Aquacultura Indonesiana (2004) 5(2): 79–83

ISSN 0216–0749

Purifikasi Fenolic Bahan Bioaktif Hydrozoa Bougainvilla Sebagai

Bakterisida Terhadap Bakteri Vibrio harveyi
M. Fadjar1), Sri Andayani1) dan M. Faizal2)
1)
Fakultas Perikanan, Universitas Brawijaya,
Jl. Veteran, Malang, E-mail: f4dj4r_02@yahoo.com
2)
FMIPA, Universitas Brawijaya,
Jl. Veteran, Malang

Abstract
M. Fadjar, Sri Andayani and M. Faizal. 2004. Fenolic purification bioactive of Hydrozoa agent as bactericide
of Vibrio harveyi. Aquacultura Indonesiana, 5(2): 79–83. The objective of this research was to isolate and the
Hydrozoa’s (Bougainvilla sp.) bioactive agent and to got the minimum doses of the bioactive agent as bactericide
of Vibrio harveyi, in vitro. The methods used was qualitative test, isolation and purification of the bioactive agent,
light layer chromathography methods, spectrophotometer UV, MIC dan disk test to harveyi isolate. Result showed
phenolic as the bioactive agent in Bougainvilla sp. the minimum concentration for the bioactive agent was 1.9 mg/
L and the biggest inhibiting zone was 10.7 mm as bactericide of V. harveyi.

Keywords: Bougainvilla sp.; Hydrozoa; Phenolic; Vibrio harveyi

Abstrak
Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi dan memurnikan serta mendapatkan dosis terendah penitritasi
masing-masing konsentrasi bahan bioaktif Bougainvilla sp. dari klas Hydrozoa sebagai bakterisida terhadap Vibrio
harveyi, secara invitro. Metode penelitian yang dilakukan adalah uji kualitatif, isolasi dan pemurnian bahan bioaktif,
kromatografi lapis tipis (KLT), Spectrofotometer UV, Uji Minimum Inhibitory Concentration (MIC) dan cakram
terhadap isolat V. harveyi. Hasil uji kualitatif, isolasi dan pemurnian mendapatkan bahan bioaktif fenolic pada
Bougainvilla sp. uji MIC menunjukkan konsentrasi daya hambat terendah 1,9 mg/L terhadap V. harveyi dan uji
cakram menunjukkan zona hambatan terbesar rata-rata 10,7 mm.

Kata kunci: Bougainvilla sp.; Hydrozoa; Fenolic; Vibrio harveyi

Pendahuluan 1–3 hari sejak gejala awal (Taufik dan Zafran,

Hydrozoa merupakan salah satu biota laut
yang tergolong ubur-ubur termasuk phylum
Coelenterata, mempunyai senyawa bioaktif untuk
penanggulangan penyakit pada ikan dan udang.
Penelitian jenis Hydrozoa sangat jarang dilakukan.
Padahal di perairan sangat potensial
keberadaannya. Senyawa bioaktif yang diperoleh
dari bunga karang antara lain dari golongan fenolat,
steroid dan terpenoid menunjukkan aktifitas kuat
terhadap bakteri, ikan dan udang (Muliani et al.,
1998). Selain itu Yahya et al. (2003) menyatakan
bahwa bahan bioaktif tentakel ubur-ubur dapat
dipergunakan sebagai bakterisida selektif untuk
Vibrio harveyi penyebab penyakit larva udang.
Serangan bakteri Vibrio harveyi terhadap benih
bersifat akut dan ganas karena dapat memusnahkan
populasi larva yang terserang hanya dalam waktu
1997).
Pemberian bahan antibiotik dan bahan-bahan
kimia yang digunakan akhir-akhir ini dapat
menyebabkan akumulasi dan persisten di alam,
sehingga dikhawatirkan dapat menurunkan kualitas/
mutu lingkungan perairan. Demikian perlu beberapa
alternatif penanggulangan penyakit dengan
menggunakan bahan-bahan alami yang masih
terbatas pemakaian saponin dan rotenon, sehingga
perlu terobosan baru dengan pemanfaatan bahan
bioaktif Hydrozoa yang lebih ramah lingkungan.
Penggunaan ekstrak kasar Hydrozoa dari species
Bougainvilla sp. terhadap bakteri Vibrio harveyi
melalui uji MIC dan cakram menunjukkan respon
yang positif (Fadjar et al., 2003) sehingga perlu
dilakukan isolasi dan pemurnian bahan bioaktifnya
sebagai bakterisida.

 Hak cipta oleh Masyarakat Akuakultur Indonesia 2005 79

 Aquacultura Indonesiana, Vol. 5, No. 2, Agustus 2004 : 79–83
Materi dan Metode
Isolasi dan Pemurnian Bahan Bioaktif
Filtrat yang diperoleh pada persiapan
sampel diukur volumenya dan diekstraksi dengan
petroleum benzena sebanyak empat kali dengan
volume setengah bagian volume sampel. Fase air
hasil ekstraksi ditambah etanol (1:1) dipekatkan
menggunakan rotary evaporator vacuum pada
suhu 40ºC sehingga diperoleh ekstrak etanol pekat.
Ekstrak etanol pekat ditambah larutan HCl
0,2 N sebanyak dua kali volume ekstrak etanol pekat
sambil distirer dalam ice bath, setelah itu ditambah
larutan NaOH 15% sampai pH 10. Fase kloroform
yang diperoleh dicuci dengan akuades dan
dikeringkan dengan penambahan Na2SO4 an hidrat,
kemudian dipekatkan lagi dengan N 2 sampai
diperoleh ekstrak pekat (Maldoni, 1991).
Analisa Kromatografi Lapis Tipis
Ekstrak kloroform pekat diletakkan pada
permukaan plat KLT dengan pipa kapiler,
selanjutnya dielusi menggunakan lar utan
pengembang kloroform:methanol (10:0) sebanyak
10 mL yang dibandingkan dengan standar kafein
dalam bejana yang telah dijenuhkan dengan pelarut
selama 3 jam. Setelah gerakan pelarut sampai pada
garis batas, elusi dihentikan. Noda pada permukaan
plat diperiksa di bawah sinar UV dengan panjang
gelombang 254 nm. Selanjutnya dilakukan
pemisahan dengan KLT preparatif, di mana elusi
dilakukan tanpa standar kafein. Hasil elusi diambil
dengan cara melarutkan noda dalam 3 mL pelarut
kloroform. Larutan disentrifugasi dan supernatan
disiapkan dalam tabung reaksi.
Identifikasi dengan Spektrofotometer UV
Sampel yang diperoleh dari analisa KLT
dianalisa dengan UV – Vis dengan panjang
gelombang 200–800 nm.
Uji MIC (Minimum Inhibitory Concentration)
Pengamatan kualitatif terhadap ada atau
tidaknya pertumbuhan bakteri setelah diberi bahan
bioaktif pada media cair dilakukan dengan uji MIC.
Larutan pepton 500 mL diambil masing–masing 5
mL untuk 13 tabung reaksi dengan konsentrasi
masing-masing sebesar 500; 250; 125; 62,5; 31,3;
15,6; 7,8; 3,9; 1,9; 1,0; 0,5; 0,2; dan 0,1 mg/L.
 Hak cipta oleh Masyarakat Akuakultur Indonesia 2005
Masing-masing tabung diinokulasi dengan suspensi
bakteri Vibrio harveyi 1 oose (setara dengan Mc
Farland Equivalence Turbidity Standart 1,0).
Sebagai kontrol negatif digunakan 5 mL pepton yang
tidak diinokulasi bakteri sebagai kontrol positif.
Setelah diinkubasi selama 24 jam pada 25ºC,
diperoleh konsentrasi dosis terendah yang dapat
menghambat pertumbuhan bakteri uji.
Uji Cakram
Kertas cakram steril dicelupkan pada
ekstrak bahan bioaktif yang konsentrasinya
ditentukan sesuai perlakuan. Setelah 15–30 menit
kertas cakram ditempelkan pada media TCBSA
yang telah diinokulasi dengan bakteri Vibrio
harveyi. Pengukuran dilakukan setelah masa
inkubasi selama 24 jam pada 25ºC dengan mengukur
zona bening yang terbentuk di sekitar kertas
cakram.
Hasil dan Pembahasan
Isolasi dan Pemurnian Bahan Bioaktif
Bougainvilla sp
Bougainvilla sp. diperoleh perairan
Probolinggo atau Selat Madura. Bougainvilla sp.
diektraksi dengan Etanol dan khloroform diperoleh
massa akhir seperti pada Tabel 1 sedangkan hasil
uji kualitatif terdapat pada Tabel 2 dan hasil
kromatografi lapis tipis (KLT) pada species
Bougainvilla sp. tercantum pada Tabel 3.
Tabel 1. Massa ekstraksi Bougainvilla sp.
Species Massa awal Massa Ekstrak %
(g) Pekat (g)
Bougainvilla sp. 108.26 CHCl3 13.95 12.89
Etanol 10.04 9.27
Tabel 2. Uji kualitatif
Species Uji Uji Uji
Alkaloid Fenolik Flavonoid
Bougainvilla sp. Mayer ++ +
Dragendorff +++ –
Hasil KLT menunjukkan adanya noda tunggal
di atas plat KLT dengan pola nilai Rf yang berbeda-
beda pada berbagai perbandingan pelarut. Adanya
80
 Purifikasi fenolic bahan bioaktif hydrozoa Bougainvilla sp. (M. Fadjar et al.)

Tabel 3. Hasil KLT Bougainvilla sp.

Pelarut pengembang CHCl3:MeOH 10:0 7:3 6:4 2:8

Jarak tempuh pelarut (cm) 8 8 8 8
Jarak tempuh noda sampel (cm) 6.7 6.6 7.1 4.5
Jarak tempuh kafein (cm) 0.3 6.9 7.2 4.2
Rf sampel 0.8375 0.825 0.8875 0.9
Rf kafein 0.0375 0.8625 0.9 0.84
Keterangan noda Satu Noda Noda Satu
noda coklat berekor coklat berekor coklat noda coklat

hanya 1 noda dapat diinterpretasikan sebagai
suatu senyawa yang paling dominan dalam komposisi
ekstrak kloroform atau hanya senyawa tunggal
dalam ekstrak yang dianalisis. Nilai Rf sampel
dibandingkan kafein dalam pengembang 100%
kloroform jauh lebih tinggi daripada kafein. Hal ini
menunjukkan bahwa sifat kepolaran senyawa lebih
rendah daripada kafein dan menggambarkan
kerangka non polar yang dominan pada struktur
senyawa. Sedangkan nilai Rf dengan pengembang
dengan komposisi kloroform lebih rendah daripada
metanol menunjukkan nilai yang tidak berbeda jauh.
Hal ini memungkinkan analisis terhadap berat
molekul senyawa yang tidak terlalu berbeda jauh
dengan kafein.
Analisis UV
Hasil panjang gelombang UV dapat dilihat
pada Tabel 4 di bawah ini.
Tabel 4. Hasil UV dengan akstrak ethanol
Species Panjang
gelombang Amaks
maks (nm)
Bougainvilla sp. 252.0 0.4202
209.0 1.4537
Tipe absorpsi sinar UV dan ekstrak ethanol/
air menunjukkan puncak- puncak kembar pada
daerah 200–250 nm yang berasal dari transisi
elektronik  ke * yang berhubungan dengan
karakter aromatik yang mengandung substituen OH
Tabel 5. Hasil uji MIC terhadap V. harveyi
dalam sistem fenolik. Oleh sebab itu senyawa yang
terkandung dalam ekstrak etanol/air merupakan
senyawa golongan fenolik.
Uji MIC
Dari hasil uji MIC (Tabel 5) dapat diketahui
bahwa konsentrasi bahan bioaktif Bougainvilla sp.
terendah adalah 1,9 mg/L. Konsentrasi bahan
bioaktif ini jauh lebih rendah jika dibandingkan
dengan ekstrak dari beberapa organisme laut yang
sudah diuji coba seperti golongan Tunikata
(Ecteinascida turbinata) di mana organisme ini
bersifat sitotoksik dan pada konsentrasi 10 mg/L
dapat membunuh sel. Sedangkan ekstrak Bugula
stolonifera dan Bugula turrinata menunjukkan
effek menghambat pada konsentrasi 109 mg/L pada
bakteri gram negatif (Angka dan Suhartono, 2000).
Kebanyakan molekul bioaktif yang diisolasi
dari sumber lautan adalah toksin yang merupakan
obat melalui modifikasi kimiawi dan rekayasa
genetika. Organisme laut yang memiliki senyawa
bioaktif berupa racun, di mana senyawa ini dapat
melindungi diri dari serangan jasad renik dan
predator yang berbahaya dan dapat bersifat
sitotoksik, antibakteri (mengganggu pembentukan
RNA sehingga mengganggu sintesa protein), anti
virus dan anti tumor (Robinson, 1995). Senyawa-
senyawa tersebut dapat dimanfaatkan untuk
mengontrol pertumbuhan bakteri terutama bakteri
patogen dengan mekanisme kerja dasar sesuai
dengan yang dikemukakan oleh Tanu (1987), antara
lain:

Bahan Konsentrasi Uji MIC (mg/L)

bioaktif
500 250 125 62.5 31.3 15.6 7.8 3.9 1.9 0.9 0.5 0.3 0.1
Fenolic – – – – – – – – + + + + +

 Hak cipta oleh Masyarakat Akuakultur Indonesia 2005 81

 Aquacultura Indonesiana, Vol. 5, No. 2, Agustus 2004 : 79–83
1. Mengganggu metabolisme sel mikroba
2. Menghambat sisntesa dinding sel mikroba
3. Merusak keutuhan membran sel mikroba
4. Menghambat sintesa protein sel mikroba
(merusak asam nukleat mikroba).
Cao et al. (1998) menyebutkan bahwa
racun ubur – ubur disebut SNTX (Sea Nettle
Jellyfish Toxin) yang terdiri dari beberapa
polipeptida. Sel mengeluarkan lebih dari 1 l SNTX
protein/mL media menunjukkan peningkatan
sementara aktifitas metabolisme yang kemudian
diikuti dengan penurunan secara tajam dan kematian
sel per menit. Selanjutnya disebutkan bahwa racun
ini merupakan senyawa bioaktif yang bersifat
sitotoksid. Racun ubur–ubur ini dapat mengganggu/
merusak membran sel, yaitu dapat mengganggu
transport senyawa yang keluar masuk sel misalnya
nutrisi, karena membran sel juga mengendalikan
pengangkutan aktif ke dalam sel.
Uji Cakram
Uji cakram dilakukan untuk mengetahui
daya hambat bahan aktif dan dosis Bougainvilla
sp. Dengan konsentrasi yang berbeda terhadap
pertumbuhan bakteri V. harveyi. Hasil rata –rata
perlakuan uji cakram dapat dilihat pada Tabel 6
berikut ini.
Tabel 6. Hasil rata-rata pengaruh bahan aktif dan dosis
Bougainvilla sp terhadap daya hambat bakteri
V. harveyi.
Bahan aktif D o s i s (mg/L)
Fenolic 1.9 2.4 2.9 3.4 3.9
Daya 8.17 8.47 8.67 9.33 10.7
hambat (mm)
Diameter daya hambat terbesar untuk
bahan aktif fenolic dari ubur–ubur Bougainvilla sp.
adalah rata – rata10,7 mm. Mekanisme
penghambatan atau kematian mikroba akibat suatu
senyawa kimia disebabkan oleh beberapa hal yaitu:
kerusakan dinding sel, kebocoran membran
sitoplasma, penghambatan sintesa protein,
penghambatan aktifitas enzim dan adanya metabolit
serta penghambatan terhadap pembentukan dan
pertumbuhan spora (Droop dan Jannasch, 1977;
Scheuer,1973 dalam Minale, 1994; Schmitz, 1994).
Pada umumnya senyawa antimikroba yang
berupa fenol mampu menembus dinding sel dan
 Hak cipta oleh Masyarakat Akuakultur Indonesia 2005
merusak sistem yang ada dalam sel. Membran
sitoplasma yang berperan pada keutuhan sel juga
dapat diganggu permeabilitasnya oleh beberapa
senyawa antimikroba yang terdapat dalam ubur-
ubur yang dapat menyebabkan kebocoran isi sel.
Senyawa penyebab kebocoran membran sitoplasma
adalah senyawa yang bersifat antiseptik dan
desinfektan.
Menurut Jawetz et al. (1976), diameter
hambatan yang terbentuk merupakan ukuran
kekuatan suatu zat anti mikroba terhadap bakteri
yang diperiksa. Hambatan di sekitar cakram
tergantung pada daya serap bahan aktif ke dalam
agar dan kepekaan kuman terhadap bahan aktif yang
dipergunakan. Apabila zat anti mikroba itu bersifat
menghambat, maka petumbuhan bakteri tersebut
akan terhenti dan di sekitar cakram disk itu akan
terlihat lingkaran bening yang tidak ditumbuhi bakteri
setelah diinkubasi selama 18–24 jam.
Aktifitas anti mikroba dapat meningkat dari
bakteriostatik manjadi bakterisida bila kadar anti
mikrobanya ditingkatkan melebihi kadar hambat
minimum (MIC), yaitu konsentrasi minimum yang
dapat menghambat pertumbuhan bakteri yang
ditandai dengan terbentuknya daerah bening di
sekitar cakram (Gan et al., 1987).
Dari hasil penelitian ini dapat dijelaskan,
bahwa pada konsentrasi ekstrak yang lebih tinggi
maka kemampuan bahan bioaktif untuk
menghambat pertumbuhan bakteri V. harveyi akan
semakin besar. Akan tetapi konsentarsi bahan
bioaktif yang tinggi tidak selamanya akan
memberikan zona hambatan yang lebar karena
masih ada faktor lain yang penting dan perlu untuk
diperhatikan, yaitu kecepatan pertumbuhan dari
bakteri. Apabila kecepatan aktifitas anti bakteri dari
sampel ke dalam medium lebih rendah daripada
kecepatan pertumbuhan bakteri maka peningkatan
konsentrasi tidak akan memperbesar zona
hambatannya.
Kesimpulan
Dari hasil penelitian ini dapat disimpulkan
bahwa Bougainvilla sp yang termasuk dalam
kelompok Hydrozoa mengandung bahan bioaktif
fenolic, yang dapat dipergunakan sebagai bakterisida
terhadap bakteri V. harveyi.
Daya hambat minimal dari bahan-bahan
bioaktif fenolic terhadap bakteri V. harveyi adalah
1,9 mg/L. Zona hambatan rata–rata yang terbesar
82
 Purifikasi fenolic bahan bioaktif hydrozoa Bougainvilla sp. (M. Fadjar et al.)
dari bahan bioaktif fenolic terhadap bakteri V.
harveyi adalah 10,70 mm
Ucapan Terima Kasih
Penulis mengucapkan terima kasih kepada
DIKTI, Depdiknas karena penelitian ini dapat
terlaksana berdasarkan dana Penelitian Hibah
Bersaing X/2 tahun anggaran 2003.
Daftar Pustaka
Angka, S.L. dan M.T. Suhartono. 2000. Bioteknologi Hasil
Laut. Pusat Kajian Sumberdaya Pesisir dan
Lautan, IPB, Bogor. 149 hlm.
Cao, C.J., M.E. Eldefrawi, A.T. Eldefrawi, J.W. Burnet,
R.J. Mioduszewski, D.E. Menking and J.J.
Valdes. 1998. Toxicity of sea nettle toxin to human
hepatocytes and protective effects of
phosporylating and alkylating agents. Toxicon,
Maryland, USA, 36: 269–281.
Droop, M.R. and H.W. Jannasch. 1977. Advance in
Aquatic Microbiology. Academic Press., New
York, 381 pp.
Fadjar, M., Sri Andayani, D. Arfiati dan A. Prajitno. 2003.
Pemanfaatan ekstrak kasar hydrozoa sebagai
bakterisida terhadap bakteri Vibrio harveyi.
Jurnal Ilmu–ilmu Hayati (Life Sciences), Malang,
15(1): 60–71.
Gan, S.R., Setiabudi, U. Sjamsudin dan Z.S. Bustami.
1987. Farmakologi dan Terapi. Bagian farmakologi,
Fak. Kedokteran UI, Jakarta, 729 hlm.
 Hak cipta oleh Masyarakat Akuakultur Indonesia 2005
Jawetz, E., J.L. Melnick dan E.A. Adelberg. 1976. Review
Of Medical Microbiology. Lange Medical
Publications, Canada, 542 pp.
Maldoni, B. 1991. Alkaloid: Isolation and Purification.
Journal of Chemical Education, 68(8): 700–703.
Minale, L. 1994. Terpenoid bunga karang. Dalam: P.J.
Scheuer (Ed.), Marine Natural Product,
Penerjemah Kosoemardiyah, IKIP Semarang
Press., Semarang, hlm. 181–247.
Muliani, E., Suryati, A. Tompo, A. Parenrengi dan
Rosmiati. 1998. Isolasi bioaktif bunga karang
sebagai fungisida pada benih udang windu
Penaeus monodon. Jurnal Penel. Perik. Indo.,
Jakarta, 4(2): 13–24.
Robinson, T. 1995. Kandungan Organik Tumbuhan
Tinggi, Edisi ke enam. Penerjemah: K.
Padmawinata, Penerbit ITB, Bandung, 367 hlm.
Schmitz, F.J. 1994. Steroid dari lautan tak lazim. Dalam:
P.J. Scheuer (Ed.), 1978. Marine Natural Product,
Penerjemah Koesoemardiyah, IKIP Semarang
Press., hlm. 251–305.
Tanu, I. 1987. Farmakologi dan Terapi, Edisi 3. Bag.
Farmakologi, Fak. Kedokteran UI. Jakarta.
Taufik, I. dan Zafran. 1997. Uji daya hambat berbagai
jenis bakteri terhadap perkembagan Vibrio
harveyi pada pemeliharaan larva kepiting bakau
(Scylla serrata). Jurnal Penel. Perik. Indo.,
Jakarta, 2(1): 36–44.
Yahya, Sukoso, Aulanni’am, S.B.U. Bagus dan J.
Basmal. 2003. Identifikasi dan purifikasi bioaktif
hasil ekstrak jaringan tentakel ubur–ubur laut
sebagai bakterisida selektif untuk Vibrio harveyi
penyebab penyakit larva udang. Jurnal Ilmu–ilmu
Hayati, Malang, 15(1): 39–52.
83