HPLC

(High Performance Liquid

Chromatography)
Kelompok 1
Nurindah Zulfiana Arham D1B121299
Rezky Yuliana Rauf D1B121296
Sri Wahyuni D1B121328
A. Nuraini Bhr D1B121292
Nadhifah Indah Suryani D1B121335
Muhammad Haidir Setiawan D1B121252
Pokok Pembahasan
Bagian-bagian dan fungsi
Definisi HPLC alat
Prinsip kerja Gambar alat
Kegunaan Kelebihan dan kekurangan
 01
Definisi HPLC
(High Performance
Liquid
Chromatography)
Apa itu HPLC?
Kromatografi cair kinerja tinggi (HPLC) adalah teknik
kromatografi yang digunakan untuk memisahkan
campuran senyawa dan banyak digunakan dalam
bidang kimia, biokimia, serta industri. Tujuaan utama
penggunaan HPLC adalah untuk mengidentifikasi,
mengukur dan memurnikan komponen individu dari
campuran.
 02
Prinsip kerja HPLC
(High Performance
Liquid
Chromatography)
 Bagaimanakah
prinsip kerja
Pada prinsip kerja HPLC yaitu
pemisahan analit-analit berdasarkan
kepolarannya, alatnya terdiri dari

HPLC?
kolom (sebagai fasa diam) dan larutan
tertentu sebagai fasa geraknya. Yang
paling membedakan HPLC dengan
kromatografi lainnya adalah pada
HPLC digunakan tekanan tinggi untuk
mendorong fasa gerak. Campuran
analit akan terpisah berdasarkan
kepolarannya dan kecepatannya untuk
sampai kedektetor (waktu retensinya)
akan berbeda, hal ini akan teramati
pada spectrum yang puncak-
puncaknya terpisah.
 03
Kegunaan HPLC
(High Performance
Liquid
Chromatography)
Apakah Kegunaan HPLC ?

01 Untuk memisahkan
beberapa senyawa 02 Digunakan untuk
menentukan berat
sekaligus karena molekul polimer dan
setiapa senyawa masalah-masalah
mempunyai afinitas biokimia.
selektif antara fase
diam dan fase gerak
tertentu
Lanjutan .......
03 Zat- zat dengan
kepolaran berbeda yaitu 04
antara sedikit polar
sampai polar dapat
dipisahkan dengan HPLC
berdasarkan partisi cair-
cair
Asam-asam nukleat
dapat dipisahkan
dengan kolom penukar
ion yang dikombinasikan
dengan kolom butiran
berlapis zat berpori.
Lanjutan......
05 Dapat memisahkan vitamin- vitamin yang larut dalam air

06 HPLC cocok digunakan untuk memisahkan minyak atsiri. Minyak atsiri

terdiri atas campuran yang sangat rumit dan oleh karena itu HPLC
berguna untuk memisahkan campuran rumit menjadi golongan-
golongan senyawa atau memisahkan golongan senyawa menjadi
komponen-komponennya

07 HPLC digunakan untuk memisahkan golongan minyak,

misalnya terpenoid tinggi, segala senyawa jenis fenol, alkaloid,
lipid dan gula
 04
Bagian-bagian &
fungsi alat HPLC
(High Performance
Liquid
Chromatography)
1. Wadah fase gerak

Wadah fase gerak terbuat dari bahan

yang inert terhadap fase gerak. Bahan
yang umum digunakan adalah gelas dan
baja anti karat. Daya tampung tandon
harus lebih besar dari 500 ml sehingga
dapat digunakan selama 4 jam dengan
kecepatan alir yang umumnya 1-2
ml/menit
2. Pompa
Pompa berfungsi untuk memompa baik eluen
dan sampel yang disuntikan melalui injektor.
a. Syarat :
- Tekanan hingga 6000 psi (400 atm)
- tahan korosi & tahan terhadap fasa gerak
- Control laju alir yang akurat , hingga 20 m.
L/menit
- Dapat menyalurkan fasa gerak pada
rentang kecepatan dan tekanan lebar -
Dapat digunakan untuk melakukan elusi
gradien
 3. Injektor
Injector (Pemasukkan cuplikan) tempat memasukkan cuplikan
kedalam pangkal kolom (kepala kolom), diusahakan agar sedikit
mungkin terjadi gangguan pada kemasan kolom.
a. Syarat :
tekanan tidak turun
b. Teknik :
- syringe/ septum : disuntikkan melalui septum, tahan hingga
tekanan 1500 psi/ 70 atm, tidak tahan dengan semua pelarut
kromatografi cair, partikel kecil dari septum yang terkoyak
(akibat jarum injector) dapat menyebabkan penyumbatan.
- stop-flow : aliran pelarut dihentikan sementara. Teknik ini
digunakan karena difusi di dalam cairan kecil.
- loop vaive (kran cuplikan) : cara automatis (dengan
menggunakan adaptor yang sesuai, volume yang lebih kecil
dapat diinjeksikan secara manual).
4. Kolom
Kolom Keberhasilan atau kegagalan analisis bergantung pada
pilihan kolom dan kondisi kerja yang tepat. Kolom merupakan
bagian yang sangat penting dari disebut cartridge. Biasanya
terbuat dari stainless steel.
a. Fungsi :
- Menyaring kotoran
- Menjenuhkan fasa diam
b. Jenis :
- Kolom analitik : d= 2 -6 mm. Panjang kolom tergantung pada
jenis material pengisi kolom
- Kolom pengaman/guard kolom / preparatif : d= >6 mm, p =25 -
100 cm , dpt digunakan pada temperatur lebih tinggi dari
temperatur kamar.
5. Detektor
Detector Digunakan untuk mendeteksi
adanya komponen sampel (cuplikan) di
dalam eluen kolom (analisis kualitatif) dan
menghitung jumlahnya (analisis kuantitatif).
Syarat :
- sangat peka (sensitifitasnya tinggi)
- tidak banyak berderau (noise)
- memberi respons untuk semua tipe
senyawa
- tidak merusak cuplikan
 05
Kelebihan HPLC
(High Performance
Liquid
Chromatography)
Apa Kelebihan HPLC ?

Kerja lebih mudah Volume sampel kecil Mampu memisahkan

dengan automasi (dapat menganalisis molekul-molekul dari
dalam prosedur sampel yang kecil suatu campuran
analisis dan kuantitasnya) dengan daya pisah
pengolahan data
tinggi
Lanjutan....

Merupakan metode Dapat digunakan Pilihan fase gerak

analitis: cepat, peka, untuk sampel dan fase diamnya
akurat, tepat, organik dan luas.
reproducible, anorganik, bersifat
preparatif volatile dan non
volatil, stabil dan
tidak stabil secara
termal
Lanjutan....

Dapat dihindari Dapat digunakan Kolom dapat

terjadinya bermacan-macam digunakan kembali
dekomposisi atau detektor dengan
kerusakan bahan kepekaan yang
analisis tinggi
Lanjutan.....

aktu analisa cukup HPLC dapat Teknik HPLC dapat

singkat digunakan untuk dilakukan pada
isolasi zat yang suhu kamar
tidak mudah
menguap dan zat
yang tidak stabil
 06
Kekurangan HPLC
(High Performance
Liquid
Chromatography)
Apa Kekurangan HPLC ?

Larutan harus dicari Harus mengetahui Hanya bisa

fase diamnya kombinasi yang digunakan untuk
terlebih dahulu optimum antara asam organik
pelarut, analit dan
gradient elusi
Lanjutan......
Pada kolom dengan
Harganya mahal diameter rata-rata Sering ada
partikel fase diam larutan standar
sehingga
dengan ukuran 3 yang tertinggal
penggunaannya mikrometer dan 5
dalam lingkup mikrometer sela-sela
di injektor
penelitian yang partikel lebih mudah
terbatas tertutup oleh kotoran,
jadi harus seringkali
dicuci dan kemurnian
larutan harus dijaga
Thank You
CREDITS: This presentation template was
created by Slidesgo, including icons by
Flaticon, infographics & images by Freepik