Diterjemahkan dari bahasa Inggris ke bahasa Indonesia - www.onlinedoctranslator.

com

www.nature.com/scientificreports

membuka
Kontribusi frustula dan jejak
lendir pada mobilitas diatom
Navicula sp.
Diterima: 2 Oktober 2018
Lei Chen, DingWeng, Chuan Du, JiadaoWang & shan Cao
Diterima: 23 April 2019
jejak lendir yang disekresikan dari diatom Navicula sp. dalam proses motilitas dipelajari dengan pemindaian
Diterbitkan: xx xx xxxx
mikroskop elektron (seM), mikroskop elektron transmisi (teM), mikroskop gaya atom (AFM) dan spektrum Raman
dll. Berlawanan dengan penelitian sebelumnya, pengukuran gaya dilakukan langsung pada jejak lendir sel hidup
menggunakan metodedi tempat pemetaan kekuatan oleh AFM. kurva gaya retraksi menunjukkan puncak tip-
substrat yang meningkat dan puncak tip-mucilage pola gigi gergaji kecil.Terutama, pengukuran yang sama pada
berbagai substrat dengan energi permukaan yang berbeda mengungkapkan bahwajejak lendir sebenarnya
berfungsi sebagai media yang meningkatkan gaya perekat antara diatom dan substrat, yang sangat penting
untuk adhesi dan penggerak diatom. Selain itu, sifat mekanikjejak lendir sangat berbeda dari untaian lendir
dalam kekuatan perekat maksimum dan panjang ekstensi polimer maksimum. Spektrum Raman menunjukkan
perbedaan komposisi yang keduanyadari dua jenis lendir memiliki protein dan polisakarida, tetapi untai lendir
mengandung beberapa komponen lain dengan C=o, —CH2— dan —CH3 peregangan asimetris dan simetris.
penelitian ini memberikan informasi yang lebih tepat tentang jejak lendir yang akan berguna dalam hal motilitas
diatom dan pencegahan biofouling.

Biofouling laut adalah proses kompleks yang melibatkan adhesi, pergerakan, pertumbuhan, dan reproduksi organisme
laut ke dalam struktur buatan yang terendam seperti lambung kapal, instrumen navigasi, keramba jaring akuakultur, dan
pipa pemasukan air laut, menyebabkan masalah seperti peningkatan hambatan, konsumsi bahan bakar, dan instrumen.
biaya perawatan1-5. Eksperimen perendaman laut telah menunjukkan bahwa organisme eukariotik pertama yang
menempel dan membentuk biofilm awal biasanya adalah diatom uniseluler, fotosintesis, dan bentik.6-10.
Salah satu karakteristik unik dari sel diatom adalah sel silika berornamen tinggi (frustula) dibangun seperti
cawan Petri yang terdiri dari dua bagian yang disatukan dengan korset; dan protoplas tertutup dalam frustula ini
di mana susunan pori terbentang11. Berdasarkan karakteristik dan keragaman hierarki frustrasi, nanoteknologi
diatom telah menarik penelitian kolaboratif di bidang biologi, fisika, kimia, ilmu material, dan teknik.12,13.
Misalnya, struktur frustule mengilhami perangkat mikro dan nano yang dirancang14, seperti engsel buatan dan
perangkat yang saling mengunci15,16, mekanisme klik-berhenti16, pompa mikro17, dan kontak stabil yang
diperkuat18, sel surya peka-pewarna (DSSC), elektroda baterai berstruktur nano, dan perangkat tampilan
elektroluminesen19,20.
Spesies diatom yang sangat motil, seperti Navicula sp., dapat menempel kuat pada permukaan hidrofobik dan melayang
sebagai respons terhadap fluktuasi tingkat nutrisi21-23. Adhesi sel diatom ke permukaan yang berbeda dibantu oleh sekresi terus
menerus dari lendir perekat, suatu bentuk zat polimer ekstraseluler (EPS)24-29. Untuk sebagian besar diatom raphid, dua lendir
perekat yang berbeda disekresikan30. Salah satunya adalah lapisan lendir yang sedikit lengket yang membungkus sebagian besar
permukaan sel, yang disebut jejak lendir. Yang lain yang disebut untai lendir disekresikan dari bagian raphe yang merupakan satu
atau dua celah melalui muka katup diatom mono-raphid atau bi-raphid. Untaian lendir membuat adhesi sel-substratum pada
raphe memberikan kekuatan pendorong traksi untuk 'meluncur' diatom, suatu bentuk motilitas khusus yang diamati pada diatom
raphid. Studi sebelumnya telah menyarankan bahwa ketika diatom meluncur di atas permukaan, untaian lendir di dekat raphe
terlepas dari sel dan meninggalkan 'jejak' diatom, yang akhirnya terakumulasi sebagai komponen awal biofilm.31,32. Oleh karena
itu, untaian lendir memiliki pengaruh yang signifikan terhadap proses pembentukan biofilm.

Penelitian sebelumnya menunjukkan bahwa jejak lendir relatif mudah larut, menyebar, dan tidak terlihat jelas24,32,
mengakibatkan berbagai kesulitan dalam pengamatan eksperimental. Partikel pelacak32-34, lektin dan spesifik

Laboratorium Kunci Negara Tribologi, Universitas Tsinghua, Beijing, 100084, PR China. Korespondensi dan permintaan
untukbahan harus ditujukan ke JW (email: jdwang@mail.tsinghua.edu.cn)

Ilmiah Laporan | (2019) 9:7342 | https://doi.org/10.1038/s41598-019-43663-z 1

www.nature.com/scientificreports/ www.nature.com/scientificreports

Kaca silikon Nilon PVC PP

Energi permukaan (mJ/m2) 4400 1200 50.1 40.1 30.1
Kekasaran permukaan (nm) 24.8 10.5 63.2 55.4 96.2

Tabel 1. Energi permukaan dan kekasaran setiap substrat.

antibodi35 telah diterapkan pada jejak lendir sebagai label. Namun, metode ini hanya memungkinkan deteksi,
tanpa memberikan informasi topografi. Noda kimia seperti 'Stains-all' telah berhasil digunakan untuk mewarnai
jejak, memberikan informasi tentang topografi jalan36, meskipun beberapa sifat jejak diubah oleh proses
pewarnaan. Oleh karena itu, sifat mekanik untaian lendir tidak boleh diukur setelah pewarnaan kimia. Dengan
menggunakan AFM dalam mode 'sadap cairan', Higginsdkk., (2000) memperoleh gambar topografi jejak lendir
dalam keadaan terhidrasi, meskipun topografi tidak cukup rinci31. Karena tidak terlihatnya jejak lendir di bawah
mikroskop optik, tidak mungkin untuk menemukan posisi yang benar untuk penempatan ujung kantilever untuk
mencapai kurva gaya perekat yang diperlukan, mengakibatkan kesulitan dalam penilaian sifat mekanik jejak
lendir. Penelitian sebelumnya30,31,34 telah melaporkan bahwa lebih baik menggunakan lendir yang dikumpulkan di
dekat raphe untuk mempelajari sifat mekanik, di mana jejak lendir dianggap berasal, daripada mencoba
memanfaatkan jejak itu sendiri. Namun, masih belum jelas apakah jejak lendir terbentuk dari lendir yang sama
yang dapat ditemukan di dekat raphe, apakah perubahan fisikokimia terjadi pada lendir setelah pemotongan dan
pemisahan dari sel, atau apakah sel dapat mengubah komposisi lendir selama 'meluncur'. . Oleh karena itu,
informasi tentang untaian lendir masih kurang dan penyelidikan lebih lanjut sangat penting untuk meningkatkan
pemahaman kita tentang penggerak diatom dan biofouling.
Kemampuan lentur frustule dan locomotion penting untuk diatom karena mereka harus melewati ruang
terbatas tanpa terkubur oleh sedimen segar untuk mencapai posisi yang lebih baik dengan nutrisi dan cahaya
yang cukup. Dalam penelitian ini, pewarnaan kimia digunakan untuk mendapatkan gambar SEM yang jelas dari
jejak lendir yang terdehidrasi. Topografi tiga dimensi dari jalur lendir dehidrasi diakuisisi oleh AFM.Di tempat
pemetaan gaya pada substrat di sekitar diatom yang lewat, memungkinkan pengukuran langsung gaya perekat
jejak lendir. Selain itu, komposisi jejak lendir dianalisis dengan spektra Raman, dengan hasil sifat mekanik dan
komposisi jejak lendir dianalisis dan dibandingkan dengan untaian lendir.

Bahan dan metode

Isolasi dan kultur diatom. diatom unialgal Navicula sp. dibeli dari institut oseanologi, Chinese
Academy of Science, dan diatomNavicula sp. diisolasi dari Teluk Jiaozhou di Qingdao (36°LU; 120°BT), Cina.
Media kultur disiapkan berdasarkan media kultur f/2 standar dengan tambahan Na2SiO3 (7.3mg/L) untuk
mempercepat aktivitas diatom. Media kultur disegarkan setiap 3 hari dan dipelihara di bawah kondisi
penerangan standar dengan siklus terang/gelap 12:12 jam (bohlam putih fluorescent Philips,
5.000 lux atau 67,7 E m2 S1), pada 20 °C. Untuk diatom eksperimental dipertahankan di bawah kondisi pertumbuhan
eksponensial.

Pembersihan frustula diatom. 15 mL hidrogen peroksida (H2HAI2, 35% larutan berair) ditambahkan untuk
membersihkan frustula diatom, dan campuran dipanaskan sampai 90 ° C selama 4 jam untuk memastikan oksidasi
lengkap dari kandungan organik. Setelah 4 jam sedimentasi pada suhu kamar, lapisan atas campuran dihilangkan dan 5
mL asam klorida (HCl, 37% larutan berair) ditambahkan, memungkinkan reaksi selama 2 jam. Kemudian, campuran
dengan frustula dibilas beberapa kali dengan DI-water, lapisan atas dihilangkan setelah 4 jam sedimentasi setiap kali.
Lapisan bawah larutan yang dihasilkan diendapkan ke dalam chip silikon dan dikeringkan pada suhu kamar. Setelah
benar-benar kering, sel-sel disematkan dan dipotong untuk pengamatan TEM dari pori-pori dan partikel nano frustula.

persiapan substrat. Lima jenis substrat termasuk kaca, silikon, polipropilen (PP), polivinil klorida (PVC) dan poliglisin
(Nylon) dipilih karena energi permukaannya yang berbeda akan menciptakan kondisi perekatan yang berbeda. Semua
substrat dipotong menjadi 15 mm×15mm×pelat 3mm dan dipoles. Energi permukaan dan kekasaran masing-masing
substrat tercantum dalam Tabel1. Sebelum percobaan, semua substrat dibersihkan dengan pencucian ultrasonik
berurutan dalam aseton, etanol dan air suling, masing-masing selama 20 menit.

Pewarnaan kimia dan persiapan diatom untuk seM. Pewarnaan kimia dari jejak lendir adalah
dilakukan dengan pemipetan beberapa tetes sel tersuspensi ke dalam wafer silikon yang ditempatkan dalam cawan petri
plastik, kemudian setelah sel dibiarkan mengendap selama 10 menit, ditambahkan sekitar 20 mL medium ke dalam
cawan sampai wafer silikon terendam seluruhnya. Wafer silikon dikeluarkan secara sistematis dari cawan dan 2 mL
larutan Noda-Semua (0,1 g “Stains All” [Sigma, St. Louis, MO, USA] dalam 100 mL formamida) ditambahkan ke permukaan
wafer selama 5 menit, untuk pewarnaan jejak lendir. Wafer silikon kemudian dibilas dengan lembut dalam media steril,
kaca penutup ditempatkan di atas slide dan disegel dengan lilin. Sel dibiarkan untuk menyelesaikan pewarnaan selama 1
jam, setelah itu, wafer silikon dikeringkan dengan pengeringan beku selama 24 jam. Sampel kemudian dilihat
menggunakan mikroskop elektron pemindaian pistol emisi lapangan (TESCAN LYRA3 FEG-SEM/FIB),

Pemindaian topografi AFM diambil pada jalur lendir yang mengalami dehidrasi. Selama pengamatan SEM, dering
alur bentuk dibentuk oleh sinar ion terfokus (FIB) di dekat setiap area jejak lendir yang diamati, untuk memastikan bahwa
jejak lendir yang sama mudah diidentifikasi dengan mikroskop optik menggunakan AFM (Asylum Research, Santa

Ilmiah Laporan | (2019) 9:7342 | https://doi.org/10.1038/s41598-019-43663-z 2

www.nature.com/scientificreports/ www.nature.com/scientificreports

Gambar 1. Pandangan skematis dari di tempat memaksa pemetaan oleh AFM.

Gambar 2. Gambar mikroskop optik dari di tempat memaksa pemetaan oleh AFM. Diatom bergerak dari atas ke bawah
dengan kisi pengukuran persegi panjang ditempatkan di jalur tepat di belakang diatom yang bergerak. Bilah skala: 20
m.

Barbara, CA, AS). Sampel wafer silikon direkatkan ke slide kaca dan kemudian dipasang pada tahap sampel magnetik AFM, dengan
pengamatan dilakukan dalam mode sadap, dengan laju pemindaian 1 Hz dan ukuran pemindaian 5 m.

pengukuran gaya AFM. Pengukuran gaya AFM pertama kali dilakukan pada substrat bersih di lingkungan udara murni
dan media kultur sebagai kontrol komparatif, sebelum pengukuran pada jejak lendir dalam media kultur. Suhu dan
kelembaban dipertahankan pada 25 ° C dan 10% RH, masing-masing. Probe yang digunakan untuk pengukuran gaya,
adalah kantilever silikon OMCL-AC240 (Olympus Corporation, Jepang) dengan konstanta pegas 1,83N/m yang ditentukan
menggunakan metode thermal tune37. Setelah pengukuran gaya jejak lendir telah diambil, ruang sampel cairan disiapkan
dengan menempatkan substrat ke bagian bawah penangas cairan yang dirancang khusus untuk digunakan dengan AFM.
HidupNavicula sp. sel disuspensikan dalam 1-2mL media kultur, kemudian larutan dipindahkan dengan pipet ke dalam
penangas cair, kemudian dibiarkan mengendap di permukaan substrat selama 10-20 menit. Setelah mengendap,
penangas cairan dipasang di bawah probe AFM, yang digunakan bersama dengan mikroskop optik untuk memudahkan
visualisasi diatom. Probe dipandu secara manual untuk diposisikan di jalur tepat di belakang diatom yang bergerak,
dengandi tempat pemetaan kekuatan dinilai menurut 12×10 kisi persegi panjang (Gambar 1 dan2) dengan jarak 100 nm
antar titik pengukuran. Perangkat lunak probe kekuatan molekul IGOR PRO (Wave Metrics, Lake Oswega, OR, USA),
digunakan untuk mengubah data mentah menjadi kurva gaya versus jarak pemisahan. Semua pengukuran gaya
didasarkan pada data dari beberapa diatom yang berbeda, menggunakan ujung kantilever baru untuk setiap diatom.

spektrum Raman. Ruang sampel cairan disiapkan dengan menempatkan potongan 3 . yang tidak dilapisi × Substrat
stainless steel 4 cm, di atas cawan petri kaca. Diatom hidupNavicula sp. sel disuspensikan dalam media kultur dan
dipindahkan ke cawan petri dengan pipet, sampai substrat terendam. Ruang-ruang itu kemudian dibiarkan tidak
terganggu sehingga sel-sel dapat mengendap di permukaan substrat. Setelah mengendap, cawan petri dipasang di
bawah mikroskop Raman dan spektrum Raman dihasilkan menggunakan mikroskop Raman LabRAM HR 800 (Horiba
Jobin Yvon) dengan kamera CCD berpendingin nitrogen cair. Laser ion Ar dengan panjang gelombang eksitasi 514 nm
pada intensitas 10 mw digunakan, dengan waktu akuisisi 30 detik. Semua spektrum dikoreksi latar belakang dan resolusi
spektral adalah 1 cm1. Saat mengukur jejak lendir setelah periode pengendapan diatom (20 menit), motilitas diatom
dengan meluncur di permukaan substrat terlihat dengan mikroskop optik, dengan laser ion Ar yang difokuskan pada kisi
pengukuran persegi panjang yang sama seperti yang diterapkan dalam pemetaan gaya AFM. Ketika mengukur untaian
lendir, periode pengendapan diatom diperpanjang hingga 2 jam, sampai sejumlah besar untaian lendir telah terlihat
terakumulasi di samping diatom yang tidak bergerak, di mana titik diatom dihilangkan dan laser ion Ar difokuskan pada
untaian lendir.

Hasil
pengamatan struktur hierarki frustula diatom. Gambar SEM dan TEM dari frustule
dari Navicula sp. ditunjukkan pada (Gbr.3). Gambar SEM skala besar dari frustule (Gbr.3a, b) menunjukkan array pori dua
dimensi. Pori-porinya berbentuk lingkaran atau elips dengan ukuran berkisar antara 100 ~ 200 nm. Dalam gambar TEM
resolusi lebih tinggi (Gbr.3c–f), lubang heksagonal yang lebih rinci dengan diameter 10 nm dapat diamati di lapisan
frustule lainnya. Oleh karena itu, dapat disimpulkan bahwaNavicula sp. frustule memiliki struktur hierarkis dengan dua
lapisan berpori.

Ilmiah Laporan | (2019) 9:7342 | https://doi.org/10.1038/s41598-019-43663-z 3

www.nature.com/scientificreports/ www.nature.com/scientificreports

Gambar 3. Gambar SEM dan TEM dari frustula diatom Navicula sp. (A) Gambar SEM dari keseluruhan gambar
frustule. (B) Gambar SEM dari permukaan luar frustule (C) Gambar TEM dari permukaan luar frustule (D-F) Gambar
TEM permukaan bagian dalam frustule.

Gambar 4. Gambar SEM dari jejak lendir dehidrasi dan untaian lendir. Jejak lendir gelap dan meninggalkan
diatom memanjang dalam garis lurus atau melengkung. Untaian lendir cerah, dengan akumulasi tidak teratur
diamati di samping diatom. Bilah skala: 5 m (A), 2 m (B).

topografi 'jejak' dehidrasi. Gambar SEM dari lintasan meluncur diatom ditunjukkan pada (Gbr. 2). 4), dengan
beberapa jejak lendir yang terlihat tertinggal di belakang diatom pada substrat silikon, memanjang dalam garis
lurus atau melengkung. Lebar jalur lendir sekitar 400 nm. Selain itu, gerakan luncur diatom ternyata fleksibel,
dengan kemampuan untuk mengubah sudut 90 ° berturut-turut (Gbr. 2).4b). Untaian lendir juga terlihat dalam
gambar, dengan banyak untaian ditemukan terakumulasi di sisi sel.
Tiga gambar topografi dimensi diambil oleh AFM dalam mode penyadapan, dengan struktur nano dari jejak lendir setelah
dehidrasi ditunjukkan pada (Gbr. 2b). 5). Ketinggian rata-rata jalan adalah sekitar 120 nm, dengan permukaan kasar yang
mengandung tonjolan yang tak terhitung jumlahnya, yang mungkin terbentuk selama dehidrasi. Jejak lendir yang ditunjukkan
pada (Gbr.5a) lebih lebar dan lebih kasar daripada di (Gbr. 5b). Tampaknya lendir disekresikan pada laju aliran yang konstan,
seperti ketika diatom meluncur perlahan, lendir akan terakumulasi ke tingkat yang lebih besar, menghasilkan jejak yang lebih
lebar. Selain itu, ketika diatom meluncur perlahan kecepatannya juga lebih lambat, menyebabkan permukaan luar menjadi lebih
kasar. Secara keseluruhan, gerakan yang tidak seragam dapat menghasilkan topografi yang berbeda yang diamati untuk jejak
lendir.

Ilmiah Laporan | (2019) 9:7342 | https://doi.org/10.1038/s41598-019-43663-z 4

www.nature.com/scientificreports/ www.nature.com/scientificreports

Gambar 5. Tiga dimensi topografi jalur lendir dehidrasi oleh AFM. (A) diambil dari bagian melengkung
dari jejak lendir di (Gbr. 4a), ketika (B) diambil dari bagian lurus dari jejak lendir di (Gbr. 4b).

Gambar 6. Di tempat pemetaan kekuatan oleh AFM pada substrat kaca. Setiap bujur sangkar mewakili gaya perekat ujung-
substrat maksimum, dengan jarak antara pusat bujur sangkar yang berdekatan adalah 100 nm. Nilai gaya pusat lebih tinggi
daripada yang ditemukan di tepi atas dan bawah, dengan nilai pengamatan tertinggi adalah 7,95 nN.

Pengukuran gaya oleh AFM. Karena jejak lendir relatif larut, menyebar, dan tidak terlihat oleh mikroskop optik24,32,
sangat sulit untuk mengukur kurva gaya secara langsung pada jalur lendir. Sebaliknya, penelitian sebelumnya telah
mengukur lendir di daerah raphe di mana lendir dianggap telah dikeluarkan dari24, bagaimanapun, ini mensyaratkan
bahwa diatom tidak bergerak selama pengukuran. Sayangnya, dengan metode pengamatan ini, asumsi signifikan dibuat,
bahwa komposisi lendir tidak berubah karena mendorong pergerakan diatom. Selain itu, metode ini tidak
memungkinkan kekuatan perekat antara lendir dan substrat untuk dinilai. Selain itu, banyak perubahan dapat terjadi
pada lendir setelah dicukur dan dipisahkan dari sel. Oleh karena itu, dalam penelitian inidi tempat pemetaan gaya
diadopsi untuk mendapatkan sifat mekanik nyata dari jejak lendir segar. Kisi persegi panjang adalah arah luncuran
diatom yang normal, memastikannya menutupi seluruh area yang memungkinkan di mana jejak dapat ditemukan. Jika
ada jejak lendir, mereka pasti harus dideteksi. Dengan menggunakan metode ini, kami mendapatkan 120 kurva gaya di
setiap pengukuran. Menganalisis kurva gaya ini dan gaya perekat maksimum yang diamati antara ujung probe AFM dan
substrat, memungkinkan peta gaya dibuat, seperti yang ditunjukkan pada (Gbr. 2).6). Sebagai perbandingan, gaya antara
substrat bersih dan ujung probe dalam media kultur juga diukur, dengan hasil yang ditunjukkan pada (Gbr. 2).6a).
Sementara itu, karena untaian lendir mudah terlihat dengan mikroskop optik, mereka diukur secara langsung oleh AFM,
dengan hasil yang ditunjukkan pada (Gbr. 2b).7). Hasilnya di (Gbr.6) menunjukkan area yang berbeda di mana kekuatan
perekat maksimum jelas lebih besar dari
yang lain. (Ara.7a) menunjukkan bahwa hanya puncak perekat kecil yang muncul ketika ujung probe terpisah dari
substrat bersih dalam media kultur, memungkinkan ini digunakan sebagai kontrol dasar. Oleh karena itu, setiap
area dengan daya rekat maksimum yang lebih besar dari nilai kontrol ini, dapat dianggap sebagai bagian dari
jejak lendir. Nilai terbesar yang diamati untuk gaya rekat tip-substrat maksimum adalah 7,95 nN, dengan nilai
yang diamati pada tepi atas dan bawah berada di bawah 1 nN. Karena jarak antara titik pengukuran adalah 100
nm, lebar jalur ini sekitar 500-600 nm, yang lebih lebar dari jalur dehidrasi yang diamati oleh SEM dan AFM, yang
mungkin merupakan hasil dari proses dehidrasi. Kekuatan perekat maksimum ditemukan di tengah lendir

Ilmiah Laporan | (2019) 9:7342 | https://doi.org/10.1038/s41598-019-43663-z 5

www.nature.com/scientificreports/ www.nature.com/scientificreports

Gambar 7. Karakteristik kurva gaya adhesi (retraksi) pada substrat kaca dalam media kultur. (A) Kurva gaya untuk
substrat bersih, dengan hanya puncak perekat ujung-substrat yang sangat kecil. (B) Kurva gaya untuk jejak lendir,
menunjukkan puncak perekat tip-substrat yang menonjol dan puncak perekat tip-lendir berpola gigi gergaji. (C) Kurva
gaya untuk untaian lendir, hanya menunjukkan satu puncak perekat lendir ujung yang sangat besar dan variasi non-
linier pada bidang kontak.

Angka 8. Perbandingan kekuatan perekat maksimum Fmaksimal antara ujung kantilever dan substrat yang berbeda dalam
media yang berbeda. Kotak hitam mewakili Fmaksimal diukur pada substrat bersih di udara. Lingkaran merah mewakili F
maksimal diukur dalam jejak lendir pada substrat dalam media kultur. Segitiga biru mewakili Fmaksimaldiukur pada substrat

bersih dalam media kultur. Batang kesalahan mewakili satu standar deviasi perhitungan untuk 40 kurva gaya terpisah (4
sampel untuk setiap jenis material dan 10 kurva gaya terpisah untuk setiap sampel).

jejak lebih besar dari yang terdeteksi di tepi, yang mungkin karena lendir di tengah lebih tebal daripada di tepi. Perlu dicatat
bahwa daerah jejak lendir yang lebih tebal ditemukan memiliki kekuatan perekat yang lebih besar. Alasan terperinci
membutuhkan penyelidikan lebih lanjut.
Menurut peta kekuatan yang ditunjukkan pada (Gbr. 6), kurva gaya perekat karakteristik dengan dua gaya perekat
puncak dapat dideteksi dan ditunjukkan pada (Gbr. 7b). Puncak pertama mewakili kekuatan perekat maksimum
antara ujung probe AFM dan substrat di sekitar jalur lendir (Fmaksimal), sedangkan puncak kedua mewakili gaya
perekat antara ujung probe AFM dan jejak lendir (Fmaksimal). Ketika membandingkan kurva gaya perekat dari (Gbr.
7a) dengan itu dari (Gbr. 7b), ditemukan bahwa gaya rekat antara ujung probe dan substrat cukup berbeda dari
antara ujung probe dan jejak lendir. Alasannya bisa jadi ketika mengukur kekuatan perekat jejak lendir, ujung
probe benar-benar terbenam dalam jejak lendir. Menurut teori XDLVO38,39 dan teori Lifshitz tentang gaya Van der
Waals40, sifat-sifat seperti konstanta dielektrik, indeks bias, nilai pH, kekuatan ionik dan keadaan polimer dari
media interaksi, semuanya secara signifikan mempengaruhi gaya perekat antara ujung probe dan substrat.
Selain itu, kurva kekuatan perekat diukur pada berbagai substrat, termasuk kaca, silikon, polipropilen (PP),
polivinil klorida (PVC) dan poliglisin (Nylon) di udara, media kultur dan ekor lendir. Kekuatan perekat maksimum
yang diamati antara ujung probe dan substrat, ditunjukkan pada (Gbr. 2).8). Dari (Gbr.8), jelas bahwa gaya
perekat maksimum bervariasi sesuai dengan substrat yang berbeda dan

media. Fmaksimal diukur pada substrat bersih menurun secara signifikan dari tingkat yang diukur di bawah udara ke media
kultur, namun, adanya jejak lendir pada substrat di bawah media kultur meningkatkan Fmaksimal ke tingkat yang berbeda
tergantung pada substrat. Data menunjukkan bahwa semakin besar Fmaksimal di udara, semakin besar peningkatannya
dengan adanya jejak lendir, menunjukkan bahwa bahan dan sifat permukaan juga mempengaruhi kekuatan perekat jejak
lendir. Secara umum, jejak lendir ditemukan untuk meningkatkan kekuatan perekat antara diatom dan semua substrat
yang diuji dalam percobaan ini, meskipun tingkat peningkatan terkait dengan sifat permukaan itu sendiri. Karena energi
permukaan Nylon, PVC dan PP secara signifikan lebih rendah

Ilmiah Laporan | (2019) 9:7342 | https://doi.org/10.1038/s41598-019-43663-z 6

www.nature.com/scientificreports/ www.nature.com/scientificreports

Gambar 9. Angka perbandingan distribusi probabilitas dari gaya rekat maksimum Fmaksimal dan Fmaksimal (A
) dan panjang ekstensi polimer maksimum Dmaksimal (B) dari jejak lendir dan untaian lendir. (C) Distribusi
kekuatan adhesi dan jarak jalur lendir dan untaian lendir.

Gambar 10. Diagram skema hubungan antara kurva jarak gaya adhesif dan perpanjangan rantai
polimer, dalam (A) jejak lendir dan (B) untaian lendir.

daripada kaca dan silikon, dapat disimpulkan bahwa tingkat peningkatan kekuatan perekat oleh jejak lendir lebih kecil,
pada bahan energi permukaan rendah.
Dalam kurva gaya retraksi yang dibuat untuk untaian lendir (Gbr. 7c), hanya satu puncak perekat besar yang
diamati. Selain itu, area kontak kurva gaya retraksi untuk untaian lendir tidak linier, menunjukkan variasi yang
signifikan dari kurva gaya yang dibuat untuk jalur lendir di (Gbr. 4b).7b). Puncak unik dalam kurva gaya untuk
untaian lendir dan puncak kedua dalam kurva gaya untuk jejak lendir, dapat ditafsirkan sebagai respons elastis
rantai polimer setelah diadsorpsi ke ujung probe dan kemudian diregangkan saat ujung ditarik dari substrat.
(Ara.9a) menggambarkan distribusi probabilitas dari Fmaksimal dan Fmaksimal kekuatan perekat dari jejak lendir, serta
Fmaksimal dari kurva kekuatan perekat untuk untaian lendir. Fmaksimal jejak lendir ditemukan antara 2 nN–9 nN
dengan nilai rata-rata 4,51±1,72 nN (rata-rata±SD; n=90), sedangkan Fmaksimal nilainya antara 0–2,5 nN dengan nilai
rata-rata 1,31 ± 0,24 nN (rata-rata± SD; n= 90). Fmaksimal helai lendir ditemukan antara 20 nN-45 nN dengan nilai
rata-rata 32,1 ± 5,67 nN (rata-rata ± SD; n = 90). (Ara.9b) menunjukkan distribusi probabilitas panjang ekstensi
polimer maksimum Dmaksimal, untuk kedua bentuk lendir. Dmaksimal jejak lendir ditemukan antara 45 nm-95 nm
dengan nilai rata-rata 62,8±13,2 nm (rata-rata ± SD; n = 90), sedangkan Dmaksimal helai lendir ditemukan antara 0,8
m-3,0 m, dengan nilai rata-rata 1,62 ± 0,48 m (rata-rata ± SD; n = 90). Diamati bahwa kedua Fmaksimal dan Dmaksimal
untaian lendir, jauh lebih besar daripada jejak lendir. Demikian pula, Higginsdkk., (2002) melakukan pengukuran
AFM pada lendir di area raphe dan korset yang tidak mengemudi, pada permukaan diatom stasioner
Craspedostauros australis30. Fmaksimal dia dapatkan di raphe non-mengemudi adalah 2.09 ± 1,09 nN (rata-rata ± SD;
n = 105), sedangkan Fmaksimaldi area korset adalah 3,58 ± 1,97 nN (rata-rata ± SD; n = 174), keduanya sedikit lebih
besar dari Fmaksimal jejak lendir didirikan dalam penelitian ini. Dmaksimal lendir di area raphe dan korset tidak
mengemudi, adalah 357,8±178,5 nm (rata-rata±SD; n=90) dan 725±402.6 (rata-rata±SD; n=164), masing-masing,
yang secara signifikan lebih besar dari Dmaksimal didirikan untuk jejak lendir dalam penelitian ini. Karena spesies
diatom berbeda, perbandingan tersebut hanya untuk referensi, namun D . yang sangat pendekmaksimal akan
kondusif untuk motilitas diatom dengan meluncur.

Untuk menyelidiki bagaimana ujung kantilever berinteraksi dengan substrat dan polimer lendir, diagram
skematik yang menunjukkan hubungan antara kurva jarak gaya perekat dan ekstensi rantai polimer disajikan
pada (Gbr. 2). 10). Seperti yang ditunjukkan pada (Gbr.10a), sebelum ujung kantilever terlepas dari permukaan
substrat di jejak lendir, kurva gaya tampak linier. Ujung kantilever kemudian terlepas dari permukaan di titik A
dengan rantai polimer yang terpasang. Rantai polimer diregangkan saat kantilever ditarik dari permukaan ke titik
B, menghasilkan defleksi kantilever kecil yang tidak terdeteksi. Ketika rantai polimer lebih jauh

Ilmiah Laporan | (2019) 9:7342 | https://doi.org/10.1038/s41598-019-43663-z 7

www.nature.com/scientificreports/ www.nature.com/scientificreports

Gambar 11. Diagram skematis dari keadaan polimer dari jalur lendir dan untaian lendir. (A) Polimer dari jejak
lendir jarang dan melingkar rendah tanpa belitan. (B) Polimer dari jejak lendir padat dan sangat melingkar
dengan tingkat belitan yang tinggi.

diperpanjang, defleksi kantilever menjadi cukup signifikan untuk dideteksi dan puncak perekat
maksimum muncul di titik C. Dengan semakin jauhnya jarak ujung-substrat, gaya yang diterapkan
cukup besar untuk membuat rantai polimer terlepas dari ujung di titik D Interaksi antara ujung
kantilever dan rantai polimer untaian lendir sangat berbeda dari interaksi dengan jejak lendir.
Awalnya, rantai polimer yang digulung dan dikompresi dilekatkan pada ujung kantilever di titik A,
menghasilkan gaya tolak setelah ujung kantilever terlepas dari permukaan substrat. Dengan
retraksi kantilever, rantai polimer secara bertahap meregang ke kondisi bebas dan lembek, tanpa
gaya yang terdeteksi pada titik B. Ketika rantai polimer diregangkan lagi dengan retraksi kantilever,
C, yang secara khas berbeda dari titik B di (Gbr. 7a) dan temuan yang dilaporkan oleh Higgins dkk., (2003) di
mana tidak ada gaya yang jelas terdeteksi pada titik C41. Prosedur dari titik D ke E mengikuti pola yang sama
seperti dari titik C ke D pada (Gbr.10a).
Perbedaan yang ditunjukkan pada kurva gaya adhesi kedua jenis lendir kemungkinan disebabkan oleh keadaan dan
komposisi polimer. Keadaan polimer yang berbeda40 mungkin alasan untuk gaya yang diamati pada titik C di (Gbr. 10b).
Karena jejak lendir lebih tipis dan lebih kecil dari untaian lendir, mereka mengandung jumlah polimer yang lebih kecil,
yang menyiratkan bahwa polimer harus tidak terganggu dalam keadaan gulungan rendah, dengan tingkat belitan yang
berkurang di antara mereka (Gbr. 2).11a). Ketika polimer ini dilekatkan pada ujung kantilever dan diregangkan saat ujung
ditarik dari permukaan, gaya ke bawah elastis kecil terdeteksi, sehingga tidak ada gaya perekat yang diamati pada titik B
di (Gbr. 2).10a). Karena polimer memiliki panjang tertentu, keadaan kumparan rendah juga menyebabkan panjang
ekstensi maksimum polimer kecil. Namun, untaian lendir mengumpulkan lebih banyak polimer untuk dikumpulkan di
area tertentu. (Ara.11b) menunjukkan keadaan polimer yang padat, sangat melingkar dan terjalin dari untaian lendir.
Ketika polimer dalam keadaan ini dilekatkan pada ujung kantilever dan diregangkan saat ujung ditarik dari permukaan,
itu menghasilkan gaya elastis yang besar karena jalinan polimer. Akibatnya, gaya yang dihasilkan cukup besar untuk
dideteksi pada titik C di (Gbr. 2).10b) dan keadaan polimer tergulung tinggi juga menghasilkan panjang ekstensi polimer
maksimum yang lebih besar.

spektrum Raman. Meskipun variasi gaya elastik yang dihasilkan oleh keadaan polimer yang berbeda sebagian dapat
menjelaskan perbedaan kurva gaya adhesi antara jalur lendir dan untaian lendir, mereka tidak menjelaskan perbedaan
signifikan dalam Fmaksimal dan Dmaksimal. Fmaksimal dan Dmaksimal helai lendir adalah 24,5 kali dan
25,8 kali lebih besar dari jalur lendir, masing-masing. Jenis kelompok perekat dan panjang polimer
itu sendiri juga ditemukan sebagai faktor penting.
Spektrum Raman digunakan untuk menyelidiki komposisi jejak lendir dan untaian lendir, dan spektrumnya
ditunjukkan pada (Gbr. 2b). 12). Hasil penelitian menunjukkan bahwa komposisi jejak dan untaian lendir sebagian
besar sama, seperti 599 cm1 dan 594 cm1 sesuai dengan fenilalanin, 1090 cm1 dan 1088 cm1
setuju dengan polisakarida, 1612 cm1 dan 1619 cm1 cocok dengan tirosin, baik jalur lendir dan untaian
memiliki protein dan polisakarida. Namun, untaian lendir memiliki beberapa pita lain seperti 1437 cm1
sesuai dengan —CH2- deformasi42, 1655 cm1 sesuai dengan C=O, 2882 cm1 dan 2936 cm1 cocok dengan —CH2—
dan —CH3 peregangan asimetris dan simetris yang dapat berupa karbohidrat. Pita yang terdeteksi pada untaian
lendir jauh lebih kuat daripada jejak lendir, karena untaian lendir mengakumulasi lebih banyak polimer.

Diskusi
Sebagai Navicula sp. hidup di antarmuka air-sedimen, penting bagi mereka untuk menemukan posisi ideal dengan nutrisi dan
cahaya yang cukup untuk tumbuh dan berkembang biak. Penelitian ini berfokus pada lendir yang disekresikan, yang
mengungkapkan kemampuan gerak diatomNavicula sp. Karena pewarnaan kimia yang tepat membuat jejak lendir terlihat,
memungkinkan topografi 2D dan 3D diperoleh dengan SEM dan AFM. Gambar dengan jelas menunjukkan adanya jejak lendir yang
memanjang dalam garis lurus atau melengkung, dengan tinggi dan lebar rata-rata masing-masing sekitar 120 nm dan 400 nm.
Dibandingkan dengan metode pengamatan lain seperti partikel pelacak, lektin dan antibodi spesifik, hasil ini secara langsung dan
jelas menunjukkan adanya jejak lendir. Meskipun topografi diukur dalam keadaan dehidrasi dan oleh karena itu ada beberapa
kehilangan kontinuitas, temuan ini masih memberikan banyak informasi berharga seperti penampilan permukaan yang kering,
lintasan meluncur yang terperinci dan perilaku penggerak yang fleksibel dan sebagainya.

Ilmiah Laporan | (2019) 9:7342 | https://doi.org/10.1038/s41598-019-43663-z 8

www.nature.com/scientificreports/ www.nature.com/scientificreports

Gambar 12. Spektrum Raman dari jejak lendir dan untaian lendir, masing-masing.

Kurva daya rekat karakteristik dari jejak lendir diperoleh dengan AFM, dengan sifat mekaniknya
dianalisis dan dibandingkan dengan untaian lendir. Ini mungkin pertama kalinya sifat mekanik jejak lendir
diukur secara langsung dan metode pemetaan gaya terbukti sangat efektif. Hasil ini mengkonfirmasi
keberadaan jejak dan memberikan distribusi yang tepat dari kekuatan perekat jejak lendir, dengan jejak
dan lintasan juga diidentifikasi dengan mudah dan jelas menurut distribusi ini.
Dalam kurva gaya adhesif karakteristik, dua puncak utama jelas berbeda. Puncak pertama mewakili
kekuatan perekat maksimum ketika ujung kantilever terpisah dari substrat, dengan nilai rata-rata
4.51±1,72 nN (n=90). Umumnya, gaya ini kecil (di bawah 1 nN) saat mengukur di bawah air, karena gaya Van der Waals
berkurang secara signifikan dan gaya elektrostatik sebagian besar bersifat tolak-menolak di bawah air. Oleh karena itu,
ketika diatom bergerak di bawah air, jejak lendir dapat memainkan peran penting sebagai media untuk mengubah gaya
perekat antara diatom dan substrat. Penelitian sebelumnya telah melaporkan bahwa motilitas diatom mungkin
bergantung pada sistem sitoskeletal berbasis aktin, dengan protein trans-membran yang terletak tepat di bawah
membran plasma di raphe.32. Sistem sitoskeletal berbasis aktin ini mendorong protein trans-membran, yang terkait
dengan fibronektin atau vitronektin di jalur lendir untuk memungkinkan motilitas diatom melalui meluncur43. Menurut
teori ini, tidak ada mekanisme gerakan yang memerlukan kontak dengan substrat dan protein trans-membran meluas ke
jalur lendir, mendorong diatom ke depan dengan propulsi. Namun, karena jejak lendir meningkatkan kekuatan perekat
ke substrat, diasumsikan bahwa protein trans-membran dapat melakukan kontak dengan substrat dalam media jalur
lendir, menghasilkan gerakan dengan mekanisme yang sama seperti tokek 'merangkak' di permukaan. substrat di bawah
air. Tokek telah terbukti bergerak cepat dan melawan gravitasi, menggunakan gaya Van der Waals yang dihasilkan oleh
susunan setal di jari kaki mereka.44, meskipun bentuk motilitas ini akan gagal di bawah air, karena gaya Van der Waals
berkurang. Namun, diatom dapat memastikan motilitas dengan mengeluarkan jejak lendir, menggantikan air sebagai
media dan memberikan kekuatan perekat yang cukup antara protein trans-membran dan substrat di bawah air. Bukti
langsung untuk dugaan ini belum ditemukan, meskipun kekuatan perekat besar yang diamati antara substrat dan jejak
lendir, mendukungnya sebagai kemungkinan.
Kedua puncak kedua dari kurva gaya perekat karakteristik jejak lendir dan puncak unik dari kurva gaya perekat
karakteristik untai lendir, mewakili respons elastis dari rantai polimer lendirnya. Bentuk kurva gaya dan perbedaan
signifikan dalam Fmaksimal dan Dmaksimal, memberikan bukti variasi mereka. Fmaksimal dan Dmaksimal untaian lendir adalah 24,5
kali dan 25,8 kali lebih besar daripada di jalur lendir, masing-masing. Dua faktor yang bertanggung jawab atas perbedaan
ini adalah keadaan dan komposisi polimer. Selain itu, ketika mempertimbangkan perilaku pergerakan diatom, karena
untaian lendir digunakan untuk perlekatan dan adhesi ketika diatom tidak bergerak, gaya perekat yang besar diperlukan
untuk mengikat dirinya ke substrat. Sebaliknya, jejak lendir terus disekresikan dan kemudian dicukur ketika diatom
meluncur, oleh karena itu, kekuatan perekat yang lebih rendah dari jejak lendir mengurangi resistensi saat bergerak.
Demikian pula, panjang perpanjangan jalur lendir ditemukan jauh lebih pendek daripada untaian lendir, yang
kemungkinan memungkinkan pelepasan yang mudah saat bergerak.

Puncak kedua dari kurva daya rekat karakteristik dari jejak lendir, ditemukan memiliki pola gigi gergaji dengan
beberapa puncak, yang mencerminkan pelepasan segmen polimer berturut-turut dari ujung dan pemutusan ikatan yang
terbentuk di dalam dan di antara polimer. Pola serupa juga telah digunakan untuk menjelaskan kekuatan tarik tinggi dan
ketangguhan domain modular dalam perekat alami45,46, protein titin47 dan kolagen tulang48. Namun, pola gigi gergaji
yang diamati dalam penelitian ini pendek dan tidak terlalu jelas, karena jejak lendir adalah lapisan tipis sehingga lebih
sedikit polimer yang terjalin dan lebih sedikit ikatan yang terbentuk di antara mereka. Fenomena ini juga dapat diamati
pada puncak perekat unik dari kurva gaya perekat karakteristik dari untaian lendir, tetapi tidak jelas sebagai Fmaksimal jauh
lebih besar.
Lendir diatom kompleks dan terdiri dari bahan multi-komponen. Banyak pewarnaan awal dan studi komposisi
menunjukkan bahwa karbohidrat mendominasi lendir diatom24, dengan studi selanjutnya menunjukkan
terjadinya protein dan karbohidrat. Chiovittidkk.29 ditemukan karbohidrat, protein dan sulfat dalam

Ilmiah Laporan | (2019) 9:7342 | https://doi.org/10.1038/s41598-019-43663-z 9

www.nature.com/scientificreports/ www.nature.com/scientificreports

lendir dari diatom Pinnularia viridis, bagaimanapun, analisis sering berfokus pada lendir permukaan diatom dan untaian
lendir pada substrat. Dalam penelitian ini, spektrum Raman mendeteksi fenilalanin, tirosin dan polisakarida di kedua jalur
lendir dan untai, yang sesuai dengan teori bahwa lendir diatom terdiri dari protein dan karbohidrat. Komponen
ekskresen C═O, —CH2— dan —CH3, membentuk peregangan asimetris dan simetris pada untaian lendir dan
menunjukkan perbedaan antara dua jenis lendir. Karena jejak lendir sulit dikumpulkan karena transparansi dan tingkat
sekresi yang rendah, metode yang lebih baik diperlukan untuk analisis komposisi yang efektif dan akurat. Spektrum
Raman tidak memberikan komposisi yang tepat untuk kedua jenis lendir, tetapi hasil mengkonfirmasi bahwa mereka
berbeda secara signifikan, yang kemungkinan menjadi alasan yang berkontribusi untuk perbedaan yang diamati pada F
maksimal dan Dmaksimal. Pekerjaan kami sebelumnya49 menunjukkan bahwa fleksibilitas dan kemampuan lentur dari frustula

diatom Navicula
sp. melaluiin-vivo pengamatan gerak sel, dan deformasi lekukan lekukan mikromanipulasi diperoleh untuk
mengungkapkan bahwa frustula diatom mampu menanggung deformasi lentur yang hebat tanpa pecah. Analisis elemen
hingga lebih lanjut mengkonfirmasi bahwa struktur diatom lebih fleksibel dalam lentur daripada struktur komparatif
dengan ukuran yang sama atau volume yang sama tanpa pori-pori. Adhesi diperkirakan dari gaya van der Waals,
menunjukkan bahwa gesekan bawah air yang dihasilkan mampu mempertahankan deformasi selama gerak sel.
Pengamatan pergerakan diatom dan lendir yang disekresikan menunjukkan bahwa beberapa organisme dapat menonjol
keluar dari frustula dari raphe (~ 160 nm) untuk sementara membentuk satu atau dua batang50 atau pseudopoda51,
bersentuhan dengan substratum melalui lendir yang disekresikan dan meninggalkan lubang (200~300 nm) di jalur
luncur. Adhesi sel-substratum diperlukan untuk meluncur diatom. Sifat mikromekanis diatomNavicula pelliculosa diukur
secara semi-kuantitatif oleh AFM, dan daerah dengan sifat mekanik yang berbeda diidentifikasi52. Modulus elastisitas
bervariasi dari 7 hingga 20 GPa, dari 20 hingga 100 GPa dan dari 30 hingga ratusan GPa tergantung pada lokasi
pengukuran. Juga, kekerasan berkisar dari 1 hingga 12 GPa, menghadirkan perbedaan spasial yang besar. Uji pemuatan
lain menggunakan jarum mikro kaca terkalibrasi dilakukan pada tiga jenis sel diatom53, menunjukkan bahwa frustula
sangat kuat dan mampu menahan tekanan mekanis sesuai dengan tekanan 100–700 ton/m2. Pemeriksaan fraktur pada
frustule diatom pennate menunjukkan bahwa retakan tidak melewati, tetapi sekitar menit (sekitar 40 nm) silika yang
membentuk frustule.54. Ini hampir menggandakan area retakan, sehingga meningkatkan jumlah energi yang diperlukan
untuk memecahkan frustrasi53. Sebuah studi nanoindentasi AFM menunjukkan bahwa sifat mekanik dipengaruhi oleh
ukuran pori, jarak pori, dan porositas55,56. Simulasi bekerja57,58 mengungkapkan bahwa silika nanopori dapat secara
mekanis dapat dideformasi dan ulet, dan struktur hierarki dikaitkan dengan peningkatan eksponensial dalam
ketangguhan dan toleransi cacat tanpa memperkenalkan mekanisme atau bahan tambahan58. Struktur hierarkis
menyediakan jalur untuk mengubah bahan rapuh menjadi sistem ulet melalui pengaturan struktural bergantian pada
skala nano57, menghasilkan kegagalan kekuatan tinggi untuk menanggung beban dan melindungi protoplas sebagai
pelindung52,53.

Kesimpulan
Melalui SEM, TEM, AFM, spektrum Raman dan teknik biologi kimia lainnya, topografi, sifat mekanik dan komposisi
jejak lendir diatom Navicula sp. telah dijelaskan dan dianalisis dibandingkan dengan untaian lendir. Hasil ini
memberikan dasar untuk pemahaman yang lebih baik tentang karakteristik lendir diatom dan fungsinya dalam
proses lokomotif diatom. Secara khusus,di tempat metode pemetaan gaya oleh AFM memungkinkan pengukuran
kurva gaya jejak lendir secara langsung dan menentukan sifat mekaniknya. Dalam studi lebih lanjut, komposisi
rinci jejak lendir dan fungsi spesifik dalam motilitas diatom akan diselidiki. Selain itu, probe AFM koloid akan
digunakan untuk menyelidiki adhesi antara berbagai partikel dan lendir diatom. Penelitian ini memberikan
kontribusi yang signifikan untuk studi lebih lanjut tentang mekanisme penggerak diatom dan pencegahan
biofouling.

Referensi
1. Cooney, JJ & Tang, RJ Mengukur efek cat antifouling pada pembentukan biofilm mikroba. Metode Enzim. 310, 637–644 (1999).

2. Champ, MA Tinjauan strategi regulasi organotin, tindakan yang tertunda, biaya dan manfaat terkait. Sci. Lingkungan Total.258, 21-71
(2000).
3. Yebra, DM, Kiil, S. & Dam-Johansen, K. Teknologi antifouling - langkah masa lalu, sekarang dan masa depan menuju pelapis antifouling
yang efisien dan ramah lingkungan. Prog. Organisasi Mantel.50, 75-104 (2004).
4. Abbott, A., Abel, PD, Arnold, DW & Milne, A. Analisis biaya-manfaat penggunaan TBT: kasus untuk pendekatan pengobatan. Sci.
Lingkungan Total.258, 5–19 (2000).
5. Dobretsov, S., Dahms, HU & Qian, PY Penghambatan biofouling oleh mikroorganisme laut dan metabolitnya. Biofouling. 22, 43–
54 (2006).
6. Chambers, LD, Stokes, KR, Walsh, FC & Wood, RJK Pendekatan modern untuk pelapis antifouling laut. Berselancar. Mantel. Teknologi.201,
3642–3652 (2006).
7. Callow, ME & Fletcher, RL Pengaruh bahan berenergi permukaan rendah pada bioadhesi: tinjauan. Int. Biodeter. Biodegr.34,
333–348 (1994).
8. De Messano, LVR, Sathler, L., Reznik, LY & Coutinho, R. Pengaruh biofouling pada korosi lokal pada baja tahan karat N08904
dan UNS S32760. Int. Biodeter. Biodegr.63, 607–614 (2009).
9. Cooksey, KE & Wigglesworthcooksey, B. Adhesi bakteri dan diatom ke permukaan di laut: ulasan. air. Mikrob. Ekol.9, 87–96
(1995).
10. Lewin, R. Adhesi mikroba adalah masalah yang lengket. Sains. 224, 375–377 (1984).
11. Hildebrand, M. Diatom, proses biomineralisasi, dan genomik. Kimia Putaran.108, 4855–4874 (2008).
12. Gordon, R., Losic, D., Tiffany, MA, Nagy, SS & Sterrenburg, FAS The Glass Menagerie: diatom untuk aplikasi baru dalam
nanoteknologi. Tren Bioteknologi. 27, 116–127 (2009).
13. Losic, D., Mitchell, JG & Voelcker, NH Pelajaran diatom di nanoteknologi dan bahan canggih. Adv. ibu.21, 2947–2958
(2009).
14. Gebeshuber, IC dkk. Menjelajahi potensi inovasi biomimetik untuk MEMS 3D baru.Adv. ibu. Res.74, 265–268 (2009).
15. De Stefano, M., De Stefano, L. & Congestri, R. Morfologi fungsional mikro dan struktur nano dalam dua frustula diatom yang berbeda.
Superlattice Microst. 46, 64–68 (2009).

Ilmiah Laporan | (2019) 9:7342 | https://doi.org/10.1038/s41598-019-43663-z 10

www.nature.com/scientificreports/ www.nature.com/scientificreports

16. Gebeshuber, IC & Crawford, RM Mikromekanika dalam silika terhidrasi biogenik: engsel dan perangkat yang saling mengunci dalam diatom.
Mekanisme PI Ind. JJ. Ind.220, 787–796 (2006).
17. Srajer, J., Majlis, BY & Gebeshuber, IC Simulasi mikrofluida dari rantai diatom kolonial mengungkapkan gerakan osilasi. Akta Bot. Kroasia.
68, 431–441 (2009).
18. Gebeshuber, IC Biotribology menginspirasi teknologi baru. Nano Hari Ini. 2, 30-37 (2007).
19. Jeffryes, C., Campbell, J., Li, HY, Jiao, J. & Rorrer, G. Potensi nanobioteknologi diatom untuk aplikasi dalam sel surya, baterai, dan
perangkat electroluminescent. Lingkungan Energi. Sci.4, 3930–3941 (2011).
20. Li, CH, Wang, F. & Yu, JC Semikonduktor/komposit biomolekuler untuk aplikasi energi surya. Lingkungan Energi. Sci.4, 100-113 (2011).

21. McLachlan, DH, Brownlee, C., Taylor, AR, Geider, RJ & Underwood, GJC Respon motil yang diinduksi cahaya dari diatom bentik
muara Navicula permanen dan Klosterium Cylindrotheca (Bacillariophyceae). J.Fikol. 45, 592–599 (2009).
22. Belanda, R. dkk. Adhesi dan motilitas diatom pengotoran pada elastomer silikon.Biofouling. 20, 323–329 (2004).
23. Muthukrishnan, T. dkk. Komunitas diatom pada pelapis kontrol pengotoran biosida komersial setelah satu tahun perendaman di
lingkungan laut.Lingkungan Mar. Res.129, 102-112 (2017).
24. Hoagland, KD, Rosowski, JR, Gretz, MR & Roemer, SC Zat polimer ekstraseluler diatom: fungsi, struktur halus, kimia,
dan fisiologi. J.Fikol. 29, 537–566 (1993).
25. Bhosle, NB, Sawant, SS, Garg, A. & Wagh, AB Isolasi dan analisis kimia parsial eksopolisakarida dari diatom fouling laut
Navicula-subinflata. Bot. Merusak.38, 103–110 (1995).
26. Staats, N., De Winder, B., Stal, LJ & Mur, LR Isolasi dan karakterisasi polisakarida ekstraseluler dari diatom epipelik
Klosterium Cylindrotheca dan Navicula salinarum. Eur. J.Fikol.34, 161–169 (1999).
27. Khandeparker, RDS & Bhosle, NB Zat polimer ekstraseluler dari diatom fouling laut Amphora rostrata Wm.Sm.
Biofouling. 17, 117–127 (2001).
28. Chiovitti, A., Bacic, A., Burke, J. & Wetherbee, R. Glikan kaya xylose heterogen dikaitkan dengan glikoprotein ekstraseluler dari
diatom biofouling Craspedostauros australis (Bacillariophyceae). Eur. J.Fikol.38, 351–360 (2003).
29. Chiovitti, A., Higgins, MJ, Harper, RE, Wetherbee, R. & Bacic, A. Polisakarida kompleks dari diatom raphid Pinnularia viridis (
Bacillariophyceae). J.Fikol. 39, 543–554 (2003).
30. Higgins, MJ, Crawford, SA, Mulvaney, P. & Wetherbee, R. Karakterisasi lendir perekat yang disekresikan oleh sel diatom hidup
menggunakan mikroskop kekuatan atom. Protista. 153, 25–38 (2002).
31. Higgins, MJ, Crawford, SA, Mulvaney, P. & Wetherbee, R. Topografi lembut, 'jejak' diatom perekat seperti yang diamati oleh mikroskop
gaya atom. Biofouling. 16, 133–139 (2000).
32. Edgar, LA & Pickettheaps, JD Valve morphogenesis di diatom pennate Navicula-cuspidata. J.Fikol. 20, 47–61 (1984).
33. Lind, JL dkk. Adhesi substratum dan meluncur dalam diatom dimediasi oleh proteoglikan ekstraseluler.tanaman. 203, 213–221 (1997).

34. Higgins, MJ, Molino, P., Mulvaney, P. & Wetherbee, R. Struktur dan sifat nanomekanis dari lendir perekat yang memediasi
adhesi dan motilitas diatom-substratum. J.Fikol. 39, 1181-1193 (2003).
35. Wustman, BA, Gretz, MR & Hoagland, KD Perakitan matriks ekstraseluler dalam diatom (Bacillariophyceae) (I. Model perekat
berdasarkan karakterisasi kimia dan lokalisasi polisakarida dari diatom laut Achnanthes longipes dan diatom lainnya). Fisiol
Tumbuhan. 113, 1059–1069 (1997).
36. Molino, PJ & Wetherbee, R. Biologi diatom biofouling dan perannya dalam pengembangan lendir mikroba. Biofouling. 24, 365–
379 (2008).
37. Hutter, JL & Bechhoefer, J. Kalibrasi ujung mikroskop gaya atom. Pdt. alat musik.64, 1868–1873 (1993).
38. Oss, CJV Energi interaksi sel-sel dan sel-biopolimer. Biofi Sel. 14, 1–16 (1989).
39. Bayoudh, S., Othmane, A., Mora, L. & Ben Ouada, H. Menilai adhesi bakteri menggunakan teori DLVO dan XDLVO dan teknik jet
pelampiasan. Permukaan koloidB. 73, 1–9 (2009).
40. Israelachvili, JN Gaya Antarmolekul dan Permukaan. 661–674 (Elsevier 2011).
41. Higgins, MJ, Sader, JE, Mulvaney, P. & Wetherbee, R. Menyelidiki permukaan diatom hidup dengan mikroskop kekuatan atom:
Struktur nano dan sifat nanomekanis dari lapisan lendir. J.Fikol. 39, 722–734 (2003).
42. Contreras-Garcia, A. dkk. Penghambatan biofilm dan sifat elusi obat dari permukaan polietilen dan karet silikon yang dimodifikasi
DMAEMA baru.Biofouling. 27, 123–135 (2011).
43. Stossel, TP Tentang perayapan sel hewan. Sains. 260, 1086–1094 (1993).
44. Tian, Y. dkk. Adhesi dan gesekan pada pelekatan dan pelepasan kaki tokek.Prok. Natal akad. Sci. Amerika Serikat103, 1920-19325 (2006).
45. Smith, BL dkk. Asal mekanistik molekuler dari ketangguhan perekat alami, serat dan komposit.Alam. 399, 761–763
(1999).
46. Gebeshuber, IC, Thompson, JB, Del Amo, Y., Stachelberger, H. & Kindt, JH in vivo kekuatan atom skala nano. penyelidikan
mikroskopis sifat adhesi diatom.ibu. Sci. Teknologi.18, 763–766 (2002).
47. Marszalek, PE dkk. Intermediet bukaan mekanis dalam modul titin.Alam. 402, 100-103 (1999).
48. Thompson, JB dkk. Waktu pemulihan lekukan tulang berkorelasi dengan waktu pembentukan ikatan.Alam. 414, 773–776 (2001).
49. Wang, JD, Cao, S., Du, C. & Chen, DR Strategi penggerak bawah air oleh diatom pennate bentik Navicula sp. Protoplasma.250,
1203–1212 (2013).
50. Wang, Y., Lu, JJ, Mollet, JC, Gretz, MR & Hoagland, KD Rakitan matriks ekstraseluler dalam diatom (Bacillariophyceae). 2.
2,6-dichlorobenzonitrile penghambatan motilitas dan produksi tangkai di diatom laut Achnanthes longipes. Fisiol Tumbuhan. 113, 1071–
1080 (1997).
51. Yumura, S., Mori, H. & Fukui, Y. Lokalisasi aktin dan miosin untuk mempelajari gerakan ameboid di dictyostelium menggunakan
peningkatan imunofluoresensi. J. Sel Biol. 99, 894–899 (1984).
52. Almqvist, N. dkk. Sifat mikromekanik dan struktural dari diatom pennate diselidiki dengan mikroskop kekuatan atom.J. Mikro.
202, 518–532 (2001).
53. Hamm, CE dkk. Arsitektur dan sifat material cangkang diatom memberikan perlindungan mekanis yang efektif.Alam. 421, 841–
843 (2003).
54. Crawford, SA, Higgins, MJ, Mulvaney, P. & Wetherbee, R. Struktur nano dari diatom frustule seperti yang diungkapkan oleh kekuatan atom dan
pemindaian mikroskop elektron. J.Fikol. 37, 543–554 (2001).
55. Herrmann, M., Richter, F. & Schulz, SE Studi sifat mekanik nano untuk film berpori tipis melalui lekukan instrumentasi: SiO22
film konstanta dielektrik rendah sebagai contoh. Mikroelektronik Eng. 85, 2172–2174 (2008).
56. Losic, D., Pendek, K., Mitchell, JG, Lal, R. & Voelcker, NH AFM nanoindentations permukaan biosilika diatom. Langmuir. 23,
5014–5021 (2007).
57. Garcia, AP & Buehler, MJ Bioinspired silikon nanopori memberikan ketangguhan yang besar pada deformabilitas yang besar. Komp. ibu. Sci.48, 303–
309 (2010).
58. Sen, D. & Buehler, MJ Hirarki struktural mendefinisikan ketangguhan dan toleransi cacat meskipun blok bangunan rapuh sederhana dan mekanis lebih
rendah. Sci. Reputasi.1, 35 (2011).

Ilmiah Laporan | (2019) 9:7342 | https://doi.org/10.1038/s41598-019-43663-z 11

www.nature.com/scientificreports/ www.nature.com/scientificreports

Ucapan Terima Kasih

Pekerjaan ini didukung oleh National Science Foundation of China Project di bawah Hibah No.
51775296.

Kontribusi Penulis
Jiadao Wang menyusun pekerjaan itu; Shan Cao dan Chuan Du merancang dan melakukan eksperimen; Lei Chen
dan Ding Weng menganalisis data eksperimen dan menyusun naskah yang direvisi oleh Jiadao Wang.

informasi tambahan
Minat Bersaing: Para penulis menyatakan tidak ada kepentingan yang bersaing.

Catatan penerbit: Springer Nature tetap netral sehubungan dengan klaim yurisdiksi dalam peta yang diterbitkan dan
afiliasi institusional.

Akses terbuka Artikel ini dilisensikan di bawah Lisensi Internasional Creative Commons Attribution 4.0,
yang mengizinkan penggunaan, berbagi, adaptasi, distribusi, dan reproduksi dalam media atau
format, selama Anda memberikan kredit yang sesuai kepada penulis asli dan sumbernya, berikan tautan ke lisensi
Creative Commons, dan tunjukkan jika ada perubahan. Gambar atau materi pihak ketiga lainnya dalam artikel ini
termasuk dalam lisensi Creative Commons artikel, kecuali dinyatakan lain dalam batas kredit untuk materi tersebut. Jika
materi tidak termasuk dalam lisensi Creative Commons artikel dan penggunaan yang Anda maksudkan tidak diizinkan
oleh peraturan perundang-undangan atau melebihi penggunaan yang diizinkan, Anda harus mendapatkan izin langsung
dari pemegang hak cipta. Untuk melihat salinan lisensi ini, kunjungihttp://creativecommons.org/licenses/by/4.0/.

© Penulis 2019

Ilmiah Laporan | (2019) 9:7342 | https://doi.org/10.1038/s41598-019-43663-z 12