. Ekstrak etanol buah cabai rawit...........................................................15
Gambar 8. Hasil KLT preparatif ekstrak etanol cabai rawit dan standar
kapsaisin..............................................................................................15
Gambar 9. Sampel fraksi toluen- etil asetat ekstrak etanol buah cabai rawit
Replikasi 1, Replikasi 2 dan Replikasi 3.............................................16
Gambar 10.Hasil elusi ekstrak etanol cabai rawit dan standar kapsaisin...............21
Gambar 11.Hasil uji aktivitas antioksidan etanol, standar kapsaisin, ekstrak
etanol cabai rawit dan fraksi toluen-etil asetat ekstrak etanol
cabai rawit...........................................................................................24
 DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1. Surat keterangan hasil determinasi tanaman..................................13
Lampiran 2. Certificate of Analysis standar kapsaisin........................................14
Lampiran 3. Gambar sampel penelitian..............................................................15
Lampiran 4. Penimbangan sampel dan perhitungan % rendemen......................16
Lampiran 5. Perhitungan pembuatan larutan seri kapsaisin untuk kurva
baku penetapan kadar.....................................................................18
Lampiran 6. Hasil scanning pelarut kapsaisin (etanol).......................................19
Lampiran 7. Hasil scanning optimasi λ maksimum kapsaisin............................19
Lampiran 8. Pengukuran serapan larutan seri kapsaisin.....................................20
Lampiran 9. Perhitungan Rf................................................................................20
Lampiran 10. Perhitungan konsentrasi fraksi........................................................21
Lampiran 11. Pengukuran serapan kapsaisin dan perhitungan konsentrasi
kapsaisindalam fraksi pengenceran 10x.........................................22
Lampiran 12. Perhitungan penetapan kadar..........................................................23
Lampiran 13. Hasil uji kualitatif aktivitas antioksidan.........................................24
Lampiran 14. Optimasi metode uji aktivitas antioksidan......................................25
Lampiran 15. Uji aktivitas antioksidan standar kapsaisin.....................................27
Lampiran 16. Uji aktivitas antioksidan sampel fraksi...........................................29
Lampiran 17. Hasil dan perhitungan adisi sampel................................................35
 ABSTRAK

Paparan radikal bebas dalam kehidupan sehari-hari tidak dapat dihindari

sehingga diperlukan adanya senyawa antioksidan untuk menangkal dampak buruk
radikal bebas. Antioksidan sintetik dapat berdampak buruk bagi kesehatan
sehingga antioksidan alami merupakan alternatif yang lebih aman. Ekstrak etanol
buah cabai rawit (Capsicum frutescens L.) memiliki aktivitas antioksidan dimana
kapsaisin diduga merupakan salah satu senyawa yang berperan penting. Purifikasi
ekstrak etanol buah cabai rawit diperlukan untuk memastikan peran kapsaisin
dalam aktivitas antioksidan ekstrak etanol. Tujuan dari penelitian ini untuk
mengetahui adanya kandungan kapsaisin, kadar kapsaisin dan aktivitas
antioksidan dari fraksi toluen-etil asetat ekstrak etanol buah cabai rawit. Manfaat
penelitian ini adalah memberi informasi pada masyarakat mengenai potensi
antioksidan dari fraksi toluen-etil asetat buah cabai rawit sehingga dapat
dimanfaatkan untuk memelihara kesehatan. Simplisia buah cabai rawit diekstrak
menggunakan pelarut etanol dengan metode sokhletasi, lalu difraksinasi
menggunakan KLT preparatif dengan fase gerak toluen-etil asetat (1:1 v/v) dan
fase diam menggunakan silika gel 60 F254. Metode yang digunakan untuk
penetapan kadar kapsaisin adalah spektrofotometri UV dan untuk uji aktivitas
antioksidan adalah metode DPPH dengan parameter aktivitas antioksidan berupa
nilai IC50. Hasil penelitian menunjukkan terdapat kandungan kapsaisin dalam
fraksi toluen-etil asetat buah cabai rawit dengan kadar sebesar 331,036±24,433
μg/mL dan terdapat aktivitas antioksidan dengan IC50 sebesar 302,3±3,97 µg/mL.

Kata kunci: aktivitas antioksidan, buah cabai rawit, DPPH, fraksi toluen-etil asetat
ekstrak etanol buah cabai rawit, kapsaisin, spektrofotometri UV
 ABSTRACT

Exposure of free radical in daily life is inevitable so as antioxidant is

required to prevent the bad effect of free radical. However synthetic antioxidant
can give bad effect for health so that natural antioxidant becomes an alternative
choice. Ethanol extract of rawit chilli fruit (Capsicum frutescens L.) has
antioxidant activity and capsaicin was expected as one of the compound that play
an important role for the activity. Purification of rawit chilli fruit ethanol extract is
needed to ensure the role of capsaicin in the antioxidant activity of the extract.
The aims of this research are to know about the presence of capsaicin, assign the
antioxidant activity and determine the level of capsaicin in toluene-ethyl acetate
fraction of rawit chilli fruit ethanol extract. The benefit of this research is to give
public information about the antioxidant potency from toluene-ethyl acetate
fraction of rawit chilli fruit ethanol extract so that it can be used for maintain our
health. Rawit chilli fruit simplisia was extracted using ethanol as the solvent with
soxhletation method, and then fractionation process was conducted with
preparative TLC using toluen-ethyl acetate (1:1 v/v) as the mobile phase and silica
gel 60 F254 as the stationary phase. Method that was used to determine the
capsaicin level is UV spectrophotometry and to assign the antioxidant activity was
DPPH, with IC50 value as the antioxidant activity parameter. The result of this
research was that toluene-ethyl acetate fraction of rawit chilli fruit ethanol extract
had capsaicin compound which the level was 331,036±24,433 μg/mL and it had
antioxidant activity which the IC50 value was 302,3±3,97 µg/mL.

Keywords: antioxidant activity, rawit chilli fruit, DPPH, toluene-ethyl acetate

fraction of rawit chilli fruit ethanol extract, capsaicin, UV spectrophotometry

xiv
PENDAHULUAN
Paparan radikal bebas dapat memicu terjadinya berbagai macam penyakit,
terutama penyakit degeneratif. Oleh karena itu dibutuhkan senyawa antioksidan sebagai
penangkal radikal bebas. Terdapat dua macam antioksidan berdasarkan sumbernya yaitu
antioksidan alami dan antioksidan sintetik. Berdasarkan penelitian Papas (1999),
antioksidan sintetik bersifat karsinogenik sehingga antioksidan alami dibutuhkan sebagai
alternatif sumber antioksidan yang relatif lebih aman dan mudah didapatkan.
Cabai rawit (Capsicum frutescens L.) merupakan salah satu buah yang dalam kehidupan
sehari-hari dimanfaatkan sebagai penyedap makanan. Menurut penelitian Nascimento et
al. (2013), ekstrak etanol buah cabai rawit memiliki aktivitas antioksidan ketika diuji
menggunakan metode DPPH dengan EC50 yang didapatkan sebesar 302,3±3,97 µg/mL.
Salah satu senyawa yang diduga berperan dalam aktivitas antioksidan adalah kapsaisin.
Cabai rawit mengandung senyawa kapsaisin dengan kadar sebesar 1,85% (b/b) (Musfiroh
dkk., 2013). Zimmer et al. (2012) menyatakan bahwa kapsaisin murni memiliki aktivitas
antioksidan dengan EC50 sebesar 17,62±1,84 µg/mL sehingga diduga bahwa kapsaisin
merupakan salah satu senyawa yang berperan penting dalam aktivitas antioksidan buah
cabai rawit.
Aktivitas antioksidan dari senyawa kapsaisin murni jauh lebih tinggi
dibandingkan dengan ekstrak etanol cabai rawit. Hal ini dikarenakan ekstrak etanol cabai
rawit masih mengandung berbagai senyawa yang bersifat kompleks. Oleh karena itu, untuk
memastikan aktivitas antioksidan kapsaisin dalam buah cabai rawit diperlukan purifikasi
lebih lanjut. Peneliti melakukan pengembangan dari penelitian sebelumnya oleh
Nascimento et al. (2013) dengan melakukan purifikasi berupa fraksinasi menggunakan
KLT (kromatografi lapis tipis) preparatif. Metode ini membutuhkan waktu yang singkat
dalam memisahkan senyawa dan memerlukan sampel dalam jumlah sedikit (Sarker and
Nahar, 2012). Menurut Wagner dan Bladt (2001), solven untuk kromatografi yang dapat
digunakan untuk memisahkan senyawa kapsaisin dari buah cabai salah satunya adalah
menggunakan pelarut campuran toluen dan etil asetat, sehingga dalam penelitian ini
digunakan solven campuran toluen-etil asetat untuk melakukan fraksinasi. Metode DPPH
dipilih untuk menguji aktivitas antioksidan karena menurut Koleva, Beek, Linssen, Groot,
dan Evstatieva (2002), metode ini sangat cepat, sederhana, sensitif, dan reprodusibel.
Tujuan dari penelitian ini adalah mengetahui adanya kandungan kapsaisin, kadar
kapsaisin dan aktivitas antioksidan dari fraksi toluen-etil asetat ekstrak etanol buah cabai

1
rawit. Diharapkan penelitian ini bermanfaat untuk memberi informasi pada masyarakat
mengenai potensi antioksidan dari fraksi toluen-etil asetat buah cabai rawit sehingga dapat
dimanfaatkan untuk memelihara kesehatan tubuh.

METODE PENELITIAN
Alat dan Bahan
Alat yang digunakan dalam penelitian ini berupa seperangkat alat sokhlet, alat-alat
gelas (Pyrex-Germany), mikropipet 10-100 µL dan 200-1000 µL (Socorex), blender
(Miyako), neraca analitik (Scaltec SBC 22, BP 160P, max 60/120 g, min 0,001 g),
waterbath (Memmert), oven (Memmert), vacuum rotary evaporator (Butchi), bejana
kromatografi (Camag), lampu UV 254 nm, spektrofotometer UV-Vis (Shimadzu UV mini-
1240) dan vortex.
Bahan utama yang digunakan dalam penelitian ini adalah buah cabai rawit yang
berasal dari perkebunan cabai di daerah Kopeng, Jawa Tengah. Bahan kimia yang
digunakan adalah kapsaisin pro analysis (p.a.) (Sigma-Aldrich), etanol 96% teknis (CV
Genera Labora), toluen p.a. (Merck), etil asetat p.a. (Merck), DPPH p.a. (Sigma-Aldrich),
metanol
p.a. (Merck), kertas saring, alumunium foil dan TLC silica gel 60 F254 for thin layer
chromatography (Merck).

Determinasi Tanaman
Determinasi tanaman cabai rawit dilakukan di Laboratorium Sistematika
Tumbuhan, Fakultas Biologi, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta. Determinasi
dilakukan pada seluruh bagian tanaman cabai rawit yang meliputi akar, batang, daun,
bunga dan buah cabai rawit.

Pembuatan Simplisia
Buah cabai rawit ditimbang sebanyak 1 kg, lalu dilakukan sortasi dan pencucian
untuk memisahkan buah dari pengotor dan bagian yang tidak terpakai. Kemudian buah
dipotong menjadi beberapa bagian dan dijemur secara tidak langsung di bawah sinar
matahari hingga kering yang ditandai dengan simplisia mudah hancur saat diremas
menggunakan tangan. Kemudian dilanjutkan pengeringannya menggunakan oven pada
suhu 50o C hingga didapatkan bobot tetap. Buah cabai rawit kering dihaluskan dengan
blender sehingga didapatkan serbuk simplisia buah cabai rawit.
Ekstraksi
Ekstrasi dilakukan pada 25 g serbuk simplisia buah cabai rawit dengan metode
sokhletasi menggunakan cairan penyari berupa etanol 96% sebanyak 350 mL yang
dilakukan pada suhu 70°C. Sokhletasi dilakukan hingga larutan penyari pada tabung
sokhlet tampak jernih atau sekitar 26 jam. Ekstrak kemudian dipekatkan menggunakan
vacuum rotary evaporator hingga volume ekstrak kira-kira setengah dari volume awal.
Kemudian pemekatan dilanjutkan menggunakan waterbath hingga diperoleh ekstrak kental
dengan bobot tetap

Pembuatan Larutan Standar Kapsaisin

Sejumlah 10 mg standar kapsaisin dilarutkan dalam 10 mL labu takar
menggunakan etanol 96%, kemudian labu takar dikocok hingga larutan homogen.
Diperoleh larutan standar kapsaisin dengan konsentrasi 1000 µg/mL.

Fraksinasi
Metode untuk melakukan fraksinasi adalah KLT preparatif dengan fase diam
silika gel 60 F254 dan fase gerak campuran toluen dan etil asetat. Dilakukan optimasi fase
gerak terlebih dahulu dengan menotolkan ekstrak etanol buah cabai rawit dan standar
kapsaisin 1000 µg/mL pada plat KLT yang kemudian dielusi menggunakan berbagai
perbandingan volume toluen dan etil asetat. Fase gerak optimum dipilih berdasarkan fase
gerak yang memberikan pemisahan bercak yang baik (tidak ada bercak yang saling
menumpuk).
Fraksinasi dilakukan dengan melarutkan 0,2 g ekstrak etanol menggunakan 0,5
mL etanol 96%, kemudian ditotolkan membentuk pita sepanjang plat KLT hingga larutan
ekstrak habis. Standar kapsaisin 1000 µg/mL juga ditotolkan di plat KLT di sebelah tempat
penotolan ekstrak. Plat KLT kemudian dielusi dengan fase gerak optimum. Pita bercak
yang memiliki nilai Rf sama dengan standar kapsaisin dikerok, lalu dilarutkan dengan
etanol 96% dan disaring dengan corong buchner. Fraksi dipekatkan di atas waterbath
hingga diperoleh bobot tetap, kemudian dilarutkan kembali hingga 10 mL menggunakan
etanol 96%.

Validasi Metode Analisis Penetapan Kadar

Akurasi dan Presisi
Dimasukkan sampel fraksi masing-masing sebanyak 1 mL ke dalam tiga buah
labu takar 10 mL. Masing-masing kemudian ditambahkan dengan standar kapsaisin 100
µg/mL sejumlah 1, 2 dan 3 mL, lalu dilarutkan menggunakan etanol 96%. Larutan tersebut
kemudian diukur absorbansinya menggunakan spektrofotometer pada panjang gelombang
maksimum kapsaisin. Akurasi ditentukan dengan menghitung perolehan kembali
(recovery) dari kadar sampel fraksi yang diadisi masing-masing tiga kali replikasi. Presisi
ditentukan dengan menghitung CV kadar sampel yang diadisi menggunakan tiga
konsentrasi maupun yang tidak diadisi, masing-masing tiga kali replikasi.
Linearitas dan rentang
Standar kapsaisin dibuat dalam lima seri konsentrasi (20, 40, 60, 80 dan 100
µg/mL). Kemudian lima seri konsentrasi standar kapsaisin diukur pada panjang gelombang
maksimum sehingga diperoleh persamaan kurva baku. Linearitas ditentukan dengan
menganalisis koefisien korelasi (nilai r) dari kurva baku hubungan konsentrasi standar
kapsaisin terhadap absorbansinya. Rentang didapatkan dari konsentrasi terendah dan
tertinggi dari standar kapsaisin yang terdapat pada kurva baku tersebut.
Spesifisitas
Dilakukan penentuan panjang gelombang maksimum terlebih dahulu dengan
membuat tiga seri konsentrasi standar kapsaisin (20, 40 dan 60 µg/mL) yang diukur pada
rentang panjang gelombang 200-400 nm. Kemudian dilakukan scanning etanol 96% pada
panjang gelombang 200-800 nm. Spesifisitas dilihat dari ada tidaknya puncak spektra
etanol pada panjang gelombang maksimum kapsaisin.

Penetapan Kadar Kapsaisin Dalam Fraksi

Diambil 1 mL fraksi dan dipipet ke dalam labu takar 10 mL, lalu dilarutkan
menggunakan etanol 96%. Kemudian serapan sampel tersebut diukur pada panjang
gelombang maksimum kapsaisin. Hasil pengukuran fraksi dimasukkan ke dalam
persamaan yang didapat dari kurva baku sehingga didapatkan nilai kadar.

Uji Aktivitas Antioksidan

Uji kualitatif aktivitas antioksidan dilakukan dengan cara sebagai berikut:
disiapkan 4 buah tabung reaksi dimana tabung A berisi 1 mL etanol, tabung B berisi 1 mL
ekstrak 20
µg/mL, tabung C berisi 1 mL fraksi dan tabung D berisi standar kapsaisin 100 µg/mL.
Masing-masing tabung ditambah dengan 1 mL DPPH 100 µg/mL lalu ditambah dengan 3
mL etanol. Semua tabung divortex dan ditunggu selama 30 menit, lalu diamati perubahan
warna yang terjadi.
Uji kuantitatif aktivitas antioksidan dilakukan dengan mengukur serapan DPPH
dengan spektrofotometer UV-Vis. Penentuan panjang gelombang maksimum dilakukan
dengan mengukur serapan larutan DPPH 100 µg/mL pada rentang 400-800 nm. Penentuan
operating time (OT) dilakukan dengan mengukur 4 mL standar kapsaisin 80 µg/mL yang
ditambahkan dengan 1 mL DPPH 80 µg/mL pada panjang gelombang maksimum setiap 5
menit selama 1 jam. OT ditentukan pada waktu dimana serapan mulai stabil.
Blanko dibuat dengan 4 mL etanol dan 1 mL DPPH 100 µg/mL, lalu ditunggu
selama OT dan diukur serapannya pada panjang gelombang maksimum. Standar kapsaisin
dibuat dalam lima seri konsentrasi (5, 10, 15, 20 dan 25 µg/mL), masing-masing
konsentrasi diambil sebanyak 4 mL dan ditambah dengan 1 mL DPPH 100 µg/mL lalu
ditunggu selama OT dan diukur serapannya pada panjang gelombang maksimum. Fraksi
dibuat dalam lima seri konsentrasi, masing-masing konsentrasi diambil sebanyak 4 mL dan
ditambahkan dengan 1 mL DPPH 100 µg/mL lalu ditunggu selama OT dan diukur
serapannya pada panjang gelombang maksimum.

Perhitungan Nilai IC50

Dibuat kurva hubungan antara seri larutan standar kapsaisin dengan % aktivitas
antioksidan dan kurva hubungan antara seri larutan fraksi dengan % aktivitas antioksidan.
Dari persamaan yang didapatkan, dihitung nilai IC50 standar kapsaisin dan fraksi.

HASIL DAN PEMBAHASAN

Determinasi bertujuan untuk memastikan kebenaran identitas tanaman yang
digunakan sehingga kesalahan sampel dalam penelitian dapat dihindari. Hasil determinasi
menyatakan bahwa tanaman yang dipakai dalam penelitian ini adalah benar tanaman cabai
rawit.
Sortasi basah dan pencucian buah berguna untuk memisahkan buah dari pengotor
dan bagian yang tidak terpakai. Kemudian dilakukan pengeringan buah di bawah sinar
matahari secara tidak langsung dengan tujuan untuk menghindarkan simplisia dari
pertumbuhan mikroba agar simplisia tidak cepat rusak. Pengeringan dilakukan di bawah
sinar matahari secara tidak langsung bertujuan agar simplisia tidak rusak karena sinar UV
dari matahari. Pengeringan yang telah selesai ditandai dengan simplisia mudah dipatahkan
dan mencapai bobot tetap. Pengeringan hingga bobot tetap bertujuan untuk memastikan
bahwa kandungan air dalam simplisia sudah seminimal mungkin. Kemudian buah kering
dihaluskan menggunakan blender hingga didapatkan serbuk simplisia buah cabai rawit.
Tujuan pembuatan serbuk ini adalah memperkecil ukuran partikel simplisia agar luas
permukaan simplisia lebih besar sehingga ketika proses ekstraksi, permukaan simplisia
yang mengalami kontak dengan larutan penyari lebih banyak dan proses ektraksi menjadi
lebih
optimal. Setelah itu dilakukan perhitungan persentase rendemen untuk mengetahui
perbandingan perolehan sampel dengan jumlah bahan yang digunakan. Persentase
rendemen serbuk yang didapat sebesar 19,918% (b/b).
Ekstraksi serbuk simplisa buah cabai rawit menggunakan metode sokhletasi.
Dalam metode ini, solven ekstraksi dipanaskan pada labu alas bulat di bagian bawah,
diuapkan, dan mengalami kondensasi pada kondenser dan menetes ke bawah mengenai
sampel hingga terendam seihngga dapat menarik keluar zat aktif dari sampel. Ketika
solven mencapai lengan sifon, solven akan mengalami pengosongan karena mengalir ke
dalam labu alas bulat membawa zat aktif. Proses tersebut berlangsung secara kontinu.
Metode ini memiliki keuntungan yaitu memerlukan pelarut yang jumlahnya lebih sedikit
dibandingkan maserasi, namun hanya dapat digunakan untuk senyawa yang tahan panas
(Azwanida, 2015). Kapsaisin memiliki titik didih yang tinggi (210 o C) sehingga dapat
diekstraksi dengan sokhletasi. Pelarut organik yang digunakan untuk ekstraksi adalah
etanol 96%. Ekstraksi dilakukan hingga warna larutan penyari dalam tabung sokhlet jernih,
dengan asumsi bahwa semua senyawa kapsaisin sudah terambil dari simplisia. Digunakan
suhu 70o C karena merupakan titik didih etanol. Pemekatan ekstrak dilakukan dengan
menggunakan vaccuum rotary evaporator lalu dilanjutkan diatas waterbath hingga
didapatkan ekstrak kental dengan bobot tetap. Hal ini bertujuan untuk menghilangkan
pelarut pengekstraksi yang masih tertinggal dalam ekstrak. Didapatkan persentase
rendemen ekstrak sebesar 21,513±0,644% (b/b).
Purifikasi senyawa kapsaisin dalam ekstrak dilakukan dengan fraksinasi. Tujuan
dari fraksinasi adalah untuk menghasilkan berbagai fraksi dimana di setiap fraksinya
mengandung senyawa-senyawa yang memiliki kesamaan polaritas atau ukuran molekul
(Sarker and Nahar, 2012). Fraksinasi dilakukan dengan metode KLT preparatif. Prinsipnya
sama dengan KLT biasa yaitu pemisahan senyawa berdasarkan perbedaan kecepatan
migrasi analit melalui fase diam dengan fase gerak cair (Gandjar dan Rohman, 2007). Dari
hasil optimasi didapatkan fase gerak optimum berupa toluen-etil asetat (1:1 v/v) (Gambar
1). Parameter bercak yang mengandung kapsaisin adalah berdasarkan adanya kesamaan
nilai Rf (Retardation factor) bercak ekstrak etanol buah cabai rawit dengan larutan standar
kapsaisin. Terdapat delapan bercak yang muncul dan bercak dengan nilai Rf yang sama
 10

Gambar 1. Hasil elusi ekstrak etanol cabai rawit (A) dan standar kapsaisin (B) dengan fase
gerak toluen-etil asetat (1:1 v/v), fase diam silica gel 60 F254 dan detektor UV 254 nm.
Bercak dengan nilai Rf 0,43 ada di dalam kotak berwarna merah

dengan standar kapsaisin adalah bercak kelima dengan nilai Rf sebesar 0,43. Namun
bercak pita fraksi tersebut memiliki warna yang berbeda dengan standar kapsaisin.
Menurut Wagner dan Bladt (2001), kapsaisin dapat dideteksi saat disinari dengan sinar UV
jika konsentrasinya cukup tinggi. Bercak dengan warna berbeda tersebut diduga karena
kandungan kapsaisin dalam fraksi rendah dan ada senyawa lain pada bercak tersebut yang
berpendar sehingga warna tersebut bukan berasal dari senyawa kapsaisin. Meskipun
begitu, fraksinasi tetap dilakukan dengan mengerok KLT preparatif pada pita bercak
dengan Rf 0,43 dengan asumsi pada pita tersebut terdapat senyawa kapsaisin yang sudah
terpurifikasi. Persentase rendemen fraksi yang didapat sebesar 27,573±0,894% (b/b).
Validasi metode analisis berguna untuk menilai parameter-parameter tertentu dan
membuktikan bahwa parameter tersebut memenuhi persyaratan untuk penggunaannya.
Akurasi dan Presisi
Akurasi adalah kedekatan hasil penetapan yang diperoleh dengan hasil sebenarnya
yang dinyatakan sebagai hasil perolehan kembali (recovery) dari analit yang ditambahkan
(Pharmaceutical Convention Incorporation, 2014). Presisi adalah kedekatan dari suatu seri
pengukuran yang diperoleh dari sampel yang homogen yang dilihat dari nilai CV
(Pharmaceutical Convention Incorporation, 2014). Menurut persyaratan akurasi dan presisi
oleh Gonzales dan Herrador (2007), Semua hasil data (Tabel I) telah memenuhi
persyaratan sehingga dapat dikatakan bahwa akurasi dan presisi metode sudah baik.
Linearitas dan Rentang
Linearitas adalah kemampuan metode analisis untuk memberikan respons yang
baik dan proporsional dengan konsentrasi analit dalam sampel yang dapat dilihat dari nilai
r (Pharmaceutical Convention Incorporation, 2014). Semakin nilai r mendekati satu,
semakin proporsional hasil pengujian terhadap konsentrasi analit. Dari persamaan kurva
baku (Gambar 2), didapat nilai r sebesar 0,9998 sehingga dapat dikatakan bahwa linearitas
data sudah baik. Rentang berguna untuk menyatakan rentang tertinggi dan terendah dari
kadar analit dalam sampel yang dapat ditetapkan secara presisi, akurat dan linearitas yang
dapat diterima (Pharmaceutical Convention Incorporation, 2014). Rentang dalam
pengujian ini adalah pada konsentrasi 20-100 μg/mL.
Spesifisitas
Spesifisitas adalah kemampuan suatu metode untuk dapat mengukur suatu zat
tertentu secara akurat dan presisi dengan adanya kemungkinan komponen lain dalam

Tabel I. Hasil Pengukuran Akurasi dan Presisi Metode Penetapan Kadar

Konsentrasi Recovery Rata-rata
SD CV
(µg/mL) (%) (µg/mL)
Replikasi 1 33,427 -
Tanpa
Replikasi 2 35,369 - 33,104 2,443 7,381%
adisi
Replikasi 3 30,515 -
Replikasi 1 43,71845 102,9127%
Adisi 10
Replikasi 2 45,75728 103,8835% 43,071 3,061 7,108%
µg/mL
Replikasi 3 39,73786 92,2330%
Replikasi 1 54,49515 105,3398%
Adisi 20
Replikasi 2 53,71845 91,7476% 52,262 3,219 6,158%
µg/mL
Replikasi 3 48,57282 90,2913%
Replikasi 1 65,27184 106,1489%
Adisi 30 Replikasi 2 65,17476 99,3528% 63,524 2,943 4,633%
µg/mL
Replikasi 3 60,12621 98,7055%

1,2
Absorbansi

1 y = 0,0103x - 0,0003
0,8 R² = 0,9997
0,6
0,4
Standar
0,2
kapsaisin
0
0 50 100 150
Konsentrasi (µg/mL)

Gambar 2. Kurva hubungan konsentrasi dengan absorbansi standar kapsaisin

 Tabel II. Hasil Penetapan Kadar Kapsaisin Dalam Fraksi
Kadar (μg/mL) Rata-rata (μg/mL) SD CV
Replikasi 1 334,2718
Replikasi 2 353,6893 331,036 24,433 7,381%
Replikasi 3 305,1456

sampel seperti pengotor atau produk degradasi (Pharmaceutical Convention Incorporation,

2014). Pengujian diawali dengan optimasi panjang gelombang maksimum kapsaisin
terlebih dahulu. Panjang gelombang maksimum kapsaisin yang didapat dari hasil
pengujian adalah 280 nm. Dari hasil scanning etanol, tidak terdapat puncak pada panjang
gelombang 280 nm. Hasil ini sudah sesuai dengan penelitian oleh Koleva et al. (2013)
yang menyatakan bahwa panjang gelomang maksimum kapsaisin ketika dilarutkan dengan
etanol adalah pada 280 nm sehingga dapat dikatakan bahwa metode sudah spesifik.
Penetapan kadar kapsaisin menggunakan metode spektrofotometri. Prinsip metode
ini adalah mengukur absorbsi energi dari suatu senyawa pada panjang gelombang tertentu,
dimana absorbsi energi sebanding dengan konsentrasi dari senyawa tersebut. Didapatkan
hasil penetapan kadar kapsaisin dalam fraksi (Tabel II) sebesar 331,036±24,433 μg/mL
sehingga kadar kapsaisin dalam buah segar sebesar 708,325±67,556 mg/kg atau
0,071±0,007% (b/b). Hasil ini jauh lebih kecil dari hasil penelitian Musfiroh dkk. (2013)
yang menyatakan bahwa buah cabai rawit mengandung kapsaisin sebesar 1,85% (b/b). Hal
ini dimungkinkan karena terdapat sejumlah sampel yang hilang selama proses pengolahan
sampel hingga pada tahap fraksi.
Uji aktivitas antioksidan dilakukan dengan metode DPPH. Prinsip dari metode ini
adalah berubahnya warna larutan DPPH dari ungu menjadi kuning pucat ketika dicampur
dengan substansi yang dapat mendonorkan atom hidrogen. Intensitas warna yang
dihasilkan diukur menggunakan spektrofotometer visibel. Uji aktivitas antioksidan diawali
dengan uji kualitatif. Adanya perubahan warna larutan dari ungu menjadi kuning pucat
ketika senyawa uji direaksikan dengan DPPH mengindikasikan bahwa terdapat aktivitas
antioksidan. Pengujian memberikan hasil positif untuk senyawa standar kapsaisin, ekstrak
etanol dan fraksi toluen-etil asetat ekstrak etanol buah cabai rawit, namun negatif untuk
etanol. Hal ini menunjukkan bahwa standar kapsaisin, ekstrak etanol dan fraksi toluen-etil
asetat ekstrak etanol buah cabai rawit memiliki aktivitas antioksidan, sedangkan etanol
sebagai pelarut tidak memiliki aktivitas antioksidan. Pada uji kuantitatif, dilakukan
optimasi terlebih dahulu untuk menentukan panjang gelombang maksimum dan OT
(Operating Time). Optimasi panjang gelombang maksimum bertujuan untuk menentukan
panjang gelombang dimana
larutan DPPH menghasilkan serapan maksimum. Dari hasil pengujian, didapatkan panjang
gelombang maksimum DPPH adalah pada 516 nm. Menurut Molyneux (2004), panjang
gelombang maksimum untuk DPPH adalah pada kisaran 515-520 nm sehingga hasil
pengujian telah sesuai dengan teori. Optimasi OT bertujuan untuk menentukan waktu
dimana reaksi antara senyawa yang memiliki aktivitas antioksidan dan larutan DPPH
sudah berjalan sempurna yang ditunjukkan dengan absorbansi yang stabil. Dari hasil
percobaan, absorbansi terus mengalami penurunan sehingga OT ditentukan dari waktu di
mana selisih absorbansi larutan mendekati konstan yaitu pada menit ke-40.
Indikator uji aktivitas antioksidan ini adalah didapatkannya nilai IC50. Nilai IC50
(Inhibitory Concentration 50) atau sering disebut juga EC50 (Efficient Concentration 50)
didefinisikan sebagai konsentrasi substrat yang dapat menyebabkan hilangnya aktivitas
DPPH sebesar 50% (Molyneux, 2004). Dari hasil perhitungan (Tabel III), didapatkan IC 50
standar kapsaisin sebesar 14,417 μg/mL dan IC50 sampel sebesar 347,998±19,359 μg/mL.
Menurut klasifikasi kekuatan antioksidan oleh Blois (1958), nilai IC 50 <50 μg/mL adalah
antioksidan sangat kuat, 50-100 μg/mL adalah antioksidan kuat, 101-150 μg/mL adalah
antioksidan sedang dan >150 μg/mL adalah antioksidan lemah. Berdasarkan kategori
tersebut, standar kapsaisin termasuk dalam antioksidan sangat kuat, sedangkan fraksi
toluen
- etil asetat ekstrak etanol buah cabai rawit merupakan antioksidan lemah. Nilai IC50
standar hasil pengujian lebih kecil dari hasil penelitian oleh Zimmer et al. (2012) yaitu
sebesar 17,62±1,84 µg/mL. Sedangkan nilai IC50 sampel fraksi lebih besar dibandingkan
dengan IC50 ekstrak etanol buah cabai rawit yang diteliti Nascimento et al. (2013) yaitu
sebesar 302,3±3,97 µg/mL, yang berarti bahwa ekstrak etanol buah cabai rawit lebih poten
dalam memberikan aktivitas antioksidan dibandingkan dengan sampel yang sudah
dipurifikasi. Dimungkinkan hal ini dikarenakan aktivitas antioksidan ekstrak etanol buah
cabai rawit tidak hanya berasal dari senyawa kapsaisin namun juga dari senyawa lainnya
yang saling bersinergi, sehingga ketika dipurifikasi, senyawa lain yang mempunyai
aktivitas antioksidan sudah dihilangkan dan aktivitas antioksidannya menjadi turun.

Tabel III. Hasil Perhitungan IC50 Standar Kapsaisin dan Sampel Fraksi
IC50 (μg/mL) Rata-rata (μg/mL) SD CV
Standar 14,417 - - -
Replikasi 1 347,760
Replikasi 2 367,474 347,998 19,359 5,563%
Replikasi 3 328,758
 Kapsaisin DPPH

Gambar 3. Mekanisme kapsaisin dengan radikal DPPH

Namun aktivitas antioksidan standar kapsaisin jauh lebih tinggi dibandingkan dengan
sampel fraksi dikarenakan senyawa standar memiliki kemurnian tinggi, sedangkan sampel
fraksi kemungkinan masih mengandung senyawa selain kapsaisin. Menurut penelitian yang
dilakukan oleh Okada et al. (2010), senyawa kapsaisin bersifat sebagai antioksidan karena
pada strukturnya terdapat gugus OH fenolik yang dapat memberikan atom H kepada
senyawa radikal sehingga senyawa radikal akan bersifat netral. Penangkapan atom H ini
akan menimbulkan perubahan warna pada DPPH yang semula berwarna ungu akan
berubah menjadi kuning pucat karena senyawa DPPH tereduksi dan tidak lagi mengalami
delokalisasi elektron (Gambar 3).

KESIMPULAN DAN SARAN

Terdapat kandungan kapsaisin dalam fraksi toluen-etil asetat ekstrak etanol buah
cabai rawit dengan kadar sebesar 331,036±24,433 μg/mL. Fraksi toluen-etil asetat ekstrak
etanol buah cabai rawit memiliki aktivitas antioksidan dengan IC50 sebesar 347,998
±19,359
µg/mL.
Saran untuk penelitian selanjutnya adalah mencari metode lain yang lebih selektif
dalam mendeteksi kapsaisin seperti menggunakan densitometri atau kromatografi cair
kinerja tinggi.

DAFTAR PUSTAKA
Azwanida, N.N., 2015. A Review on the Extraction Methods Use in Medicinal Plants,
Principle, Strength and Limitation. Medicinal & Aromatic Plants, 4, 196.
Blois, M.S., 1958. Antioxidant determination by the use of stable free radicals. Nature, 181,
1199-2000.
Gandjar, I.G., dan Rohman, A., 2007. Kimia Farmasi Analisis, Pustaka Pelajar, Yogyakarta,
7.
Gonzales, A.G. and Herrador, M.A., 2007. A Practical Guide to Analytical Method
Validation, Including Measurement Uncertainty and Accuracy Profiles. Trends in
Analytical Chemistry, 26(3), 228-238.
Koleva, I. I., van Beek, T.A., Linssen, J.P., de Groot, A., and Evstatieva, L N., 2002.
Screening of Plant Extracts for Antioxidant Activity: A Comparative Study of
Three Testing Methods. Phytochemical Analysis, 13(1), 8-17.
Liljana, G.K., Viktorija, M., Marija, S.D., Rubin, G., and Emilija, I.J., 2013. The Effect of
Different Methods of Extractions of Capsaicin on Its Content in the Capsicum
Oleoresins. Food Science, Engineering and Technology, 917-922.
Molyneux, P., 2004. The Use of The Stable Free Radical Diphenylpicryl-Hydrazyl (DPPH)
For Estimating Antioxidant Activity. Songklanakarin J. Sci. Technol., 26(2), 211-
219.
Musfiroh, I., Mutakin, M., Angelina, T., and Muchtardi, M., 2013. Capsaicin Level of
Various Capsicum Fruits. International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical
Science, 5(1), 248-251.
Nascimento, P.L.A., Nascimento, T.C.E.S., Ramos, N.S.M., Silva, G.R, Camara, C.A.,
Silva, T.M., et al., 2013. Antimicrobial and antioxidant activities of Pimenta
malagueta (Capsicum frutescens). Academic Journal, 7(27), 3526-3533.
Okada, Y., Tanaka, K., Sato, E. and Okajima,H., 2010. Kinetics and Antioxidative Sites of
Capsaicin in Homogeneous Solution. J Am Oil Chem Soc, 87, 1397–1405.
Papas, A.M., 1999. Diet and Antioxidant Status. Food and Chemical Toxicology, 37, 999-
1007.
Pharmaceutical Convention Incorporation, 2014. United States Pharmacopoeia XXXVII/
NF XXXI, Twin Brook Parkway, 1225.
Sarker, S.D. and Nahar, L., 2012. Natural Products Isolation, 3rd ed. Humana Press, New
York, 9, 33, 118-120.
Wagner, H., and Bladt, S., 2001. Plant Drug Analysis: A Thin Layer Chromatography
Atlas, 2nd ed. Springer, Berlin, 291.
Zimmer, A.R., Leonardi, B., Miron, D., Schapoval, E., Oliveira, J.R. and Gosmann, G.,
2011. Antioxidant and Anti-Inflammatory Properties of Capsicum Baccatum:
from Traditional Use to Scientific Approach. Journal of Ethnopharmacology, 139,
228– 233
 LAMPIRAN
Lampiran 1. Surat keterangan hasil determinasi tanaman
Lampiran 2. Certificate of Analysis standar kapsaisin
 Lampiran 3. Gambar sampel penelitian

Gambar 4. Buah cabai rawit segar Gambar 5. Buah cabai rawit kering

Gambar 6. Serbuk simplisia buah Gambar 7. Ekstrak etanol buah

cabai rawit cabai rawit

A B

Gambar 8. Hasil KLT preparatif ekstrak etanol cabai rawit

(A) dan standar kapsaisin (B)
 A B C

Gambar 9. Sampel fraksi toluen - etil asetat ekstrak etanol

buah cabai rawit Replikasi 1 (A), Replikasi 2 (B) dan
Replikasi 3 (C)

Lampiran 4. Penimbangan sampel dan perhitungan % rendemen

𝑏𝑜𝑏𝑜𝑡 𝑏𝑎ℎ𝑎𝑛 𝑦𝑎𝑛𝑔 𝑑𝑖𝑑𝑎𝑝𝑎𝑡
% rendemen =𝑏𝑜𝑏𝑜𝑡 𝑏𝑎ℎ𝑎𝑛 𝑦𝑎𝑛𝑔 𝑑𝑖𝑔𝑢𝑛𝑎𝑘𝑎𝑛 𝑥 100%
a. Data penimbangan buah segar
Berat tampah 181,5 g
Berat tampah + buah 1208,5 g
Berat tampah sisa 182,1 g
Berat buah 1026,4 g

b. Data penimbangan buah hasil pengeringan

Berat tampah 181,5 g
Berat tampah + buah 392,7 g
Berat buah 211,2 g

c. Data penimbangan serbuk total

Berat wadah 80,011 g
% rendemen = 204,439 𝑔 𝑥 100%
1026,4 𝑔 Berat wadah + serbuk 284,450 g
Berat serbuk 204,439 g = 19,918% b/b
d. Data penimbangan serbuk untuk ekstraksi
Replikasi 1 (g) Replikasi 2 (g) Replikasi 3 (g)
Berat cawan 62,2314 62,3448 62,3145
Berat cawan + serbuk 89,2353 87,3786 87,3225
Berat cawan sisa 64,2315 62,3532 62,3145
Berat serbuk 25,0038 25,0254 25,0080

e. Data penimbangan ekstrak

Replikasi 1 (g) Replikasi 2 (g) Replikasi 3 (g)
Berat cawan 72,7131 56,5012 62,3025
Berat cawan + ekstrak 77,5633 62,0655 67,6310
Berat ekstrak 5,2502 5,5643 5,3285

 Replikasi 1  Replikasi 3
5,2502 𝑔
% rendemen = % rendemen =
5,3285 𝑔
25,0038 𝑔 𝑥 100% 𝑥 100%
25,0080 𝑔

= 20,998% b/b = 21,307% b/b

 Replikasi 2
5,5643 𝑔
% rendemen =
25,0254 𝑔 𝑥 100%
= 22,235% b/b

f. Data penimbangan ekstrak untuk fraksinasi

Replikasi 1 (g) Replikasi 2 (g) Replikasi 3 (g)
Berat vial 6,3152 6,3149 6,8715
Berat vial + ekstrak 6,5155 6,5156 7,0718
Berat vial ekstrak 0,2003 0,2007 0,2003

g. Data penimbangan fraksi

Replikasi 1 (g) Replikasi 2 (g) Replikasi 3 (g)
Berat cawan 69,4061 55,1563 52,5538
Berat cawan + fraksi 69,4620 55,213 52,6070
 Berat cawan fraksi 0,0559 0,0567 0,0532

 Replikasi 1  Replikasi 3
% rendemen = 0,0559 𝑔
𝑥 100% % rendemen = 0,0532 𝑔 𝑥 100%
0,2003 𝑔
0,2003 𝑔
= 27,908% b/b = 26,560% b/b
 Replikasi 2
% rendemen = 0,0567 𝑔
𝑥 100% `
0,2007 𝑔

= 28,251% b/b

h. Data penimbangan standar kapsaisin

Kertas 0,2409 g
Kertas + serbuk 0,2511 g
Kertas sisa 0,2409 g
Serbuk 0,0102 g

i. Data penimbangan DPPH

Replikasi 1 (g) Replikasi 2 (g) Replikasi 3 (g)
Berat gelas beaker 62,5867 96,8635 96,8345
Berat gelas beaker +
62,5975 96,8744 96,8447
DPPH
Berat DPPH 0,0108 0,0109 0,0102

Lampiran 5. Perhitungan pembuatan larutan seri kapsaisin untuk kurva

baku penetapan kadar
Semua larutan seri dibuat dari larutan stok kapsaisin 1000 μg/mL dan diencerkan
dalam labu takar 10 mL.
C1 . V1 = C2. V2
 100 μg/mL  80 μg/mL
1000 μg/mL.V1 = 100 μg/mL.10 mL 1000 μg/mL.V1 = 80 μg/mL.10 mL
V1 = 1 mL V1 = 0,8 mL
 60 μg/mL  20 μg/mL
1000 μg/mL.V1 = 60 μg/mL.10 mL 1000 μg/mL.V1 = 20 μg/mL.10 mL
V1 = 0,6 mL V1 = 0,2 mL
 40 μg/mL
1000 μg/mL.V1 = 40 μg/mL.10 mL
V1 = 0,4 mL

Lampiran 6. Hasil scanning pelarut kapsaisin (etanol)

Lampiran 7. Hasil scanning optimasi λ maksimum kapsaisin

 Lampiran 8. Pengukuran serapan larutan seri kapsaisin
a. Hasil scanning larutan seri kapsaisin

Konsentrasi
Absorbansi
(μg/mL)
20 0,205
40 0,411
60 0,618
80 0,81
100 1,031

b. Kurva baku dan persamaan regresi linier larutan seri kapsaisin

Konsentrasi vs Absorbansi
1,2
y = 0,0103x - 0,0003
Absorbansi

1
R² = 0,9997
0,8
Seri konsentrasi
0,6
kapsaisin
0,4
Linear (Seri
0,2 konsentrasi kapsaisin)

0
0 50 100 150
Konsentrasi (µg/mL)

x = konsentrasi (μg/mL)
y = absorbansi
Persamaan regresi linier: y = 0,0103x - 0,0003
r = 0,9998

Lampiran 9. Perhitungan Rf
Ekstrak etanol cabai rawit dielusi dengan fase gerak optimum yaitu toluen : etil
asetat (1:1) v/v
 Jarak elusi bercak = 4,3 cm
Batas elusi pada plat = 10
10 cm cm 𝑗𝑎𝑟𝑎𝑘 𝑒𝑙𝑢𝑠𝑖 𝑏𝑒𝑟𝑐𝑎𝑘
Rf𝑏𝑎𝑡𝑎𝑠
= 𝑒𝑙𝑢𝑠𝑖 𝑝𝑎𝑑𝑎 𝑝𝑙𝑎𝑡

4,3 𝑐𝑚
= 10 𝑐𝑚
4,3 cm = 0,43

A B
Gambar 10. Hasil elusi ekstrak etanol cabai rawit (A) dan standar kapsaisin
(B) dengan fase gerak toluen-etil asetat (1:1 v/v), fase diam silica gel 60 F254
dan detektor UV 254 nm. Bercak dengan nilai Rf 0,43 ada di dalam kotak
berwarna merah

Lampiran 10. Perhitungan konsentrasi fraksi

Semua fraksi dilarutkan dalam labu takar 10 mL
a. Konsentrasi fraksi stok
𝑏𝑜𝑏𝑜𝑡 𝑓𝑟𝑎𝑘𝑠𝑖
C = 𝑣𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒 𝑢𝑛𝑡𝑢𝑘 𝑚𝑒𝑙𝑎𝑟𝑢𝑡𝑘𝑎𝑛
 Replikasi 1  Replikasi 3
0,0559 𝑔
C= = 5590 μg/mL C=
0,0532 𝑔
= 5320 μg/mL
10 𝑚𝐿
10 𝑚𝐿
 Replikasi 2
0,0567 𝑔
C= = 5670 μg/mL
10 𝑚𝐿

b. Perhitungan konsentrasi pengenceran fraksi 10x

 Replikasi 1  Replikasi 3
5590 μg/mL.1 mL = C2.10 mL 5320 μg/mL.1 mL = C2 .10 mL
C2 = 559 μg/mL C2 = 532 μg/mL
 Replikasi 2
5670 μg/mL.1 mL = C2.10 mL
 C2 = 567 μg/mL

Lampiran 11. Pengukuran serapan kapsaisin dan perhitungan konsentrasi

kapsaisin dalam fraksi pengenceran 10x
a. Pengukuran serapan kapsaisin dalam fraksi pengenceran 10x
Replikasi Absorbansi
1 0,344
2 0,364
3 0,314

b. Perhitungan konsentrasi kapsaisin dalam fraksi pengenceran 10x

Perhitungan menggunakan persamaan regresi linier dari kurva baku
konsentrasi vs absorbansi kapsaisin
 Replikasi 1  Replikasi 3
y = 0,0103x - 0,0003 y = 0,0103x - 0,0003
0,344 = 0,0103x – 0,0003 0,314 = 0,0103x – 0,0003
x = 33,427 μg/mL x = 30,515 μg/mL
 Replikasi 2
y = 0,0103x - 0,0003
0,364 = 0,0103x – 0,0003
x = 35,369 μg/mL

C Replikasi 1+C Replikasi 2+C Replikasi 3

Rata-rata = 3

33,427+35,369+30,515
= 3 = 33,1036 μg/mL
SD = 2,4433
CV = SD
Rata−rata x 100%
2,4433
= 33,104 x 100%
= 7,3808 %
 Lampiran 12. Perhitungan penetapan kadar
Kadar kapsaisin dalam fraksi = konsentrasi yang didapat x faktor pengenceran
Jumlah kapsaisin dalam 10 ml fraksi = kadar kapsaisin dalam fraksi x 10 mL
jumlah kapsaisin dalam 10 ml fraksi
Kadar kapsaisin dalam ekstrak = 𝑗𝑢𝑚𝑙𝑎ℎ 𝑒𝑘𝑠𝑡𝑟𝑎𝑘 𝑦𝑎𝑛𝑔 𝑑𝑖𝑡𝑜𝑡𝑜𝑙𝑘𝑎𝑛
kadar kapsaisin dalam ekstrak
Kadar kapsaisin dalam simplisia =
𝑗𝑢𝑚𝑙𝑎ℎ 𝑠𝑖𝑚𝑝𝑙𝑖𝑠𝑖𝑎 𝑢𝑛𝑡𝑢𝑘 𝑒𝑘𝑠𝑡𝑟𝑎𝑘𝑠𝑖
Kadar kapsaisin dalam simplisia
Kadar kapsaisin dalam buah segar =
𝑏𝑜𝑏𝑜𝑡 𝑏𝑢𝑎ℎ 𝑠𝑒𝑔𝑎𝑟 𝑦𝑎𝑛𝑔 𝑑𝑖𝑔𝑢𝑛𝑎𝑘𝑎𝑛

Replikasi 1 Replikasi 2 Replikasi 3

Kadar 33,427 μg/mL x 35,369 μg/mL x 30,515 μg/mL x

kapsaisin 10 10 10
dalam fraksi = 334,272 μg/mL = 353,689 μg/mL = 305,146 μg/mL
Jumlah
334,272 μg/mL x 353,689 μg/mL x 305,146 μg/mL x
kapsaisin
10 mL 10 mL 10 mL
dalam 10 ml
= 3342,718 µg = 3536,893 µg = 3051,1456 µg
fraksi
3342,718 3536,893 3051,1456
Kadar
µg/0,2003 g µg/0,2007 g µg/0,2003 g
kapsaisin
= 87,618 = 98,058 = 81,177
dalam
mg/5,2502 g mg/5,5643 g mg/5,3285 g
ekstrak
Kadar 87,618 98,058 mg 81,177
kapsaisin mg/25,0038 g /25,0254 g mg/25,0080 g
dalam = 716,393 = 801,065 = 663,615
simplisia mg/204,439 g mg/204,439 g mg/204,439 g
Kadar 716,393 801,065 716,393 mg
kapsaisin mg/1026,4 g mg/1026,4 g /1026,4 g
dalam buah = 697,968 mg/kg = 780,461 mg/kg = 646,546 mg/kg
segar = 0,070% b/b = 0,078% b/b = 0,065% b/b
 𝐾𝑎𝑑𝑎𝑟 𝑟𝑒𝑝𝑙𝑖𝑘𝑎𝑠𝑖 1+𝐾𝑎𝑑𝑎𝑟 𝑟𝑒𝑝𝑙𝑖𝑘𝑎𝑠𝑖 2+𝐾𝑎𝑑𝑎𝑟 𝑟𝑒𝑝𝑙𝑖𝑘𝑎𝑠𝑖 3
Rata-rata = 3

697,968+780,461+716,393
= 3

= 708,325 mg/kg
SD = 67,556
CV = 𝑆𝐷
𝑅𝑎𝑡𝑎−𝑟𝑎𝑡𝑎 x 100%
67,556
= 708,325 x 100%
= 9,537%

Lampiran 13. Hasil uji kualitatif aktivitas antioksidan

A B C D

Gambar 11. Hasil uji aktivitas antioksidan etanol (A),

standar kapsaisin (B), ekstrak etanol cabai rawit (C) dan
fraksi toluen- etil asetat ekstrak etanol cabai rawit (D)
 Lampiran 14. Optimasi metode uji aktivitas antioksidan
a. Penentuan operating time
 Hasil serapan standar kapsaisin setiap 5 menit

Waktu Selisih Waktu Selisih

Absorbansi Absorbansi
(menit) absorbansi (menit) absorbansi
0 0,754 - 30 0,337 0,022
3 0,661 0,093 35 0,318 0,019
5 0,571 0,09 40 0,301 0,017
10 0,488 0,083 45 0,284 0,017
15 0,425 0,063 50 0,271 0,013
20 0,39 0,035 55 0,26 0,011
25 0,359 0,031 60 0,251 0,009

 Kurva Operating Time

Penentuan Operating Time Standar

Kapsaisin
0,8
Absorbansi

0,6

0,4 Standar
kapsaisin 100
0,2 µg/mL

0
0 20 40 60 80
Waktu (menit)
b. Penentuan λ maksimum DPPH
 Replikasi 1

 Replikasi 2

 Replikasi 3
 𝐴𝑏𝑠 𝑟𝑒𝑝𝑙𝑖𝑘𝑎𝑠𝑖 1+𝐴𝑏𝑠 𝑟𝑒𝑝𝑙𝑖𝑘𝑎𝑠𝑖 2+𝐴𝑏𝑠 𝑟𝑒𝑝𝑙𝑖𝑘𝑎𝑠𝑖 3
Rata-rata = 3

514+516+518
= 3

= 516 nm

Lampiran 15. Uji aktivitas antioksidan standar kapsaisin

a. Pembuatan seri konsentrasi standar kapsaisin
 5 μg/mL
 20 μg/mL
100 μg/mL . V1 = 5 μg/mL . 10 mL
100 μg/mL . V1 = 20 μg/mL . 10 mL
V1 = 0,5 mL
V1 = 2 mL
 10 μg/mL
 25 μg/mL
100 μg/mL . V1 = 10 μg/mL . 10 mL
100 μg/mL . V1 = 25 μg/mL . 10 mL
V1 = 1 mL
V1 = 2,5 mL
 15 μg/mL
100 μg/mL . V1 = 15 μg/mL . 10 mL
V1 = 1,5 mL

a. Hasil serapan blanko dan seri konsentrasi standar kapsaisin

Konsentrasi (µg/mL) Absorbansi

5 0,25
10 0,219
15 0,184
20 0,158
25 0,109
Blanko 0,376

b. Perhitungan %S
𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝑏𝑙𝑎𝑛𝑘𝑜−𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙
%S = 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝑏𝑙𝑎𝑛𝑘𝑜 x 100%
  5 μg/mL  20 μg/mL
0,376−0,250
%S = x 100% %S =
0,376−0,158
0,376 x 100%
0,376

= 33,511% = 57,979%
 10 μg/mL  25 μg/mL
0,376−0,219
%S = 0,376 x 100% %S =
0,376−0,109
0,376 x 100%
= 41,755% = 71,011%
 15 μg/mL
0,376−0,184
%S = 0,376 x 100%
= 51,064%
d. Kurva baku dan persamaan regresi linier

Konsentrasi vs %S
80
70 y = 1,8245x + 23,697
R² = 0,9901
60
%S (%)

50
Seri konsentrasi
40
kapsaisin
30
20
10 Linear (Seri
0 konsentrasi
0 10 20 30 kapsaisin)
Konsentrasi (μg/mL)

x = konsentrasi (µg/mL)
y = %S
Persamaan regresi linier: y = 1,8245x + 23,697
r = 0,9950

c. Perhitungan IC50 standar kapsaisin

Perhitungan menggunakan persamaan regresi linier dari kurva baku konsentrasi
vs %S kapsaisin
IC50 standar kapsaisin: y = 1,8245x + 23,697
50 = 1,8245x + 23,697
 x = 14,417 µg/mL

Lampiran 16. Uji aktivitas antioksidan sampel fraksi

a. Pembuatan seri konsentrasi sampel
 Replikasi 1
- Pengenceran 20x (279,5 μg/mL)
5590 μg/mL.V1 = 279,5 μg/mL.10 mL
V1 = 0,5 mL
- Pengenceran 15x (372,667 μg/mL)
5590 μg/mL.V1 = 372,667 μg/mL.6 mL
V1 = 0,4 mL
- Pengenceran 12x (465,833 μg/mL)
5590 μg/mL.V1 = 465,833 μg/mL.6 mL
V1 = 0,5 mL
- Pengenceran 10x (559 μg/mL)
5590 μg/mL.V1 = 559 μg/mL.10 mL
V1 = 1 mL
- Pengenceran 8,572x (652,167 μg/mL)
5590 μg/mL.V1 = 652,167 μg/mL.6 mL
V1 = 0,7 mL
 Replikasi 2
- Pengenceran 20x (283,5 μg/mL)
5670 μg/mL . V1 = 283,5 μg/mL . 10 mL
V1 = 0,5 mL
- Pengenceran 15x (378 μg/mL)
5670 μg/mL . V1 = 378 μg/mL . 6 mL
V1 = 0,4 mL
- Pengenceran 12x (472,5 μg/mL)
5670 μg/mL . V1 = 472,5 μg/mL . 6 mL
V1 = 0,5 mL
- Pengenceran 10x (567 μg/mL)
 5670 μg/mL . V1 = 567 μg/mL . 10 mL
V1 = 1 mL
- Pengenceran 8,572x (661,5 μg/mL)
5670 μg/mL . V1 = 661,5 μg/mL . 6 mL
V1 = 0,7 mL
 Replikasi 3
- Pengenceran 20x (266 μg/mL)
5320 μg/mL . V1 = 266 μg/mL . 10 mL
V1 = 0,5 mL
- Pengenceran 15x (354,667 μg/mL)
5320 μg/mL . V1 = 354,667 μg/mL . 6 mL
V1 = 0,4 mL
- Pengenceran 12x (443,333 μg/mL)
5320 μg/mL . V1 = 443,333 μg/mL . 6 mL
V1 = 0,5 mL
- Pengenceran 10x (532 μg/mL)
5320 μg/mL . V1 = 532 μg/mL . 10 mL
V1 = 1 mL
- Pengenceran 8,572x (620,667 μg/mL)
5320 μg/mL . V1 = 620,667 μg/mL . 6 mL
V1 = 0,7 mL

d. Hasil serapan blanko

 𝐵𝑙𝑎𝑛𝑘𝑜1+𝐵𝑙𝑎𝑛𝑘𝑜 2+𝐵𝑙𝑎𝑛𝑘𝑜 3
Rata-rata = 3

0,394+0,416+0,394
= 3

= 0,306
e. Hasil serapan seri konsentrasi sampel fraksi
 Replikasi 1  Replikasi 3

 Replikasi 2

Replikasi 1 Replikasi 2 Replikasi 3

Konsentrasi Konsentrasi Konsentrasi
Abs Abs Abs
(μg/mL) (μg/mL) (μg/mL)
279,500 0,231 283,500 0,238 266 0,229
372,667 0,189 378 0,196 354,667 0,189
 465,833 0,145 472,500 0,152 443,333 0,151
559 0,119 567 0,121 532 0,114
652,167 0,074 661,500 0,09 620,667 0,083

g. Perhitungan %S
 Replikasi 1
- 279,5 μg/mL - 559 μg/mL
0,401−0,231 0,401−0,119
%S = 0,401 x 100% %S = 0,401 x 100%
= 42,442% = 70,348%
- 372,667 μg/mL - 652,167 μg/mL
0,401−0,189 0,401−0,074
%S = 0,401 x 100% %S = 0,401 x 100%
= 52,907% = 81,561%
- 465,833 μg/mL
0,401−0,145
%S = 0,401 x 100%
= 63,870%
 Replikasi 2
- 283,5 μg/mL - 567 μg/mL
0,401−0,238 0,401−0,121
%S = 0,401 x 100% %S = 0,401 x 100%
= 40,698% = 69,851%
- 378 μg/mL - 661,5 μg/mL
0,401−0,196 0,401−0,09
%S = 0,401 x 100% %S = 0,401 x 100%
= 51,163% = 77,575%
- 472,5 μg/mL
0,401−0,152
%S = 0,401 x 100%
= 62,126%
  Replikasi 3
- 266 μg/mL - 532 μg/mL
0,401−0,229
%S = 0,401 x 100% %S =
0,401−0,114
0,401 x 100%
= 42,940% = 71,595%
- 354,667 μg/mL - 620,666 μg/mL
0,401−0,189
%S = 0,401 x 100% %S =
0,401−0,083
0,401 x 100%
= 52,907% = 79,319%
- 443,333 μg/mL
0,401−0,151
%S = 0,401 x 100%
= 62,375%

e. Kurva baku dan persamaan regresi linier

Konsentrasi vs %S Sampel
90
Replikasi 1
80
70
Replikasi 2
%S (%)

60
50
Replikasi 3
40
30 Linear
20 (Replikasi 1)
Linear
10
(Replikasi 2)
0 Linear
(Replikasi 3)
0 200 400 600 800
Konsentrasi µg/mL
x = konsentrasi (µg/mL)
y = %S
Persamaan regresi linier:
Replikasi 1: y = 0,1027x + 14,385
Replikasi 3: y = 0,1031x + 16,105
r = 0,9971
r = 0,9989
Replikasi 2: y = 0,0978x + 14,061
r = 0,9964
f. Perhitungan IC50 sampel
Perhitungan menggunakan persamaan regresi linier dari kurva baku konsentrasi
vs %S sampel
IC50 Replikasi 1: y = 0,1027x + 14,385
50 = 0,1027x + 14,385
x = 347,760 µg/mL
IC50 Replikasi 2: y = 0,0978x + 14,061
50 = 0,0978x + 14,061
x = 367,474 µg/mL
IC50 Replikasi 3: y = 0,1031x + 16,105
50 = 0,1031x + 16,105
x = 328,758 µg/mL
IC50 Replikasi 1+ IC50 Replikasi 2+ IC50 Replikasi 3
Rata-rata = 3

347,760+367,474+ 328,758
= 3

= 347,998 µg/mL
SD = 19,359
CV = 𝑆𝐷
𝑅𝑎𝑡𝑎−𝑟𝑎𝑡𝑎 x 100%
19,359
= 347,998 x 100%
= 5,563%
 Lampiran 17. Hasil dan perhitungan adisi sampel
a. Hasil serapan sampel
 Replikasi 1
 Replikasi 3

 Replikasi 2

Konsentrasi adisi
10 µg/mL 20 µg/mL 30 µg/mL
Replikasi 1 0,450 0,561 0,672
Replikasi 2 0,471 0,553 0,671
Replikasi 3 0,409 0,500 0,619

b. Perhitungan konsentrasi sampel

Perhitungan menggunakan persamaan regresi linier dari kurva baku konsentrasi
vs absorbansi kapsaisin
 Adisi 10 µg/mL
 - Replikasi 1 - Replikasi 3
y = 0,0103x - 0,0003 y = 0,0103x - 0,0003
0,450 = 0,0103x – 0,0003 0,409 = 0,0103x – 0,0003
x = 43,718 μg/mL x = 39,738 μg/mL
- Replikasi 2
y = 0,0103x - 0,0003
0,471 = 0,0103x – 0,0003
x = 45,757 μg/mL
C Replikasi 1+ C Replikasi 2+ C Replikasi 3
Rata-rata = 3

43,718+45,757 + 39,738
= 3

= 43,071 µg/mL
SD = 3,061
CV = 𝑆𝐷
𝑅𝑎𝑡𝑎−𝑟𝑎𝑡𝑎 x 100%
3,061
=43,071 x 100%
= 7,108%
 Adisi 20 µg/mL
- Replikasi 1 - Replikasi 3
y = 0,0103x - 0,0003 y = 0,0103x - 0,0003
0,561 = 0,0103x – 0,0003 0,500 = 0,0103x – 0,0003
x = 54,495 μg/mL x = 48,573 μg/mL
- Replikasi 2
y = 0,0103x - 0,0003
0,553 = 0,0103x – 0,0003
x = 53,718 μg/mL
- Replikasi 3
C Replikasi 1+ C Replikasi 2+ C Replikasi 3
Rata-rata = 3

54,495 +53,71 + 48,573

= 3

= 52,262 µg/mL
SD = 3,219
 CV = 𝑆𝐷
𝑅𝑎𝑡𝑎−𝑟𝑎𝑡𝑎 x 100%
3,219
=52,262 x 100%
= 6,158%
 Adisi 30 µg/mL
- Replikasi 1 - Replikasi 3
y = 0,0103x - 0,0003 y = 0,0103x - 0,0003
0,672 = 0,0103x – 0,0003 0,619 = 0,0103x – 0,0003
x = 65,272 μg/mL x = 60,126 μg/mL
- Replikasi 2
y = 0,0103x - 0,0003
0,671 = 0,0103x – 0,0003
x = 65,175 μg/mL
C Replikasi 1+ C Replikasi 2+ C Replikasi 3
Rata-rata = 3

65,272+65,175 + 60,126
= 3

= 63,524 µg/mL
SD = 2,943
CV = 𝑆𝐷
𝑅𝑎𝑡𝑎−𝑟𝑎𝑡𝑎 x 100%
2,943
=63,524 x 100%
= 4,633%

c. Perhitungan % recovery
Konsentrasi larutan n setelah adisi− Konsentrasi tanpa adisi
% recovery = Konsentrasi (jumlah) adisi x100%
 Adisi 10 µg/mL
- Replikasi 1 - Replikasi 3
43,718−33,427
% recovery = x 100% % recovery =
39,738−30,515
x 100%
10
10
= 102,913% = 92,233%
- Replikasi 2
45,757−35,369
% recovery = x 100%
10
 = 103,884%
 Adisi 20 µg/mL
- Replikasi 1 - Replikasi 3
54,495−33,427 39,738−30,515
% recovery = x 100% % recovery = x 100%
20 10
= 105,340% = 92,233%
- Replikasi 2
53,718−35,369
% recovery = x 100%
20

= 91,748%
 Adisi 30 µg/mL
- Replikasi 1 - Replikasi 3
65,272−33,427
% recovery = x 100% % recovery =
60,126−30,515
x 100%
30
30
= 106,149% = 98,706%
- Replikasi 2
65,175−35,369
% recovery = x 100%
30

= 99,353%
 BIOGRAFI PENULIS

Penulis skripsi yang berjudul Penetapan Kadar

Kapsaisin dan Uji Aktivitas Antioksidan Fraksi
Toluen- Etil Asetat Buah Cabai Rawit (Capsicum
Frutescens L.) dengan Metode 2,2-Difenil-1-
Pikrilhidrazil (PPH) memiliki nama lengkap Regina
Hiacinta Eva Angelista. Penulis dilahirkan di
Yogyakarta pada tanggal 16 Juni 1995 sebagai anak
pertama dari dua bersaudara, dari pasangan Agus
Setiawan dan Lelly Puspa Dewi. Penulis
menempuh pendidikan formal di TK Santa Theresia Muntilan (2000-2001), SD
Marsudirini Muntilan (2001-2007), SMP Marganingsih Muntilan (2007-2010),
SMA Van Lith Muntilan (2010-2013), dan kemudian melanjutkan kuliah di
Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta pada tahun 2013.
Semasa kuliah, penulis aktif dalam berbagai kegiatan baik kegiatan fakultas
maupun universitas, seperti menjadi seksi perlengkapan Donor Darah JMKI
(2014), seksi dekorasi dan dokumentasi Komisi Pemilihan Gubernur BEMF dan
Ketua DPMF Farmasi (2014), seksi dekorasi dan dokumentasi Pemilihan Presiden
dan Wakil Presiden BEM USD (2015), bendahara Student Exchange Programme
Committee (2015), divisi publikasi dan informasi Dewan Perwakilan Mahasiswa
Farmasi (2015/2016), asisten praktikum Farmakologi Toksikologi (2015 dan
2016) dan asisten praktikum Mikrobiologi (2016).