Nama: Fadila Kurnia

NIM : 08061181722067

Efek Ekstrak Pimenta pseudocaryophyllus Pada Asam Urat: Aktivitas

Antiinflamasi dan Efek Anti-Hiperurisemik Melalui Xantine Oksidase dan
Aksi Urikosurik
1. Pengenalan
Hiperurisemia adalah kondisi patologis dalam suatu penyakit dikenal
sebagai asam urat, yang ditandai dengan peradangan arthritis yang disebabkan
oleh pengendapan kristal natrium urat (asam urat) di persendian, cairan sinovial
dan jaringan lain (Albrecht et al., 2014). Kadar asam urat yang tinggi dalam tubuh
dapat terjadi akibat kekurangan pada ekskresi zat ini atau peningkatan produksi.
Perkembangan penyakit terkait dengan faktor-faktor seperti jenis kelamin, usia,
etnis dan gaya hidup, yang mempengaruhi terutama pria paruh baya (Pinheiro,
2008).
Pimenta pseudocaryophyllus (Gomes) Landrum, populer dikenal sebagai
"cataia", "craveiro" atau "louro-cravo" adalah spesies dari Famili Myrtaceae
sebagian besar tersebar di pantropis dan subtropis wilayah (Fajemiroye et al.,
2012; Paula et al., 2012). Dalam pengobatan tradisional, daun P.
pseudocaryophyllus digunakan untuk diuretik, obat penenang dan afrodisiak
tindakan (Paula et al., 2012).
Dalam penelitian ini, dilaporkan bahwa P. pseudocaryophyllus mampu
menurunkan kadar asam urat pada tikus hiperurisemik. Dengan demikian,
mekanisme zat yang terkandung dalam ekstrak memberikan efek anti-
hiperurisemik. Sebagai pelengkap, aktivitas anti inflamasi juga dievaluasi melalui
eksperimen model gout arthritis yang diinduksi oleh kristal monosodium urate
(MSU).

2. Metode Penelitian
2.1.Preparasi Tanaman dan Ekstrak
Daun dan ranting dari P. pseudocaryophyllus (Gomes) Landrum
dikumpulkan di Lagoa Santa, Minas Gerais, Brazil, pada Oktober 2012. Ekstraksi
daun (1742,0 g) dan cabang (2896,0 g) dilakukan ekstraksi dengan metode
perkolasi menggunakan heksana, etil asetat dan etanol untuk peningkatan
polaritas. Lalu pelarut diuapkan dengan menggunakan rotatory evaporator (Buchi)
40°C, menghasilkan ekstrak kental berikut: daun heksan (HL, 30.0 g), cabang
heksan (HB, 3.8 g), daun etil asetat (EAL, 74,0 g), cabang etil asetat (EAB, 50,0
g), daun etanol (EEL, 236,0 g) dan cabang etanol (EEB, 182,0 g). Ekstrak air
diperoleh dengan perkolasi 70,0 g daun secara menyeluruh dan bubuk cabang
dengan air suling. Air dihilangkan dengan liofilisasi, menghasilkan 9,6 g ekstrak
kasar encer daun (AL) dan 4,9 g ekstrak kasar berair dari cabang (AB).
2.2. Skrining Fitokimia
Adanya tanin dan polifenol, flavonoid, glikosida dan antrakuinon aglikon,
triterpen, steroid, kumarin, alkaloid, saponin, glikosida kardiotonik, dan
proantosianidin dievaluasi dalam ekstrak P. pseudocaryophyllus. Analisis
dilakukan dengan menggunakan prosedur standar yang dijelaskan sebelumnya
(Farnsworth, 1966; Matos, 1997).
2.3. Uji oksidase xantin in vitro
Pengujian dengan ekstrak P. pseudocaryophyllus dilakukan menggunakan
metodologi sebelumnya yang dijelaskan oleh Ferraz Filha et al. (2006), dengan
modifikasi. EAL, EAB, EEL dan EEB dilarutkan dalam air suling dan DMSO
(1%) dengan konsentrasi akhir10.0; 20,0; 30,0; 40,0; 50.0 dan 100.0 μg / mL,
untuk mendapatkan Nilai IC50. Di cember yang berisi volume masing-masing
500 μLsampel ditambahkan 1,125 mL dapar fosfat (pH 7,4) dan 187,5 μL enzim
XO (0,28 U / mL). Sistem ini diinkubasi pada 30 ° C selama 10 menit. Setelah itu,
substrat xantin sebanyak 1.375 mL ditambahkan dan absorbansi segera diperoleh
setiap menit selama 10 menit pada 295 nm (Varian BIO-50). Allopurinol,
xanthine inhibitor oksidase, digunakan sebagai kontrol positif (10 μg / mL).
Hasilnya dinyatakan sebagai persentase penghambatan XO dan dihitung sebagai:
% penghambatan ¼ (kemiringan 1 pengujian / kemiringan kosong) 100.
2.4. Aktivitas Urikosurik Pada Tikus
Mencit Swiss albino jantan (25–30 g) dan tikus Wistar jantan (180–280 g)
dipasok oleh Universidade Federal de Ouro Preto. Hewan dibagi menjadi
kelompok eksperimen (n¼6), ditempatkan di kotak plastik dan dirawat pada siklus
terang 12 jam / gelap 12 jam, di suhu kamar 25 ° C. Mereka diberi makanan
standar dan air ad libitum.
 Murugaiyah dan Chan (2009) sebelumnya menggunakan model ini dalam
studi anti-hiperurisemia. Tikus menerima kalium oksonat (200 mg / kg,
intraperitoneal) dan asam urat (1 g / kg, dengan gavage) agar menjadi
hiperurisemia. Makanan dan air ditarik semalaman sebelum penelitian. EAL,
EAB, EEL dan EEB (125 dan 250 mg / kg) disiapkan dalam larutan minyak
DMSO 5% dan obat yang digunakan secara klinis, benzbromarone (10 mg / kg)
dan probenesid (50 mg / kg) disiapkan dalam campuran etanol 10% dalam 20%
Tween 20 larutan air. Formulasi diberikan secara intraperitoneal ke tikus 30 menit
setelah induksi hiperurisemia. Urine dikumpulkan di tabung dan asupan air diukur
selama 5 jam setelah perawatan. Akhirnya, hewan dibius dengan ketamin dan
xylasine (masing-masing 40 dan 87 mg / kg), diberikan secara intraperitoneal,
untuk mengambil darah dari aorta perut. Sampel darah dipertahankan pada suhu
kamar sampai pembekuan darah dan, setelah itu, serumnya diperoleh setelah
sentrifugasi pada 3000g selama 10 menit. Serum dan sampel urin disimpan pada
suhu 20 ° C sampai pengukuran asam urat, yang dilakukan dengan metode
kolorimetri, menggunakan standar kit diagnostik (Bioclin, Brasil), menurut
produsen instruksi.
2.5. Uji in vivo xantin oksidase
Hati tikus dipotong segera setelah pengambilan darah, dicuci dalam larutan garam
0,9% dan disimpan dengan cepat pada suhu 80 ° C sampai diproses. Pemisahan
fraksi sitosol yang mengandung enzim dilakukan seperti yang dijelaskan (Haidari
et al., 2009; Zhu et al., 2004). Secara singkat, hati dihomogenisasi dalam 5 mL
dari 80 mM buffer natrium fosfat (pH 7,4). Homogenat disentrifugasi pada 3000g
selama 10 menit pada suhu 4 ° C. Lapisan lipid telah dihilangkan dan supernatan
disentrifugasi lagi p selama 60 menit pada 4 ° C, menghasilkan fraksi sitosol.
Fraksi ini sudah biasamengevaluasi aktivitas residu xantin oksidase hati menurut
metode yang sebelumnya dijelaskan oleh Hall et al. (1990) dengan modifikasi.
Pembentukan asam urat dipantau secara spektrofotometri. Singkatnya, 100 μL
dari fraksi sitosol hati diinkubasi sebelumnya dalam 5,4 mL larutan kalium
oksonat (1 mM) di 50 mM dapar natrium fosfat (pH 7,4) pada 35 ° C selama 15
menit. Setelah masa inkubasi, 1,2 mL larutan xantin (250 mM) ditambahkan
untuk memulai reaksi, dihentikan setelah 0 dan 30 menit dengan penambahan 500
μL 0,6 M HCl. Sampel disentrifugasi pada 3000g selama 5 menit dan asam urat
dalam supernatan diukur secara spektrofotometri pada 295 nm (Varian BIO-50).
Konsentrasi protein ditentukan menurut Bradford (1976) metode menggunakan
albumin serum sapi sebagai standar. Aktivitas enzim dinyatakan sebagai nmol
produksi asam urat.
2.6. Efek Peradangan Akibat Kristal Monosodium Pada Tikus
Aktivitas anti-inflamasi ekstrak P. Pseudocaryophyllus dievaluasi
menggunakan model dari metode yang dijelaskan sebelumnya oleh Rasool dan
Varalakshmi (2006). Pada hari pertama percobaan (waktu 0), inflamasi diinduksi
dengan injeksi 50 μL (80 mg / mL) kristal monosodium (MSU) ke dalam wilayah
subplantar tikus kaki belakang kanan, sedangkan kelompok kontrol normal
mendapat saline 0,9%. EAL, EAB, EEL dan EEB (125 dan 250 mg / kg)
disiapkan di 5% larutan berminyak DMSO. Indometasin (3 mg / kg) dalam
campuran 10% Tween 20 larutan air. Sampel diberikan secara gavage 1 jam
sebelum injeksi MSU dan diulangi setiap hari selama 2 hari lagi. Ketebalan kaki
antara wajah punggung dan perut dari kaki diperoleh dengan menggunakan
caliper aturan pada 0, 4, 24 dan 48 jam setelah injeksi MSU, sedangkan
pembengkakan inflamasi dinyatakan sebagai variasi ketebalan (Δ) versus waktu 0.
2.7. Analisis Statistika
Hasilnya disajikan sebagai kesalahan standar mean (S.E.M.) dari enam
hewan. Signifikansi statistik dari perbedaan dievaluasi dengan analisis varian
(ANOVA) diikuti oleh Tes Dunnett menggunakan GraphPad Prism 5.0 Software
(Inc., San Diego, CA, AS). Nilai IC50 dihitung dengan regresi linier.

3. Hasil dan Pembahasan

Dalam analisis farmakognostik terdeteksi adanya triterpen, steroid,
kumarin, saponin, tanin, dan flavonoid. Reaksi positif EEL, EEB, AL dan EB
dengan natrium nitrit, menunjukkan adanya tanin terhidrolisis dan negatif dengan
n-butanol, menunjukkan tidak adanya tanin kental dalam ekstrak ini. Plat
kromatografi berisi sampel ekstrak ini terungkap dengan asam sulfat menegaskan
tidak adanya proanthocyanidins. Dalam EAB dan EEL diidentifikasi keberadaan
coumarins. Flavonoid terdeteksi di EAL, EAB, EEL, EEB, AL dan AB. Dalam
ekstrak air (AL dan AB) diidentifikasi keberadaannya saponin. Triterpen dan
steroid terdeteksi di EAL.
Hasil uji oksidase xantin in vitro, ialah sebagai berikut
 Sumber potensial agen anti-hiperurisemik baru mungkin berasal dari
produk alami. Ekstrak metanol dan lignan dari Phyllanthus niruri menunjukkan
efek anti-hyperuricemic, aktivitas ekstrak metanol ditugaskan untuk tindakan
urikosurik dan sebagian melalui penghambatan xantin oksidase, sedangkan
aktivitas lignan dikaitkan dengan tindakan uricosuric mereka (Murugaiyah dan
Chan, 2009). Dalam studi sebelumnya, Lychnophora trichocarpha dan
Sparattosperma leucanthum terbukti menjanjikan untuk pengobatan artritis gout
dan hiperurisemia, menunjukkan kemampuan untukmenghambat xantin oksidase
hati dan aktivitas anti-inflamasi (De Souza et al., 2012; Lima et al., 2015).
Dalam penelitian ini, spesies P. pseudocaryophyllus untuk secara ekspresif
mampu menghambat xantin oksidase in vitro. Telah dilaporkan sebelumnya
bahwa ekstrak tumbuhan menyebabkan lebih dari 50% penghambatan enzim pada
konsentrasi uji 50 μg / mL membenarkan investigasi lebih lanjut (Schmeda-
Hirschmann et al., 1996). Semua ekstrak (kecuali AL dan AB) menunjukkan nilai
IC50 di bawah 50 μg / mL, yang dievaluasi secara in vivo.
Pemberian ekstrak P. pseudocaryophyllus dari daun dan cabang
menyebabkan penurunan kadar asam urat serum pada tikus hiperurisemik. Fakta
ini dapat dipahami melalui dua jalur yang diselidiki. Ekstrak EAL, EAB, EEB dan
AB dua dosis yang dievaluasi dan AL, (250 mg / kg) menunjukkan peningkatan
ekskresi asam urat urin.. EEL, EAB, EEB dan AB mampu menghambat aktivitas
residu xantin oksidase hati. Dengan demikian, ekstrak P. pseudocaryophyllus
mampu mengurangi hiperurisemia melalui dua jalur yang diteliti: meningkatkan
ekskresi asam urat urin dan menghambat oksidase xantin hati.
Peradangan adalah salah satu masalah utama yang dilaporkan pada asam
urat pasien dan hubungan ini telah dievaluasi menggunakan in vitro studi, model
hewan dan manusia (Krishnan, 2014). Salah satu Ciri utama dari artritis gout akut
adalah aktivasi sel dipromosikan oleh kristal mikro monosodium urate (MSU) di
persendian, yang dapat berinteraksi dengan sel seperti neutrofil, monosit,
makrofag dan sel sinovial sebagai fibroblas (Jiang et al., 2012). Misalnya, dalam
monosit, kristal mikro merangsang sintesis dari sejumlah besar sitokin pro-
inflamasi seperti tumor faktor nekrosis (TNF-α), IL-1β, IL-6 dan IL-8 (Neogi,
2011). Selain itu, kristal urat fagosit makrofag memulai pelepasan enzim lisosom
yang terlibat dalam proses seperti kemotaksis dan permeabilitas sel (Rasool dan
Varalakshmi, 2006). Dalam penelitian ini, diamati bahwa ekstrak etil asetat (EAL
dan EAB) menunjukkan penurunan signifikan pada edema kaki yang disebabkan
oleh Kristal MSU pada 4 jam, 24 jam dan 48 jam. Ekstrak ini juga meningkat
ekskresi asam urat (EAL dan EAB) urin dan menghambat hati xantin oksidase
(EAB 250 mg / kg), menunjukkan aksi sinergis yang mungkin mewakili
kemanjuran dalam pengobatan gout dan hiperurisemia.
Investigasi fitokimia sebelumnya dari P. Pseudocaryophyllus
menghasilkan isolasi pentacyclic triterpenes lupeol, αamyrin, dan β-amyrin dan
flavonoid quercetin, quercitrin, dan afzelin (Paula et al., 2012). Di antara senyawa
ini, lupeol dan quercetin memiliki laporan penurunan kadar asam urat pada tikus
hiperurisemik yang disebabkan oleh oksonat. Efek hipourikemik dari quercetin
sebagian karena penghambatan aktivitas residu xantin oksidase hati (Zhu et al.,
2004). Lupeol tidak memiliki mekanisme hipourikemia seperti yang dijelaskan
(De Souza et al., 2012).
Senyawa ini juga terkait dengan aktivitas anti inflamasi.
Quercetin juga menghambat respon inflamasi yang disebabkan oleh
karagenan pada tikus. Isi PGE2, TNF-α, RANTES, MIP-2 dan mRNA untuk
cyclooxygenase-2 ditekan pada tikus-tikus ini (Morikawa, et al., 2003). Lupeol
memiliki sifat penghambatan pada produksi sitokin inflamasi seperti pelepasan
IL-1, TNF-α dan PGE2 oleh makrofag in vitro (Fernández et al., 2001). The
pentacyclic triterpene α-amyrin menunjukkan tindakan anti-inflamasi yang kuat
dan cepat pada edema telinga tikus yang diinduksi oleh 12-O-
tetradecanoylphorbol-13-acetate (TPA). Mekanisme ini tampaknya melibatkan
kemampuannya untuk menghambat tingkat PGE2, melalui penghambatan ekspresi
COX-2 (Medeiros et al., 2007). Pemberian β-amyrin menyebabkan penurunan
yang signifikan pada edema kaki yang diinduksi karagenan dengan cara yang
bergantung pada dosis. Pengobatan dengan β-amyrin secara signifikan
menghambat sekresi PGE2, IL-6 dan aktivasi NF-κB dengan cara yang
bergantung pada konsentrasi pada LPS yang diinduksi (Krishnan et al., 2014).
 Jadi, efek antihiperurikemik oleh urikosurik atau penghambatan xanthine
oksidase cara dan aktivitas anti-inflamasi disajikan oleh ekstrak P.
pseudocaryophyllus sebagian dapat dikaitkan dengan senyawa ini.

4. Kesimpulan
Spesies P. pseudocaryophyllus menunjukkan aktivitas anti-hiperurisemia
yang luar biasa. ekstrak yang diuji mampu mengurangi asam urat serum melalui
dua jalur utama regulasi asam urat dalam tubuh manusia, dengan menghambat
pembentukan dan meningkatkan nya ekskresi. Oleh karena itu, ekstrak P.
pseudocaryophyllus dapat dianggap menjanjikan dalam pengobatan penyakit yang
berhubungan dengan hiperurisemia. Selain itu, ekstrak etil asetat juga memiliki
aktivitas antiinflamasi yang signifikan.
Beberapa flavonoid telah menunjukkan kemampuan untuk menghambat
xantin oksidase, anti-hiperurisemik dan aktivitas anti-inflamasi. Flavonoid
terdeteksi di semua ekstrak yang dievaluasi, sedang dipertimbangkan metabolit
utama di P. pseudocaryophyllus. Karena itu, kelompok metabolit ini mungkin
bertanggung jawab atas efek anti-hiperurisemik dan anti-inflamasi P.
Pseudocaryophyllus ekstrak.