HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMOTOGRAFI

PENGERTIAN HPLC

Kromotografi cair tenaga tinggi {KCKT} atau bisa disebut high performance liquid cromotografi
merupakan metode tidak dekstruktif dan dapat digunakan baik untuk analisis kualitatif dan
kuantitatif.

PRINSIP KERJA HPLC{HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMOTOGHRAPHY}

Prinsip kerja HPLC pada prinsipnya pemisahan analit-analit berdasarkan kepolarannya alatnya
terdiri dari kolom {sebagai fase diam) dan larutan tertentu sebagai fase geraknya.yang paling
membedakan HPLC dengan chromotography lainnya adalah pada HPLC digunakan tekanan tinggi
untuk mendorong fasa gerak,campuran analit akan terpisah berdasarkan kepolarannya,dan
kecepatannya untuk sampai ke detektor{ waktu retensinya} akan berbeda,hal ini akan teramati pada
spectrum yang puncak puncaknya terpisah.

1.Kromotografi adsorbsi

Prinsip kromotografi adsorbsi telah diketahui sebagaimana dalam kromotografi telah diketahui
sebagaimana dalam kromotografi lapis tipis.pemisahan kromotografi adsorbsi biasanya
menggunakan fase normal dengan menggunakan fase diam, silika gel,alumina meskipun demikian
segitar 90% kromotografi ini memakai silikan sebagai fase diamnya. Pada silika dan alumina
terdapat gugus hidroksil yan g akan berinteraksi dengan solut ,gugus silanol pada silika mempunyai
reaktifitas yang berbeda karnanya solut dapat terikat secara kuat sehingga dapat menyebabbkan
puncak yang berekor.

2.kromotografi fase terikat ( kromotografi partisi)

Kebanyakan fase diam kromotografi ini adalah silikan yang dimodifikasi secara kimiawi atau fase
terikat ,sejauh ini yang digunakan untuk memodifikasi silikan adalah hidrokarbon hidrokarbon
nonpolar,seperti dengan oktadesilsilana,oktasilana,atau dengan fenil fase diam yang paling populer
digunakan adalah oktadesilsilina, (ODS atau C18) dan kebanyakan pemisahannya adalah fase
terbalik

3.kromotografi penukaran ion

HPLC penukaran ion menggunakan fase diam yanga dapat menukar kation dan anion dengan
suatu fase gerak,ada banyak penukaran ion yang beredar di pasaran,meskipun demikian yang
paling luas penggunaannya adalah polistiren resin.kebanyakan pemisahan kromotografi ion
dilakukan dengan menggunakan media air karna sifat ionisasinya,
4.kromotografi pasangan ion

Kromotografi pasangan ion digunakan untuk pemisahan sampel sampel ion dan mengatasi masalah
masalah yang melekat pada metode penukaran ion.sampel ionik ditutup dengan ion yang
mempunyai muatan yang berlawanan.

5.kromotografi eksklusi ukuran

Kromotografi ini disebut juga dengan kromotografi permiasi gel dapat digunakan untuk
memisahkan atau menganalisis senyawa dengan berat molekul>2000 dalton,fase dian yang
digunakan dapat berupa silika atau polimer yang bersifat porus sehingga solut dapat melewati
porus (lewat diantara partikel) atau berdifusi lewat fase diam.

6.kromotografi afinitas

Dalam kasus ini pemisahan terjadi karna interaksi interaksi biokimia yang sangat spesifik fase diam
mengandung gugus gugus molekul yang hanya dapat menyerap sampel jika ada kondisi kondisi
yang terkaid dengan muatan dan sterik tertentu pada sampel yang sesuai ( sebagai mana dalam
interaksi antara antigen dan antibodi) kromatografi jenis ini dapat digunakan untuk mengisolasi
protein (enzim )dari campuran yang sangat kompleks

REFERENSI Materi-kimia-lengkap.blogspot.co.id/2014/07/kromatografi –cair-kinerja –tinggi-

kckt-.html?m1

KELEBIHAN DAN KEKURANGAN DALAM PENGGUNAAN ALAT HPLC

KELEBIHAN

 Mampu memisahkan molekul molekul dari suatu campuran dengan daya memisah yang
tinggi
 Dapat dihindari terjadinya decomposisi/kerusakan bahan analisis.
 Dapat digunakan macam macam detektor dengan kepekaan yang tinggi
 Kolom dapat digunakan kembali
 Waktu analisa sangat singkat
 HPLC dapat digunakan untuk isolasi zat yang tidak mudah menguap dan zat yang tidak
stabil
 Dapat menganalisis sampel kecil kuantitasnya
 Tehnik HPLC dapat dilakukan pada suhu kamar.
KELEMAHAN DARI ALAT HPLC

 Harga sebuah alat HPLC cukup mahal

 Sering ada larutan standar yang tertinggal di injektor
 Pada kolom dengan diameter rata rata partikel fase diam dengan ukuran 5 dan 3 mikro
meter sela sela partikel lebih mudah tertutup oleh kotoran ,jadi harus sering kali dicuci
dan kemurniaan larutan harus dijaga

REFERENSI Meyer ,F,R.,2004.,Practical High-performance-liquid chromatography,4th

Ed.,john wiley & sons ,new york

APLIKASI/PENERAPAN HPLC DALAM KEHIDUPAN

1.HPLC dengan prinsip kromatografi banyak digunakan pada industri farmasi dan
peptisida
2.zat zat dengan kepolaean yang berbeda, yaitu antara sedikit polar samapi polar dapat
dipisahkan dengan HPLC berdasarkan partisi cair-cair
3.asam asam nukleat dapat dipisahkan dengan kolom penukaran ion yang
dikombinasikan dengan kolom butiran berlapis zat yang berpori
4.morfin heroin dan semacamnya telah dapat dipisahkan dengan rezin zipax-sax
5.dapat memisahkan vitamin vitamin yang larut dalam air
6.digunakan untuk menentukan berat molekul polimer dan masalah masalah biokimia
7.kromatografi cairan kinerja tinggi(KCKT/HPLC) digunakan untuk memisahkan golongan
golongan takatsiri,misalnya terpenoid tinggi, segalah jenis senyawa fenol,alkoloid,lipid
dan gula
8.HPLC cocok digunakan untuk memisahkan minyak atsiri,minyak atsiri terdiri atas
campuran yang sangat rumit menjadi golongan golongan senyawa atau memisahkan
golongan senyawa menjadi komponen komponennya

REFERENSI Ahmad,M.,dan suherman .1991.kromatografi cair kinerja.,tinggi.Airlangga

univerciti press surabaya/romatografi-cair –kinerja tinggi-hplc.html.