BAB I PENDAHULUAN

1. Sistem Penghantar Obat Langsung ke Target (Drug Targetting)

Sistem penghantaran obat langsung ke target banyak digunakan untuk

penyakit kekurangan enzim dan kanker. Pada sistem ini obat dapat berjalan-jalan di
dalam tubuh tanpa memberikan efek farmakologi, tetapi apabila sistem ini bertemu
dan mask di targetnya baru obat tersebut dilepas oleh cariernya dan kemudian
memberikan efek. Pada terapi kanker dengan sistem ini efek samping yang biasa
muncul jika diberikan obat kanker diharapkan tidak akan muncul. Berbagai macam
carrier dapat digunakan seperti micelles, liposom, vesicle, polimer dentiric, Liquid
kristal, nanokapsul, dan nanospheres. Lihat pada gambar 1 dan 2

2. Tujuan membuat nanopartikel.

Nanopartikel bertujuan untuk mengatasi kelarutan zat aktif yang sukar

larut,memperbaiki bioavailabilitas yang buruk, memodifikasi sistem penghantaran
obat sehingga obat dapat langsung menuju daerah yang spesifik, meningkatkan
stabilitas zat aktif dari degradasi lingkungan (penguraian enzimatis, oksidasi,
hidrolisis), memperbaiki absorbsi suatu senyawa makromolekul, dan mengurangi
efek iritasi zat aktif pada saluran cerna (Mohanraj and Chen, 2006).

1
3. Keuntungan menggunakan nanopartikel sebagai sistem penghantaran obat
adalah sebagai berikut (Mohanraj dan Chen, 2006):

1. Ukuran partikel dan sifat permukaan dari nanopartikel dapat dimanipulasi

dengan mudah untuk mencapai target obat baik secara aktif maupun pasif
setelah pemberian secara parenteral.

2. Nanopartikel penghantar obat dapat mengontrol dan memperpanjang pelepasan

obat pada saat tranportasi dan pada sisi lokalisasi, mengubah distribusi
organ dari obat, dan berikutnya mempengaruhi klirens dari obat sehingga
dapat mencapai peningkatan efikasi terapetik obat dan mengurangi efek
samping.

3. Pelepasan secara terkontrol dan sifat degradasi partikel dapat diatur sesuai
dengan pemilihan jenis matriks. Drug loading secara relatif tinggi dan obat
dapat dimasukkan ke dalam sistem tanpa reaksi kimia, ini merupakan faktor
penting untuk memelihara aktivitas obat.

4. Mengarahkan obat ke organ target dapat dicapai dengan melekatkan ligan target
pada permukaan partikel atau menggunakan tuntunan magnet.

5. Sistem dapat diberikan dalam berbagai rute seperti oral, nasal, parenteral,
intraokular dan lain-lain.

4. Kekurangan Nanopartikel

Disamping kelebihannya, nanopartikel juga memiliki beberapa

kekurangan, antara lain: nanopartikel susah dalam penanganan dan
penyimpanan karena mudah teragregasi, nanopartikel tidak cocok untuk
obat dengan dosis besar; karena ukurannya kecil, nanopartikel dapat
memasuki bagian tubuh yang tidak diinginkan yang dapat menimbulkan akibat
yang berbahaya, misalnya dapat menembus membran inti sel dan
menyebabkan kerusakan genetik yang tidak diinginkan atau mutasi (Rawat et
al., 2006).

2
 BAB II ANALISA DAN TRANSLATE JURNAL

“Development and evaluation of Desvenlafaxine loaded PLGA-

chitosan nanoparticles for brain delivery”

Abstrak

Depresi merupakan kondisi kejiwaan yang melemahkan yang tetap menjadi

penyebab kecacatan paling umum kedua di dunia. Saat ini, depresi mempengaruhi lebih
dari 4 persen populasi dunia. Sebagian besar obat yang ditujukan untuk manajemen
klinis depresi menambah ketersediaan. Namun khasiat dan terapi antidepresan yang
sering diperdebatkat karena tidak dapat mencapai otak dengan rute administrasi
konvensional. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk melihat potensi nanopartikel
PLGA-chitosan mukoadhesif untuk penghantaran Desvenlafaxine yang dienkapsulasi
ke otak melalui hidung untuk rute penghantaran otak sehingga dapat dilihat profil
farmakokinetik dan farmakodinamikdari Desvenlafaxine. Desvenlafaxine
diformulasikan dalam bentuk nanopartikel PLGA-chitosan dibuat dengan teknik
evaporasi emulsi pelarut dan dioptimalkan dengan berbagai karakteristik fisiokimia.
Efikasi antidepresan dari Desvenlafaxine yang dioptimalkan dengan evaluasi dalam
berbagai model depresi tikus serta estimasi biokimia monoamina di otak. Selanjutnya,
tingkat Desvenlafaxine di otak dan plasma darah ditentukan pada berbagai interval
waktu untuk perhitungan parameter farmakokinetik yang berbeda. Nanopartikel PLTE-
chitosan yang mengandung Desvenlafaxine (172 nm / + 35 mV) pada pemberian
intranasal secara signifikan mengurangi gejala depresi dan meningkatkan tingkat
monoamina di otak dibandingkan dengan Desvenlafaxine yang diberikan secara oral.
Penghantaran nanopartikel Desvenlafaxine PLGAchitosan melalui Hidung untuk
mencapai otak juga meningkatkan profil farmakokinetik Desvenlafaxine. Dengan rasio
otak / darah mencit pada titik dan waktu yang berbeda. Dengan demikian, intranasal
mukoadhesif Desvenlafaxine Nanopartikel PLGA-chitosan dapat berpotensi digunakan
untuk pengobatan depresi.

1. Pendahuluan

3
 Depresi adalah gangguan mental yang melemahkan, ditandai dengan suasana hati
rendah, putus asa, mudah sedih , rendah diri , tidur terganggu dan seringkali dengan
pikiran untuk bunuh diri (Kircanski et al., 2012; Lenox dan Frazer, 2010). Sesuai
laporan WHO saat ini, depresi adalah salah satu dari penyebab utama kecacatan yang
mempengaruhi lebih dari 350 juta orang di seluruh dunia (Marcus et al., 2012). Survei
Kesehatan Mental Dunia dilakukan di 17 negara melaporkan bahwa rata-rata 1 dari 20
orang telah menderita episode depresi (WHO, 2015). Depresi juga telah bertanggung
jawab atas bunuh diri yang diperoleh data 1 juta jiwa per tahun (Marcus et al., 2012).
Penyebab utama depresi adalah gangguan dalam monoaminergic yaitu norepinefrin,
serotonin, transmisi dopamin di otak karena interaksi kompleks dari beberapa sosial,
psikologis dan biologisfaktor (Kircanski et al., 2012; Lenox dan Frazer, 2010). Oleh
karena itu sebagian besar obat untuk pengobatan depresi meningkat sehingga
ketersediaan monoamina di sinaps oleh berbagai mekanisme sangat diperlukan. Untuk
harapan terapeutik antidepresan ini tergantung pada jumlah yang ada dalam jangka
panjang di situs aksi di otak (Kircanski et al., 2012; Lenox dan Frazer,2010; Nutt,
2008). Pada saat ini antidepresan kebanyakan dihantarkan dengan rute oral karena sifat
kronis pengobatan untuk beberapa hari. Namun, penggunaa terapi antidepresan oral
terbatas karena ketidakmampuan rute oral untuk mencapai otak secara efektif dari
sirkulasi sistemik sebagai penghalang darah otak (BBB) dan darah-serebrospinal
penghalang cairan (BSF) membatasi pengangkutan obat dari sirkulasi sistemik ke
sistem saraf pusat (CNS) (Kilts, 2003). Sehingga konsentrasi obat dalam plasma
bervariasi setelah pemberian oral menyebabkan efek yang merugikan, kehilangan
khasiat dan ketidakberdayaan (Kilts, 2003). Selama beberapa dekade, berbagai jenis
antidepresan semacam itu sebagai antidepresan trisiklik, inhibitor reuptake serotonin
selektif (SSRI), dan inhibitor serotonin dan norepinefrin reuptake (SNRI) telah
digunakan untuk pengobatan depresi tetapi tingkat remisi setelah percobaan pertama
antidepresan adalah <30%, yang terus menurun setelah kegagalan antidepresan pertama
(Kircanski et al., 2012; http://mentalhealthdaily.com). Karena itu, para ilmuwan dan
perusahaan farmasi telah bersaing untuk mengembangkan obat antidepresan yang
efektif yang mampu memberikan cepat dan berkepanjangan pengampunan. Ini
tercermin dari serangkaian obat antidepresan baru disetujui oleh FDA dalam 3 tahun
terakhir seperti vilazodone, levomilnacipran, vortioxetine dan 20 lainnya saat ini dalam
uji klinis (http://mentalhealthdaily.com).

4
 Hal ini memberikan alasan yang kuat untuk pengembangan nanoformulasi untuk
penghantaran dengan intranasal yang dapat mengangkut obat antidepresan ke otak
secara non-invasif dan meningkatkan konsentrasi dosis di otak, mengurangi efek
samping dan intolerabilitas. Dalam beberapa tahun terakhir penghantaran melalui
intranasal (i.n.) ke otak telah muncul sebagai teknik baru untuk menghantarkan agen
terapeutik ke CNS (Kumar et al., 2008).  Penghantaran obat dari Hidung ke otak
memiliki koneksi unik yang terdapat pada penciuman dan / atau sistem saraf trigeminal
hadir antara epitel penciuman dan CNS, melewati BBB (Kumar et al., 2008a, b). Baru-
baru ini, sejumlah besar publikasi telah melaporkan penghantaran melalui hidung ke
otak karena manfaatnya yang jelas misalnya, menghindari BBB dan metabolisme
dilambung dan hati, non-invasif dan kemudahan administrasi (Kumar et al.,2008ab; Al-
Ghananeem et al., 2010; Md et al., 2012).

Dalam penelitian ini Desvenlafaxine succinate (DVF), yang generasi kedua SNRI,
terpilih sebagai kandidat obat untuk penghantaran obat dari hidung keotak.
Desvenlafaxine adalah metabolit aktif venlafaxine dengan bioavailabilitas oralnya 80%
dan waktu paruhnya 11 jam. Meskipun Desvenlafaxine memiliki serotonin yang lebih
baik : norepinefrin rasio (10: 1) dari Venlafaxine (30: 1), terapi oral dikaitkan dengan
sejumlah efek samping seperti peningkatan tekanan darah dan peningkatan detak
jantung, sembelit, agitasi, tremor, berkeringat, mual, sakit kepala, dan gangguan tidur
(Mann, 2005; Perry dan Cassagnol, 2009). Untuk pengembangan sistem pengiriman
obat, polimerik biodegradable nanopartikel tersusun dari polylactide-co-glycolide
(PLGA) dan chitosan (CN) dioptimalkan. Nanopartikel PLGA-CN adalah
biodegradable, biokompatibel dan bioadhesive digunakan untuk memperpanjang waktu
tinggal obat di rongga hidung dan membatasi pembersihan mukosiliar dihidung untuk
penyerapan yang lebih baik di epitel hidung termasuk daerah penciuman untuk
pengiriman hidung ke otak (Pawar et al., 2010). Tujuan dari penelitian ini adalah untuk
mengoptimalkan ukuran nano pada sistem pengiriman obat DVF (Desvenlafaxine )
menggunakan PLGA dan CN untuk intranasal melalui hidung untuk penghantaran ke
otak DVF dan mengevaluasi efektivitas antidepresannya oleh studi farmakodinamik dan
biokimia pada hewan. Tujuan dari pekerjaan ini adalah untuk mengevaluasi
farmakokinetik dari nanopartikel PLGA-CN yang dimuat di otak dan plasma, masing-
masing untuk korelasi dengan hasil dari farmakodinamik dan studi biokimia.

5
2. Bahan-bahan dan metode-metode

2.1. Material

Poly (D, L-lactic-co-glycolic) (50:50, MW 9–12 KDa, asam karboksilat ) dari

Shandong Institute of Medical Instrument (Jinan, Shandong, Cina). DVF suksinat
adalah diperoleh dari Chengdu-Kaijie Biopharm Co. Ltd (Chengdu, Cina). Polivinil
alkohol (PVA, Av. MW 30–70 KDa), Chitosan MW rendah (CN, 75-85% tingkat
deasetilasi, MW 50-190 KDa) dan crude pig mucin (PM) dari Sigma Chemical Co.
Semua bahan kimia dan reagen lain yang digunakan adalah kelas analitis.

2.2. Hewan Percobaan

Tikus Wistar jantan dewasa (umur 6-8 minggu) dengan berat badan 250 g dipilih
untuk studi farmakokinetik, biokimia dan otak farmakokinetik. Penelitian saat ini
disetujui oleh Research review and ethics board (RREB), Rumah Sakit Tianjin Huanhu,
P.R. Cina. Semua percobaan hewan dilakukan sesuai kewajiban tindakan nasional
untuk penggunaan hewan percobaan (Republik Rakyat Tiongkok).

2.3. Persiapan nanopartikel PLGA-CN

Nanopartikel PLGA-CN dibuat dengan pelarut emulsi metode evaporasi (Wang et

al., 2013). Sebentar 100 mg PLGA dilarutkan dalam 2,5 mL kloroform dengan atau
tanpa DVF (30% w / w) dan ditambahkan ke 10 ml fase berair (0,5% larutan asam
asetat dengan kisaran pH 4.6-4.8) mengandung 0,5% PVA dan 0,5% CN. Itu emulsi
primer vorteks selama 90 detik dan kemudian disonikasi dengan aprobe sonicator pada
50 W (Q700 Sonicator, CT USA) selama 60 detik di atas es. Chloroform diuapkan
dengan rotary evaporator secara parsial. Nanopartikel diperoleh dengan
ultrasentrifugasi (23.000 g, 18 menit pada 4°C, Beckmann coulter, USA). Nanopartikel
berbagai konsentrasi dikeringkan dengan metode pengeringan beku menggunakan
manitol sebagai cryoprotectant (2,5% b / b)

6
2.4. Karakterisasi PLGA-CN

Nanopartikel PLGA-CN dikarakterisasi untuk ukuran partikel dan distribusi

ukuran, zeta potensial entrepment efisiensi (EE) dan drug loading (DL). Ukuran
partikel, distribusi ukuran dan zeta potensi Instrumen, Inggris). Ukuran partikel dari
formulasi yang dioptimalkan juga ditentukan menggunakan mikroskop elektron
transmisi (TEM, Morgagni 268D, AS). EE dan DL ditentukan oleh pemisahan DVF
dari DVF terkait dengan nanopartikel PLGACN oleh ultrasentrifugasi pada 45.000 g
selama 30 menit. Efisiensi jebakan dan pemuatan obat dihitung menggunakan
persamaan seperti yang diberikan di bawah ini:

Pelepasan vitro DVF dari formulasi yang dioptimalkan adalah ditentukan oleh tas
dialisis (MWCO 12 KDa; Sigma-Aldrich) dalam aparatus pembubaran diisi dengan
dapar fosfat pada pH 7,4 dan pH 6.0 (pada 37° C ± 0,5? C). Pada waktu sampling
yang telah ditentukan poin, 2 mL ditarik untuk analisis dan diganti dengan jumlah
buffer fosfat yang sama sampai 24 jam. DVF adalah ditentukan dalam sampel dengan
HPLC fase balik dengan UV deteksi pada 230 nm menggunakan fase gerak yang
mengandung campuran buffer dan asetonitril dalam rasio 70: 30. Buffer terdiri dari 10
mM kalium dihidrogen fosfat dan 2 mM garam natrium sulfon asam 1-oktan (pH 6,0)
(Rao et al., 2014).
2.5. Potensi mukoadesif nanopartikel

Potensi mukoadhesif nanopartikel ditentukan oleh efikasi pengikat lendir mereka

seperti yang dijelaskan oleh Yin dan rekan (Yin et al., 2006). Kemudian 2 ml suspensi
(0,5 mg / ml) dalam buffer fosfat (pH7,4) diinkubasi dengan volume suspensi
nanopartikel pada 37° C selama 60 menit. Setelah masa inkubasi, sampel
disentrifugasi pada 65.000 g selama 20 mnt. Supernatan diukur dengan UV

7
spektrometri (251 nm) dan efisiensi pengikatan musin ditentukan oleh persamaan
yang disebutkan di bawah ini.

2.6. Studi farmakodinamik

2.6.1. Stres model diinduksi

2.6.1.1. Tes renang paksa.
Tes berenang paksa dilakukan untuk mengakses dan membandingkan efikasi
antidepresan dari intranasal DVF PLGA-CN NPs dengan DVF oral / intranasal
(Porsolt et al., 1978; Kitada et al., 1981). Singkatnya, tikus berenangkan dalam
bejana kaca berbentuk silinder yang diisi dengan air hingga 30 cm memerintahkan
untuk berenang dan / atau mengapung tanpa dukungan ekor dan hindlimbs. Dua sesi
renang dilakukan, 15 menit sebelum pemberian obat untuk menyesuaikan diri dan
melatih tikus untuk situasi ujian. Sesi tes dilakukan untuk 5 menit pada hari ke 16
setelah satu jam setelah dosis terakhir. Sesi uji prilaku berenang direkam, memanjat
dan imobilitas dicatat. Aktivitas lokomotor dari keempatnya kelompok direkam oleh
foto digital di kotak tertutup (30 cm x 30 cm) dilengkapi dengan photocells sensitif
terhadap cahaya inframerah pada hari ke 16 0,5 jam setelah sesi tes. Kegiatan itu
disimpulkan sebagai jumlah total selama 5 menit per tikus. Untuk FST tikus-tikus
dibagi-bagi dalam empat kelompok dengan enam tikus di setiap kelompok. Dosis
dihitung dengan mengekstrapolasi dosis terapeutik manusia (50 mg / kg / -hari,
bioavailabilitas oral? 80%) ke tikus berdasarkan permukaan tubuh daerah
menggunakan faktor konversi dosis 0,018 dari manusia ke tikus (Paget dan Barnes,
1964). Kelompok 1 dan kelompok 2 tikus diberikan DVF PLGA-CN NP (setara
dengan 5 mg / kg / hari DVF) dan DVF (setara dengan 5 mg / kg / hari) intranasal
selama 16 hari, masing-masing. Kelompok 3 diberikan larutan DVF (0,5 ml, setara
dengan 5 mg / kg / hari) dengan gavage oral selama 16 hari. Grup 4 berfungsi
sebagai kontrol dan diobati dengan larutan garam normal (100 ￒ ml) secara
intranasal selama 16 hari. Untuk rute intranasal, DVF / DVF Nanopartikel PLGA-

8
 CN dilarutkan / didispersi dalam 100 ￒ l garam normal dan diberikan (50 ￒ l /
lubang hidung) dengan tabung polietilen (0,1 mm) yang ditempatkan 5 mm dalam
setiap lubang hidung. Tikus dibius sebelum dosis dan dimonitor sampai pemulihan.
Semua kelompok uji dibandingkan dengan kelompok kontrol.

2.6.2. Model obat yang diinduksi

2.6.2.1. Reserpine reversal test (RRT).

Di antara model-model obat-obat yang menginduksi depresi perilaku, pembalikan

reserpine yang diinduksi imobilitas, ptosis, hipotermia dan sedasi digunakan untuk
mengukur efektivitas antidepresan (Costa et al., 1960). Sama dengan untuk FST, tikus
dibagi menjadi empat kelompok dengan enam tikus tiap kelompok dan diberikan dosis
yang sama untuk tiap formulasi. Sesuai metode yang dijelaskan oleh Costa et al.,
Setiap kelompok tikus diberikan reserpine solution (2 mg / kg) secara intraperitoneal
(Costa et al., 1960). Setelah satu jam, kelompok eksperimen menerima perawatan
masing-masing dan pengurangan reserpine yang diinduksi palpebral ptosis, diare,
hipotermia dan imobilitas diukur pada tikus individu masing-masing kelompok pada
2, 4 dan 8 jam setelah perawatan, masing-masing. Diare dan ptosis diukur dengan skor
dan diberi peringkat antara 0, 1 dan 2 dengan 0 tanpa gejala, 2 untuk gejala berat dan 1
untuk menengah.

2.7. Estimasi biokimia serotonin, noradrenalin dan dopamin

Tikus-tikus digunakan setelah studi farmakodinamik dan tingkat tiga

neurotransmiter yaitu serotonin, noradrenalin, dan dopamin diperkirakan di otak oleh
modifikasi Schlumpf dan metode rekan kerja (Schlumpf et al., 1974). Pertama otak
tikus diekstraksi dan bagian subkortikal otak dipisahkan dari korteks dan ditimbang.
Jaringan yang ditimbang dihomogenisasi menggunakan 4 ml HCl-butanol (0,37: 1)
pada 0° C. Sampel disentrifugasi pada 1150 g pada 0°C selama 10 menit. Aliquot
supernatan (1 ml) dihapus dan ditambahkan ke heptana-HCl (1,5-0,3 ml, 0,1 M) pada
0°C. Setelah 10 menit vortexing, tabung disentrifugasi pada 700g rpmselama 10 menit
pada 0° C. Lapisan berair (0,25 ml) digunakan untuk penentuan neurotransmitter
seperti yang dijelaskan di bawah ini. Untuk estimasi serotonin (5 HT), reagen O-
phthaldialdehyde (0,3 ml, kekuatan-20 mg / 100 ml conc. HCl) ditambahkan ke dalam
fase air (0,25 ml) seperti yang dijelaskan pada tahap sebelumnya dan dipanaskan pada

9
100°C selama 10 menit. Semua sampel dibeli ke suhu kamar dan absorbansi diukur
pada 360–470 nm (eksitasi / emisi) dalam spektrofluorimeter (Spectrofluorimeter
RF5301-PC, Shimadzu, Jepang). Sampel jaringan kosong disiapkan dengan prosedur
yang sama tetapi tanpa penambahan Reagen O-phthaldialdehyde. Untuk estimasi nor-
adrenalin dan dopamin, HCl (0,06 ml, 0,4 M) dan buffer EDTA sodium asetat (0,1 ml,
pH 6,9) ditambahkan ke fase air s (0,25 ml). Selanjutnya, sampel dioksidasi dengan
menambahkan 0,15 ml larutan iodin (0,1 ml dalam etanol). Setelah 2 menit, reaksi
diblokir dengan 0,15 ml larutan Na 2SO3 [Na2SO3 (0,5 g dalam 2 ml H2O) + NaOH (18
mL, 5 M)]. Setelah 15 menit, 0,1 ml asam asetat (10 M) ditambahkan ke campuran
reaksi dan dipanaskan pada 100°C selama 6 menit. Sampel disimpan pada suhu
kamar dan absorbansi tercatat pada 395–485 nm untuk noradrenalin dan 330–375 nm
untuk dopamin. Sampel kosong diperoleh dengan menambahkan bersama semua
reagen oksidasi langkah dalam urutan terbalik (Na2SO solusi sebelum yodium).
Standar internal disiapkan dengan menambahkan 250 ￒ l serotonin, dopamin dan
noradrenalin dalam 0,5 ml air suling HCl butanol (1: 2). Untuk sampel kosong
digunakan reagen internal yang dilarutkan dengan air suling : HCl-butanol (1: 2)

2.8. Farmakokinetik pada darah dan otak

Farmakokinetik pada darah dan otak dilakukan sesuai teknik eksperimental yang
dijelaskan sebelumnya (Al-Ghananeem et al., 2010; Md et al., 2012). Kelompok 1
tikus diberikan DVF PLGA-CN NP (setara dengan 5 mg / kg / hari DVF) secara
intravena dengan vena ekor. Kelompok 2 dan 3 tikus diberikan solusi DVF dan
nanopartikel DVF PLGA-CN (setara dengan 5 mg / kg / hari DVF) secara intranasal.
Studi farmakokinetik dilakukan sampai 72 jam untuk mendapatkan fase eliminasi
yang jelas untuk estimasi parameter farmakokinetik yang berbeda. Darah (100 ￒ l)
dikumpulkan oleh vena ekor dalam tabung yang dilapisi EDTA dan disentrifugasi
pada 3000 rpm untuk 5 menit untuk mendapatkan plasma (50 ￒ l). DVF diekstrak
dari plasma dengan ekstraksi cair dan citalopram digunakan sebagai standar internal
untuk estimasi oleh HPLC (Raut et al., 2003). Untuk koleksi otak, tikus diperlakukan
pada interval waktu jadwal oleh serviks atau koleksi otak tikus dikorbankan pada
interval waktu tertentu dilakukan dislokasi. Otak dibedah dari tengkorak, dicuci
dengan saline normal untuk menghilangkan noda darah dan kotoran, ditimbang dan
disimpan pada 80°C hingga digunakan lebih lanjut. Otak dihomogenisasi oleh

10
jaringan homogeniser dengan 2 ml saline normal. Volume otak yang kecil tissue
homogenate (200 ￒ l) digunakan untuk estimasi konsentrasi DVF di otak.
Konsentrasi plasma puncak (Cmax) dan waktu yang dibutuhkan untuk mencapai
puncak plasma (Tmax) diperoleh dari profil konsentrasi dalam plasma pada waktu
tertentu. Penargetan terapi obat dari DVF PLGA-CN NP setelah pemberian intranasal
diperoleh dengan efisiensi penargetan obat (DTE) yang merupakan rasio nilai
AUCbrain / AUCblood (intranasal): AUCbrain / AUCblood (intravena) (Kumar et al.,
2008a).

2.9. Analisis statistik

Semua percobaan dilakukan tiga kali pengulangan. Hasilnya dinyatakan sebagai

mean ± standard error (SE) untuk semua data in vivo. Hasil lainnya dinyatakan
sebagai mean ± standar deviasi (SD). Perbandingan statistik nilai rata-rata dilakukan
dengan analisis varians (ANOVA) diikuti oleh uji Dunnett. P <0,05 dianggap
signifikan dan P <0,01 dianggap sangat signifikan.

3. Hasil dan Pembahasan

3.1. Persiapan dan karakterisasi DVF yang dibuat nanopartikel dengan PLGA-CN

Nanopartikel PLGA dibuat dengan teknik penguapan pelarut emulsi

menggunakan CN sebagai penstabil. CN digunakan sebagai stabilizer karena
memberikan sifat mukoadhesif ke nanopartikel. Pada langkah pertama, Nanopartikel
PLGA kosong tanpa DVF disintesis dan konsentrasi polimer dan stabilizer
dioptimalkan. Ukuran partikel PLGA nanopartikel ditemukan tergantung pada rasio

11
polimer dan stabilizer. Karena jika CN saja tidak dapat menstabilkan nanopartikel
PLGA oleh karena itu campuran CN dan PVA digunakan untuk persiapan NP (Wang
et al., 2013). Placebo yang dioptimalkan nanopartikel memiliki PLGA: CN + rasio
PVA 1: 1 (CN: PVA = 1: 1) dengan ukuran partikel 151,5 ± 7,3 nm, PDI 0,201 ± 0,11
dan potensi zeta +42,97 ± 7,32 mV. Di langkah berikutnya, nanopartikel DVF dibuat
dengan melarutkan DVF dalam fasa polimer dan menggunakan kondisi / konsentrasi
yang sama seperti dioptimalkan untuk plasebo nanopartikel. Konsentrasi DVF
dioptimalkan (DVF: PLGA 1: 3) untuk ukuran partikel <200 nm (Tabel 1). Beberapa
penelitian telah menunjukkan nanopartikel yang lebih kecil dari 200 nm mudah
dihantarkan melalui membran penciuman transeluler oleh neuron olfaktorius ke otak
(Kumar et al., 2008a; Md et al., 2012). Ukuran partikel rata-rata nanopartikel DVF
PLGA-CN (172.5 ± 10.2) (Gambar. 1a) ditemukan lebih besar dari nanopartikel tanpa
zat aktif ( DVF ) karena peningkatan konsentrasi fase internal / fase polimer. Gambar
TEM dari Nanopartikel DVF PLGA-CN juga menunjukkan bahwa ukuran partikel-
partikel ini adalah <200 nm (Gambar 1c). Nilai potensial zeta rata-rata juga ditemukan
lebih rendah daripada nanopartikel plasebo karena DVF dimediasi meningkatkan
muatan negatif dari emulsi. Namun, Nilai potensial zeta 35,63 ± 8,25 mV (pH 7,4,
Gambar 1b) mewakili sistem yang stabil. % DL dan% EE ditemukan menjadi 30,8 ±
3,1 dan 76,4 ± 4.2, masing-masing yang menunjukkan bahwa DVF dapat terperangkap
dalam nanopartikel PLGA-CN. Efikasi yang mengikat musin untuk dioptimalkan
PLGA-CN NPs dan DVF PLGA NPs ditemukan 64,0 ± 2,7% dan 59,6 ± 1,5%,
masing-masing. Penurunan kekuatan mukoadhesif dapat dijelaskan oleh muatan
positif bersih yang lebih rendah dari nanopartikel DVF PLGA-CN dibandingkan
dengan PLGA-CN nanopartikel. Pelepasan vitro dari DVF dari DVF yang
dioptimalkan Nanopartikel PLGA-CN dilakukan pada pH 7,4 (fisiologis pH) dan pH
6.0 (pH hidung mukosa) (Gambar 1d). Itu menunjukkan biphasic pola dengan
pelepasan obat 30% (pH 7,4) dan 34% (pH 6,0) dalam waktu 1 jam diikuti oleh rilis
berkelanjutan karakteristik untuk lebih lanjut dari 24 jam. Pelepasan persentase
kumulatif DVF dari DVF Nanopartikel PLGA-CN adalah 77,21 ± 3,87% (pH 7,4) dan
76,32 ± 3,54% (pH 6,0) selama periode 24 jam. Obat meledak awal pelepasan
kemungkinan besar karena pelepasan DVF yang dilekatkan secara perlahan ke
permukaan nanopartikel sedangkan rilis lambat kemudian mungkin karena rilis DVF
dari inti nanopartikel PLGA-CN oleh pembengkakan dan hidrasi matriks PLGA NP.

12
 Hasil penelitian menunjukkan bahwa DVF secara efektif terperangkap di dalam
Matriks NP PLGA-CN; Namun, tidak ada perbedaan di antara keduanya profil
pelepasan mereka pada pH 7,4 dan pH 6,0.

3.2. Studi farmakodinamik

FST adalah tes praklinis yang paling banyak digunakan untuk menilai khasiat
antidepresan dari kelompok terapeutik eksperimental pada hewan uji. Sejak
perkembangannya pada awal 1970-an, FST telah digunakan untuk menilai aktivitas
antidepresan senyawa baru (Lucki, 1997). Pada hewan percobaan dengan dipaksa
berenang paksa di lingkungan yang tak terhindarkan di mana setelah perjuangan awal
tikus melewati postur yang tidak bergerak dan mengapung secara submisif dengan
kepala di atas air tanpa ada gerakan yang lain. Posrsolt dan temannya menyarankan
bahwa imobilitas ini secara selektif dikurangi oleh berbagai obat antidepresan (Porsolt
et al., 1978; Lucki, 1997). Tiga parameter FST dengan aktivitas lokomotor dievaluasi
untuk signifikansi hewan percobaan. Regimen pengobatan antidepresan kronis untuk

13
16hari dilakukan karena diketahui bahwa efek terapeutik antidepresan membutuhkan
beberapa hari atau minggu untuk berkembang (Kitadaet al., 1981; Berney, 2005).
Administrasi obat selama 16 hari sejalan dengan prosedur yang dilaporkan
sebelumnya oleh Reneric et al.(2002). Kelompok kontrol yaitu tikus yang depresi
ditampilkan paling tinggi imobilitas dan berenang, memanjat dan hitungan lokomotif
terendah. Perlakuan kronis dengan DVF PLGA-CN NPs secara signifikan mengurangi
imobilitas (P <0,01) dan meningkatkan renang waktu (P <0,01), waktu pendakian (P
<0,05) dan hitungan lokomotor (P <0,01) dibandingkan dengan kelompok kontrol
(Gbr.2).

Penelitian ini
menunjukkan bahwa
DVF PLGA-CN NP
menyediakan tingkat
terapeutik
berkelanjutan DVF di
otak yang mengurangi
gejala depresi. Sebuah
studi masa lalu telah
mengkonfirmasi bahwa peningkatan kecepatan berenang dan perilaku pendakian di
FST hanya terjadi ketika pengobatan antidepresan meningkatkan tingkat
neurotransmiter yaitu tingkat serotonin, norepinefrin dan dopamin di terminal saraf
(Rénéric dan Lucki, 1978). Di sisi lain perawatan dengan solusi DVF menurunkan
imobilitas dan meningkatkan waktu berenang (P <0,05) tetapi tidak meningkatkan
waktu pendakian dan jumlah lokomotor pada tingkat yang signifikan dibandingkan
dengan kontrol tertekan. Ini mungkin karena waktu tinggal yang singkat. Solusi DVF
di rongga hidung sebagai hasilnya; terapi berkelanjutan tingkat DVF tidak
dipertahankan di otak untuk efek antidepresan yang optimal. Pengiriman oral dari
DVF menghasilkan efek antidepresan yang lebih rendah daripada DVF (i.n.) dan DVF
PLGA-CN NPs. Namun DVF (oral) menurunkan imobilitas tikus (P <0,05), tetapi
tidak bisa meningkatkan jumlah renang, pendakian dan lokomotor ke tingkat yang

14
signifikan. Ini mungkin karena efek gabungan dari penetrasi yang buruk dari DVF ke
otak, degradasi di g.i.t, terpadapat first pass metabolism dan transporter P-
glikoprotein penghabisan lainnya yang ada di BBB. Berbagai penelitian menunjukkan
bahwa otak menyerap obat-obatan rendah jika mengalami metabolisme dan / atau
hilang oleh transporter di BBB (Hermann dan Bassetti, 2007). Hasil ini konsisten
dengan temuan sebelumnya yang telah ditunjukkan bahwa pemberian obat oral
mengarah ke aktivitas antidepresan yang lebih rendah dibandingkan dengan intranasal
hidung untuk penghantaran obat ke otak (Alam et al., 2012; Haque et al., 2014).

RRT juga merupakan salah satu obat yang paling banyak digunakan model
depresi (Bourin et al., 1983). Reserpin telah diketahui secara ireversibel memblokir
transporter monoamina vesikular (VMAT) dan mengganggu transmisi monoaminergik
di otak (Henry dan Scherman, 1989). Pemblokiran transporter VMAT mencegah
serapan vesikular dari monoamina dan selanjutnya di rilis celah sinaptik untuk eksitasi
saraf sinaptik (Henry dan Scherman, 1989). Menipisnya monoamina di terminal saraf
mengarah ke gejala perilaku seperti hipotermia, ptosis, imobilitas, diare (Bourin et al.,
1983; Henry dan Scherman, 1989). Tiga formulasi mengurangi reserpin imobilitas
yang diinduksi pada tikus tetapi hanya solusi DVF (i.n., 2 h) dan DVF NP PLGA-CN
(i.n., 2 jam, 4 jam) yang dapat mengurangi ke tingkat yang lebih signifikan (P <0,05)
(Gambar 3A). Demikian pula, semua tiga formulasi hipotermia yang diinduksi
reserpin pada tikus tetapi perbedaan ini tidak signifikan dibandingkan dengan
kelompok kontrol (Gambar 3B). Namun, ptosis dan diare yang dihasilkan oleh
reserpin lemah hanya dibantah oleh DVF PLGA-CN NP (Gambar 3A dan B). Dengan
demikian, formulasi ini menunjukkan lebih baik dan lebih membedakan aktivitas
antidepresan pada model FST kronis daripada obat yang diinduksi model depresi.Oleh

15
karena itu, kadar monoamina dapat ditentukan di otak tikus yang menjalani FST

3.3. Studi biokimia

Sejumlah besar teori, hipotesis dan mekanisme diusulkan untuk depresi. Teori
yang paling banyak diterima untuk patogenesis depresi adalah hipotesis monoamina,
di mana defisiensi fungsional dari monoamina yaitu serotonin, noradrenalin dan
dopamin di CNS telah dikaitkan dengan gejala depresi (Lenox dan Frazer, 2010).
Sebagian besar antidepresan saat ini meningkatkan konsentrasi neurotransmiter di otak
(Richelson, 1990). Oleh karena itu, kami menyelidiki perubahan dalam kadar
monoamina otak dan kadar monoamina otak mereka korelasi dengan aktivitas
antidepresan dari kelompok yang berbeda tikus digunakan di FST. Fig. 4
menunjukkan konsentrasi serotonin, norepinefrin dan dopamin di pos otak FST.
Hasilnya menunjukkan bahwa intranasal dari nanopartikel DVF PLGA-CN
meningkatkan serotonin (P <0,01) dan noradrenalin (P <0,05) secara signifikan
dibandingkan dengan kontrol depresi, meskipun tingkat noradrenalin dipulihkan lebih
efektif.

16
 Tingkat dopamin juga ditemukan meningkat pada tikus yang diobati dengan NPV
PLGACN NP tetapi secara statistik tidak signifikan dibandingkan dengan kontrol
depresi (p> 0,05). Hasil ini masuk kesepakatan dengan laporan yang diterbitkan yang
menunjukkan bahwa monoamina terutama serotonin dan noradrenalin berkurang saat
kondisi stres seperti yang diamati pada tikus yang depresi (Arnsten, 2009).
Nanopartikel PLGA-CN memfasilitasi penghantaran DVF ke otak dan DVF mencegah
reuptake serotonin dan noradrenalin meningkatkan konsentrasi Nanopartikel DVF
PLGA-CN di terminal saraf. DVF PLGA-CN NP secara efektif membalikkan tingkat
monoamina neurotransmiter pada tikus depresi kronis dan karena hal ini menunjukkan
aktivitas berenang, memanjat dan lokomotor yang lebih baik. DVF (i.n.) pengobatan
meningkatkan kadar noradrenalin secara moderat, tetapi gagal meningkatkan kadar
serotonin dan dopamin secara signifikan. Di sisi lain DVF (oral) tidak dapat membawa
perubahan signifikan (p> 0,05) pada tingkat tiga neurotransmiter yang memiliki
korelasi baik dengan hasil studi farmakodinamik. Berdasarkan hasil ini, dapat
disimpulkan bahwa depresi kronis pada tikus paling dipengaruhi oleh perubahan
tingkat noradrenalin di otak dan paling tidak terpengaruh terhadap perubahan tingkat
dopamin. Hasil ini sesuai sama dengan penelitian sebelumnya yang telah
menunjukkan perilaku depresi oleh syok tak terkendali lebih sensitif terhadap
perubahan tingkat noradrenalin di otak dari pada serotonin atau dopamine (Weiss et
al., 1981). Lebih lanjut tingkat DVF di otak dan sirkulasi sistemik diidentifikasi untuk
memperkuat hal ini untu di klaim.

3.4. Farmakokinetik dalam darah dan otak

17
 Konsentrasi DVF di otak dan plasma darah dianalisis pada titik waktu yang
berbeda sampai 72 jam setelah pemberian dosis DVF PLGA-CN nanopartikel (i.n.),
solusi DVF (i.n) dan DVF PLGA-CN nanopartikel (i.v.). Konsentrasi DVF yang lebih
tinggi ditemukan di otak , homogenasi ketika nanopartikel DVF PLGA-CN diberikan
intranasal (954,56 ± 126,63 ng / ml) dibandingkan dengan administrasi IV (396,91 ±
64,34 ng / ml) (Gbr. 5). Parameter farmakokinetik lainnya seperti paruh hidup, AUC,
dan AUMC juga ditemukan lebih tinggi di otak untuk DVF PLGA-CN nanopartikel
(i.n.) dari nanopartikel DVF PLGA-CN (i.v.). Juga, tingkat eliminasi nanopartikel
DVF PLGA-CN (i.n.) ditemukan secara signifikan lebih rendah (p <0,05) di otak
(Tabel 2). Pada saat awal kondisi di otak menunjukkan konsentrasi jaringan / profil
waktu terlihat sama untuk semua tiga formulasi tetapi hal ini berbeda secara signifikan
pada titik waktu selanjutnya. Namun DVF PLGA-CN nanopartikel (i.v.) mampu
mempertahankan DVF di otak untuk waktu yang lama tetapi pada tingkat yang jauh
lebih rendah daripada Nanopartikel DVF PLGA-CN (i.n.)

18
 Hasil ini membuktikan bahwa PLGA jalur transportasi otak dan mempertahankan
konsentrasi terapeutik yang efektif melampaui 72 jam di otak. Karena itu,
penghantaran obat melalui hidung intranasal ke otak merupakan strategi yang lebih
baik untuk non-invasif pengiriman DVF ke otak. Literatur menunjukkan bahwa agen
terapeutik yang diberikan secara intranasal mencapai otak melalui mekanisme
ekstraseluler dan intraseluler oleh penciuman dan jalur saraf trigeminal (Illum, 2000;
Thorne dan Frey, 2001). Sejumlah penelitian telah secara komprehensif menunjukkan
hal itu nanopartikel mukoadhesif dapat mengangkut obat ke otak oleh hidung unik ke
jalur transportasi otak dan mempertahankan konsentrasi terapeutik yang efektif untuk
waktu yang lama di otak (Kumar et al., 2008a, b; Al-Ghananeem et al., 2010; Md et
al., 2012). Oleh karena itu, DVF dienkapsulasi dalam polimer nanopartikel tersusun
dari PLGA dan CN mukoadhesif.

Sistem nanopartikulat PLGA-CN meningkatkan waktu retensi DVF di rongga

hidung untuk mempertahankan konsentrasi terapeutik yang efektif di otak. Selain itu,
CN digunakan dalam formulasi hidung ke otak telah ditemukan untuk meningkatkan
transportasi paraseluler melalui persimpangan ketat epitel karena interaksi khusus CN
dengan baik melalui jalur protein kinase C atau interaksi elektrostatik dengan residu
asam sialic bermuatan negatif pada epitel mukosa sel (Artursson et al., 1994; Thorne
et al., 2004). Nanopartikel DVF PLGACN (i.n.) memperbaiki profil farmakokinetik
DVF di otak yang memulihkan tingkat neurotransmitter monoaminergik di otak dan
meningkatkan farmakodinamik. Hasil yang paling mengejutkan diperoleh setelah
administrasi DVF (i.n.). Meskipun tingkat penyerapannya di otak lebih cepat dari
nanopartikel DVF PLGA-CN, itu sangat singkat waktu tinggal di otak kemungkinan
besar karena pembersihan mukosiliar DVF dari rongga hidung. Penyerapan cepat bisa
dijelaskan atas dasar berat molekul kecil dari DVF (399,48 Da) dan nilai log P 2,26
yang memfasilitasi permeasinya melalui persimpangan sel-sel epitel dan transportasi
penciuman ke melalui jalur saraf trigeminal.

Dalam sirkulasi sistemik, nanopartikel DVF PLGA-CN hadir dalam konsentrasi

plasma puncak yang lebih rendah (4781.33 ± 561.25 ng / ml) daripada DVF PLGA-
CN nanopartikel (i.v.) (16243.67 ± 4445.15 ng / ml) (Gbr. 6).

19
 Hasil ini selaras dengan studi sebelumnya yang telah menunjukkan bahwa obat
dapat diserap ke dalam sirkulasi sistemik oleh daerah pernapasan dari rongga hidung
tetapi pada tingkat yang jauh lebih rendah daripada rute intravena (Kumar et al.,
2008a; Md et al., 2012). DVF (i.n.) juga terdeteksi di luar 24 jam dalam plasma
karena penyerapan terus menerus dari daerah pernapasan, tetapi berdasarkan pada
konsentrasi plasma dapat disimpulkan bahwa sebagian besar dosis telah ditingkatkan
oleh pembersihan mukosiliar. Otak / darah rasio DVF ditemukan lebih tinggi untuk
nanopartikel DVF PLGA-CN (i.n.) di hampir semua titik waktu. Berdasarkan nilai
AUC plasma mereka, bioavailabilitas sistemik dari nanopartikel DVF PLGA-CN
(i.n.) dan DVF (i.n.) ditemukan masing-masing menjadi 56,35% dan 23,70%. DTE
menunjukkan partisi rata-rata DVF antara otak dan plasma darah dengan waktu
sedangkan DTP singkatan dari persentase DVF langsung dibawa ke otak melalui
hidung menuju jalur otak. DTE dan DTP untuk DVF PLGA-CN nanopartikel (i.n.)
dihitung untuk menjadi 544,23 dan 81,62, dan untuk DVF (i.n.) adalah 202,41 dan
50,59, masing-masing. Nilai DTE dan DTP yang lebih besar dari DVF PLGA-CN
nanopartikel menunjukkan bahwa mereka memiliki efisiensi penargetan
penghantaran obat ke otak yang lebih baik daripada dua formulasi lainnya.

4. Kesimpulan

Dalam penelitian ini, sistem pengiriman obat PLGA-CN nanosized dioptimalkan

untuk pengiriman otak DVF. Nanopartikel DVF PLGACN dioptimalkan secara
signifikan meningkatkan penyerapan DVF ke otak. Terbukti dari farmakodinamik
dan tingkat monoamina di otak, nanopartikel DVF PLGA-CN efektif terbalik gejala
depresi pada tikus. Hasil ini juga menunjukkan penghantaran obat melalui hidung ke

20
otak adalah pilihan non-invasif yang layak untuk terapi depresi dan gangguan otak
lainnya. Namun, formulasi ini memerlukan studi praklinis yang ketat pada model
hewan yang lebih tinggi untuk memprediksi tefek terapi pada manusia. Upaya yang
signifikan juga dibutuhkan untuk pengembangan perangkat pengiriman itudapat
menyimpan formulasi secara eksklusif ke daerah penciuman dari nos.

DAFTAR PUSTAKA

Alam, M.I., Baboota, S., Ahuja, A., Ali, M., Ali, J., Sahni, J.K., 2012. Intranasal
administration of nanostructured lipid carriers containing CNS acting drug:
pharmacodynamic studies and estimation in blood and brain. J. Psychiatr.
Res.46, 1133–1138.

Al-Ghananeem, A.M., Saeed, H., Florence, R., Yokel, R.A., Malkawi, A.H., 2010.
Intranasal drug delivery of didanosine-loaded chitosan nanoparticles for brain
targeting; an attractive route against infections caused by aids viruses. J. Drug
Target. 18, 381–388.

Arnsten, A.F.T., 2009. Stress signalling pathways that impair prefrontal cortex
structure and function. Nat. Rev. Neurosci. 10, 410–422. Artursson, P.,
Lindmark, T., Davis, S.S., Illum, L., 1994. Effect of chitosan on the
permeability of monolayers of intestinal epithelial cells (Caco-2). Pharm. Res.
11, 1358–1361.

21
Berney, P., 2005. Dose-response relationship of recent antidepressants in the
shortterm treatment of depression. Dialogues Clin. Neurosci. 7, 249–262.
Bourin, M., Poncelet, M., Chermat, R., Simon, P., 1983. The value of the
reserpine test in psychopharmacology. Arzneimittelforschung 33, 1173–1176.

Costa, E., Garattini, S., Valyelli, L., 1960. Interactions between resperpine,
chlorpromazine and imipramine. Experientia 16, 461–463.

Haque, S., Md, S., Sahni, J.K., Ali, J., Baboota, S., 2014. Development and
evaluation of brain targeted intranasal alginate nanoparticles for treatment of
depression. J. Psychiatr. Res. 48, 1–12.

Henry, J., Scherman, D., 1989. Radioligands of the vesicular monoamine transporter
and their use as markers of monoamine storage vesicles. Biochem. Pharmacol.
38, 2395–2404.

Hermann, D.M., Bassetti, C.L., 2007. Implications of ATP-binding cassette

transporters for brain pharmacotherapies. Trends Pharmacol. Sci. 28, 128–134.

Illum, L., 2000. Transport of drugs from the nasal cavity to central nervous system.
Eur. J. Pharm. Sci. 11, 1–18.

Kilts, C.D., 2003. Potential new drug delivery system for antidepressants: an
overview. J. Clin. Psychiatry 64, 31–33.

Kircanski, K., Joormann, J., Gotlib, I.H., 2012. Cognitive aspects of depression.
Wiley Interdiscip. Rev. Cogn. Sci. 3, 301–313

22