Review Jurnal

ZOONOSIS : TUBERCULOSIS

OLEH:

ANDI AZIFAH CAHYANI

O11116003

PROGRAM STUDI KEDOKTERAN HEWAN

FAKULTAS KEDOKTERAN
UNIVERSITAS HASANUDDIN
MAKASSAR
2018
 Tuberkulosis (TB) adalah penyakit menular kronis yang disebabkan oleh Mycobacterium
tuberculosis. Manifestasi klinis yang paling umum adalah TB paru. Basil yang dihirup dapat
dilokalisasi di tempat-tempat lain, yang mengarah ke TB luar paru (EPTB). Di antara manifestasi
EPTB yang berbeda, meningitis tuberkulosis (TBM) telah dianggap sebagai bentuk yang fatal
Tingkat fatalitas di negara-negara berkembang telah dilaporkan berkisar antara 44 hingga 69%.
Faktanya, diagnosis yang tertunda atau salah sering mengakibatkan komplikasi serius jangka
panjang yang melumpuhkan. Keterlibatan sistem saraf pusat sering ditemukan sekunder akibat
TB di tempat lain dalam tubuh, terutama paru-paru. Kehadiran TB di tempat lain dalam tubuh
mendukung diagnosis, meskipun ketiadaannya tidak mengecualikannya. Sebagian besar pasien
dengan TB-neuro didiagnosis berdasarkan kriteria klinis, pencitraan, dan investigasi
laboratorium dari cairan Cerebrospinal (CSF).
Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mendeteksi M. tuberculosis dan M. bovis pada
cairan Cerebrospinal manusia dengan menggunakan in-house nested PCR (N-PCR) assay.
Subjek dalam penelitan yaitu sampel cairan Cerebrospinal dari 212 pasien Metode yang
digunakan dimulai dari pengumpulan pasien. Sampel Cerebrospinal Fluid (CSF) dari 212 pasien
diselidiki. CSF dikumpulkan dalam kondisi aseptik dengan pungsi lumbal. Lima ratus mikroliter
hingga 2,0 ml CSF tersedia untuk penelitian ini. Sampel disimpan pada suhu 20 ° C, sebelum
diproses untuk DNA target untuk N-PCR dan smear microscopy untuk basil tahan asam (AFB;
auramine O stain).
Persiapan lisat sel mikobakteri yang mengandung DNA target : (i) Kultur bakteri. Satu
mililiter kultur fase logaritmik dari M. tuberculosis atau M. bovis yang ditumbuhkan dalam
kaldu Middlebrook 7H9 dipelet dan disuspensikan kembali dalam 100 l 0,1% dari Triton X-100.
Suspensi direbus (90 ° C selama 40 menit) dan disentrifugasi. Supernatan disimpan pada suhu 20
° C dan digunakan sebagai templat DNA dalam PCR. (ii) CSF. Target DNA disiapkan dari CSF
dengan modifikasi metode Chakravorty dan Tyagi. CSF disaring. Wadah CSF dibilas dengan 2
ml larutan penghambatan dan disaring. Membran dipindahkan ke tabung Eppendorf 1,5 ml yang
mengandung 500 l larutan penghilang penghambatan, diinkubasi selama 15 menit pada suhu
kamar, dan disentrifugasi.Supernatan dibuang, dan membran dicuci dengan air steril. Suspensi
digunakan untuk membuat apusan dan kemudian direbus dalam bak kering diikuti oleh
sentrifugasi. Supernatan disimpan pada suhu 20 ° C dan digunakan sebagai templat DNA.
DNA sequencing / Pengurutan DNA. Primer F- dan R-amplified N-PCR produk dari 10
sampel yang menunjukkan produk 89-bp dari M. bovis dielusi dari gel agarosa dengan mini
Elute Gel Extraction kit. DNA yang diekstraksi diliofilisasi dan dikirim untuk disekuensing ke
Pusat Sumber Daya Sekuensing DNA di The Rockefeller University. Kemudian lakukan Analisis
statistic, Kecenderungan dalam deteksi M. tuberculosis dan M. bovis oleh N-PCR dalam sampel
CSF yang berasal dari pasien yang dikategorikan secara klinis ditentukan oleh tren uji chi-
square. Lalu deteksi dan identifikasi M. tuberculosis dan M. bovis di CSF. Deteksi dan
diferensiasi M. tuberculosis dan M. bovis dalam sampel CSF yang representatif digambarkan
dalam untaian rantai DNA. Dari 112 sampel diselidiki, 37 (33%) positif untuk M. tuberculosis
dan M. bovis oleh N-PCR. Pola campuran PCR yang diperkuat produk terlihat dalam sampel
CSF. Dalam 17% (19/112) dari sampel, M. bovis terdeteksi. Infeksi dengan M. tuberculosis
sendiri terdeteksi pada 2,7% (3/112) dari sampel diselidiki. Infeksi simultan dengan kedua
pathogen didirikan pada 15/112 sampel (13,4%). Dalam 12,5% (14/112) dari sampel, AFB
terdeteksi secara mikroskopis. Dalam semua sampel positif untuk AFB, M. tuberculosis dan /
atau M. bovis terdeteksi oleh N-PCR. Namun, sejumlah terbatas sampel BTA-negatif (23/112)
adalah positif oleh N-PCR. Dua puluh tujuh dari 100 sampel CSF dari pediatric bangsal Rumah
Sakit Safdarjung ditemukan positif untuk M.TBC dan / atau M. bovis dengan uji N-PCR. Kasus
positif distribusi adalah sebagai berikut: 3 sampel positif untuk M. TBC, 17 positif untuk M.
bovis, dan infeksi campuran terdeteksi pada 7 sampel.
Kategorisasi klinis pasien. 69 pasien dari Rumah Sakit AIIMS dikategorikan menjadi
pasti, highly robable, probable dan mungkin TBM dan NTBM. Berdasarkan kriteria dijelaskan
yakni : Kriteria Klinis (A) Demam dan sakit kepala selama 14 hari, muntah, sensorium yang
berubah ; CSF (B) Gula, 60 mg%; protein, 100 mg%; sitologi negatif untuk sel-sel ganas;
pleositosis dengan 20 sel ; Radiologicalb (C) Eksudat dalam tangki basal, hidrosefalus, infark,
peningkatan gyral ; Extraneural (D) TB aktif paru-paru, GIT, ISK, dan getah bening, tulang, kulit
Hasil dari NPCR dicocokkan dengan kategorisasi klinis dan apusan hasil mikroskop.
Pengawasan komparatif dari tiga parameter, yaitu, diagnosis klinis, mikroskop smear, dan N-
PCR, menunjukkan bahwa sensitivitas N-PCR (60,0%) lebih besar daripada mikroskop smear
(36,0%,) Spesifisitasnya adalah 88,6% dibandingkan dengan smear microscopy. Analisis urutan
produk N-PCR tunggal atau ganda dalam sampel CSF yang representatif. Pita ganda yang
diperoleh dari sampel CSF diekstraksi dan diklon secara individual ke dalam vektor pGEMT
seperti yang dijelaskan dalam Bahan dan Metode.
Meskipun TB manusia disebabkan terutama oleh M. tuberculosis, suatu proporsi kasus
yang tidak diketahui disebabkan oleh M. bovis. Infeksi manusia dengan M. bovis terjadi terutama
oleh konsumsi susu yang terkontaminasi atau susu atau produk daging lainnya. Rute langsung
telah menjadi rute yang paling umum dari infeksi.Epidemi virus human immunodeficiency di
Indonesia negara-negara berkembang, khususnya di mana infeksi M. bovis terjadi pada hewan
dan kondisi yang mendukung penularan zoonosis, merupakan ancaman kesehatan masyarakat
yang serius. Penelitian ini berfokus pada diagnosis TBM. Tes yang saat ini digunakan untuk
diagnosis TBM cepat terbatas deteksi AFB pada apusan, diikuti oleh kultur dan tes biokimia.
Lebih lanjut, TB yang disebabkan oleh M. tuberculosis pada manusia adalah tidak dapat
dibedakan secara klinis, radiologis, dan histopatologis dari TB yang disebabkan oleh M. bovis.
Masalah yang terkait dengan sensitivitas diagnosis TBM dengan mikroskop smear dan waktu
yang lama diambil oleh kultur telah diatasi dengan teknik molekuler. Berbeda dengan target ini,
para Target gen hupB yang digunakan dalam uji N-PCR memiliki potensi keuntungan
mendeteksi dan mengidentifikasi yang terkait erat anggota MTC, yaitu., M. tuberculosis dan M.
bovis.
Aspek penting dari uji N-PCR adalah deteksi infeksi M. tuberculosis dan M. bovis
bersama dalam sampel CSF. Deteksi infeksi campuran dengan lebih dari satu strain M.
tuberculosis dalam sampel klinis manusia dengan molekuler teknik telah dilaporkanDalam
penelitian ini, pasien di antaranya M. bovis atau infeksi campuran terdeteksi oleh uji N-PCR
didistribusikan secara merata di daerah pedesaan dan perkotaan. Meningkatnya risiko TBM pada
orang-orang ini mungkin berhubungan dengan tidak hanya mereka standar sosial ekonomi,
mencerminkan status gizi mereka, tetapi juga standar hidup mereka yang buruk, kepadatan
penduduk, dan yang berlaku kondisi tidak sehat. Singkatnya, penelitian ini menunjukkan bahwa
infeksi oleh anggota MTC dapat ditentukan dengan teknik molekuler yang tepat dan target gen
yang ditentukan. Ini akan membantu dalam membentuk strategi yang tepat untuk pencegahan TB
manusia oleh mikobakteri patogen selain M. tuberculosis yang biasa.
Referensi :
Shah, N. P., A. Singhal, A. Jain, P. Kumar, S. S. Uppal, M. V. P. Srivatsava, and H. K. Prasad.
2006. Occurrence of Overlooked Zoonotic Tuberculosis: Detection of Mycobacterium
bovis in Human Cerebrospinal Fluid. Journal of Clinical Microbiology. 44(4):1352–1358.