SKRINGING SENYAWA FLAVONOID, POLIFENOL DAN ALKALOID

ALAT

1. Timbangan analitik 11. Batang pengaduk

2. Bejana KLT 12. Pipet tetes

3. Lampu UV 13. Hot plate

4. Gelas ukur 10 mL 14. Spray botol kaca KLT

5. Tabung reaksi + rak 15. Penggaris dan pensil

6. Aluminium foil 16. Pinset

7. Cawan porselen 17. Batang pengaduk

8. Spatel stainless steel 18. Corong

9. Kertas saring 19. Waterbath

10. Pipa kapiler 2 μL 20. Indicator pH universal

BAHAN
1. 50 mg Ekstrak etanol daun jambu biji 7. Etanol,
(Psidium guajava) 8. Kloroform
2. 0,3 gram Ekstrak etanol buah lada hitam 9. Aseton,
(Piper nigrum) 10. Etil asetat,
3. Sitroborat 11. n-Heksana,
4. FeCl3 12. HCL,
5. Dragendorff, 13. NH4OH,
6. Pelat KLT silica gel 60 F254, 14. Asam formiat

PROSEDUR KERJA
Sebelum memulai kerja di laboratorium, hal yang perlu dilakukan yaitu :
1. Memakai APD, seperti jas lab, handgloves, dan masker
2. Bagi yang berkerudung, kerudung dimasukkan ke dalam jas lab. Bagi perempuan berambut panjang,
rambut dikuncir.
3. Menyiapkan alat dan bahan
4. Memastikan alat yang akan digunakan bersih
5. Menyiapkan ekstrak yang akan ditimbang
6. Menyiapkan timbangan (memastikan waterpass tepat di tengah lingkaran, membersihkan, dan menara
cawan porselen)
Skrining Senyawa Flavonoid

Menimbang 50 mg ekstrak Memasukkan Mengukur 2 mL Masukkan ke

daun jambu biji dengan ekstrak ke n-Heksana dalam tabung
cawan porselen yang sudah dalam tabung dengan gelas ukur reaksi yang berisi
ditara di timbangan analitik reaksi 10 mL ekstrak

Ulangi penambahan Buang n-Heksana

dan pengocokan pada tempat Kocok hingga n- Tutup tabung
sampai n-Heksana pembungan (cawan Heksana reaksi dengan
yang ditambahkan porselin) berwarna aluminium foil
tidak berwarna

Masukkan ke Pindahkan sampel ke

Mengukur 2 mL Aduk menggunakan
tabung reaksi dalam cawan
etanol 96% dengan spatel stainless steel
berisi ekstrak porselen lalu totolkan
gelas ukur 10 mL sampai ekstrak larut
daun jambu biji pada plat KLT

Menotolkan sampel Jenuhkan dengan

Menyiapkan plat KLT Menyiapkan bejana
pada plat KLT cara melapisi
2 x 10 cm (buat garis KLT dengan fase gerak
dengan pipa kapiler dinding bejana
sebagaibatas bawah Kloroform-Aseton
2 L (totolkan 2 x 2 dengan kertas saring
1,5 cm dan bartas atas -Asam Formiat (6:6:1)
L) (kertas saring
0,5 cm dengan pensil) sebanyak 10 mL
terbasahi semua)

Memasukkan pelat KLT pada

Mengeluarkan pelat KLT menggunakan
bejana KLT (poin O) dengan Melakukan eluasi
pinset dan menguapkan sisa fase gerak
menggunakan pinset, tutup hingga batas atas
dengan cara diangin-anginkan
bejana KLT pelat

Menyemprot pelat KLT

Panaskan pelat di atas hot plate (pelat KLT
dengan pereaksi sitroborat
tidak menyentuh langsung hot plate) selama Memasukkan pereaksi
di dalam lemari asam
2-3 menit hingga terlihat noda warna kuning sitroborat ke dalam spray
±2-3 menit hingga terlihat
pelat KLT tidak menyentuh langsung hot botol kaca KLT
noda warna kuning
plate) selama

Pelat KLT diamati di
bawah lampu UV 366
nm
Dokumentasikan hasil
Adanya flavonoid ditunjukkan
KLT dengan foto dan
dengan munculnya noda berwarna
hitung nilai Rf senyawa
kuning intensif pada pelat KLT.
flavonoid.
Skrining Senyawa Polifenol

Menimbang 50 mg ekstrak Memasukkan Mengukur 2 mL Masukkan ke

daun jambu biji dengan ekstrak ke n-Heksana dalam tabung
cawan porselen yang sudah dalam tabung dengan gelas ukur reaksi yang berisi
ditara di timbangan analitik reaksi 10 mL ekstrak

Ulangi penambahan Buang n-Heksana

dan pengocokan pada tempat Kocok hingga n- Tutup tabung
sampai n-Heksana pembuangan (cawan Heksana reaksi dengan
yang ditambahkan porselin) berwarna aluminium foil
tidak berwarna

Masukkan ke Pindahkan sampel ke

Mengukur 2 mL Aduk menggunakan
tabung reaksi dalam cawan
etanol 96% dengan spatel stainless steel
berisi ekstrak porselen lalu totolkan
gelas ukur 10 mL sampai ekstrak larut
daun jambu biji pada plat KLT

Menotolkan sampel Jenuhkan dengan Menyiapkan bejana

Menyiapkan plat KLT
pada plat KLT cara melapisi KLT dengan fase
2 x 10 cm (buat garis
dengan pipa kapiler dinding bejana gerak Kloroform-Etil
sebagai batas bawah
2 L (totolkan 2 x 2 dengan kertas saring Asetat-Asam Formiat
1,5 cm dan bartas atas
L) (kertas saring (0,5 : 9 : 0,5) sebanyak
0,5 cm dengan pensil)
terbasahi semua) 10 mL

Memasukkan pelat KLT pada

bejana KLT (poin A) dengan
menggunakan pinset, tutup
bejana KLT
Mengeluarkan pelat KLT menggunakan
Melakukan eluasi
pinset dan menguapkan sisa fase gerak
hingga batas atas
dengan cara diangin-anginkan
pelat

Menyemprot pelat KLT

dengan pereaksi FeCl3 di
Adanya Polifenol ditunjukkan Memasukkan pereaksi
dalam lemari asam FeCl3 ke dalam spray botol
dengan munculnya noda
±2-3 menit hingga terlihat
berwarna hitam pada pelat KLT. kaca KLT
noda warna kuning

Dokumentasikan hasil KLT dengan

foto dan hitung nilai Rf senyawa
Polifenol.
Skrining Senyawa Flavonoid
Mengukur 2 mL Masukkan ke
Menimbang 0,3 gram ekstrak
etanol 96% dalam cawan Aduk sampai larut
etanol buah lada hitam dengan
dengan gelas porselin yang menggunakan
cawan porselen yang sudah
ukur 10 mL berisi ekstrak batang pengaduk
ditara di timbangan analitik

Keluarkan cawan porselen dari

penangas air menggunakan Panaskan di atas Mengukur 5 mL HCl
Masukkan 5 mL
pinset dan didiamkan selama penangas air selama 2N dengan
beberapa menit hingga sampel 2-3 menit, sambil
HCl 2N ke dalam
menggunakan gelas
mencapai suhu ruang diaduk sesekali. cawan porselen ukur 10 mL

Saring dengan corong

Menimbang NaCl sebanyak 0,3 Setelah sampel Aduk sampai
yang diberi kertas saring,
gram pada timbangan analitik dingin tambahkan homogen tampung filtrat pada
dengan alas kertas perkamen 0,3 gram NaCl menggunakan spatel tabung reaksi.
stainless steel

Tambahkan NH4OH 28%

Tambakan ke dalam
sampai larutan menjadi basa, Mengukur 5 mL HCl
filtrat, aduk ad
aduk ad homogen dengan batang 2N menggunakan
homogen dengan
pengaduk (cek menggunakan gelas ukur 10 mL
batang pengaduk
indicator universal)

Melakukan ekstraksi Kocok lalu diamkan Ambil fase

Mengukur 5 mL
dengan 5 mL kloroform beberapa menit hingga kloroform
kloroform bebas
bebas air dalam tabung terbentuk 2 fase (fase dengan pipet dan
air menggunakan
reaksi, tutup tabung reaksi kloroform berada dibagian kumpulkan pada
gelas ukur 10 mL
dengan aluminum foil bawah, fase air di atas) cawan porselen

Menyiapkan plat KLT 2 x Jenuhkan dengan cara Menyiapkan bejana

Uapkan diatas
10 cm (buat garis sebagai melapisi dinding KLT dengan fase
penangas air
batas bawah 1,5 cm dan bejana dengan kertas gerak Kloroform –
hingga pelarut
bartas atas 0,5 cm dengan saring (kertas saring Etil Asetat (1:1)
tersisa 0,5 mL
pensil) terbasahi semua) sebanyak 10 mL

Mengeluarkan pelat KLT

Menotolkan fse
kloroform pada plat KLT
dengan pipa kapiler 2 L
(totolkan 2 x 2 L)
Memasukkan pelat KLT pada
Melakukan menggunakan pinset dan
bejana KLT (poin Q) dengan
eluasi hingga menguapkan sisa fase
menggunakan pinset, tutup
bejana KLT
batas atas pelat gerak dengan cara diangin-
KLT anginkan

Menyemprot pelat KLT dengan

Adanya alkaloid ditunjukkan dengan pereaksi Dragendorff di dalam
Memasukkan pereaksi
munculnya noda berwarna jingga pada lemari asam
Dragendorff ke dalam
pelat KLT. ±2-3 menit hingga terlihat noda
spray botol kaca KLT
warna kuning

Dokumentasikan hasil KLT dengan foto dan hitung nilai Rf senyawa alkaloid.
HASIL PRAKTIKUM DAN ANALISIS

Sampel Jenis Skrining Hasil Analisis

Ekstrak etanol 96% daun Flavonoid Penampak noda : Sitroborat
Noda
jambu biji

Jarak noda :

Jarak eluen :

Rf

Ekstrak etanol 96% daun Polifenol Penampak noda : FeCl3

Noda
jambu biji

Jarak noda

Jarak eluen

Rf

Ekstrak etanol 96% buah Alkaloid Penampak noda : Dragendorff

Noda
lada hitam

Jarak noda

Jarak eluen

Rf