HPLC

(High Performance
Liquid
Chromatography)
Kelompok 1
Nurindah Zulfiana Arham D1B121299
Rezky Yuliana Rauf D1B121296
Sri Wahyuni D1B121328
A. Nuraini Bhr D1B121292
Nadhifah Indah Suryani D1B121335
Muhammad Haidir Setiawan
D1B121252
Pokok Pembahasan
Bagian-bagian dan fungsi alat
Definisi HPLC
Gambar alat
Prinsip kerja
Kelebihan dan kekurangan
Kegunaan
 0
1
Definisi HPLC
(High Performance
Liquid
Chromatography)
Apa itu HPLC?
Kromatografi cair kinerja tinggi (HPLC) adalah teknik
kromatografi yang digunakan untuk memisahkan campuran
senyawa dan banyak digunakan dalam bidang kimia,
biokimia, serta industri. Tujuaan utama penggunaan HPLC
adalah untuk mengidentifikasi, mengukur dan memurnikan
komponen individu dari campuran.
 0
2
Prinsip kerja HPLC
(High Performance
Liquid
Chromatography)
Pada prinsip kerja HPLC yaitu pemisahan
Bagaimanaka
h prinsip
analit-analit berdasarkan kepolarannya,
alatnya terdiri dari kolom (sebagai fasa
diam) dan larutan tertentu sebagai fasa

kerja HPLC?
geraknya. Yang paling membedakan HPLC
dengan kromatografi lainnya adalah pada
HPLC digunakan tekanan tinggi untuk
mendorong fasa gerak. Campuran analit
akan terpisah berdasarkan kepolarannya
dan kecepatannya untuk sampai
kedektetor (waktu retensinya) akan
berbeda, hal ini akan teramati pada
spectrum yang puncak-puncaknya
terpisah.
 0
3
Kegunaan HPLC
(High Performance
Liquid
Chromatography)
Apakah Kegunaan
HPLC ?
0 Untuk memisahkan 0 Digunakan untuk

1 beberapa senyawa
sekaligus karena setiapa
senyawa mempunyai
2 menentukan berat molekul
polimer dan masalah-
masalah biokimia.
afinitas selektif antara
fase diam dan fase
gerak tertentu
Lanjutan .......

0 Zat- zat dengan kepolaran 0 Asam-asam nukleat dapat

3 berbeda yaitu antara

sedikit polar sampai polar
dapat dipisahkan dengan
4 dipisahkan dengan kolom
penukar ion yang
dikombinasikan dengan
HPLC berdasarkan partisi kolom butiran berlapis zat
cair-cair berpori.
Lanjutan......
0 Dapat memisahkan vitamin- vitamin yang larut dalam air

5
0 HPLC cocok digunakan untuk memisahkan minyak atsiri. Minyak atsiri terdiri
atas campuran yang sangat rumit dan oleh karena itu HPLC berguna untuk
6 memisahkan campuran rumit menjadi golongan-golongan senyawa atau
memisahkan golongan senyawa menjadi komponen-komponennya

0 HPLC digunakan untuk memisahkan golongan minyak, misalnya

7
terpenoid tinggi, segala senyawa jenis fenol, alkaloid, lipid dan gula
 0
4
Bagian-bagian &
fungsi alat HPLC
(High Performance
Liquid
Chromatography)
1. Wadah fase
gerak
Wadah fase gerak terbuat dari bahan yang
inert terhadap fase gerak. Bahan yang
umum digunakan adalah gelas dan baja anti
karat. Daya tampung tandon harus lebih
besar dari 500 ml sehingga dapat digunakan
selama 4 jam dengan kecepatan alir yang
umumnya 1-2 ml/menit
2. Pompa
Pompa berfungsi untuk memompa baik eluen
dan sampel yang disuntikan melalui injektor. a.
Syarat :
- Tekanan hingga 6000 psi (400 atm)
- tahan korosi & tahan terhadap fasa gerak
- Control laju alir yang akurat , hingga 20 m.
L/menit
- Dapat menyalurkan fasa gerak pada rentang
kecepatan dan tekanan lebar - Dapat
digunakan untuk melakukan elusi gradien
 3. Injektor
Injector (Pemasukkan cuplikan) tempat memasukkan cuplikan kedalam
pangkal kolom (kepala kolom), diusahakan agar sedikit mungkin terjadi
gangguan pada kemasan kolom.
a. Syarat :
tekanan tidak turun
b. Teknik :
- syringe/ septum : disuntikkan melalui septum, tahan hingga tekanan
1500 psi/ 70 atm, tidak tahan dengan semua pelarut kromatografi
cair, partikel kecil dari septum yang terkoyak (akibat jarum
injector) dapat menyebabkan penyumbatan.
- stop-flow : aliran pelarut dihentikan sementara. Teknik ini
digunakan karena difusi di dalam cairan kecil.
- loop vaive (kran cuplikan) : cara automatis (dengan menggunakan
adaptor yang sesuai, volume yang lebih kecil dapat diinjeksikan
secara manual).
4. Kolom
Kolom Keberhasilan atau kegagalan analisis bergantung pada pilihan
kolom dan kondisi kerja yang tepat. Kolom merupakan bagian yang
sangat penting dari disebut cartridge. Biasanya terbuat dari stainless
steel.
a. Fungsi :
- Menyaring kotoran
- Menjenuhkan fasa diam
b. Jenis :
- Kolom analitik : d= 2 -6 mm. Panjang kolom tergantung pada jenis
material pengisi kolom
- Kolom pengaman/guard kolom / preparatif : d= >6 mm, p =25 -100 cm
, dpt digunakan pada temperatur lebih tinggi dari temperatur
kamar.
5. Detektor

Detector Digunakan untuk mendeteksi adanya

komponen sampel (cuplikan) di dalam eluen
kolom (analisis kualitatif) dan menghitung
jumlahnya (analisis kuantitatif). Syarat :
- sangat peka (sensitifitasnya tinggi)
- tidak banyak berderau (noise)
- memberi respons untuk semua tipe senyawa
- tidak merusak cuplikan
 0
5
Kelebihan HPLC
(High Performance
Liquid
Chromatography)
Apa Kelebihan HPLC ?

Kerja lebih mudah Volume sampel kecil Mampu memisahkan

dengan automasi (dapat menganalisis molekul-molekul dari
dalam prosedur sampel yang kecil suatu campuran
analisis dan kuantitasnya) dengan daya pisah
pengolahan data
tinggi
Lanjutan....

Merupakan metode Dapat digunakan Pilihan fase gerak dan

analitis: cepat, peka, untuk sampel organik fase diamnya luas.
akurat, tepat, dan anorganik,
reproducible, bersifat volatile dan
preparatif non volatil, stabil dan
tidak stabil secara
termal
Lanjutan....

Dapat dihindari Dapat digunakan Kolom dapat

terjadinya bermacan-macam digunakan kembali
dekomposisi atau detektor dengan
kerusakan bahan kepekaan yang tinggi
analisis
Lanjutan.....

aktu analisa cukup HPLC dapat digunakan Teknik HPLC dapat

singkat untuk isolasi zat yang dilakukan pada suhu
tidak mudah menguap kamar
dan zat yang tidak
stabil
 0
6
Kekurangan HPLC
(High Performance
Liquid
Chromatography)
Apa Kekurangan HPLC ?

Larutan harus dicari Harus mengetahui Hanya bisa digunakan

fase diamnya terlebih kombinasi yang untuk asam organik
dahulu optimum antara
pelarut, analit dan
gradient elusi
Lanjutan......
Pada kolom dengan
Harganya mahal diameter rata-rata Sering ada
partikel fase diam larutan standar
sehingga
dengan ukuran 3
penggunaannya yang tertinggal
mikrometer dan 5
dalam lingkup mikrometer sela-sela di injektor
penelitian yang partikel lebih mudah
terbatas tertutup oleh kotoran,
jadi harus seringkali
dicuci dan kemurnian
larutan harus dijaga
Thank
You
CREDITS: This presentation template was
created by Slidesgo, including icons by Flaticon,
infographics & images by Freepik