Diterjemahkan dari bahasa Inggris ke bahasa Indonesia - www.onlinedoctranslator.

com

Jurnal Ilmu Koloid dan Antarmuka 589 (2001) 65–76

Daftar isi tersedia di SainsLangsung

Jurnal Ilmu Koloid dan Antarmuka

beranda jurnal: www.elsevier.com/locate/jcis

Artikel Reguler

Interaksi antara perilaku antarmuka, struktur sel dan geser memungkinkan

ekstraksi lipid bifasik dari seluruh sel diatom (Navicula sp.)
Bhagya Yatipanthalawa A, Wu Li B, David RA Hill A, Zlatan Trifunovic C, Muthupandian Ashokkumar B, Peter
J. Scales A, Gregory JO Martin A,⇑
A Grup Pemrosesan Alga, Departemen Teknik Kimia, Universitas Melbourne, Parkville, Victoria 3010, AustraliaB Grup Sonokimia, Sekolah
Kimia, Universitas Melbourne, Parkville, Melbourne, Victoria 3010, AustraliaC Fasilitas Mikroskopi Tingkat Lanjut, Institut Ilmu Pengetahuan
Molekuler dan Bioteknologi Bio21, Universitas Melbourne, Victoria 3010, Australia

abstrak grafis

info artikel abstrak

Sejarah artikel: Hipotesa: Bacillariophyceae (yaitu, diatom) adalah kelas alga penting dengan potensi penggunaan dalam produksi protein dan
Diterima 15 September 2020 Direvisi lipid termasuk rantai panjang x-3 asam lemak tak jenuh ganda. Ekstraksi bifasik lipid mikroalga menggunakan pelarut yang
25 November 2020 Diterima 17
tidak dapat bercampur dengan air seperti heksana, dapat menghindari energi yang berlebihan yang diperlukan untuk
Desember 2020 Tersedia online 21
menyaring pelarut dari air, tetapi umumnya memerlukan pemecahan sel yang intensif energi. Struktur sel yang unik dan
Desember 2020
kimia permukaan diatom dibandingkan dengan spesies mikroalga lainnya memungkinkan ekstraksi lipid bifasik tanpa
pecahnya sel sebelumnya.
Kata kunci:
Eksperimen: Kinetika ekstraksi lipid bifasik dari utuh Navicula sp. sel diselidiki selama pencampuran geser rendah
Ekstraksi lipid alga
dan geser tinggi, dan dengan aplikasi ultrasound sebelumnya atau simultan (20 kHz pada 0,57 W/mL). Pengukuran
Zat polimer ekstraseluler Struktur sel
tegangan antarmuka dinamis dan analisis mikroskopis elektron digunakan untuk menyelidiki ekstraksi lipid dalam
diatom kaitannya dengan perilaku antarmuka dan struktur sel.
Navicula sp. Hasil: Hasil tinggi (>80%) lipid intraseluler diekstraksi dari sel utuh selama beberapa jam setelah kontak geser rendah
Perilaku antarmuka dengan heksana. Sel-sel yang terkait dengan dan menstabilkan antarmuka heksana-air, memungkinkan heksana
Ultrasonikasi untuk menyusup ke dalam pori-pori komponen frustule dari dinding sel dan mengakses lipid intraseluler.
Ditunjukkan bahwa zat polimer ekstraseluler mucilaginous (EPS) terikat pada sel

⇑ Penulis yang sesuai.

Alamat email: byatipanthal@student.unimelb.edu.au (B.Yatipanthalawa), wu.li@unimelb.edu.au (W.Li), david.hill@unimelb.edu.au (Bukit DRA), zlatan@unimelb.edu. au(Z. Trifunovic),
masho@unimelb.edu.au (M.Ashokkumar), peterjs@unimelb.edu.au (Timbangan PJ), gjmartin@unimelb.edu.au (GJO Martin).

https://doi.org/10.1016/j.jcis.2020.12.0560021-9797/- 2020 Elsevier

Inc. Semua hak dilindungi undang-undang.
B. Yatipanthalawa, W. Li, David RA Hill dkk. Jurnal Ilmu Koloid dan Antarmuka 589 (2001) 65–76

dinding bertindak sebagai penghalang untuk penetrasi pelarut ke dalam sel. EPS ini dapat dihilangkan dengan
ultrasonikasi sebelumnya. Ekstraksi bifasik sangat dipercepat oleh geser yang diterapkan oleh pencampuran rotor-
stator atau ultrasound. Geser tinggi dapat menghilangkan EPS mucilaginous dari permukaan sel untuk memfasilitasi
kontak langsung permukaan sel dengan heksana dan menghasilkan tetesan emulsi yang lebih kecil dengan
peningkatan luas permukaan. Kombinasi geseran tinggi dengan adanya heksana mengakibatkan pecahnya sel di
tempat, yang sangat mempercepat ekstraksi lipid dan memungkinkan hasil tinggi lipid netral (>95%) untuk
dipulihkan dari sel yang baru dipanen dalam waktu kurang dari 5 menit Studi ini menunjukkan kemampuan geser
untuk memungkinkan pecahnya sel secara simultan dan ekstraksi lipid dari alga diatom berdasarkan struktur sel
dan perilaku antarmuka.
- 2020 Elsevier Inc. Semua hak dilindungi undang-undang.

1. Perkenalan menunjukkan bahwa adalah mungkin untuk memecahkan sel-sel pra-

Mikroalga termasuk mikroorganisme fotosintesis yang dapat
menghasilkan produk berharga termasuk lipid, protein, karbohidrat, dan
metabolit bernilai tinggi seperti asam lemak tak jenuh ganda rantai panjang,
vitamin, dan karotenoid. [1]. Kemampuan beberapa spesies mikroalga untuk
mengakumulasi lipid triasilgliserida (TAG) dalam jumlah tinggi
menjadikannya bahan baku alternatif yang menjanjikan untuk produksi
minyak makanan dan bahan bakar, termasuk biodiesel.[2]. Ekstraksi lipid
mikroalga, yang terdapat dalam membran sel dan sebagai badan lipid di
dalam sel, merupakan proses yang penting dan menantang.
[3]. Meskipun lipid dapat dengan mudah diekstraksi pada hasil tinggi dari
biomassa mikroalga yang dikeringkan secara termal, pengeringan
mengkonsumsi energi dalam jumlah yang sangat besar.[4]. Oleh karena itu,
pemulihan lipid alga yang hemat energi bergantung pada ekstraksi dari
bubur alga basah yang terkonsentrasi[5]. Pelarut polar dan non-polar
dapat digunakan untuk mengekstrak lipid dari biomassa mikroalga basah,
yang masing-masing selektif untuk lipid membran polar dan TAG.[6]. Pelarut
polar seperti metanol, etanol dan propanol dapat larut dalam air dan dapat
secara individual atau dalam kombinasi tertentu dengan pelarut non-polar
dan air membentuk sistem ekstraksi monofasik. Dalam sistem monofasik,
pelarut dapat menembus dinding sel alga dan melarutkan lipid intraseluler,
yang kemudian dapat berdifusi keluar melalui gradien konsentrasi.[7].
Namun, penggunaan pelarut polar tidak disukai pada skala industri karena
pemulihan pelarut ini untuk digunakan kembali memerlukan distilasi
intensif energi untuk memisahkan pelarut yang dapat larut dalam air dari
air. Ini secara efektif menghilangkan manfaat ekstraksi lipid dari bubur
basah daripada biomassa kering[3,5]. Pelarut yang tidak dapat bercampur
dengan air seperti heksana membentuk sistem bifasik cair-cair dengan
adanya air, dan karena itu lebih disukai, karena pelarut yang kaya lipid dapat
dipisahkan secara fisik (misalnya dengan sentrifugasi) dari air dalam bubur,
sehingga menghindari penguapan termal air.
Dalam sistem bifasik seperti itu, pelarut dan bubur berair perlu dicampur
sehingga fase pelarut dapat menghubungi lipid. Dengan pengecualian
beberapa alga sepertiBotryococcus braunii yang mengekskresikan
hidrokarbon ekstraseluler [8], lipid yang diinginkan dilindungi di dalam
dinding sel yang harus dipecah untuk memungkinkan tetesan lipid
bergabung menjadi tetesan heksana ekstraseluler. Untuk alga dengan
dinding sel yang kuat, sepertiChlorella sp. danNannokloropsis sp. [9–11],
telah ditunjukkan bahwa sel-sel harus diganggu sebelum melakukan
ekstraksi lipid bifasik [7,12,13]. Karena sel-sel yang kuat ini memerlukan
tekanan mekanis yang kuat untuk pecah, pemecahan sel belum ditemukan
terjadi di bawah kondisi pencampuran yang digunakan selama ekstraksi,
yang memerlukan gangguan sel hulu menggunakan metode fisik atau kimia
seperti homogenisasi tekanan tinggi, ultrasonikasi, dan hidrolisis kimia.
[3,9,14]. Sekarang secara umum disepakati bahwa sel alga harus dipecah
sebelum melakukan ekstraksi lipid bifasik. Namun, jika memungkinkan
untuk secara bersamaan memecahkan sel selama ekstraksi lipid bifasik, ini
dapat meningkatkan efisiensi energi keseluruhan dari pemulihan lipid dan
mengurangi jumlah langkah proses. Bensalem, dkk.[15]
permeabilisasi dari mutan yang kekurangan dinding sel Chlamydomonas
reinhardtii selama ekstraksi bifasik dengan heksana. Selain itu, Kwak, dkk.
[16]menunjukkan kemungkinan gangguan sel simultan berbantuan geser
tinggi dan ekstraksi lipid dari defisiensi dinding sel Aurantiochytrium sp.
Namun, mutan yang kekurangan dinding sel tidak dapat diterapkan secara
industri. Pecahnya ganggang yang kuat dan relevan secara industri seperti
Chlorella dan Nannokloropsis yang memiliki dinding sel selulosa yang kuat
dan berdekatan, menghadirkan tantangan yang lebih signifikan.
Sebaliknya, akan lebih baik untuk menemukan alga yang kuat
sehubungan dengan budidaya skala besar, tetapi juga dapat pecah
selama ekstraksi lipid. Dihipotesiskan di sini bahwa diatom seperti
Navicula layak diselidiki, karena mereka memiliki struktur dinding sel
yang berbeda secara fundamental yang dapat membuat mereka lebih
mudah pecah selama ekstraksi biphasic. Bacillariophyceae (yaitu
diatom) adalah kelas penting dari alga yang berpotensi sebagai bahan
baku untuk biorefineries karena tingkat pertumbuhannya yang tinggi,
kemampuan mengakumulasi TAG, dan menghasilkan rantai panjang.x-
3 asam lemak tak jenuh ganda [17–19]. Alih-alih memiliki dinding sel
sejati, sel diatom dilindungi oleh apa yang disebut frustula yang
terbuat dari silika amorf dan terdiri dari dua katup terpisah.[20].
Meskipun frustula silikon ini sendiri sangat keras, memecahnya untuk
memecahkan sel diatom telah diamati lebih mudah daripada
memecahkan mikroalga lain yang dikelilingi oleh dinding sel selulosa,
sepertiChlorella atau Nannokloropsis [9,21,22].
Studi ekstraksi lipid dari diatom seperti: Phaeodactylum tricornutum dan
Chaetoceros calcitrans sebagian besar terbatas pada yang melibatkan
biomassa kering [23–26] atau ekstraksi basah monofasik menggunakan
pelarut yang larut dalam air [27–29]. Namun seperti yang disebutkan
sebelumnya, penggunaan biomassa kering atau pelarut yang larut dalam air
tidak hemat energi. Yang lebih relevan di sini, adalah studi oleh Horst, et al.
[30], di mana penulis menyelidiki gangguan enzim (papain) sel diatom P.
tricornutum sebagai alternatif untuk gangguan sel mekanis untuk
memungkinkan ekstraksi lipid bifasik menggunakan heptana. Studi
menunjukkan bahwa papain dapat memecahkan sel dengan memungkinkan
pemisahan dua bagian diatom. Yang penting, penelitian ini juga
menemukan bahwa gangguan sel sebelumnya diperlukan untuk
mendapatkan hasil lipid yang tinggi menggunakan ekstraksi bifasik
[30], konsisten dengan penelitian tentang alga lainnya [13]. Namun,
proses ekstraksi dilakukan tanpa pencampuran intensif dan dibatasi
hingga 1 jam. Kemungkinan pecahnya diatom dengan menerapkan
geser selama ekstraksi lipid belum diselidiki.
Peran geser, sementara jelas penting untuk kinetika ekstraksi biphasic,
tidak sepenuhnya dipahami. Secara khusus, efek geser pada kinetika
ekstraksi lipid bifasik dari alga dengan struktur dinding sel yang berbeda,
seperti diatom, memerlukan penyelidikan lebih lanjut. Peningkatan geser
dapat meningkatkan emulsifikasi, sehingga meningkatkan area antarmuka
antara pelarut yang tidak dapat bercampur dengan air dan bubur alga
berair untuk mempercepat ekstraksi, sementara berpotensi membuat
pemulihan hilir pelarut (misalnya dengan sentrifugasi) lebih sulit[12]. Geser
juga memberikan tekanan mekanis, yang jika cukup kuat dalam kaitannya
dengan sifat mekanik

66
B. Yatipanthalawa, W. Li, David RA Hill dkk.
sel, dapat mengakibatkan pecahnya sel [9,10], meskipun di bawah kondisi geser
yang sangat intens untuk sebagian besar spesies alga.
Ada berbagai cara untuk menghasilkan geser selama ekstraksi, termasuk
perangkat tipe impeller konvensional seperti mixer rotor-stator [31]. Sebagai
alternatif, ultrasound daya berintensitas tinggi dan frekuensi rendah dapat
digunakan untuk menghasilkan tingkat geser yang jauh lebih tinggi yang
sebanding dengan homogenisasi tekanan tinggi, melalui kavitasi akustik
yang dihasilkan dari fluktuasi tekanan dalam fluida.[32]. Ultrasonografi daya
terkenal untuk meningkatkan transfer massa dan mempercepat ekstraksi
lipid, protein, dan polisakarida dari berbagai bahan tanaman[33]. Juga telah
ditunjukkan bahwa geseran ekstrim yang dihasilkan oleh ultrasound dapat
cukup untuk memecahkan mikroalga dengan dinding sel selulosa yang kuat,
sepertiNannokloropsis [14]. Kemampuan ultrasound untuk memecahkan
sel-sel alga dan untuk meningkatkan perpindahan massa selama ekstraksi,
memberikan kesempatan untuk menerapkan ultrasound untuk melakukan
ruptur sel secara simultan dan ekstraksi lipid bifasik. Seperti dibahas di atas,
ini bisa sangat menjanjikan untuk ganggang seperti diatom termasuk
Navicula sp. yang memiliki struktur dinding sel lebih lemah dari
Nannokloropsis atau Chlorella
[9]. Selain itu, frustula diatom adalah partikel keras yang tidak dapat dideformasi,
yang mungkin bersifat abrasif dan merusak peralatan pemecahan sel industri
seperti homogeniser bertekanan tinggi, yang berpotensi membatasi
kemampuannya untuk dipecah sebelum ekstraksi lipid.
Untuk merancang proses ruptur sel dan ekstraksi lipid simultan
yang efektif, penting untuk memahami pengaruh geser pada struktur
sel dan mekanisme ekstraksi lipid bifasik. Hal ini juga penting untuk
mempertimbangkan interaksi fisikokimia antara ganggang dan tetesan
pelarut dalam kaitannya dengan geser dan emulsifikasi. Misalnya, telah
ditunjukkan bahwa pecahan dinding sel yang pecah dari
Nannochoropsis aktif permukaan, sehingga mempengaruhi sifat
emulsi selama dan setelah ekstraksi lipid bifasik [34]. Namun, perilaku
antarmuka diatom selama ekstraksi bifasik belum dipertimbangkan.
Dalam penelitian ini, slurry dari unruptured Navicula sp. sel menjadi
sasaran berbagai tingkat geser (dihasilkan oleh pencampuran lembut,
pencampuran rotor-stator geser tinggi, dan ultrasound daya) di
hadapan dan tidak adanya heksana.Navicula sp. dipilih sebagai diatom
pennate representatif dengan fitur struktural sel penting (yaitu frustula
silika) yang umum di antara Bacillariophyceae lainnya tetapi kurang
dalam studi yang lebih umumP.trikornutum. Kinerja dan kinetika
ekstraksi lipid bifasik diselidiki dalam kaitannya dengan geser dan
struktur sel. Mekanisme baru terungkap dan dijelaskan dalam
kaitannya dengan sifat fisikokimia yang berbeda dariNavicula sp. sel.
Studi ini bertujuan untuk memberikan wawasan baru ke dalam
ekstraksi lipid bifasik dari diatom dan untuk menyelidiki potensi sel alga
yang pecah secara bersamaan dan mengekstraksi lipid.
2. Bahan-bahan dan metode-metode
2.1. Budidaya dan panen mikroalga
diatom Navicula sp., diisolasi dari Sungai Wimmera di Jeparit, Victoria,
Australia oleh Anne dan Bob Hill, diisolasi ke dalam media f yang
dimodifikasi dengan tambahan silika seperti yang dijelaskan sebelumnya
[6.22]. Budaya tumbuh seperti yang dijelaskan oleh Hukum, et al.[34] dalam
15 L carboys pada suhu kamar (22 ± 2 -C) di bawah siklus terang: gelap 14:10
jam dengan udara terus menerus disalurkan melalui batu udara. Kultur
dipanen setelah periode pertumbuhan 10 hari dengan sentrifugasi
menggunakan centrifuge tumpukan disk (Pemisah OTC 2-02-137, GEA
Westfalia, Italia) pada 10.000 rpm. Dipastikan bahwa sentrifugasi tidak
merusak sel (Gambar. S1). Kandungan nitrogen dalam media diukur selama
siklus pertumbuhan menggunakan kit uji nitrat API komersial[35]. Sel-sel
yang dipanen kekurangan nitrogen selama 4 hari terakhir dari periode
budidaya 10 hari. NS
67
Jurnal Ilmu Koloid dan Antarmuka 589 (2001) 65–76
Konsentrasi padatan biomassa yang dipanen ditentukan dengan mengukur
berat kering biomassa setelah pengeringan oven semalaman pada suhu 60
-C. Pengaruh kadar garam diperhitungkan dalam perhitungan berat kering
dengan mengasumsikan jumlah air yang diuapkan dengan pengeringan
telah meninggalkan garam yang berjumlah 3% dari beratnya. Bubur pada
konsentrasi yang berbeda diperoleh dengan mengencerkan biomassa yang
dipanen dengan 3% air laut buatan (Coral Pro Salt, Red Sea Fish Pharm LTD,
Israel).
2.2. Ekstraksi dan fraksinasi lipid total
Total lipid diekstraksi dalam rangkap tiga menggunakan yang
dijelaskan sebelumnya [6] dimodifikasi metode Bligh dan Dyer di mana
kloroform (99,8% AR, RCI Labscan, Chem Supply, SA, Australia) dan
metanol (99,9% HPLC, Fisher Scientific, Ottawa, Kanada) digunakan
sebagai pelarut ekstraksi. Lipid yang diekstraksi dikeringkan di bawah
aliran nitrogen pada 40 -C menggunakan pemanas blok-dri (Techne
Sample Concentrator, model DB-3D Dri-Block, Bibby Scientific Limited,
Stone, UK). Lipid yang dikumpulkan ditimbang dan kemudian
disuspensikan kembali dalam kloroform-metanol (1:2) untuk fraksinasi
selanjutnya dari lipid netral dari fraksi fosfo- dan glikolipid
menggunakan ekstraksi fase padat (SPE) seperti yang dijelaskan
sebelumnya dalam Olmstead, et al.[6]. Fraksi lipid netral ditemukan 84
± 1%, yang digunakan untuk menentukan hasil ekstraksi lipid netral.
2.3. Ekstraksi lipid bifasik di bawah kondisi pencampuran yang berbeda
Pengaruh aliran geser pada kinetika ekstraksi lipid bifasik dari
Navicula sp. diperiksa melalui tiga metode pencampuran yang
berbeda: pencampuran geser rendah, pencampuran rotor stator, dan
ultrasonikasi. Untuk semua metode, rasio 1:1 voln-heksana (95% HPLC,
RCI Labscan, Chem Supply, SA, Australia) dan suspensi alga digunakan
dengan mencampurkan 10 mL sampel suspensi alga padat 2,1%
dengan 10 mL n-heksana dalam 50 mL tabung sentrifugal berbentuk
kerucut. Ekstraksi dilanjutkan sampai perbedaan dua konsentrasi
berturut-turut minimal.
Ekstraksi di bawah pencampuran geser rendah dilakukan dengan
memutar pada 8 rpm menggunakan rotator (Labquake, Barnstead
International, Iowa, USA). Suhu ekstraksi dipertahankan pada 24 ± 1 -C
dengan menempatkan mixer dalam inkubator (Unimax 1010 &
Incubator 1000, Heidolph Instruments, Jerman). Intensitas daya
maksimum yang diperlukan oleh rezim pencampuran ini sebelumnya
diperkirakan 0,002 W/mL[36].
Untuk menerapkan lebih banyak geser selama ekstraksi, mixer
rotor-stator geser tinggi (Ultraturrax, IKA Labortechnik) diterapkan
pada campuran ekstraksi pada kecepatan rotasi 6500 rpm. Wadah
sampel direndam dalam penangas air dengan suhu 24 ± 2 -C selama
proses berlangsung. Konsumsi daya unit rotor-stator ditemukan 0,95
W/mL menggunakan meteran daya yang terpasang.
Ultrasonication diterapkan untuk menyelidiki efek dari geser intens
pada ekstraksi lipid biphasic. Transduser ultrasonik frekuensi rendah
berintensitas tinggi (Branson Sonifier beroperasi pada 20 kHz) dengan
tanduk ujung mikro berdiameter 3 mm digunakan. Ujung tanduk
diposisikan pada antarmuka heksana-biomassa untuk pencampuran
yang efisien. Suhu sampel dipertahankan dengan penangas air pada 24
± 2 -C. Intensitas daya ditentukan menjadi 0,57 W/mL.
2.4. Kuantifikasi kinetika ekstraksi lipid
Kinetika ekstraksi lipid diselidiki dengan mengukur hasil lipid yang
diekstraksi dalam 1,5 mL sampel yang diambil pada interval waktu yang
berbeda tergantung pada total waktu ekstraksi metode pencampuran.
Sampel ini disentrifugasi pada 2330G selama 10 menit (Allegra X-30R,
rotor sudut tetap F0685, Beckman Coulter, Victoria, Australia) untuk
memulihkan lapisan heksana yang kaya lipid dari campuran ekstraksi.
Pelet disuspensikan kembali dalam heksana segar hingga
B. Yatipanthalawa, W. Li, David RA Hill dkk.
1,5 mL, dan bahan yang dihasilkan ditambahkan kembali ke bejana
ekstraksi untuk menjaga volume konstan selama percobaan. Lapisan
supernatan heksana yang kaya lipid kemudian diencerkan dengann-
heksana. Jumlah lipid yang diekstraksi dalam setiap sampel waktu-
kursus diukur dengan mengukur absorbansi pada 450 nm
menggunakan spektrofotometer UV-Vis (spektrofotometer absorbansi
Cary 3E UV-Vis, Agilent Technologies, Mulgrave, VIC, Australia).
Absorbansi antara 400 nm dan 800 nm diukur pada kenaikan 5 nm dan
450 nm (klorofilA) dipilih sebagai panjang gelombang yang paling
cocok dengan kurva respons lipid pada rentang konsentrasi yang
relevan. Kurva kalibrasi diplot berdasarkan absorbansi pada 450 nm
menggunakan konsentrasi yang diketahui dari lipid yang diekstraksi
heksana yang dilarutkan kembali dalam 95%n-heksana sebagai pelarut
dasar. Kurva ini digunakan untuk mengubah absorbansi menjadi
konsentrasi lipid.
2.5. Pemindaian mikroskop elektron
Scanning electron microscopy (SEM) digunakan untuk gambar
Navicula sp. sel untuk mengungkapkan perubahan morfologi dan
pecahnya sel akibat kontak heksana dan pencampuran yang dibantu
geser. Wafer silikon potong dadu (13 mm kali 13 mm) dilapisi dengan
0,1% (v/v) polietilenimin (PEI) (berat molekul rata-rata bercabang ~
25.000 g/mol yang diukur dengan hamburan cahaya, Sigma Aldrich,
NSW, Australia) dengan menempatkan a setetes PEI pada wafer dan
keringkan di bawah nyala api. Wafer didinginkan kembali ke suhu
kamar dan suspensi sel (200akuL) diinkubasi pada wafer silikon
berlapis PEI selama 1 jam. Suspensi sel berlebih dikeringkan, dan wafer
direndam dalam 2,5% glutaraldehida dalam Phosphate buffered saline
(PBS) selama 1 jam untuk mengikat film PEI. Wafer silikon kemudian
dibilas tiga kali dalam PBS segar masing-masing selama 10 menit
sebelum mengeringkannya secara berurutan dalam peningkatan
konsentrasi etanol 10, 30, 50, 70, 90 dan 100% dalam air (10 menit
untuk setiap langkah). Wafer dikeringkan dalam pengering titik kritis
(Balzers CPD030 Liechtenstein, Jerman). Sel-sel pada wafer silikon
dicitrakan dengan mikroskop elektron pemindaian (volumescope FEI
Teneo) pada tegangan 5 kV dan arus 25 pA.
2.6. Mikroskop elektron transmisi
Contoh dari Navicula sp. yang telah mengalami perlakuan yang
berbeda disiapkan untuk analisis mikroskop elektron transmisi (TEM).
Pertama, suspensi sel disentrifugasi dalam centrifuge bench-top pada
1750 g selama 5 menit (MiniSpin plus, Rotor F-45-12-11, Eppendorf AG,
Jerman). Supernatan dihilangkan dan pelet sel disuspensikan kembali
dalam volume yang sama dari agarosa titik leleh rendah 0,7% (dibuat
dengan air laut)[37]. Sel-sel dikrio-imobilisasi dengan pembekuan
tekanan tinggi menggunakan Leica EM PACT2.
Pembawa sampel beku dipindahkan di bawah nitrogen cair ke
media substitusi beku. Media substitusi beku terdiri dari 1% OsO4 (4%
tingkat mikroskop elektron larutan berair, ProSciTech, QLD, Australia),
0,5% uranil asetat (tingkat 99,6% ProSciTech (Electron Microscopy
Sciences), QLD, Australia) dan
2,5% H2O dalam aseton (99,8% AR Grade, Chem Supply, VIC, Australia)
[38,39] dan diproses menggunakan protokol substitusi pembekuan
cepat yang dijelaskan sebelumnya [38]. Setelah mencapai 0 -C, fiksatif
dibilas dengan dua pertukaran aseton murni, sebelum melanjutkan ke
infiltrasi resin dan penanaman di Embed 812 (ProSciTec). Setelah resin
dipolimerisasi, bagian ultra tipis (70 nm) disiapkan pada formvar
dengan kisi-kisi tembaga berlapis karbon (100 mesh) menggunakan
ultramikrotom (Leica EM UC7). Bagian-bagian itu diwarnai dengan 7%
uranil asetat dalam metanol dan Reynold's sitrat. Bagian tipis diamati
pada TEM (FEI Talos L120C).
68
Jurnal Ilmu Koloid dan Antarmuka 589 (2001) 65–76
2.7. Pengukuran tegangan antarmuka
Untuk menyelidiki perilaku antarmuka sel alga selama ekstraksi lipid
menggunakan heksana, tensiometer jatuh liontin (OCA20, Dataphysics,
Jerman) digunakan untuk menentukan tegangan antarmuka antara
fase air (suspensi mikroalga) dan fase organik (n-heksana). Pengukuran
ini dilakukan dalam kondisi diam untuk fokus pada kimia permukaan
sistem. Sebelum pengukuran, konsentrasi padatan bubur mikroalga
dikurangi menjadi 0,1% menggunakan media air laut. Pada konsentrasi
padatan seperti itu, kinetika perilaku antarmukaNavicula sp. sel dapat
diperiksa berdasarkan tegangan antarmuka dinamis (DIFT)[34,40].
Untuk pengukuran ini, kuvet tahan pelarut 10 mm - 10 mm
digunakan untuk menampung n-heksana dan sumbat kuvet PTFE
dengan lubang tengah digunakan untuk meminimalkan penguapan
pelarut sambil membiarkan jarum penjatuh liontin melewatinya.
Setetes fase berair diproduksi menggunakan spuit kaca kedap gas
dengan jarum pengunci Luer stainless steel (22 gauge, diameter luar
0,72 mm)[34]. Gambar tetesan ditangkap menggunakan unit kamera
terintegrasi dan tegangan antarmuka dihitung dalam perangkat lunak
instrumen menggunakan persamaan Young-Laplace. Akuisisi data
dilakukan secara manual selama 30 detik pertama dan kemudian
beralih ke akuisisi data otomatis dengan kecepatan 10 poin/menit.
2.8. Penghapusan EPS berbantuan ultrasound
Navicula sp. diketahui memiliki jumlah EPS yang signifikan
[41], yang dapat mempengaruhi proses ekstraksi lipid. Untuk menyelidiki
kemungkinan peran EPS pada ekstraksi lipid, ultrasonikasi diterapkan tanpa
adanya heksana sebagai sarana untuk menghilangkan EPS secara fisik sebelum
ekstraksi lipid. Untuk ini, 20 mL suspensi sel yang memiliki konsentrasi padat 1,5%
disiapkan dan diultrasonik dalam 50 mL tabung sentrifugal berbentuk kerucut
selama interval waktu 5 detik, 30 detik, dan 60 detik menggunakan pengaturan
ultrasonik intensitas tinggi yang sama yang dijelaskan sebelumnya. Supernatan
yang kaya EPS dihilangkan dengan mensentrifugasi bubur pada 3920 g selama 10
menit, kemudian mengeluarkan supernatan yang kaya EPS. Suspensi alga yang
direduksi EPS dibuat dengan mengencerkan kembali pelet alga yang
disentrifugasi dengan 3% air asin untuk mencapai volume cairan total yang sama
(yaitu, 20 mL).
2.9. Reproduksibilitas eksperimental
Semua percobaan dilakukan setidaknya dalam rangkap dua.
Ekstraksi lipid total dan fraksinasi dan pengukuran berat kering
dilakukan dalam rangkap tiga untuk sampel duplikat. Kinetika ekstraksi
lipid (konsentrasi lipid) dan pemulihan pelarut diukur dalam rangkap
dua pada sampel percobaan rangkap tiga. Rata-rata dan simpangan
baku dihitung berdasarkan ulangan. Pengukuran tegangan antarmuka
dilakukan dalam rangkap dua untuk sampel duplikat dan kumpulan
data yang representatif disajikan. Gambar SEM dan TEM yang mewakili
seluruh sampel dipilih.
3. Hasil dan Pembahasan
3.1. Ekstraksi lipid bifasik dari sel Navicula yang tidak pecah di bawah
pencampuran geser rendah
Untuk memberikan pemahaman dasar awal ekstraksi bifasik tanpa adanya
geser, percobaan pertama kali dicoba secara keseluruhan Navicula sel yang belum
mengalami ruptur sel sebelumnya menggunakan pencampuran geser rendah. Ini
tidak diharapkan menghasilkan ekstraksi lipid yang signifikan, karena seperti yang
disebutkan dalam pendahuluan, penelitian sebelumnya tentang ekstraksi pelarut
bifasik pada mikroalga telah
B. Yatipanthalawa, W. Li, David RA Hill dkk. Jurnal Ilmu Koloid dan Antarmuka 589 (2001) 65–76

secara konsisten menunjukkan bahwa pecahnya sel sebelumnya
diperlukan untuk ekstraksi lipid yang efektif [7,30]. Namun yang
mengejutkan, ditemukan bahwa hasil lipid yang tinggi (>80% dari total
lipid netral) dapat diperoleh, meskipun lambat, meskipun sel-selnya
tidak pecah (seperti yang disebutkan dalamBagian 2.1, sel tidak pecah
dengan sentrifugasi selama pemanenan; Gambar. S1) dan ekstraksi
dilakukan di bawah kondisi pencampuran geser rendah (Gambar 1).
Penjelasan yang paling jelas untuk hasil ini adalah pecahnya sel terjadi
selama proses ekstraksi, dan ini menyebabkan pelepasan lipid dari sel
dan pemulihannya ke dalam tetesan heksana. Untuk menyelidiki
hipotesis ini, pemindaian gambar mikroskop elektron sel diambil
setelah paparan berkepanjangan (23 jam) terhadap pencampuran
geser rendah dengan heksana (Gambar 1c,e) dan dibandingkan
dengan sel segar (Gambar 1b, d). Menariknya, meskipun pencampuran
rendah dengan heksana menghasilkan hasil lipid yang tinggi (Gambar
1a), sel-sel yang dicampur dalam heksana selama 23 jam sebenarnya
tidak pecah secara fisik (Gambar 1C). Pengamatan ini menunjukkan
bahwa lipid intraseluler dapat dibiarkan tidak pecahNavicula sel dan
masuk ke tetesan heksana melalui mekanisme baru.
Karena heksana tidak dapat bercampur dengan air, ia tetap sebagai
tetesan emulsi yang tidak dapat berdifusi ke dalam sel mikroalga [7]. Rute di
mana lipid diekstraksi dari utuhNavicula sel menjadi tetesan heksana yang
tidak bercampur dengan air karena itu tidak segera terlihat. Satu
kemungkinan adalah bahwa sel-sel bersentuhan langsung dengan tetesan
heksana dan ini entah bagaimana memungkinkan penggabungan badan
lipid intraseluler ke dalam heksana melalui perjalanan melalui dinding sel.
Diatom sebenarnya ditutupi oleh cangkang silika keras yang disebut frustula
daripada dinding sel sejati. Frustula ini mengandung pori-pori hidrofobik
dengan ukuran mulai dari 40 nm hingga 1500 nm tergantung pada
spesiesnya[42], yang digunakan untuk beberapa fungsi termasuk
pertukaran gas dan dapat berfungsi sebagai saluran untuk
heksana yang tidak dapat bercampur dengan air untuk menghubungi
badan lipid di dalam sel yang utuh [20,43]. Proses ini akan
membutuhkan sel untuk mematuhi tetesan heksana untuk
memungkinkan kontak intim antara tetesan dan sel agar heksana
menembus pori-pori frustule dan menyatu dengan badan lipid. Klein,
dkk.[44] telah menemukan sudut kontak air di udara dengan diatom
lautNavicula jeffreyi lapisan menjadi 68,6-, menunjukkan bahwa
mereka cukup hidrofobik yang memungkinkan kontak yang cukup
dengan tetesan heksana.
Oleh karena itu, peran antarmuka air-heksana dan perilaku
antarmuka sel alga tampaknya menjadi pusat ekstraksi lipid bifasik tak
terduga dari unruptured Navicula sp. sel. Faktor-faktor tersebut perlu
diperiksa tanpa adanya gaya geser, yang sebaliknya dapat berdampak
pada kinetika ekstraksi seperti yang akan dibahas selanjutnya.Gambar
1c menunjukkan bahwa meskipun Navicula sp. sel tidak pecah oleh
kontak yang lama dengan heksana, ada beberapa bahan asing yang
ada di latar belakang yang memberikan beberapa bukti awal bahwa
Navicula sel berinteraksi langsung dengan tetesan heksana.
3.2. Perilaku antarmuka selama ekstraksi lipid bifasik dari sel
Navicula yang tidak pecah tanpa adanya geser
Karena mekanisme ekstraksi yang diusulkan harus terjadi pada
antarmuka heksana-air, keberadaan sel dan lipid yang diekstraksi pada
antarmuka diharapkan mempengaruhi tegangan antarmuka (IFT). Oleh
karena itu, untuk menyelidiki ini lebih lanjut, pengukuran tegangan
antarmuka dinamis (DIFT) dilakukan pada antarmuka antara heksana
dan suspensi berair dariNavicula sp. sel (Gambar 2.).

Gambar 1. (a) Kinetika ekstraksi lipid bifasik dari bubur basah (2,1% padatan) yang baru dipanen, utuh Navicula sp. sel menggunakan heksana di bawah pencampuran geser rendah.
Kinetika dinyatakan sebagai persentase dari total lipid netral yang diekstraksi menggunakan metode Bligh dan Dyer yang dimodifikasi. Bilah kesalahan mewakili standar deviasi dari
pengukuran duplikat dari percobaan rangkap tiga. Gambar SEM representatif dari (b, d) segarNavicula sp. sel dipanen dengan sentrifugasi dan (c, e)Navicula sp. sel setelah 23 jam
pencampuran geser rendah dengan heksana. Bilah skala mewakili 10MM. Gambar SEM tambahan dari sel segar dan kontak heksana disediakan dalam informasi tambahan (Gambar S2
dan S3).

69
B. Yatipanthalawa, W. Li, David RA Hill dkk.
Empat rezim yang berbeda (I-IV) dapat dibedakan dalam kurva IFT (
Gambar 2.b), tiga yang pertama sejajar dengan tahap yang sebelumnya
diidentifikasi untuk antarmuka yang distabilkan partikulat [34,40]. IFT pada
dasarnya tetap tidak berubah pada ~48 mN/m selama 20 detik pertama
(I), setelah itu mulai menurun (II). Setelah mencapai ~40 mN/m, IFT terus
menurun dengan kecepatan yang lebih lambat selama beberapa menit
(III), sebelum transisi pada sekitar 1000 detik ke periode penurunan
yang lebih cepat, namun semakin melambat (IV), mendekati nilai
minimum yang tampak sekitar 18 mN/m setelah sekitar 1 jam (3600
detik).
Pengukuran tegangan antarmuka dinamis serupa dilakukan oleh
Beverung, et al. [40] untuk menyelidiki adsorpsi protein pada
antarmuka minyak-air. Dalam hal itu, model 3-rezim diusulkan untuk
menafsirkan dinamika tegangan antarmuka dalam kaitannya dengan
adsorpsi protein dalam kondisi diam. Dalam rezim I (fase induksi), IFT
tetap tinggi untuk waktu yang singkat sampai protein aktif permukaan
berdifusi ke antarmuka dari media curah. IFT kemudian mulai
berkurang pada fase II (pembentukan monolayer) sebagai antarmuka
menjadi ditutupi oleh monolayer molekul protein, yang dalam proses
adsorpsi dapat terungkap. Pada fase III (adsorpsi multilayer), IFT terus
menurun, tetapi pada tingkat penurunan yang lebih lambat
dibandingkan pada fase II. Pengurangan IFT pada fase ini terjadi
setelah antarmuka telah jenuh oleh molekul protein di mana mereka
dapat menjalani interaksi antar molekul lebih lanjut (yaitu tutup
pengepakan atau gelasi). Sel alga, meskipun beberapa kali lipat lebih
besar dari protein, masih merupakan partikel yang proses adsorpsi
antarmukanya serupa.
Gambar 2. Perubahan tegangan antarmuka antara heksana dan Navicula sp. fase bubur
(konsentrasi padatan 0,1%) sebagai fungsi waktu yang diplot pada skala waktu linier (a) dan log
(b). Rezim yang berbeda dipisahkan oleh garis putus-putus vertikal dan mekanisme yang
mungkin mendasari masing-masing dijelaskan secara singkat.
70
Jurnal Ilmu Koloid dan Antarmuka 589 (2001) 65–76
dapat diharapkan terjadi [34,40]. Dengan demikian, tiga tahap pertama
dalam kurva DIFT diamati di sini (Gambar 2.) sejajar dengan waktu
induksi untuk difusi sel ke antarmuka (rezim I), penurunan IFT karena
pengembangan monolayer antarmuka sel alga (rezim II), dan
pengemasan dan penataan ulang antar-seluler lebih lanjut pada
antarmuka (rezim AKU AKU AKU).
Menariknya, dalam sistem bifasik heksana dan Navicula
suspensi, rezim keempat yang unik (rezim IV) dapat dibedakan dalam
profil DIFT (Gambar 2.B). Alih-alih mencapai dataran tinggi di IFT
setelah pengemasan antar-seluler (rezim III) mengikuti tiga rezim awal
ini, ada dimulainya kembali yang cepat dan dramatis dalam
pengurangan IFT (rezim IV). Keberadaan tahap keempat pengurangan
IFT belum dilaporkan dalam sistem makromolekul seperti protein[40],
atau untuk bubur mikroalga yang memiliki dinding sel selulosa (
Nannokloropsis) [34]. Hal ini menunjukkan terjadinya fenomena di luar
adsorpsi partikel antarmuka dan penataan ulang. Dengan
mempertimbangkan perilaku IFT ini sehubungan dengan ekstraksi lipid
yang diamati (Gambar 1a) dari sel yang tidak pecah (Gambar 1c),
dikemukakan di sini bahwa penurunan IFT pada rezim IV disebabkan
oleh penyerapan lipid alga intraseluler ke antarmuka. Lipid ini akan
mencakup lipid polar aktif permukaan yang dapat menjelaskan
pengurangan IFT yang jauh lebih dramatis selama rezim IV daripada
yang mungkin terjadi pada tiga tahap pertama (IFT berkurang sekitar
22 mN/m pada rezim IV, dibandingkan dengan pengurangan total
hanya sekitar 5 mN/m di seluruh rezim I hingga III).
Untuk menyelidiki lebih lanjut efek heksana pada struktur sel dan
tetesan lipid terkait, gambar TEM diperoleh mengungkapkan struktur
internal diatom sebelum dan sesudah kontak dengan heksana (Gambar
3). Gambar-gambar ini mengkonfirmasi pengamatan dari SEM bahwa
sel-sel tetap tidak pecah oleh kontak dengan heksana.Gambar 3a
menunjukkan badan lipid dalam sel utuh berukuran besar dan terletak
di dekat membran sel, membuatnya relatif mudah diakses oleh tetesan
heksana tempat sel dapat diadsorpsi. Yang penting, setelah kontak
dengan heksana, badan lipid dapat dilihat telah dievakuasi, dengan
hanya daerah berongga yang tersisa di dalam sel secara keseluruhan (
Gambar 3b), menunjukkan bahwa badan lipid memang telah menyatu
menjadi tetesan heksana ekstraseluler. Gambar pendukung lebih lanjut
dapat ditemukan diGambar. S4. Lipatan yang ada di daerah berongga
bisa menjadi artefak persiapan sampel atau beberapa bahan yang tidak
diekstraksi dari tubuh lipid. Ekstraksi bifasik lipid dariNavicula sp. tanpa
adanya sel yang pecah baik sebelum atau selama ekstraksi pada
dasarnya berbeda dengan mekanisme yang sebelumnya diidentifikasi
untuk mikroalga lain yang memiliki dinding sel selulosa.[7]. Selain itu,
dapat diamati bahwa lapisan gelap yang mengelilingi permukaan
dinding sel dari sel yang tidak diobati (Gambar 3a) jauh lebih redup di
sekitar sel yang dikontakkan dengan heksana (Gambar 3B). Lapisan ini
diidentifikasi di sini sebagai EPS, yang akan dibahas di bagian
selanjutnya.
3.3. Pengaruh geser pada ekstraksi lipid
Eksperimen dilakukan untuk menyelidiki efek geser pada kinetika
ekstraksi lipid bifasik dari utuh Naviculasel menggunakan pencampuran
rotor-stator geser tinggi dan ultrasonikasi (Gambar 4). Ultrasonication
memungkinkan ekstraksi lipid tercepat, diikuti oleh pencampuran rotor
stator (Gambar 4), dan pencampuran geser rendah (Gambar 1), dengan hasil
75% dari total lipid netral yang ada seperti yang dikuantifikasi menggunakan
metode Bligh and Dyer yang dicapai dalam waktu sekitar
1,5 menit, 70 menit dan 2000 menit, masing-masing. Hasil ini menunjukkan
bahwa ekstraksi sangat dipercepat oleh geser, khususnya dengan geser
intens yang disediakan oleh ultrasonikasi daya.
Perbedaan laju ekstraksi sebagai fungsi geser dapat dijelaskan
sebagian oleh derajat emulsifikasi. Tingkat gaya geser yang lebih tinggi
dapat mendorong pecahnya tetesan emulsi, yang mengarah ke tetesan
yang lebih kecil. Ultrasonication dapat menghasilkan tetesan emulsi
yang sangat kecil dalam waktu singkat karena gaya geser yang tinggi
B. Yatipanthalawa, W. Li, David RA Hill dkk.
Gambar 3. Gambar TEM dari (a) yang baru dipanen Navicula sp. sel, dan (b) sel yang dikontakkan dengan heksana hanya melalui adsorpsi antarmuka difusi selama 2 jam. Lingkaran
merah menunjukkan posisi badan lipid yang terisi (a) dan yang dikosongkan (b) (Cl=kloroplas; M=mitokondria). Panah merah digunakan untuk menunjukkan perbedaan bahan
ekstraseluler yang ada di dinding sel pada gambar sisipan. Bilah skala mewakili 1MM. Gambar tambahan yang membandingkan sel segar dan kontak heksana disediakan dalam
informasi tambahan (Gambar S4). (Untuk interpretasi referensi warna dalam legenda gambar ini, pembaca merujuk ke versi web artikel ini.)
timbul dari kavitasi akustik [45]. Pencampuran rotor-stator geser tinggi juga
menghasilkan gaya geser, tetapi tidak dapat membentuk tetesan emulsi
sekecil mungkin dengan ultrasonikasi[46]. Tetesan yang lebih kecil
menghasilkan area antarmuka spesifik yang lebih tinggi antara tetesan
heksana yang tersebar dan bubur alga yang terus menerus. Ini akan
meningkatkan jumlah sel yang mampu melakukan kontak langsung dengan
tetesan heksana, dengan sel alga bertindak sebagai penstabil antarmuka
utama sistem emulsi gaya Pickering ini, sehingga mempercepat ekstraksi
langsung melalui mekanisme yang diidentifikasi sebelumnya. Sementara
peningkatan area antarmuka yang terkait dengan peningkatan geser
(ultrasonikasi> pencampuran rotor-stator> pencampuran geser rendah)
konsisten dengan peningkatan laju ekstraksi, mungkin tidak cukup untuk
menjelaskan perbedaan dramatis dalam kinetika. Secara khusus, meskipun
sel-sel pada awalnya tidak pecah (Gambar 1a) dan tidak pecah oleh kontak
heksana tanpa adanya pencampuran geser (Gambar 1b), ada kemungkinan
bahwa sel-sel pecah sebagai akibat dari gaya geser yang diberikan selama
ekstraksi menggunakan ultrasonikasi dan pencampuran rotor-stator. Untuk
menyelidiki apakah pecahnya sel terjadi selama ekstraksi, gambar SEM
diperoleh dari sel-sel yang terpapar ultrasonikasi (selama 60 detik) atau
pencampuran rotor-stator (selama 20 menit) dengan adanya heksana (
Gambar 4b dan c). Memang, penerapan geser menggunakan ultrasound
atau pencampuran rotor-stator dengan adanya heksana mengakibatkan
disintegrasi seluler. Dalam kasus ultrasonikasi, bagaimanapun, sel pecah
tampaknya secara signifikan lebih luas dibandingkan dengan pencampuran
rotor-stator, sebagaimana dibuktikan oleh jumlah yang lebih besar dari
puing-puing seluler internal yang ada dalam gambar SEM. Dalam kedua
kasus, pecahnya sel terbukti telah terjadi sebelum permulaan periode
ekstraksi lipid bifasik yang sangat cepat.Gambar 4) memberikan wawasan
lebih lanjut ke dalam kinetika ekstraksi yang ditingkatkan dengan adanya
geser.
3.4. Peran zat polimer ekstraseluler (EPS) pada ekstraksi lipid bifasik
dari Navicula
Berdasarkan hasil yang disajikan sejauh ini, terbukti bahwa
perjalanan lipid intraseluler dari yang tidak pecah Navicula sel terjadi
pada antarmuka heksana-air. Proses ini akan tergantung pada sur-
71
Jurnal Ilmu Koloid dan Antarmuka 589 (2001) 65–76
kimia wajah sel. Di luar dinding sel itu sendiri, banyak mikroalga,
termasuk diatom seperti:Navicula, mengeluarkan apa yang disebut zat
polimer ekstraseluler (EPS) [44,47]. EPS diatom beragam secara
fungsional, struktural, dan kimiawi[48]. Dalam diatom sepertiNavicula,
EPS telah ditemukan untuk sepenuhnya membungkus sel dan menjadi
permukaan aktif dan perekat [44,49,50]. Lebih spesifik,Navicula
diketahui memiliki kapsul EPS berlendir luar yang tebal dan lapisan
'kulit' organik yang lebih tipis (10 nm) yang terkait erat dengan katup
[48]. Dalam konteks ini, lapisan EPS mucilaginous luar hadir secara
utuhNavicula sel berspekulasi menjadi penghalang terhadap pelarut
yang tidak dapat bercampur dengan air yang menembus sel dan
bergabung dengan badan lipid intraseluler.
Untuk menyelidiki kemungkinan peran EPS dalam kaitannya dengan
ekstraksi lipid bifasik, ultrasonikasi diterapkan untuk menghilangkan
lapisan EPS berlendir sebelum kontak heksana. Memang, penghapusan
EPS dari utuhNavicula sel dicapai dengan ultrasonikasi selama 60 detik
tanpa adanya heksana, yang penting tanpa mempengaruhi sel (
Gambar 5). Gambar SEM dan TEM disajikan dalamGambar 5
menunjukkan bahwa ultrasound menghilangkan EPS mucilaginous
yang menutupi permukaan sel segar tanpa mengakibatkan pecahnya
sel yang signifikan atau pelepasan isi intraseluler. Setelah USG,
permukaan frustula silika dapat terlihat jauh lebih halus (Gambar 5b)
daripada permukaan 'berbulu' yang tidak dirawat dari sel-sel segar (
Gambar 5a), sedangkan organel intraseluler dan badan lipid tetap utuh
(Gambar 5C). Membandingkan gambar-gambar ini (Gambar 5) dengan
sel yang mengikuti kontak heksana di bawah pencampuran geser
rendah (Gambar 3b) di mana badan lipid dikeluarkan dari sel utuh,
memperkuat mekanisme baru pelepasan lipid intraseluler dari Navicula
terjadi pada antarmuka air-heksana.
Untuk menyelidiki lebih lanjut peran EPS pada ekstraksi lipid bifasik
dari Navicula, pengukuran diperoleh dari tegangan antarmuka dinamis
antara heksana dan suspensi Naviculasel-sel yang EPS mucilaginous
dihilangkan dengan ultrasonikasi sebelum kontak heksana (Gambar 6).
Menerapkan protokol DIFT yang ditetapkan, efek penghapusan EPS
pada perilakuNaviculasel pada antarmuka air-heksana diperiksa
menggunakan suspensi Navicula sel-sel yang dikenai ultrasonikasi
untuk berbagai
B. Yatipanthalawa, W. Li, David RA Hill dkk. Jurnal Ilmu Koloid dan Antarmuka 589 (2001) 65–76

Gambar 4. (a) Kinetika ekstraksi lipid bifasik dari bubur basah (2,1% padatan) dari yang baru dipanen, tidak pecah Navicula sp. sel menggunakan heksana dicampur dengan ultrasonikasi dan
pencampuran rotor stator. Kinetika dinyatakan sebagai persentase dari total lipid netral yang diekstraksi menggunakan metode Bligh dan Dyer yang dimodifikasi. Bilah kesalahan mewakili standar
deviasi dari pengukuran duplikat dari percobaan rangkap tiga. Gambar SEM representatif dari (b) sel yang dikenai ultrasonikasi selama 60 detik dengan adanya heksana (1: 1 heksana: pasta) (c) sel yang
dicampur dengan heksana (1: 1 heksana: pasta) menggunakan pencampuran stator rotor selama 20 menit. Sisipan menunjukkan sel representatif pada perbesaran yang lebih tinggi. Bilah skala
mewakili 10MM.

durasi (0, 5, 30, dan 60 detik). Ini mewakili serangkaian penghapusan
EPS bergradasi, karena EPS mucilaginous dapat diharapkan secara
progresif dilepaskan ke supernatan selama ultrasonikasi, yang
kemudian dihilangkan melalui sentrifugasi sebelum pengukuran DIFT.
Pengukuran DIFT sebelumnya (Gambar 3) dilakukan pada
konsentrasi sel rendah (0,1 wt%) untuk mengungkapkan seluruh
perkembangan dinamika antarmuka (yaitu rezim kinetik yang terpisah
dengan baik). Namun, rangkaian pengukuran DIFT berikutnya
dilakukan menggunakan suspensi sel padatan 1,5% untuk menyoroti
efek penghilangan EPS pada rezim akhir IV (yaitu serapan lipid
antarmuka) yang sebelumnya terungkap. Pada konsentrasi padatan
seperti itu, dapat diharapkan bahwa antarmuka air-heksana akan
hampir seketika jenuh olehNavicula sel pada pembentukan liontin drop
sebelum dimulainya akuisisi data, sehingga tidak mengungkapkan
rezim I dan II [34]. Akibatnya, profil dimulai dengan penurunan IFT
linier relatif (Gambar 5) perwakilan dari rezim III, seperti yang disajikan
dalam penelitian sebelumnya [34,49]. Penghapusan EPS mengurangi
IFT awal (dari ~48 mN/m menjadi ~ 42 mN/m setelah sonikasi 1 menit),
menunjukkan bahwa penghilangan progresif kompleks kimia, EPS
amfifilik[44] mengubah aktivitas permukaan dan perilaku pembasahan
antarmuka sel, tampaknya meningkatkan hidrofobisitas relatif sel.
meningkat
hidrofobisitas dapat dikaitkan dengan penghilangan kapsul
mucilaginous yang lebih hidrofilik, memperlihatkan lapisan 'kulit'
organik yang lebih hidrofobik yang melapisi katup silika. Frustula
diatom yang dibersihkan sebenarnya telah terbukti mampu
mengadsorpsi protein selektif dari larutan protein berair, bahkan pada
nilai pH netral, mengkonfirmasi hidrofobisitas moderatnya.[51].
Konsisten dengan profil DIFT konsentrasi sel rendah (Gambar 2.), A
tahap akhir pengurangan IFT yang cepat, namun melambat (yaitu rezim IV)
diamati untuk semua sampel. Penghapusan EPS keduanya mengurangi
waktu yang dibutuhkan untuk mencapai rezim IV (dari 3 menit, menjadi 70
detik, 25 detik, dan 7 detik untuk ultrasonikasi 0 detik, 5 detik, 30 detik, dan
1 menit). Untuk semua sampel, ada penurunan yang signifikan dalam IFT
lebih dari 20 mN/m selama rezim IV, dibandingkan dengan pengurangan
sebelumnya kurang dari 10 mN/m dari pembasahan antarmuka oleh sel. Hal
ini konsisten dengan hasil yang diperoleh pada konsentrasi sel yang lebih
rendah (Gambar 2.). Seperti yang dibahas, penurunan dramatis dalam IFT
dapat dikaitkan dengan lipid aktif permukaan intraseluler yang diekstraksi
keluar dari sel karena kontak dengan heksana. Waktu tunggu yang diamati
pada permulaan tahap pelepasan lipid (rezim IV) untuk sel segar yang tidak
diobati konsisten dengan gagasan bahwa EPS pada awalnya bertindak
sebagai penghalang untuk transfer lipid dari sel ke fase heksana. Penerapan
ultrasonikasi untuk menghilangkan lapisan EPS mucilaginous dari
permukaan sel tanpa mempengaruhi internal

72
B. Yatipanthalawa, W. Li, David RA Hill dkk.
Gambar 5. Gambar SEM representatif dari (a) baru dipanen Navicula sp. sel dan (b) sel yang dikenai ultrasonikasi 1 menit. Bilah skala mewakili 5MM. (c) gambar TEM dari aNavicula sp.
ultrasonikasi sel selama 1 menit, memperlihatkan dinding sel yang kekurangan zat polimer ekstraseluler yang melekat (M = mitokondria; N = nukleus; C = kloroplas). Bilah skala mewakili
500 nm. Gambar SEM dan TEM tambahan untuk sel yang diultrasonikasi selama 1 menit disediakan dalam informasi tambahan (Gambar S5 dan Gambar S6, masing-masing).
Gambar 6. Profil tegangan antarmuka dinamis (DIFT) antara heksana dan suspensi dari Navicula
sp. sel (1,5% padatan) sehubungan dengan perawatan sebelumnya dengan ultrasound (selama 5
detik, 30 detik, atau 1 menit) untuk menghilangkan EPS yang terikat. Garis tren berwarna merah
menunjukkan DIFT pada rezim III. Garis putus-putus menunjukkan waktu dan IFT yang terkait
dengan permulaan rezim IV. (Untuk interpretasi referensi warna dalam legenda gambar ini,
pembaca merujuk ke versi web artikel ini.)
struktur atau komposisi sel, oleh karena itu, mengurangi waktu
heksana hidrofobik untuk secara langsung menghubungi lapisan
organik yang melapisi frustula, menembus sel dan akhirnya
mengekstrak lipid.
Menariknya, permulaan tahap pelepasan lipid (rezim IV) terjadi pada
IFT yang kira-kira sama (~ 39 mN/m) terlepas dari jumlah EPS yang
awalnya ada. Ini menunjukkan bahwa lapisan antarmuka memiliki
komposisi yang serupa pada titik ini, yang dapat
73
Jurnal Ilmu Koloid dan Antarmuka 589 (2001) 65–76
mencerminkan penghapusan penghalang EPS antara frustula dan
heksana, memungkinkan kontak lengkap antara keduanya. Dengan
demikian, nilai IFT ini (39 mN/m) tampaknya mewakili IFT minimum
yang dapat diperoleh dari stabilisasi antarmuka oleh sel 'telanjang',
yang dilucuti dari lapisan EPS mucilaginous hidrofilik/sterik.
Berdasarkan gambar TEM diGambar 3, tampaknya kontak heksana
menghilangkan lapisan EPS mucilaginous, yang tampaknya merupakan
prekursor yang diperlukan untuk permulaan tahap pelepasan lipid
(rezim IV). Onset lebih awal untuk sel pra-ultrasonik oleh karena itu
menunjukkan bahwa ultrasonikasi membantu dalam pra-penghapusan
penghalang EPS mucilaginous untuk memajukan dimulainya transfer
massa lipid antara sel dan fase heksana. Namun, karena ultrasonikasi
selama 1 menit dengan adanya heksana terlihat merusak sel (Gambar 1
d), kemungkinan penghilangan EPS bukanlah alasan utama untuk
kinetika ekstraksi yang lebih cepat yang diamati padaGambar 1.
Sebaliknya, eksperimen ini mengungkapkan bahwa EPS mucilaginous
memberikan penghalang untuk ekstraksi biphasic dari yang tidak
pecahNaviculasel.
Hasil saat ini tidak cukup untuk memberikan diskusi konklusif
tentang sifat penghilangan EPS mucilaginous oleh heksana atau peran
pastinya sebagai penghalang. Karakterisasi kimia EPS yang lebih rinci
akan diperlukan untuk memahami pengaruh relatif dari efek pelindung
sterik dan hidrofobik potensial dan sifat penghilangan EPS melalui
kontak heksana. Menariknya, diGambar 3c, ada bukti penghilangan EPS
sebagian dan terlokalisasi, yang menunjukkan permukaan sel dibasahi
sebagian oleh heksana. Namun, tidak jelas apakah heksana secara
kimia mengubah EPS (misalnya menghilangkan komponen hidrofobik
penting untuk memungkinkan pelepasan dan pelarutan EPS) atau
hanya memindahkannya dari permukaan sel.
Telah ditunjukkan di sini bahwa kombinasi heksana dan geseran
tinggi menghasilkan pecahnya sel, tetapi sel-sel tetap utuh jika
terpapar salah satunya secara terpisah. Alasan sel menjadi rentan
terhadap gaya geser dengan adanya heksana tidak sepenuhnya jelas,
tetapi harus terkait dengan adsorpsi sel pada heksana.
B. Yatipanthalawa, W. Li, David RA Hill dkk.
Gambar 7. Skema mekanisme yang diusulkan ekstraksi lipid bifasik dari diatom Navicula dengan dan tanpa gaya geser yang tinggi. Penjelasan rinci tentang mekanisme ini termasuk
dalam teks utama.
antarmuka ane/air. Misalnya, penghilangan lipid intraseluler dari sel
yang terletak di antarmuka heksana/air secara mekanis dapat
melemahkan sel, khususnya struktur yang menghubungkan frustula.
Selain itu, peristiwa pemecahan tetesan dan rekoalesensi yang terjadi
ketika emulsi dikenai gaya geser dapat meningkatkan tekanan mekanis
pada sel.
3.5. Mekanisme keseluruhan ekstraksi lipid bifasik dari Navicula sp.
Berdasarkan pengamatan di sini, mekanisme ekstraksi lipid dari
Navicula sp. diusulkan seperti yang dijelaskan di bawah ini dan
diringkas secara skematis dalamGambar 7.
Pertama, gaya geser intensitas tinggi yang diberikan oleh ultrasonikasi
tanpa heksana menghilangkan EPS mucilaginous sambil membiarkan sel-sel
tetap utuh (Gambar 7A). Dengan tidak adanya gaya geser, ekstraksi lipid
dimungkinkan, meskipun sangat lambat (Gambar 7B). Sel-sel menyerap ke
tetesan heksana, dengan EPS mucilaginous menghadirkan penghalang
untuk kontak intim antara frustula dan pelarut. Setelah beberapa menit,
heksana membasahi lapisan organik yang melapisi frustula, menembus
pori-pori di frustula, dan mengeluarkan badan lipid di dalam sel. Proses ini
terus mengekstrak lipid dari sel yang berbeda dalam kultur selama berjam-
jam, untuk akhirnya memulihkan hasil lipid yang tinggi. Penerapan
ultrasound dengan adanya heksana, menghilangkan EPS mucilaginous dari
permukaan sel dan mengurangi ukuran tetesan heksana (Gambar 7C). Hal
ini meningkatkan kontak langsung sel dengan heksana karena
penghilangan penghalang EPS dan luas permukaan yang tersedia untuk
kontak dengan heksana melalui pembentukan emulsi dengan tetesan kecil.
Penggabungan terus-menerus dan pembentukan kembali tetesan heksana
kecil karena pencampuran yang cepat dengan adanya ultrasonik
74
Jurnal Ilmu Koloid dan Antarmuka 589 (2001) 65–76
kation mengakibatkan pecahnya diatom karena tekanan mekanis yang
tinggi yang dikenakan pada sel.
Menurut mekanisme ini, ekstraksi bifasik lipid dari diatom seperti:
Navicula dapat dicapai baik melalui kontak langsung sel dengan
heksana atau lebih cepat setelah sel pecah yang dapat terjadi in-situ
selama ekstraksi dilakukan di bawah geser tinggi. Tetesan emulsi yang
lebih kecil lebih disukai untuk meningkatkan luas permukaan yang
tersedia bagi sel untuk kontak dengan heksana[3]. Ultrasonication tidak
hanya membantu dalam membentuk emulsi yang ketat[32] tetapi juga
menghilangkan lapisan EPS yang menutupi permukaan sel (Gambar 5),
yang memfasilitasi kontak langsung sel dengan heksana. Sel rentan
pecah ketika mengalami kontak heksana dan gaya geser (Gambar 4).
Ini bisa jadi karena melemahnya mekanis sel-sel yang terpapar
heksana[52] atau peningkatan kekuatan mekanik pada antarmuka
yang dihasilkan dari kerusakan dan tumbukan tetesan emulsi di bawah
geser [32]. Yang penting, ini adalah perilaku yang berbeda dengan apa
yang telah diamati sebelumnyaNannokloropsis sp., yang memiliki
dinding sel selulosa. UntukNannokloropsis sp., tidak ada ekstraksi lipid
langsung dari sel utuh [12,13] atau pecahnya sel selama ekstraksi lipid
bifasik ultrasonik diamati (Gambar S7). Mekanisme yang berbeda
terungkap di sini untukNaviculaa muncul terkait dengan sifat
fisikokimia dan porositas struktur dinding selnya. Akan menarik di
masa depan untuk mempelajari diatom lain untuk melihat seberapa
universal mekanisme ini di kelas alga ini mengingat kesamaan mereka
dalam struktur dinding sel dan perbedaan karakteristik permukaan dan
fisiologis.[48].
4. Kesimpulan
Ekstraksi lipid bifasik dari sel diatom yang tidak pecah
Navicula sp. diselidiki dalam kaitannya dengan struktur sel, antarmuka
B. Yatipanthalawa, W. Li, David RA Hill dkk.
perilaku sosial dan penerapan geser. Yang penting dan tidak terduga, pecahnya sel sebelumnya
diamati tidak perlu untuk ekstraksi lipid. Namun, ekstraksi sangat lambat, membutuhkan waktu
lebih dari 40 jam untuk mengekstrak > 80% dari total lipid netral. Pengukuran tegangan
antarmuka mengungkapkan bahwa sel utuh mampu melakukan kontak langsung dengan fase
heksana tanpa penerapan geser yang menghasilkan penurunan tegangan antarmuka yang
signifikan dari 40 mN/m menjadi 18 mN/m. Kontak dengan tetesan heksana memungkinkan
penghilangan badan lipid intraseluler, seperti yang ditunjukkan pada gambar TEM dan dikaitkan
dengan bagian melalui pori-pori di frustule sel. Proses ini lambat, memakan waktu beberapa
menit untuk populasi awal sel, dan terhambat oleh adanya EPS mucilaginous pada permukaan
sel. Penerapan geser dengan pencampuran rotor-stator dan ultrasonikasi sangat meningkatkan
tingkat ekstraksi lipid, dengan 75% dari total lipid netral pulih di sekitar 70 menit atau 1,5 menit,
masing-masing. Ultrasonication tanpa heksana tidak dapat memecahkan sel secara efektif, tetapi
mampu menghilangkan EPS mucilaginous yang menutupi permukaan sel. Dengan adanya
heksana, ultrasonikasi dapat merusak sel, menghasilkan ekstraksi > 95% dari lipid netral dalam
<5 menit. Studi ini mengungkapkan mekanisme yang berbeda untuk ekstraksi lipid bifasik dari
diatom tetapi malah mampu menghilangkan EPS mucilaginous yang menutupi permukaan sel.
Dengan adanya heksana, ultrasonikasi dapat merusak sel, menghasilkan ekstraksi > 95% dari
lipid netral dalam <5 menit. Studi ini mengungkapkan mekanisme yang berbeda untuk ekstraksi
lipid bifasik dari diatom tetapi malah mampu menghilangkan EPS mucilaginous yang menutupi
permukaan sel. Dengan adanya heksana, ultrasonikasi dapat merusak sel, menghasilkan
ekstraksi > 95% dari lipid netral dalam <5 menit. Studi ini mengungkapkan mekanisme yang
berbeda untuk ekstraksi lipid bifasik dari diatomNavicula untuk yang sebelumnya diamati dengan
ganggang seperti Nannokloropsis dan Chlorella yang memiliki dinding sel selulosa yang tidak
permeabel. Wawasan ini akan membantu upaya masa depan untuk mengembangkan ekstraksi
lipid bifasik yang efektif dan pemulihan EPS dari spesies mikroalga diatom.
Pernyataan kontribusi kepengarangan CReditT
Bhagya Yatipanthalawa: Konseptualisasi, Metodologi, Investigasi,
Visualisasi, Penulisan - draf asli. Wu Li:Metodologi, Pengawasan,
Penulisan - review & editing. Bukit David RA: Metodologi, Sumber Daya,
Penulisan - ulasan & pengeditan. Zlatan Trifunovic:Metodologi,
Investigasi.mutupandian
Ashokkumar: Konseptualisasi, Sumber Daya, Pengawasan, Penulisan
- review & editing, Akuisisi pendanaan. Peter J. Timbangan: Konsep-
alization, Resources, Supervision, Writing - review & editing, Funding
acquisition. Gregorius JO Martin: Konseptualisasi, Sumberdaya,
Visualisasi, Penulisan - draft asli, Penulisan - review & editing, Supervisi,
Akuisisi pendanaan.
Pernyataan Kepentingan Bersaing
Para penulis menyatakan bahwa mereka tidak mengetahui adanya persaingan
kepentingan keuangan atau hubungan pribadi yang tampaknya dapat
mempengaruhi pekerjaan yang dilaporkan dalam makalah ini.
Ucapan Terima Kasih
Kami berterima kasih kepada Australian Research Council (ARC)
yang telah menyediakan dana melalui Discovery Projects Grant Scheme
(DP170103791) dan University of Melbourne yang telah memberikan
dukungan infrastruktur. B. Yatipanthalawa berterima kasih kepada
University of Melbourne yang telah memberikan Beasiswa Penelitian
Melbourne. Para penulis juga ingin menyoroti afiliasi mereka dengan
Future Food Hallmark Research Initiative dari The University of
Melbourne.
Lampiran A. Bahan pelengkap
Data tambahan untuk artikel ini dapat ditemukan online di
https://doi.org/10.1016/j.jcis.2020.12.056.
75
Jurnal Ilmu Koloid dan Antarmuka 589 (2001) 65–76
Referensi
[1] AK Minhas, P. Hodgson, CJ Barrow, A. Adholeya, Sebuah tinjauan tentang penilaian
kondisi stres untuk produksi simultan lipid mikroalga dan karotenoid, Front.
Mikrobiol. 7 (2016) 546.
[2] NS. Aguirre, A. Bassi, P. Saxena, Tantangan teknik dalam produksi biodiesel dari
mikroalga, Crit. Pdt. Bioteknologi. 33 (3) (2013) 293–308.
[3] T. Dong, EP Knoshaug, PT Pienkos, LM Laurens, Pemulihan lipid dari biomassa
mikroba berminyak basah untuk produksi biofuel: tinjauan kritis, Appl. Energi 177
(2016) 879–895.
[4] MJ Cooney, G. Young, R. Pate, Bio-minyak dari mikroalga fotosintesis: Studi kasus,
Bioresour. teknologi. 102 (1) (2011) 166–177.
[5] GJO Martin, Persyaratan energi untuk ekstraksi pelarut basah lipid dari biomassa
mikroalga, Bioresour. teknologi. 205 (2016) 40–47.
[6] IL Olmstead et al., Analisis kuantitatif lipid mikroalga untuk optimasi produksi
biodiesel dan omega-3, Biotechnol. Bioeng. 110 (8) (2013) 2096– 2104.
[7] BH Yap, SA Crawford, GJ Dumsday, PJ Scales, GJ Martin, Sebuah studi mekanistik
gangguan sel alga dan pengaruhnya pada pemulihan lipid dengan ekstraksi
pelarut, Alga Res. 5 (2014) 112–120.
[8] F.Zhang, L.-H. Cheng, W.-L. Gao, X.-H. Xu, L.Zhang, H.-L. Chen, Mekanisme ekstraksi
lipid dari Botryococcus braunii FACHB 357 dalam bioreaktor bifasik,
J. Bioteknologi. 154 (4) (2011) 281–284.
[9] EM Spiden, BHJ Yap, DRA Hill, SE Kentish, PJ Scales, GJO Martin, Evaluasi kuantitatif
kemudahan pecahnya mikroalga yang menjanjikan secara industri dengan
homogenisasi tekanan tinggi, Bioresour. teknologi. 140 (2013) 165-171.
[10] BHJ Yap, SA Crawford, RR Dagastine, PJ Scales, GJO Martin, Kekurangan nitrogen
mikroalga: efek pada ukuran sel, ketebalan dinding sel, kekuatan sel, dan
ketahanan terhadap kerusakan mekanis, J. Ind. Microbiol. Bioteknologi. 43 (12)
(2016) 1671–1680.
[11] TMM Bernaerts, L. Gheysen, I. Foubert, ME Hendrickx, AM Van Loey, Mengevaluasi
gangguan sel mikroalga pada homogenisasi tekanan ultra tinggi, Alga Res., Article
vol. 42, 2019, Pasal. tidak. 101616.
[12] SQ Hukum, B. Chen, PJ Timbangan, GJ Martin, pemulihan sentrifugal pelarut setelah
ekstraksi biphasic basah lipid dari bubur terkonsentrasi Nannochloropsis sp.
biomassa, Alga Res. 24 (2017) 299–308.
[13] IL Olmstead, SE Kentish, PJ Scales, GJ Martin, Pelarut rendah, metode suhu rendah
untuk mengekstraksi lipid biodiesel dari biomassa mikroalga pekat, Bioresour.
teknologi. 148 (2013) 615–619.
[14] S. Yao, S. Mettu, SQK Law, M. Ashokkumar, GJO Martin, Pengaruh USG intensitas
tinggi pada gangguan sel dan ekstraksi lipid dari bubur kental padat tinggi
Nannochloropsis sp. biomassa, Alga Res. 35 (2018) 341–348. 2018/11/01.
[15] S. Bensalem, F. Lopes, P. Bodénès, D. Pareau, O. Français, B. Le Pioufle, Memahami
mekanisme ekstraksi lipid dari mikroalga Chlamydomonas reinhardtii setelah
permintaan medan listrik dan tekanan mekanis dalam perangkat mikofluida,
Bioresour. teknologi. 257 (2018) 129–136.
[16] M.Kwak, SG Kang, W.-K. Hong, J.-I. Han, YK Chang, Gangguan sel simultan dan
ekstraksi lipid Aurantiochytrium sp basah. KRS101 menggunakan mixer geser
tinggi, Bioprocess Biosyst. Ind. 41 (5) (2018) 671–678.
[17] GB Bielsa et al., Penilaian produksi simultan dari triasilgliserol untuk biodiesel dan
eksopolisakarida sebagai produk bersama yang berharga di Navicula cincta, Algal
Res. 15 (2016) 120-128.
[18] Z. Yi, M. Xu, X. Di, S. Brynjolfsson, W. Fu, Menjelajahi lipid berharga dalam diatom,
Front. Mar. 4 (2017) 17.
[19] CA Popovich, et al., Biofuel alternatif yang tidak konvensional: Penilaian kualitas
biodiesel dan campurannya dari diatom laut Navicula cincta, Algal Res., Article vol.
39, 2019, Pasal. tidak. 101438.
[20] MS Chauton, LM Skolem, LM Olsen, PE Vullum, J. Walmsley, O. Vadstein, Penyerapan
titanium dan penggabungan ke dalam struktur nano silika oleh diatom Pinnularia
sp. (Bacillariophyceae), J. Appl. phycol. 27 (2) (2015) 777–786.
[21] J.-K. Wang, M. Seibert, Prospek untuk produksi komersial diatom, Biotechnol. Bahan
Bakar Nabati 10 (1) (2017) 16.
[22] EM Spiden, PJ Scales, BH Yap, SE Kentish, DR Hill, GJ Martin, Pengaruh pretreatment
asam dan termal pada kerusakan mekanis dua mikroalga yang relevan secara
industri: Chlorella sp. dan Navicula sp, Alga Res. 7 (2015) 5–10.
[23] A. Ramírez Fajardo, L. Esteban Cerdán, A. Robles Medina, FG Acién Fernández,
PA González Moreno, E. Molina Grima, Ekstraksi lipid dari mikroalgaPhaeodactylum
tricornutum, Eur. J. Lipid Sci. teknologi. 109 (2007) 120–126.
[24] M. Cartens, E. Molina Grima, A. Robles Medina, A. Giménez Giménez, J. Ibánez
Gonzalez, asam Eicosapentaenoic (20:5n–3) dari Marine Microalga Phaeodactylum
tricornutum Article, JAOCS, J. Am. Kimia Minyak. Soc. 73 (8) (1996) 1025–1031.
[25] H. Kanda, R. Hoshino, K. Murakami, Q. Zheng, M. Goto, Ekstraksi lipid dari mikroalga
yang dilapisi dengan dinding sel terbiomineralisasi menggunakan dimetil eter cair,
Fuel 262 (2020) 116590.
[26] DA Nogueira, JM da Silveira, .M. Vidal, NT Ribeiro, CA Veiga Burkert, Gangguan Sel
Chaetoceros calcitrans oleh Microwave dan Ultrasound dalam Ekstraksi Lipid, Int. J.
Kimia. Ind. jilid (2018, 2018.).
[27] F. Derwenskus et al., Ekstraksi bertekanan asam lemak tak jenuh dan karotenoid dari
biomassa Chlorella vulgaris dan Phaeodactylum tricornutum basah menggunakan
cairan subkritis Artikel, GCB Bioenergi 11 (1) (2019) 335– 344.
B. Yatipanthalawa, W. Li, David RA Hill dkk.
[28] D. Vandamme, L. Gheysen, K. Muylaert, I. Foubert, Dampak metode pemanenan
pada kandungan lipid total dan efisiensi ekstraksi untuk Artikel Phaeodactylum
tricornutum, Sep. Purif. teknologi. 194 (2018) 362–367.
[29] B. Gilbert-López, A. Barranco, M. Herrero, A. Cifuentes, E. Ibáñez, Pengembangan
proses hijau baru untuk pemulihan bioaktif dari Artikel Phaeodactylum tricornutum,
Food Res. Int. 99 (2017) 1056–1065.
[30] I. Horst, BM Parker, JS Dennis, CJ Howe, SA Scott, AG Smith, Pengobatan sel
Phaeodactylum tricornutum dengan papain memfasilitasi ekstraksi lipid, J.
Biotechnol. 162 (1) (2012) 40–49.
[31] M. Kwak, S. Roh, A. Yang, H. Lee, YK Chang, Ekstraksi pelarut berbantuan geser tinggi
lipid dari biomassa basah Aurantiochytrium sp. KRS101, Sep. Purif. teknologi. (2019)
.
[32] W. Li, TS Leong, M. Ashokkumar, GJ Martin, Sebuah studi tentang efektivitas dan
efisiensi energi emulsifikasi ultrasonik, PCCP 20 (1) (2018) 86–96.
[33] K. Vilkhu, R. Mawson, L. Simons, D. Bates, Aplikasi dan peluang untuk ekstraksi
berbantuan ultrasound dalam industri makanan—Sebuah tinjauan, Inovatif Food
Sci. muncul. teknologi. 9 (2) (2008) 161–169.
[34] SQ Law, S. Mettu, M. Ashokkumar, PJ Scales, GJ Martin, Sifat pengemulsi sel
mikroalga yang pecah: Hambatan untuk ekstraksi lipid atau biosurfaktan yang
menjanjikan?, Permukaan Koloid B: Biointerfaces, 2018.
[35] N. Poddar, R. Sen, GJ Martin, Kelimpahan dan keragaman bakteri dalam kultur
Microchloropsis salina (sebelumnya Nannochloropsis salina) dalam menanggapi
adanya amonium, nitrat dan gliserol, J. Appl. phycol. 32 (2) (2020) 839–850.
[36] BHJ Yap, GJO Martin, PJ Scales, Manipulasi reologi dari flocculated alga slurries untuk
mencapai pemrosesan padatan tinggi, Alga Res. 14 (2016) 1–8.
[37] SJ Nixon, RI Webb, M. Floetenmeyer, N. Schieber, HP Lo, RG Parton, Sebuah metode
tunggal untuk cryofixation dan cahaya korelatif, mikroskop elektron dan tomografi
embrio ikan zebra, Traffic 10 (2) (2009) 131–136.
[38] KL McDonald, RI Webb, Substitusi beku dalam 3 jam atau kurang, J. Microsc. 243
(3) (2011) 227–233.
[39] P. Walther, A. Ziegler, Substitusi beku sampel beku bertekanan tinggi: visibilitas
membran biologis ditingkatkan ketika media substitusi mengandung air, J. Microsc.
208 (1) (2002) 3–10.
[40] C. Beverung, CJ Radke, HW Blanch, Adsorpsi protein pada antarmuka minyak/air:
karakterisasi kinetika adsorpsi dengan pengukuran tegangan antarmuka dinamis,
Biophys. Kimia 81 (1) (1999) 59–80.
76
Jurnal Ilmu Koloid dan Antarmuka 589 (2001) 65–76
[41] GJ Underwood, DM Paterson, Pentingnya produksi karbohidrat ekstraseluler oleh
diatom epipelik laut, Adv. Bot. Res. 40 (2003) 183–240.
[42] G. Rosengarten, J. Herringer, Interaksi Diatom dengan Lingkungan Fluidanya, dalam:
Diatom Nanotechnology, 2017, hlm. 14-54.
[43] S. Krishnan et al., Perbandingan sifat pelepasan pengotoran dari permukaan
kopolimer blok PEGylated hidrofobik dan hidrofilik terfluorinasi: kekuatan
perlekatan diatom Navicula dan alga hijau Ulva, Biomacromolekul 7
(5) (2006) 1449–1462.
[44] GL Klein et al., Marine diatom Navicula jeffreyi dari komposisi biokimia dan sifat
fisika-kimia permukaan untuk memahami langkah pertama pembentukan biofilm
bentik, J. Adhes. Sci. teknologi. 28 (17) (2014/09/02 2014.) 1739–1753.
[45] S. Reddy, H. Fogler, Stabilitas emulsi emulsi yang terbentuk secara akustik, J. kimia
fisik 84 (12) (1980) 1570–1575.
[46] W. Li, TSH Leong, M. Ashokkumar, GJO Martin, Sebuah studi tentang efektivitas dan
efisiensi energi emulsifikasi ultrasonik, Phys. Kimia Kimia Fisika, 2018, vol. di tekan.
[47] I. Doghri, J. Lavaud, A. Dufour, A. Bazire, I. Lanneluc, S. Sablé, Eksopolisakarida terikat
sel dari kultur axenic dari lumpur intertidal Navicula phyllepta diatom
mempengaruhi pembentukan biofilm oleh bakteri bentik 2017/02/01 , J.Apl. phycol.
29 (1) (2017) 165–177.
[48] KD Hoagland, JR Rosowski, MR Gretz, SC Roemer, Zat polimer ekstraseluler diatom:
fungsi, struktur halus, kimia, dan fisiologi, J. Phycol. 29 (5) (1993) 537–566.
[49] I. Mnif, D. Ghribi, Bioemulsifiers berat molekul tinggi, sifat utama dan aplikasi
lingkungan dan biomedis potensial, Dunia J. Microbiol. Bioteknologi. 31 (5) (2015)
691–706.
[50] Y. Wang, Y. Chen, C. Lavin, MR Gretz, perakitan matriks ekstraseluler di diatom
(Bacillariophyceae). iv. ultrastruktur Achnanthes longipes dan Cymbella cistula
sebagaimana diungkapkan oleh substitusi pembekuan/pembekuan bertekanan
tinggi dan mikroskop elektron pemindaian emisi medan krio, J. Phycol. 36 (2) (2000)
367– 378.
[51] G. Lim, J. Lim, A. Ahmad, D. Chan, Pengaruh morfologi frustule diatom pada perilaku
adsorpsi protein, J. Appl. phycol. 27 (2) (2015) 763–775.
[52] M. Hejazi, D. Kleinegris, R. Wijffels, Mekanisme ekstraksi B-karoten dari mikroalga
Dunaliella salina dalam bioreaktor dua fase, Biotechnol. Bioeng. 88 (5) (2004) 593–
600.