ANALISIS BAHAN AKTIF BENTUK CAIR DENGAN KCKT
 Perangkat KCKT
 Kolom (pemisahan senyawa)  Hasil
pemisahan dideteksi oleh detector 
interface data station
Keunggulan KCKT :
 Dapat digunakan dalam lingkup yang
sangat luas  (Detector blind (buta) 
tidak tau apa yang dideteksi dan
Detector non blind  bisa mendeteksi
sekaligus analisis)
 Sensitivitas, selektivitas, akurasi dan
presisi baik
 Dapat untuk analisis senyawa yag
mudah menguap dan tidak menguap
 bekerja pada suhu kamar
 Dapat digunakan untuk single maupun
multi komponen
 Penggunaan sangat luas 
kefarmasian, kedokteran, pangan dan
gizi
Kekurangan/kerugian KCKT
 Pemakaiannya mahal  menggunakan
eluen yang memiliki spesifikasi yang
sangat tinggi  eluen perlu yang
sangat murni
 KCKT dominan dalam penetapan kadar
bahan baku dan/atau sediaan farmasi
 FI V 2014
 KCKT dalam FI V/2014
 Uraian lengkap kckt  lampiran no.
931
 Digunakan bahan pembanding
farmakope Indonesia (BPFI)
 Larutan resolusi  bagian dari validasi
selektivitas metode
 Penetapan kadar di FI hanya untuk
senyawa tunggal dan menggunakan
kalibrasi satu titik  tidak ada kurva
baku
 Mekanisme pemisahan analit pada
KCKT
 Pemisahan analit disebabkan oleh
perbedaan koefisien distribusi (Kd)
masing-masing analit dalam fase gerak
dan fase diam yg digunakan
 Harga Kd = Cd/Cg, makin besar harga
Cd maka Kd akan semakin besar
 Harga Kd berbanding lurus dg harga
waktu retensi. Makin besar Kd  wr
main besar. Cd (konsentrasi analit
dalam fase diam/kelarutan/afinitas)
 Kromatogram  hubungan waktu dg
respon detector (peak area)
 Prinsip pemilihan kolom dan eluen 
prinsip like-dislike
 Eluen non-polar harga mahal
 Eluen kckt diusahakan polar  analit
polar harus dirubah menjadi nonpolar
 Peningkatan kinerja KCKT  pasangan
ion
 Kolom nonpolar ODS  adrenalin polar
dibantu dengan NAO membentuk
ikatan elektrostatik
 Peningkatan kinerja KCKT  pasangan
ion asam askorbat dg setrimid
 Peningkatan KCKT dg derivatitasi ->
merubah senyawa spy bisa applicable
untuk kckt  neomisin dibantu diberi
gugus kromofor  menurunkan
polaritas
Kegunaan derivatisasi :
 meningkatkan respon detector
 meningkatkan resolusi
 meningkatkan efektivitas proses
ekstraksi
 membedakan respon detector
eluen/fase gerak, syarat
 murni (for HPLC only)
 inert
 sesuai detector yg dipkai
 viskositas rendah
 melarutkan seluruh analit
 memungkinkan mengisolasi kembali
analit
 relative murah
 isokratik  selama proses pemisahan,
menggunakan satu komposisi eluen
sama
 gradien  selama proses pemisahan
analit menggunakan dua macam eluen
dg komposisi secara bertahap berubah
keuntungan gradien elution
 dapat memisahkan sampel kompleks
 resolusi dapat ditingkatkan
 meningkatkan efisiensi kolom
 metode terbaik untuk membersihkan
kolom
tahapan yang dilakukan :
 mengatur initial set
 Keuntungan  mengurangi keslahan-
kesalahan pd ekstraksi, pemyuntikan
secraa manual
 Cara : larutan standard an larutan
sampel ditambahkan larutan standar
internal sejumlah tertentu
 Syarat internal standar : punya sifat
fisika dan kimia sama, unya respon
factor hampir sama dg anality g akan
ditentukan, zat tidak boleh ada dalam
sampel, zat murni dan stabil, Rs cuukup
baik
 0,759/0,716 =5,35
 Metode standar eksternal
 Unspike  perpotongan garis regresi
dg spike

detector KCKT
 UV, Flourenscense, electrochemical,
refractive, multipurpose  blind
detector  tidak bisa deteksi senyawa
apa
 Detector UV  paling umum dipakai
karena sederhana, data mudah diolah,
biaya operasional murah, mudah
didapat
 Perlu mengoptimalkan panjang
gelombang pd analisis multikomponen
 Perlu mencari kondisi optimal
 Tahapan analisis KCKT
 Menyiapkan zat baku  timbang teliti
 larutkan (baku induk) dan encerkan
 larutan baku kerja  injeksi
 Sampel uji  timbang teliti  larutkan
dan encerkan  injeksi KCKT
 Larutan encer  langsung di piper
 Larutan kental  tuang ke sendok
pemakaian  timbang lalu dilarutkan
dan diencerkan
 Metode normalisasi area  kerugian
jika 1 peak tidak muncul atau tambah
menyebabkan konsentrasi berubah 
reprodusibilitas rendah
 Metode standar internal 
mempunyai struktur kimia sesuai shg
kelarutan sama