Nama : Ainy Ramadhany

Nim : G701 19 103

Kelas / Kelompok : B/II (DUA)

Video ini membahas mengenai elektroforesis gel poliakrilamida sulfat dan beberapa poin yaitu
a. apa itu SDS-PAGE
b. Persiapan sampel
c. Discontinuous gel system
d. Prinsip pemisahan

A. Apa itu SDS-PAGE?

SDS-PAGE adalah elektroforesis teknik untuk pemisahan protein dan gel yang digunakan untuk
SDS adalah gel poliakrilamida yang dimana poliakrilamida adalah bahan inert sehingga tidak
berinteraksi dengan protein yang dimana itu merupakan fitur yang baik dan membentuk matriks
dan ukuran pori dapat ditentukan oleh konsentrasi gel poliakrilamida. SDS gel terdiri dari 2
lapisan yang pertama yaitu stacking gel dan yang kedua yaitu separating gel.

Pada stacking gel terdapat sumur yang dimana memasukkan sampel protein dan memakai
medan listrik dari negatif di atas dan positif di bawah medan listrik diterapkan oleh baterai dan
ketika medan listrik diterapkan protein mulai bermigrasi dari negatif ke positif dan mereka
dipisahkan dalam gel pemisah menurut mereka .

pertama-tama untuk memahami prinsip halaman SDS kita harus berbicara tentang persiapan
sampel dalam sampel kita memiliki protein dan kita juga memiliki apa yang kita sebut buffer
denaturasi atau buffer sampel atau buffer lammle yang terdiri dari beberapa zat atau bahan dan
yang paling penting dua bahan ini adalah SDS dan beta mercaptoethanol jadi saya akan
berbicara tentang mereka pertama SDS adalah deterjen bawang yang memiliki sisi kutub dan
sisi non-polar di sisi kutub dan sisi non-polar ketika SDS dilarutkan memberikan ion negatif
dan ion SDS ini mengikat protein pada rantai samping asam amino yang ada di protein
sehingga SDS memberi protein negatif muatan berapapun muatan asli protein bahkan jika
protein awalnya negatif atau positif.
SDS memberi protein muatan negatif ini juga mendenaturasi protein sehingga mengubah
protein dari struktur tersier dan sekunder menjadi primernya struktur dengan memutus ikatan
yang berimplikasi pada pembentukan struktur tersier dan sekunder demikian juga beta
merkaptoetanol juga memiliki atau berperan dalam denaturasi protein itu adalah agen pereduksi
mengurangi ikatan disulfida menjadi protein sehingga memisahkan subunit dari protein tertentu
jadi ini adalah protein ini adalah asam amino atau rantai peptida dari protein dan kemudian ini
sekunder dan tersier dan empat kuartener struktur dibentuk oleh ikatan non kovalen seperti
ikatan ionik interaksi hidrofobik seperti tulang Van der Waals ikatan hidrogen dan ikatan
disulfida.

tulang-tulang ini didenaturasi atau dirusak oleh SDS dan beta merkaptoetanol pada akhirnya
kita akan memiliki protein sebagai peptida rantai jadi bentuk protein tidak berperan dalam SDS
dan juga muatan protein jadi baik bentuk maupun muatan protein tidak berperan di halaman
SDS hanya berat molekul protein jadi ini SDS dan beta mercaptoethanol kami juga memiliki
jejak jejak hidroklorida yang merupakan buffer yaitu pH 6,8 dan juga memberikan ion klorida
dan di sana ion klorida juga penting dalam mekanisme SDS Saya akan membicarakannya
bromo etanol biru adalah pewarna pewarna itu digunakan untuk memberikan sampel warna biru
sehingga kami dapat mendeteksi sampel pada gel tingkat sampel pada gliserol gel sedikit
meningkatkan viskositas sampel e dan juga menggunakan air suling untuk melanjutkan volume
dan kami menggunakan air suling karena kami tidak membutuhkan ion dalam sampel sekarang
saya akan berbicara tentang sistem gel diskontinyu sehingga kami memiliki dua lapisan gel
seperti yang saya katakan sebelumnya gel susun dan gel pemisah dan mereka memiliki pH yang
berbeda sehingga gel susun adalah pH memiliki pH 6,8 gel pemisah memiliki pH 8,8 kami juga
memiliki kami juga memiliki dua elektroda yang memiliki pH 8,3 um ada yang disebut buffer
migrasi dan buffer migrasi mengandung jejak dan glisin glisin juga sangat penting di halaman
ini jadi saya akan berbicara tentang lisensi Dyson adalah asam amino dan ini adalah asam
amino paling sederhana karena rantai sampingnya hanya hidrogen dan itu mengatakan berarti
bahwa dalam pH asam jadi di bawah 2,3 asam amino ini terprotonasi sehingga bermuatan
positif dan pada pH basa lebih dari 9,6 itu bermuatan negatif karena terdeprotonasi antara dua
nilai ini yang kita sebut PKA 1 dan PK 2 asam amino ini netral dan benar- benar netral di titik
tengah antara PKA 1 l PK - dan bagaimana kita bisa mengetahuinya kita ambil dua koma tiga
ditambah sembilan koma enam dibagi dengan dua jadi kita mendapatkan nilai lima koma
sembilan lima yang kita sebut titik isoelektrik di mata titik listrik molekul persis netral di atas
titik ini jadi pada pH katakanlah pH enam atau ph 6,5 protein mulai sedikit negatif dan
negativitas 9,6 jadi kita harus tahu bahwa di daerah ini itu sedikit negatif dan peningkatan
negatif jadi mari kita lihat um ketika pH dan elektroda pH adalah 8 poin 3 dan kemudian glisin
bermuatan negatif seperti yang Anda lihat di sini kehidupan di sini di delapan titik tiga
bermuatan negatif sehingga glisin akan memenuhi nilai saya dari negatif menuju kutub positif
karena bermuatan negatif bu t ketika memasuki gel susun di mana pH enam koma delapan
negatif negatif dari kaca dan menurun dan kemudian mobilitas glisin menjadi sangat lambat
jadi saya akan berbicara saya akan berbicara tentang masing-masing secara terpisah jadi mari
kita pertama ambil gel susun di gel susun pHnya adalah 6,8 dan di sini kita memiliki sampel ini
jadi dalam sampel kita memiliki ion klorida seperti yang saya katakan, kita memiliki Tris
klorida Tris hidroklorida yang memberikan ion klorida kita memiliki protein sebagai kompleks
s yang negatif klorida juga negatif dan kami memiliki glisin yang pada pH 6,8 netral 2 sedikit
negatif 2 sedikit negatif sehingga mereka bermigrasi dalam urutan ini jadi pertama kami
memiliki klorida kemudian kami memiliki protein kemudian glisin paling lambat sehingga
seperti yang Anda lihat di sini protein ditumpuk antara klorida dan glisin dan karena ini kami
menyebutnya gel susun karena protein ditumpuk di antara keduanya dan ketika ini 3 mol, 3
molekul kembali pada garis ini mereka memulai gel pemisah di gel pemisah pH 8,8 ini adalah
gel pemisah dan pH 8 titik 8 jadi migrasi terjadi dalam urutan ini jadi pertama kita memiliki
klorida yang bermigrasi sangat cepat menuju muatan positif kemudian kami memiliki glisin
karena ketika pH 8 koma 8 pelajarannya jauh lebih negatif dan menjadi lebih cepat daripada .

SDS-PAGE singkatan dari elektroforesis gel natrium dodesil sulfat poliakrilamida di sini
adalah peralatan yang Anda perlukan terlebih dahulu memasukkan pelat pendek dan
spacer satu milimeter bermain ke dalam bingkai casting pastikan kaki rangka cor berada
di bagian bawah pastikan pelat juga rata di bagian bawah kemudian kencangkan klem
untuk mengamankan posisi tempat selanjutnya pasang rangka cor dengan pelat ke
dudukan pengecoran dan pastikan pemasangannya kencang dan kencang periksa segel
pengaturan Anda dengan memipetkan air DD di tengah pelat amati apakah ada
kebocoran air DD jika tidak ada kebocoran kemudian keluarkan air DD baik
menggunakan sepuluh tisu atau kertas saring sampai hampir kering ketika dudukan
pengecoran gel disiapkan disiapkan larutan gel pelarut 12 persen dalam 50 mililiter
Falcon 2 berikutnya 3,3 mililiter air DD 4,0 mililiter cairan larutan akrilamida 30% id
akrilamida adalah neurotoksik dan harus ditangani dengan hati-hati 2,5 mililiter stok
lebih rendah dan 100 mikroliter 10% SDS bersama-sama tepat sebelum Anda siap untuk
menuangkan gel tambahkan 10 mikroliter 10% ApS dan empat mikroliter Team ed
tolong susu teh itu med harus ditambahkan di lemari asam karena tim yang lebih tua
yang kuat mengkatalisis polimerisasi akrilamida jika med teh ditambahkan terlalu dini
gel akan mengeras sebelum siap untuk dipipet itu di antara pelat aduk perlahan
kemudian segera pipet penyelesaian larutan gel di antara pelat dengan pipet kaca sampai
gel pelarut mencapai tepat di atas garis hijau atau kira-kira satu sentimeter dari atas pelat
pendek harap pantau untuk memastikan tidak ada kebocoran di bagian bawah pelat pipat
200 mikroliter isopropanol pada gel pelarut Anda harus mengamati lapisan tipis pada gel
sambil menunggu pelarutan Delta polimerisasi menyiapkan larutan gel susun di tempat
lain 50 mililiter falcon untuk mencampur 1,3 5 mililiter air DD 0,33 5 mililiter stok
akrilamida 0,25 Miller stok atas dan 20 mikroliter 10% SDS setelah gel pelarut
terbentuk yang membutuhkan waktu sekitar 30 menit tiriskan isopropanol dengan
lembut bilas bagian atas gel dengan DD air dan keringkan dengan kimwipes tepat
sebelum Anda siap untuk menuangkan stacking gel tambahkan 20 mikroliter 10% aps
dan 2 mikroliter teh med ke dalam larutan stacking gel aduk rata segera pipet sekitar
satu mililiter larutan stacking gel di atas penyelesaian gel di antara pelat isi ke atas lalu
masukkan sisir ke dalam larutan tunggu gel berpolimerisasi setelah gel terbentuk
lepaskan bingkai casting dengan gel dari casting sedih kemudian dengan hati-hati
lepaskan pelat kaca dari bingkai casting bungkus tempatkan dengan hati-hati di handuk
kertas basah dan bungkus saran kemudian simpan di ruang dingin sampai minggu depan
untuk menyiapkan sampel untuk label halaman sds, tabung microfuge sesuai ing ke
sampel Anda pipet 40 mikroliter ekstrak ikan ke dalam tabung microfuge dan
tambahkan 40 mikroliter sampel buffer Panaskan tabung pada 100 derajat Celcius
selama 3 menit kemudian panggil centrifuge selama 5 detik keluarkan gel dari bungkus
saran dan handuk kertas diamankan rapat gel dengan pelat pendek menghadap ke dalam
ke modul berjalan setiap modul berjalan dapat menampung dua gel jika hanya satu gel
yang dijalankan Anda perlu menggunakan penyangganya sebagai pengganti gel kedua
jangan langsung memberi label pada pelat Anda dengan selotip karena ini akan
mencegah gel berjalan dengan baik sebagai gantinya pelat dapat langsung diberi label
dengan spidol permanen setiap tangki dapat menampung dua modul berjalan yang akan
menjadi empat gel sekaligus masukkan modul berjalan ke dalam tangki pastikan modul
dengan benar dimasukkan ke dalam slot di tangki di titik ini periksa untuk melihat
apakah daftar tersebut dengan tepat tuangkan sepuluh kali larutan buffer yang sedang
berjalan ke dalam modul yang sedang berjalan di antara dua pelat sampai sumur di
kedua pelat terendam sepenuhnya periksa untuk memastikan modul yang berjalan tidak
bocor larutan buffer apa pun ke dalam tangki tangki hanya perlu diisi setengah dengan
larutan buffer menjalankan dua gel sekarang Anda siap untuk memuat sampel lepaskan
sisir sehingga Anda dapat melihat setiap sumur dengan jelas Anda dapat memasang
panduan pemuatan pada gel untuk memudahkan memuat sampel Anda dengan benar ke
setiap jalur dengan hati-hati memuat sepuluh mikroliter larutan sampel ke dalam setiap
sumur ujung pipet harus dimasukkan ke dalam sumur di antara pelat cukup dalam untuk
mencegah sampel meluap ke jalur tetangga perlahan lepaskan larutan sampel ke jalur
saat selesai lepaskan ujung pipet ubah ujungnya lalu muat sampel lain untuk penanda
berat molekul Anda juga perlu memuat sepuluh mikroliter ke dalam sumur dan mereka
harus dimuat di salah satu jalur tengah untuk perbandingan yang mudah ketika semua
sampel dimuat tutup tutupnya nk dan masukkan elektroda dengan benar ke catu daya
kabel merah ke slot merah dan hitam ke slot hitam atur daya ke dua puluh miliamp per
pelat dan jalankan selama satu jam misalnya jika empat pelat sedang dijalankan daya
harus diatur pada 80 milliamp daya juga dapat diatur ke tegangan tegangan yang
digunakan tidak tergantung pada jumlah pelat sehingga tegangan yang konsisten dapat
digunakan untuk menjalankan sejumlah pelat misalnya atau 120 volt yang konsisten
dapat digunakan Anda harus mengamati sampel atau tahan solusi Anda untuk
dikondensasi menjadi pita tipis melalui gel susun kemudian pita akan secara bertahap
bermigrasi ke gel penyelesaian ketika pewarna biru telah mencapai dekat dengan bagian
bawah gel hentikan proses cabut catu daya lalu lepaskan modul yang berjalan dari
tangki dan tiriskan buffer yang sedang berjalan lepaskan pelat kaca dengan hati-hati dari
modul yang sedang berjalan kemudian dengan hati-hati gunakan pelepas gel untuk
mengeluarkan gel dari pelat kelas yang dapat Anda potong t susun gel dengan hati-hati
sebelum melanjutkan ke pewarnaan pindahkan gel ke dalam cawan petri persegi
kemudian tuangkan larutan pewarna biru kumasi ke dalam cawan petri merendam gel
sepenuhnya tempatkan cawan petri persegi ke dalam nampan logam untuk menghindari
tumpahan di inkubator lalu letakkan di Inkubator 50 derajat Celcius untuk pewarnaan
selama 30 menit keluarkan gel dengan pinset dan pastikan Anda dapat mengamati pita
yang jelas pada gel sebelum membuang larutan pewarnaan dan menggantinya dengan
larutan pewarnaan D Pewarnaan Wendy menambahkan sepotong kimwipe atau handuk
kertas penyerap untuk membantu menyerap pewarna noda ini pada 50 derajat Celcius
selama 30 menit dengan berputar secara berkala untuk memfasilitasi proses pewarnaan
D Anda juga mungkin ingin mengubah larutan desain setiap 15 menit sampai latar
belakang gel transparan saat destaining selesai simpan gel dalam air DD sampai Anda
dapat memindai dan menganalisisnya dengan densitometer membuang akrilamida cair
dengan benar yang mengandung larutan dalam wadah limbah akrilamida gel
polimerisasi dapat dibuang langsung ke tempat sampah sedangkan pewarna dan larutan
pewarna ini dapat dibuang ke wadah limbah non-halogen