PENGARUH SUHU, PH DAN KONSENTRASI SUBSTRAT TERHADAP AKTIVITAS ENZIM

Ingrit Lumban Batu

Program Studi Pendidikan Kimia, Jurusan Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam
Universitas Pendidikan Ganesha
Email: ingritmarbun5092@gmail.com

ABSTRAK
Percobaan ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh konsentrasi enzim terhadap aktivitas enzim dan
membuat kurva pengaruh konsentrasi enzim tersebut terhadap aktivitasnya. Ada banyak faktor yang
dapat mempengaruhi aktivitas enzim antara lain suhu, pH, konsentrasi enzim, konsentrasi substrat,
aktivator; inhibitor. Pada percobaan kali ini akan dilakukan pengaruh konsentrasi enzim terhadap
aktivitasnya. Pada penentuan aktivitas dilakukan pada pH optimum dengan konsentrasi substrat dan ko-
faktor berlebih (mendekati jenuh), sehingga laju reaksi yang terjadi merupakan laju reaksi tingkat ke nol
terhadap konsentrasi enzim. Pada konsentrasi substrat tertentu, bertambahnya konsentrasi enzim secara
bertingkat akan menaikkan kecepatan reaksi enzimatis. Dengan kata lain, semakin besar volume atau
konsentrasi enzim, semakin tinggi pula aktivitas enzim dalam memecah substrat yang dikatalisis. Pada
keadaan enzim telah jenuh oleh molekul-molekul substrat (yaitu semua molekul enzim mengikat substrat),
peningkatan kecepatan reaksi awal secara linier. Ini akan menghasilkan kurva garis lurus jika Vo diplot
terhadap konsentrasi enzim. Konsentrasi enzim yang tinggi akan mempengaruhi kecepatan reaksi secara
liner (kecepatan bertambah secara konstan). Hubungan antara laju reaksi dengan konsentrasi enzim
berbanding lurus. Jadi, semakin besar konsentrasi enzim maka semakin cepat laju reaksi yang tertera
pada kurva. Dari kurva diperoleh persamaan garis yaitu y= 6,5724x + 27,517 dengan regresi liniernya
sebesar 0.97.

Kata kunci: konsntrasi, substrat, aktivator, suhu

ABSTRACT

This experiment aims to determine the effect of enzyme concentration on enzyme activity and to curve the
effect of the enzyme concentration on its activity. There are many factors that can affect enzyme activity
including temperature, pH, enzyme concentration, substrate concentration, activator; inhibitor. In this
experiment, the effect of enzyme concentration on its activity will be carried out. The activity
determination is carried out at the optimum pH with excess substrate concentration and co-factor (close
to saturation), so that the reaction rate that occurs is the zerorate reaction rate to the enzyme
concentration. At a certain substrate concentration, increasing the enzyme concentration will increase
the enzymatic reaction speed. In other words, the greater the volume or concentration of the enzyme, the
higher the activity of the enzyme in breaking down the catalyzed substrate. When the enzyme is saturated
with substrate molecules (i.e. all enzyme molecules bind to the substrate), the initial reaction speed
increases linearly. This will produce a straightline curve if Vo is plotted against the enzyme
concentration. High enzyme concentration will affect the liner reaction speed (speed increases
constantly). The relationship between the reaction rate and the enzyme concentration is directly
proportional. So, the greater the enzyme concentration, the faster the reaction rate shown on the curve.
From the curve, the equation of the line is y = 6.5724x + 27.517 with a linear regression of 0.97.
Key words: concentration, substrate, activator, temperature
PENDAHULUAN
Enzim sebagai katalisator juga
mempunyai sifat-sifat seperti katalis pada
umumnya, yaitu ikut bereaksi, tetapi pada
akhir reaksi akan didapat kembali dalam
bentuk semula. Ada banyak faktor yang
dapat mempengaruhi aktivitas enzim antara
lain suhu, pH, konsentrasi enzim,
konsentrasi substrat, aktivator; inhibitor.
Pada percobaan kali ini akan dilakukan
pengaruh konsentrasi enzim terhadap
aktivitasnya. Pada penentuan aktivitas
dilakukan pada pH optimum dengan
konsentrasi substrat dan ko-faktor berlebih
(mendekati jenuh), sehingga laju reaksi yang
terjadi merupakan laju reaksi tingkat ke nol
terhadap konsentrasi enzim.
Kecepatan reaksi yang dikatalisis oleh
suatu enzim umumnya dilaporkan sebagai
nilai pada waktu nol (simbol V 0, dalam mol
menit-1), karena kecepatan paling tinggi
terjadi pada suatu keadaan dimana produk
reaksi belum terbentuk. Pada keadaan ini
konsentrasi substrat paling besar dan enzim
belum dihambat secara umpan balik oleh
produknya. Plot produk reaksi yang
terbentuk terhadap waktu pada reaksi
enzimatis menunjukkan bahwa pada tahap
awal terjadi grafik linier, kemudian diikuti
oleh penurunan kecepatan reaksi karena
sebagian substrat sudah digunakan dalam
reaksi atau aktivitas enzim menurun. V0
diperoleh dengan menarik garis lurus
melalui bagian linier kurva mulai pada titik
waktu nol. Kemiringan garis lurus sama
dengan V0.
Pada konsentrasi substrat rendah, jika
konsentrasi substrat dinaikkan dua kali,
maka kecepatan reaksi awal (V0) meningkat
dua kali lipat. Ini berarti bahwa pada
konsentrasi substrat rendah kecepatan reaksi
enzimatis berorde satu. Akan tetapi, pada
konsentrasi substrat yang lebih tinggi,
peningkatan konsentrasi substrat akan
menyebabkan perubahan V0 sangat kecil dan
pada konsentrasi substrat yang sangat tinggi,
peningkatan konsentrasi substrat tidak akan
mempengaruhi harga V0 (harga V0 konstan).
Keadaan ini disebabkan oleh enzim telah
jenuh oleh substrat, atau dengan kata lain
semua sisi aktif enzim telah mengikat
substrat. Kecepatan reaksi secara
keseluruhan tergantung pada kecepatan
disosiasi produk dari enzim dan
penambahan substrat lebih lanjut tidak akan
mempengaruh V0. Plot V0 terhadap [S]
berbentuk hiperboli. Pada keadaan enzim
telah jenuh oleh molekul-molekul susbtrat
(yaitu semua molekul enzim mengikat
substrat), peningkatan kecepatan reaksi awal
secara linier. Ini akan menghasilkan kurva
garis lurus jika V0 diplot terhadap
konsentrasi enzim.
Aktifitas enzim dapat diungkapkan
dengan berbagai cara. Ungkapan yang
paling umum adalah dengan kecepatan
awal dari reaksi yang dikatalisis (V0).
pada kondisi optimal enzim
bersangkutan. Katal merupakan satuan SI
dari aktivitas enzim yang didefinisikan
sebagai aktivitas katalitik yang dapat
meningkatkan kecepatan reaksi sebanyak
satu mol per detik dalam system khusus.
Istilah aktivitas (atau aktivitas total)
mengacu pada satuan total enzim dalam
sample, sedangkan aktivitas spesifik
adalah jumlah unit enzim per milligram
protein (unit mg-1). Aktivitas spesifik
adalah ukuran kemurnian enzim. Selama
pemurnian enzim, aktivitas spesifiknya
meningkat serta nilai aktivitas spesifiknya
menjadi maksimal dan konstan jika enzim
murni.
Ketergantungan kecepatan reaksi
enzimatis pada konsentrasi substrat ([S])
sebagai berikut. Pada konsentrasi
substrat rendah, jika konsentrasi substrat
dinaikkan dua kali, maka kecepatan
reaksi awal (V0) meningkat dua kali lipat.
Ini berarti bahwa pada konsentrasi
substrat rendah kecepatan reaksi
enzimatis berorde satu. Akan tetapi, pada
konsentrasi substrat yang lebih tinggi,
peningkatan konsentrasi substrat akan
menyebabkan perubahan V0 sangat kecil
dan pada konsentrasi substrat yang sangat
tinggi, peningkatan konsentrasi substrat
tidak akan mempengaruhi harga V0
(harga V0 konstan). Keadaan ini
disebabkan oleh enzim telah jenuh oleh
substrat, atau dengan kata lain semua sisi
aktif enzim telah mengikat substrat.
Kecepatan reaksi secara keseluruhan
tergantung pada kecepatan disosiasi
produk dari enzim dan penambahan
substrat lebih lanjut tidak akan
mempengaruh V0. Plot V0 terhadap [S]
berbentuk hiperbolik.
Pada keadaan enzim telah jenuh oleh
molekul-molekul susbtrat (yaitu semua
molekul enzim mengikat substrat),
peningkatan kecepatan reaksi awal secara
linier. Ini akan menghasilkan kurva garis
lurus jika V0 diplot terhadap konsentrasi
enzim. Suhu mempengaruhi reaksi yang
dikatalisis oleh enzim dengan dua cara.
Pertama, peningkatan suhu akan
meningkatkan energi termal molekul-
molekul. Pada temperatur tinggi, di
samping energi termal molekul-molekul
substrat meningkat, struktur protein
enzim akan rusak yang diakibatkan oleh
putusnya interaksi non kovalen (ikatan
hidrogen, gaya van der Waals, interaksi
elektrostatik dan sebagainya). Interaksi
non kovalen ini sesungguhnya
mempertahankan struktur tiga dimensi
protein enzim. Akibat lebih jauh adalah
terjadinya denaturasi enzim. Perubahan
kecil pada struktur tiga dimensi enzim
dapat mengubah struktur sisi aktif enzim
yang akan menyebabkan penurunan
aktivitas katalitik. Pengaruh secara
keseluruhan dari peningkatan suhu pada
kecepatan reaksi enzim adalah
kesetimbangan antara dua pengaruh yang
bertentangan ini. Grafik temperatur
diplotkan terhadap V0 menunjukkan suatu
kurva dengan temperatur optimum
(gambar 3a). Untuk beberapa enzim
mamalia, temperatur optimum umumnya
sekitar 370C, tetapi ada juga organisme
yang mempunyai enzim yang bekerja
pada suhu lebih tinggi atau lebih rendah.
Sebagai contoh, polymerase Taq yang
digunakan dalam polymerase
chainreaction (PCR) ditemukan dalam
bakteri yang hidup pada suhu tinggi
dalam sumber air panas, sehingga enzim
ini bekerja optimal pada suhu tinggi.
Ketika suhu bertambah sampai suhu
optimum, kecepatan reaksi enzim naik
karena energi kinetik bertambah. Hal
tersebut akan mengakibatkan aktivitas
enzim turun karena tidak terbentuk
komplek enzim substrat, sehingga
konsentrasi produk rendah. Enzim
biasanya diuji pada pH tinggi (optimum),
pada suhu antara 25oC sampai dengan
suhu 38oC dan pada konsentrasi substrat
mendekati jenuh. Pada keadaan ini, laju
reaksi awal biasanya sebanding dengan
konsentrasi enzim. Dengan mengetahui
konsentrasi enzim yang digunakan dalam
reaksi, maka akan terlihat pengaruhnya
terhadap aktivitas enzim. Assay enzim
secara konvensional dilakukan dengan
pengukuran kecepatan terbentuknya
produk atau kecepatan hilangnya substrat.
Jika substrat atau produk menyerap sinar
pada panjang gelombang yang spesifik,
perubahan konsentrasi substrat atau
produk dapat diukur melalui perubahan
absorbansi pada panjang gelombang
tertentu. Untuk itu, dapat dilakukan
dengan mengunakan spektrofotometer.
Karena absorbansinya berbanding lurus
dengan konsentrasi, maka kecepatan
perubahan absorbansi berbanding lurus
dengan kecepatan aktivitas enzim dalam
mol substrat yang digunakan (atau produk
yang terbentuk persatuan waktu).
TUJUAN DAN MANFAAT
Adapun tujuan dari praktikum ini adalah
untuk mengetahui pengaruh konsentrasi
enzim terhadap aktivitas enzim dan
membuat kurva pengaruh konsentrasi
enzim tersebut terhadap aktivitasnya.
METODE
Alat dan Bahan
Alat:
Pipet tetes (3 buah), Gelas kimia 100 mL (3
buah), Gelas kimia 300 mL (1 buah), Batang
pengaduk (1 buah), Gelas ukur 25 mL (1
buah), Pipet volumetri 5 mL (1 buah), Sikat
cuci (1 buah), Corong (1 buah), Erlenmeyer
100 mL (1 buah), Pemanas (1 buah), Spatula
(1 buah), Termometer (1 buah), Penjepit
kayu (1 buah), Kaca arloji (2 buah),
Spektronik 20 (1 buah).
Bahan:
Serbuk TCA 20% (10 gr), Serbuk kasein 1%
(5 gr), Buffer fosfat 0,1; pH 8 (8 gr), Serbuk
tripsin (5 gr), Kristal NaOH 0,5 M (2 gr),
Reagen Folin Ciocalteu (10 mL), Aquades
(Secukupnya), Kertas saring (Secukupnya),
Tisu (Secukupnya), Es batu (Secukupnya),
Kertas indikator universal (Secukupnya).

Prosedur Kerja

Tabel 1. Uji Aktivitas Enzim Terhadap Konsentrasi Substrat Kasein

Tabung Waktu Substrat kasein 5% (mL) Buffer Fosfat Larutan

(menit) pH (mL) 7,0 tripsin (mL)
0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 8,0
t=0 2,5 5 7,5 10 12,5 1,5 0,5
I t = 20 2,5 5 7,5 10 12,5 1,5 0,5
t=0 2,5 5 7,5 10 12,5 1,0 1,0
II t = 20 2,5 5 7,5 10 12,5 1,0 1,0
t=0 2,5 5 7,5 10 12,5 0,5 1,5
III t = 20 2,5 5 7,5 10 12,5 0,5 1,5
 t=0 2,5 5 7,5 10 12,5 0 2,0
IV t = 20 2,5 5 7,5 10 12,5 0 2,0

Inkubasi 0 menit masing tabung disertai dengan pengadukan

Dalam tabung reaksi berisi pengaduk,
dimasukkan larutan buffer fosfat dan larutan
tripsin. Kemudian ke dalam masing-masing
tabung ditambahkan 3 mL larutan TCA
20%, diaduk kuat. Ke dalam tabung
ditambahkan 5 mL larutan kasein 1%.
Didiamkan selama 30 menit dalam air es.
Selanjutnya disentrifugasi selama 10 menit,
kemudian disaring menggunakan kertas
saring. Filtrat dikerjakan melalui cara
ANSON.
Metode ANSON
Ke dalam 2 mL filtrat yang dihasilkan
ditambahkan 4 mL NaOH 0,5 M. Kemudian
ditambahkan 1 mL reagen Folin-Ciocalteu,
lalu diaduk. Didiamkan selama 10 menit,
kemudian diukur absorbansinya dengan
spektronik-20 pada Panjang gelombang 650
nm.
yang kuat. Agar pengendapan berlangsung
sempurna didiamkan selama 30 menit dalam
air es. Selanjutnya disentrifugasi selama 10
menit, kemudian disaring menggunakan
kertas saring. Filtrat dikerjakan menurut cara
ANSON.
Metode ANSON
Ke dalam 2 mL filtrat yang dihasilkan
ditambahkan 4 mL NaOH 0,5 M. Kemudian
ditambahkan 1 mL reagen Folin-Ciocalteu,
lalu diaduk. Didiamkan selama 10 menit,
kemudian diukur absorbansinya dengan
spektronik-20 pada Panjang gelombang 650
nm.
HASIL DAN PEMBAHASAN
Pada percobaan ini diberikan dua
kontrol waktu yang berbeda yaitu
pada t = 0 dan t = 20 menit, juga

Inkubasi 20 menit komposisi tabung yang berbeda pula.

Untuk masing-masing waktu
Masing-masing tabung diisi dengan larutan
kasein sesuai dengan tabel. Setiap tabung disediakan empat buah tabung reaksi
yang berisi larutan kasein dan pengaduknya (I-IV). Dalam tabung-tabung tersebut
diinkubasi selama 5 menit dalam inkubator digunakan konsentrasi substrat yang
air 35oC. Ke dalam masing-masing tabung
ditambahkan berturut-turut larutan buffer berbeda-beda. Tujuan dari
fosfat dan tripsin (sesuai dengan tabel) penambahan volume yang beragam
sambal diaduk perlahan-lahan (jangan adalah untuk membuat konsentrasi
sampai berbusa). Tabung diinkubasi selama
pada masing-masing substrat
20 menit dalam inkubator air 35oC dihitung
mulai tripsin ditambahkan. Sebanyak 3 mL menjadi berbeda-beda, sehingga
TCA 20% ditambahkan ke dalam masing- dapat dibuat plot laju reaksi terhadap
 konsentrasi substrat. Tabung dengan enzim, semakin tinggi pula aktivitas
inkubasi 0 menit berfungsi sebagai enzim dalam memecah substrat yang
kontrol terhadap tabung dengan dikatalisis. Pada keadaan enzim telah
inkubasi 20 menit. jenuh oleh molekul-molekul substrat
(yaitu semua molekul enzim
Pada konsentrasi substrat
mengikat substrat), peningkatan
tertentu, bertambahnya konsentrasi
kecepatan reaksi awal secara linier.
enzim secara bertingkat akan
Ini akan menghasilkan kurva garis
menaikkan kecepatan reaksi
lurus jika Vo diplot terhadap
enzimatis. Dengan kata lain, semakin
konsentrasi enzim.
besar volume atau konsentrasi

Tabel 2. Nilai absorbansi untuk setiap tabung

No Tabung Waktu (menit) Nilai Absorbansi

t=0 0,098
I t = 20 0,125
t=0 0,085
II t = 20 0,106
t=0 0,094
III t = 20 0,113
t=0 0,116
IV t = 20 0,131

Perhitungan konsentrasi substrat untuk Setelah dilakukan pengenceran, harga

setiap tabung reaksi adalah sebagai konsentrasi substrat pada masing-masing
berikut: tabung reaksi dapat diketahui dengan
Massa susu yang ditimbang = 2,00 gr menggunakan persamaan V1 × M1 = V2
dalam 100 mL aquades dengan × M2
perhitungan: Diketahui:
M1 = 20,0 mg/mL
2,00 gram gram V2 = 7 mL
[kasein] = = 0,02 =
100 mL mL
V1 masing-masing tabung, yaitu: 0,5;
mg 1,0; 1,5; 2,0
20,0
mL Sehingga didapatkan konsentrasi enzim
yaitu:
 Tabel 3. Konsentrasi pada setiap tabung

Tabung Konsentrasi (mg/mL)

I 1,428
II 2,857
III 4,286
IV 5,714

Maka didapatkan kurva pengaruh konsentrasi enzim terhadap aktivitasnya adalah sebagai
berikut:

Kurva Hubungan Vo Terhadap Konsentrasi Enzim

80
70
60 f(x) = 6.57 x + 27.52
R² = 0.97
50
1/Vo

40
30
20
10
0
1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 4.5 5 5.5 6
[S]

SIMPULAN
Berdasarkan pembahasan di atas maka dapat
disimpulkan bahwa konsentrasi enzim yang
tinggi akan mempengaruhi kecepatan reaksi
secara liner (kecepatan bertambah secara
konstan). Hubungan antara laju reaksi
dengan konsentrasi enzim berbanding lurus.
Jadi, semakin besar konsentrasi enzim maka
semakin cepat laju reaksi yang tertera pada
kurva. Kurva pengaruh konsentrasi enzim
terhadap aktivitasnya adalah sebagai berikut:
 Kurva Hubungan Vo Terhadap Konsentrasi Enzim
80
70
60 f(x) = 6.57 x + 27.52
R² = 0.97
50
1/Vo

40
30
20
10
0
1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 4.5 5 5.5 6
[S]

UCAPAN TERIMAKASIH
Ucapan terima kasih penulis sampaikan
kepada Dr. I Nyoman Tika, M.Si., sebagai
dosen pengampu mata kuliah Praktikum
Biokimia, atas masukan dan sarannya
sehingga percobaan ini dapat dilaksanakan
dengan baik.
DAFTAR PUSTAKA
Muderawan, I Wayan. 2007. Buku Ajar
Instrumen. Singaraja: Universitas
Pendidikan Ganesha
Redhana, I
Wayan. 2004. Penuntun Praktikum
Biokimia. Yogyakarta: Universitas Negeri
Yogyakarta
Sudarmadji, Slamet, dkk. 1996. Analisis
Bahan Makanan dan Pertanian.Yogyakarta:
Liberty Yogyakarta
Tika, I Nyoman. 2007. Penuntun Praktikum
Biokimia. Singaraja: Universitas Pendidikan
Ganesha
Wirahadikusuma, Muhamad. 1989.
Biokimia: Protein, Enzim, dan Asam
Nukleat.Bandung: Penerbit ITB.