Diterjemahkan dari bahasa Inggris ke bahasa Indonesia - www.onlinedoctranslator.

com

Jurnal Pra-bukti

Interaksi antioksidan -tokoferol, -oryzanol dan fitosterol dalam minyak dedak

padi

Ruru Liu, Ying Xu, Ming Chang, Lin Tang, Mengyao Lu, Ruijie Liu,
Qingzhe Jin, Xingguo Wang

PII: S0308-8146(20)32293-7
DOI: https://doi.org/10.1016/j.foodchem.2020.128431
Referensi: FOCH 128431

Untuk tampil di: Kimia Makanan

Tanggal diterima: 29 April 2020

Tanggal Revisi: 22 September 2020
Tanggal diterima: 16 Oktober 2020

Silakan kutip artikel ini sebagai: Liu, R., Xu, Y., Chang, M., Tang, L., Lu, M., Liu, R., Jin, Q., Wang, X., Interaksi antioksidan
dari -tokoferol, -oryzanol dan pitosterol dalam minyak dedak padi, Kimia Makanan (2020), doi: https://doi.org/10.1016/
j.foodchem.2020.128431

Ini adalah file PDF dari artikel yang telah mengalami penyempurnaan setelah diterima, seperti penambahan halaman sampul
dan metadata, dan pemformatan agar mudah dibaca, tetapi ini belum menjadi versi rekaman yang pasti. Versi ini akan
menjalani copyediting, penyusunan huruf dan tinjauan tambahan sebelum diterbitkan dalam bentuk akhirnya, tetapi kami
menyediakan versi ini untuk memberikan visibilitas awal artikel. Harap dicatat bahwa selama proses produksi, kesalahan
dapat ditemukan yang dapat mempengaruhi konten, dan semua penolakan hukum yang berlaku untuk jurnal terkait.

© 2020 Elsevier Ltd. Semua hak dilindungi undang-undang.

1 Interaksi antioksidan -tokoferol, -oryzanol dan fitosterol dalam minyak dedak padi

3 Ruru Liu1, Ying Xu1, Ming Chang, Lin Tang, Mengyao Lu, Ruijie Liu*, Qingzhe Jin, Xingguo

4 Wang

6 Pusat Penelitian Teknik Nasional Pangan Fungsional, Pusat Inovasi Kolaborasi

7 Keamanan Pangan dan Kontrol Kualitas di Provinsi Jiangsu, Sekolah Ilmu dan Teknologi Pangan,

8 Universitas Jiangnan, Wuxi, Jiangsu, PR China.

10 1 Para penulis ini memberikan kontribusi yang sama untuk pekerjaan ini dan harus dianggap sebagai penulis pertama.

* Alamat penulis yang sesuai. Sekolah Ilmu dan Teknologi Pangan, Universitas Jiangnan,
11

1800 Lihu Road, Distrik Binhu, Wuxi, Jiangsu 214122, Tiongkok.

12

Telp: + 86 510 85876799; Faks: + 86 510 85876799

13

Alamat email: ruijieliu-2007@hotmail.com (Ruijie Liu)

14
15 Abstrak: Dalam penelitian ini, minyak dedak padi murni (RBO) digunakan sebagai model matriks lipid untuk mempelajari

16 kapasitas antioksidan individu dan biner dari konstituen minor (α-tokoferol, -oryzanol dan

17 fitosterol) ditambahkan pada konsentrasi dan rasio yang berbeda. Hasilnya mengungkapkan bahwa konsentrasi

18 dipengaruhi pada stabilitas oksidasi dan kapasitas scavenging, sedangkan rasio terutama mempengaruhi jenis

19 interaksi atau tingkat sinergisme atau antagonisme. Itu penting untuk mengontrol

20 konsentrasi -tokoferol, yang akan menurun di bawah konsentrasi tinggi. Disamping

21 penghambatan fitosterol pada -tokoferol dan pembentukan ikatan hidrogen antara -oryzanol

22 dan fitosterol dispekulasikan oleh interaksi konstituen minor ini. Pekerjaan ini membantu untuk

23 pilih kombinasi yang efisien untuk menstabilkan anti-oksidasi RBO yang diperkaya nutrisi atau memberikan

24 saran untuk mempertahankan moderat konstituen kecil di RBO.

25

26 Kata kunci: Interaksi antioksidan; Konsentrasi; konstituen kecil; Perbandingan; minyak dedak padi
27 1. Perkenalan

28 Sebagai salah satu dari tiga minyak nabati bernilai tinggi yang direkomendasikan oleh Kesehatan Dunia

29 Organisasi, minyak dedak padi (RBO) mengandung beberapa konstituen kecil makanan seperti tokoferol,

30 squalene, pitosterol, polifenol, dan -oryzanol (Liu et al., 2019). Konstituen kecil ini

31 diberkahi minyak nabati dengan aktivitas fisiologis yang sangat baik (Ballus, Meinhart, de Souza Campos Jr

32 & Godoy, 2015). -tokoferol adalah antioksidan alami yang penting dalam minyak nabati, yang tidak hanya

33 menghambat produksi radikal bebas, tetapi juga menghambat oksigen singlet (Lars, Kathleen & Volker,

34 2010). Sebagai konstituen unik dalam RBO, -oryzanol dicirikan oleh pemulung radikal bebas

35 dan menghambat peroksidasi lipid (Claudia, Massimo, Cristina & Luisella, 2005). Fitosterol adalah

36 konstituen minor dalam minyak dengan struktur mirip dengan kolesterol, terutama -sitosterol, campesterol,

37 dan stigmasterol adalah konstituen membran tanaman yang efektif mengurangi LDL serum dan

38 risiko aterosklerotik (Veličkovska, Brühl, Mitrev, Mirhosseini & Matthäus, 2015). Namun, di

39 penelitian terbaru, hubungan dosis-efek yang buruk antara konstituen minor dan antioksidan

40 kapasitas minyak diamati (Liu et al., 2019; Liu et al., 2020; Siger, Kaczmarek & Rudzińska,

41 2015). Interaksi antara konstituen minor ini mungkin menjadi alasan utama untuk ini

42 fenomena.

43 Dalam beberapa tahun terakhir, untuk menemukan antioksidan komposit yang lebih efektif, tentukan apakah

44 ada interaksi antara antioksidan melalui in vivo atau in vitro aktivitas antioksidan memiliki

45 menjadi tren penelitian. Sinergisme adalah fenomena di mana sejumlah senyawa dalam

46 kombinasi menghasilkan efek antioksidan yang ''lebih'' signifikan daripada jumlah sederhana dari efek terpisah mereka.

47 Antagonisme dapat didefinisikan juga dengan mengganti ''lebih'' dengan ''kurang'', sedangkan efek aditif

48 dapat didefinisikan dengan mengganti ''lebih'' dengan ''sama'' (Becker, Nissen & Skibsted, 2004).
49 Studi sebelumnya telah menemukan bahwa konsentrasi dan rasio adalah faktor utama yang mempengaruhi

50 interaksi antara antioksidan. Schroeder, Becker dan Skibsted (2006) membuktikan bahwa ketika rasio

51 -tokoferol dan -karoten dalam liposom dekat, efek sinergis menghilang dan

52 efek antagonis terjadi. Menurut Becker, Ntouma dan Skibsted (2006), kombinasi

53 quercetin dan astaxanthin menunjukkan efek antagonis yang tinggi pada konsentrasi tinggi, sedangkan aditif

54 efek muncul pada konsentrasi rendah. Selain itu, Marinova, Toneva dan Yanishlieva (2008)

55 ditemukan ketika rasio molar -tokoferol dan myricetin sama dan total

56 konsentrasi campuran kurang dari 105, efek sinergis terkuat dicapai.

57 Oleh karena itu, kecuali rasio, konsentrasi total campuran juga penting. Karena faktanya

58 bahwa kemampuan radikal bebas antioksidan biasanya dipengaruhi oleh pelarut,

59 interaksi antara antioksidan juga bervariasi dengan sistem reaksi. Untuk campuran -tokoferol

60 dan karotenoid, efek sinergis ditemukan dengan deteksi pelarut polar (Kotíková, Lachman,

61 Hejtmánková & Hejtmánková, 2011), dan efek antagonis ditemukan oleh pelarut non-polar

62 (Karmowski, Enke, Killenberg & Böhm, 2015), sedangkan efek aditif diamati oleh kutub dan

63 pencampuran pelarut non-polar (Grandois, Guffond, Hamon, Marchioni & Werner, 2017). Dalam anhidrat

64 medium polar etanol dan medium etil asetat, Zhang et al. (2019a, 2019b) menemukan antagonistik

65 efek -tokoferol, -oryzanol dan pitosterol pada konsentrasi yang berbeda. Penghambatan -

66 regenerasi tokoferol dan ikatan hidrogen adalah alasan utama untuk efek antagonis.

67 Namun, interaksi konstituen minor dalam sistem pangan yang sebenarnya tidak dapat dicerminkan oleh

68 hasil media ideal tersebut. Oleh karena itu, perlu dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai antioksidan tersebut

69 interaksi konstituen kecil di RBO, dan mengeksplorasi pengaruh konsentrasi yang berbeda dan

70 rasio interaksi dalam sistem RBO.

71 Tujuan dari penelitian ini adalah (a) untuk mengetahui potensi sinergis, antagonis, dan

72 efek aditif dari campuran biner -tokoferol, -oryzanol dan pitosterol di RBO, coba lebih lanjut

73 untuk menjelaskan mekanisme yang mungkin bertanggung jawab atas efek sinergis dan (b) untuk mengetahuinya

74 kombinasi terbaik dengan efek besar pada anti-oksidasi RBO, serta (c) untuk mempelajari

75 pengaruh konsentrasi yang berbeda dan rasio pada interaksi konstituen kecil di RBO.

76 2. Bahan-bahan dan metode-metode

77 2.1 Bahan

78 RBO diperoleh dari Delekang Food Co., Ltd (Zhejiang, China). Fitosterol (tiga utama

79 senyawa, termasuk stigmasterol [5%], -sitosterol [75%] dan campesterol [15%]), -tokoferol

80 standar, dan 2, 2-difenil-1-pikrilhidrazil (DPPH) dibeli dari Sigma-Aldrich

81 (Bellefonte, PA, AS). Campuran standar -oryzanol (tiga senyawa utama, termasuk

82 cycloartenylferulate [39%], 24-methylene cycloartanyl ferulate [50%] dan campesterferulate [6%])

83 dibeli dari Toronto Research Chemicals (Kanada). Etil asetat tingkat analitik adalah

84 diperoleh dari Sinopharm Medicine Holding Co., Ltd. (Shanghai, Cina).

85 2.2 Penentuan kandungan konstituen minor

86 Analisis tokoferol dilakukan dengan menggunakan HPLC (1525; Waters Corporation, USA)

87 dilengkapi dengan detektor ultraviolet (mode 2996) pada kolom silika, yang dielusi dengan heksana:

88 isopropanol (98.5:1.5, v/v) pada laju aliran 0,8 mL/menit, tokoferol terdeteksi pada 295 nm (Marfil

89 dkk., 2011). Kandungan oryzanol ditentukan menurut metode sebelumnya (Chen, Jin, Zheng,

90 Hu & Jin, 2014). Secara singkat, minyak dilarutkan dalam isopropanol dan 20 L-alikuot dianalisis dengan

91 HPLC menggunakan kolom C18kandielusi dengan etanol pada laju alir 0,8 mL/menit dan ultraviolet

92 detektor diatur pada 324 nm digunakan. Analisis sterol dilakukan sesuai prosedur
93 diterbitkan sebelumnya oleh Li et al. (2011) menggunakan kromatografi gas-spektrometri massa (Thermo

94 Fisher Scientific, Italia). Senyawa fenolik total ditentukan menggunakan metode Folin-Ciocalteu

95 (Gouvinhas, Machado, Sonia, Lopes, Martins-lopes & Barros, 2014) dengan absorbansi yang diukur

96 pada 765 nm melalui spektrofotometer UV-tampak (Alpha-1500, Shanghai Lab-Spectrum

97 Instrumen Co, Ltd, Shanghai). Hasilnya dinyatakan sebagai miligram setara asam galat

98 per kilogram (mg GAE/kg), menggunakan kurva standar asam galat.

99 2.3 Persiapan RBO dengan menghilangkan konstituen minor

100 RBO dimurnikan menggunakan prosedur yang diterbitkan sebelumnya menurut Kiritsakis dan Dugan

101 (1985) dengan beberapa modifikasi. Pemurnian dilakukan dengan menggunakan kromatografi kolom

102 teknik. Pengisi dari bawah ke atas adalah: silika gel: karbon aktif: alumina: asam silikat:

103 magnesium silikat (1: 1,5: 4: 4: 4,5). RBO yang dimurnikan tidak berwarna, tidak berbau dan tidak berasa. Setelah

104 pemurnian, total fenol, -tokoferol dan -oryzanol di RBO ditemukan di bawah kuantifikasi

105 tingkat (<0,5 mg/kg).

106 2.4 Persiapan sampel

107 Larutan stok -tokoferol, -orizanol dan fitosterol dilarutkan dalam etil asetat sampai akhir

108 konsentrasi 10.000 mg/kg, 20.000 mg/kg dan 20.000 mg/kg masing-masing, dan disimpan pada -4~-8

109 HaiC. Mengambil RBO murni sebagai media, pengaturan konsentrasi tiga konstituen minor adalah

110 berdasarkan kandungan aktual dari konstituen minor dalam RBO yang dijual di pasar. Persiapan

111 sampel RBO tunggal adalah untuk secara akurat menimbang 10,00 ± 0,01 g RBO murni ke dalam tabung sentrifus,

112 dan kemudian menambahkan tiga larutan stok konstituen minor masing-masing, sehingga konsentrasi akhir

113 dari tiga konstituen minor adalah sebagai berikut: -tokoferol (50; 100; 200; 400; 500 mg/kg), -

114 oryzanol (2000; 4000; 8000; 10.000; 12.000 mg/kg) dan pitosterol (2000; 4000; 8000; 10.000;
115 12.000 mg/kg). Selain itu, komposisi dan konsentrasi campuran seperti yang ditunjukkan pada Tabel

116 1.

117 2.5 Metode Indeks Stabilitas Oksidasi (Uji Rancimat)

118 Uji Rancimat dilakukan menurut Becker et al. (2006) dengan sedikit modifikasi.

119 Periode Induksi Rancimat (IP) diukur dengan peralatan Rancimat 679 dari Metrohm

120 Nordic ApS (Glostrup, Denmark), pada 110 HaiC dan 20 L/h aliran udara. Hasil akhir antioksidan

121 disajikan sebagai periode induksi tambahan (aIP dalam jam):

122 sebuahAKU P - AKU Pdengan antioksidan - AKU Ptanpa antioksidan (1)

123 Berdasarkan pengukuran sampel minyak dengan kombinasi antioksidan equimolar,

124 kemungkinan interaksi dapat ditentukan. Efek sinergis diamati ketika

125 sebuahAKU Pantioksidan campuran (1 - 2) - aIPantioksidan (1) - aIPantioksidan (2) (2)

126 Bila sama, itu berarti efek aditif; bila kurang dari, itu adalah efek antagonis. Teoritis

127 nilai dan nilai eksperimen dalam metode evaluasi di atas harus memiliki perbedaan statistik dalam

128 matematika.

129 2.6 Penentuan kapasitas penangkal radikal bebas DPPH

130 2.6.1 Metode penangkal radikal bebas DPPH

131 Metode Espín, Soler-Rivas dan Wichers (2000) sedikit dimodifikasi, dan 0,1 mmol/L

132 DPPH. larutan dibuat dengan etil asetat. Sampel RBO ditimbang secara akurat 0,10 ±

133 0,001 g dalam tabung sentrifus, dan 4,0 mL etil asetat ditambahkan untuk melarutkan sampel minyak sepenuhnya.

134 2,0 mL larutan sampel dicampur dengan 2,0 mL larutan DPPH·, dan campuran direaksikan dalam

135 gelap pada suhu kamar selama 30 menit, absorbansi konstan pada 517 nm ditetapkan, menggunakan a

136 UV-1700 PharmaSpec UV–Vis spektrofotometer (Shimadzu, Jepang). Pemulungan eksperimental

137 kapasitas (ESC) dihitung dari persamaan berikut:

138 ESC = [ 1 ( SEBUAH  kan SEBUAH ) SEBUAH0 ] × 100% (3)

139 Dimana0, SEBUAHSaya, SEBUAHJ adalah nilai absorbansi 2,0 mL etil asetat + 2,0 mL larutan DPPH,

140 2,0 mL larutan sampel + 2,0 mL larutan DPPH dan 2,0 mL larutan sampel + 2,0 mL etil asetat,

141 masing-masing.

142 2.6.2 Perhitungan efek sinergis (SEs) dari campuran antioksidan

143 Menurut Luís, Duarte, Pereira dan Domingues (2018), kapasitas pemulung teoritis

144 (TSC) didefinisikan sebagai jumlah kapasitas scavenging terpisah dari masing-masing zat equimolar dalam

145 campuran dan persamaannya adalah sebagai berikut:

146 TSCcampuran - [ESC SEBUAH - ESCB - ESC SEBUAH - ESCB /100] (4)

147 dimana ESCSEBUAH dan ESCB adalah nilai ESC dari masing-masing senyawa dalam campuran. Itu

148 efek sinergi (SE) dari campuran biner didefinisikan nilai eksperimen, dibagi dengan

149 nilai teoretis, yang secara matematis dapat dinyatakan sebagai:

150 SE = ESCcampuran/TSCcampuran (5)

151 Jika rasio ini > 1, berarti ada efek sinergis; jika rasionya < 1, dikatakan

152 antagonisme yang diamati; sedangkan rasio = 1 akan mengungkapkan efek aditif. sinergis,

153 efek antagonis atau aditif ditugaskan tergantung pada perbedaan yang signifikan (P < 0,01)

154 antara nilai scavenging eksperimental dan nilai scavenging teoritis.

155 2.7 Analisis statistik

156 Semua percobaan dilakukan dalam rangkap tiga dan hasilnya dinyatakan sebagai rata-rata ± standar

157 kesalahan. Analisis statistik dilakukan dengan software SPSS.22 dan perbedaan antara

158 kelompok dianalisis dengan ANOVA satu arah. Duncan digunakan untuk post-hoc (P < 0,05: selisihnya
159 signifikan; P < 0,01: perbedaannya sangat signifikan). Data diplot menggunakan

160 Alat fit linier dari perangkat lunak Origin 8.5. Selain itu, Proyeksi ortogonal ke Struktur Laten

161 Analisis Diskriminan (OPLS-DA) digunakan untuk mengklasifikasikan dan menyaring interaksi secara efektif

162 nilai kombinasi yang berbeda oleh perangkat lunak SIMCA 14 (Umetrics, Swedia).

163 3. Hasil dan Pembahasan

164 3.1 Kapasitas antioksidan dari konstituen minor dalam RBO

165 Pada penelitian ini dilakukan uji Rancimat dan metode penangkal radikal bebas DPPH

166 kemampuan antioksidan dari konstituen minor. Gbr.1 menunjukkan kapasitas antioksidan minor

167 konstituen umumnya dapat digolongkan sebagai berikut: -tokoferol> -orizanol> pitosterol.

168 Namun, hasilnya memang ada perbedaan halus terutama karena mekanisme yang berbeda dari

169 dua metode dan sifat-sifat konstituen.

170 Pada rentang konsentrasi 50~500 mg/kg, IP minimum -tokoferol adalah 5,48 ± 0,01

171 h dan IP maksimum adalah 7,33 ± 0,025 jam, sedangkan IP RBO yang dimurnikan hanya 2,79 ± 0,01 jam.

172 -tokoferol berperan aktif dalam memperpanjang stabilitas oksidasi RBO, yang dapat

173 mengganggu reaksi oksidasi berantai, serta memadamkan molekul oksigen yang tereksitasi dengan cara yang tepat

174 jumlah (Kamal-Eldin & Appelqvist, 1996). Namun, -tokoferol yang berlebihan dapat dengan mudah

175 teroksidasi oleh molekul oksigen tereksitasi, menghasilkan oksidasi (Bou, Codony, Baucells &

176 Guardiola, 2005). Namun demikian, Gambar.1 B menunjukkan kapasitas pemulung DPPH dari -tokoferol

177 meningkat lebih dramatis dengan konsentrasi, dan pembersihan maksimum -tokoferol dapat

178 mencapai 84,9%. Hal ini terkait dengan hidroksil fenolik, yang dapat memberikan kontribusi H ke DPPH· dan

179 menjadi radikal bebas tokoferol kuinon yang stabil. Ketika DPPH· berlebihan digunakan,

180 jumlah stoikiometri -tokoferol untuk menghilangkan DPPH· adalah sekitar dua. Stabilitas termal -
181 oryzanol membuatnya menghadirkan tren serupa dalam dua metode, dengan IP maksimum dan izin

182 3,945 ± 0,035 jam dan 59,1% masing-masing. Kapasitas antioksidan -oryzanol terutama karena

183 kelompok asam ferulat (Li, Chen, Wang & Lu, 2015). Dalam hal kecepatan pengambilan gambar yang lebih lambat

184 radikal dari -tokoferol, dianggap bahwa adanya penarikan elektron yang kuat

185 grup-metoksi sangat meningkatkan energi ikatan hidrogen oksigen dari gugus hidroksil fungsional.

186 Selain itu, ikatan hidrogen intramolekul antara orto-gugus metoksi dan fenolik

187 gugus hidroksil juga dapat mengurangi kapasitasnya untuk mengais radikal bebas. Adapun pitosterol, itu

188 Patut dicatat bahwa meskipun kedua kurva tampak stabil, hasilnya menunjukkan luar biasa

189 arti yang berbeda (Gbr. 1). AIP fitosterol adalah negatif, yang berarti bahwa di bawah

190 kondisi eksperimental, pitosterol bertindak sebagai pro-oksidan. Ditemukan bahwa hanya ketika ada

191 fitosterol ethylidene pada rantai samping, seperti 5-avenasterol, memiliki kapasitas antioksidan

192 (Gordon & Magos, 1983). Selain itu, udara dan suhu tinggi juga mendorong oksidasi

193 fitosterol untuk membentuk produk oksidasi (Winkler & Warner, 2008). Dari Gambar 1 B, yang terkuat

194 kapasitas fitosterol untuk mengais DPPH· hanya 7,9%. Ini terutama karena alkohol

195 gugus hidroksil dari fitosterol, yang jauh kurang aktif daripada gugus hidroksil, sehingga menunjukkan

196 kapasitas antioksidan (Fu et al., 2014).

197 3.2 Interaksi antara konsentrasi yang berbeda dari konstituen minor

198 3.2.1 Interaksi diukur dengan uji Rancimat

199 Untuk menyelidiki apakah interaksi antara konstituen minor dipengaruhi oleh

200 konsentrasi, konsentrasi yang berbeda ditambahkan ke RBO. Seperti yang ditunjukkan pada Gbr.2 A, total aIP

201 meningkat dengan konsentrasi, kecuali Mc5, yang menurun menjadi 5,485 ± 0,025 jam. Ini menunjukkan

202 bahwa -tokoferol dan -orizanol membentuk lebih banyak radikal bebas pada konsentrasi yang lebih tinggi. Berdasarkan
203 prinsip kesetimbangan kimia, ketika konsentrasi reaktan terlalu tinggi, bahan kimia

204 reaksi akan berlangsung searah dengan produk, sehingga radikal bebas -tokoferol bereaksi dengan

205 oksigen untuk membentuk hidrogen peroksida, mengakibatkan penurunan total aIP (Fang, Wei, Wang, Liu,

206 Duan & Luan, 2014). Selain itu, kombinasi -tokoferol dan -oryzanol menunjukkan

207 efek antagonis yang signifikan pada konsentrasi yang berbeda, yang mungkin disebabkan oleh sedikit perbedaan dalam

208 kapasitas antioksidan di antara mereka dalam kisaran konsentrasi yang sesuai. Ketika dicampur bersama,

209 mereka akan bersaing satu sama lain untuk reaksi dengan radikal peroksil, mengurangi reaksi

210 kapasitas -tokoferol dengan oksigen aktif, menyebabkan asam lemak tak jenuh teroksidasi (seperti yang ditunjukkan)

211 pada Gambar.4 A). Mirip dengan kombinasi -tokoferol dan -oryzanol, aIP -tokoferol dan

212 kombinasi fitosterol menurun ketika konsentrasi terlalu tinggi (Gbr.2 B). Bermusuhan

213 efek diamati untuk semua kombinasi karena efek mempromosikan oksidasi pitosterol,

214 yang dapat dilihat pada Gbr.4 B.

215 Sebaliknya, Gambar 2 C menunjukkan bahwa aIP meningkat dengan konsentrasi -oryzanol dan

216 fitosterol. AIP maksimum adalah 4,205 ± 0,015 jam (Mc15). Selain Mc12, yang lainnya

217 kombinasi menunjukkan efek sinergis. Pada Gbr.4 C, menurut mekanisme pembentukan

218 ikatan hidrogen, -sitosterol dapat membentuk ikatan hidrogen antarmolekul (ROH…O-R') melalui

219 hidroksil (ROH) dan atom oksigen karbonil elektronegatif kuat (-C=O) dalam -oryzanol (Bot,

220 Adel & Roijer, 2008; Bot & Agterof, 2006). Di satu sisi, pembentukan ikatan hidrogen

221 antara -oryzanol dan pitosterol dapat menghilangkan pro-oksidasi pitosterol, di sisi lain

222 Di sisi lain, produk ikatan stabil dalam RBO dan mempertahankan kapasitas antioksidan tertentu untuk

223 keberadaan bagian hidroksil fenolik dari asam ferulat. Namun, tingkat hidrogen antarmolekul

224 pembentukan ikatan berhubungan dengan konsentrasi -oryzanol dan pitosterol (Bot, Veldhuizen,
225 Adel & Roijers, 2009), berspekulasi bahwa antagonisme ini disebabkan oleh ikatan hidrogen yang lemah

226 efek pada konsentrasi itu, dan efek mempromosikan oksidasi pitosterol menghambat

227 efek antioksidan -oryzanol. Untuk menyelidiki lebih lanjut sinergi antara -oryzanol dan

228 pitosterol, mikroskop kekuatan atom (AFM) disarankan untuk menjadi teknologi deteksi yang baik untuk

229 pembentukan ikatan hidrogen dalam RBO.

230 3.2.2 Interaksi diukur dengan metode penangkal radikal bebas DPPH

231 Gbr.2 D dan Gbr.2 E menunjukkan bahwa kapasitas scavenging -tokoferol dikombinasikan dengan

232 konstituen minor meningkat dengan konsentrasi total. Namun, kombinasi -tokoferol

233 dan fitosterol (Mc6-Mc10) menunjukkan antagonisme yang signifikan dengan cara yang bergantung pada konsentrasi,

234 yang membuktikan bahwa konsentrasi antioksidan dapat mempengaruhi derajat interaksi

235 (Hajimehdipoor, Shahretani & Shekarchi, 2014). Interaksi antara antioksidan yang sama

236 medium terkait dengan potensi redoksnya, antioksidan dengan potensi redoks rendah dapat menghambat

237 generasi radikal bebas dalam antioksidan dengan potensi redoks tinggi (Jorgensen, Madsen, Thomsen,

238 Dragsted & Skibsted, 1999). Potensi redoks -oryzanol dan pitosterol keduanya lebih tinggi

239 dari -tokoferol, yang dapat menghambat regenerasi -tokoferol, yang mengarah ke antagonis

240 efek.

241 Dalam kombinasi -oryzanol dan pitosterol, kapasitas penangkapan radikal bebas DPPH

242 meningkat dengan konsentrasi, tetapi kapasitas pemulungan Mc15 menurun, dan yang terkuat

243 Kapasitas penangkapan radikal bebas DPPH adalah 72,5% (Gbr.2 F). Efek sinergis dari -oryzanol dan

244 fitosterol ditemukan pada konsentrasi yang berbeda. Di antara semua campuran, Mc14 memiliki yang tertinggi

245 SE serta hasil uji Rancimat, yang mungkin karena efek ikatan hidrogen terkuat

246 antara -oryzanol dan pitosterol pada konsentrasi tersebut. Hasil pemeriksaan anak di bawah umur
247 konstituen pada konsentrasi yang berbeda disajikan dalam bahan tambahan (Tabel S1).

248 3.3 Interaksi antara rasio yang berbeda dari konstituen minor

249 3.3.1 Interaksi diukur dengan uji Rancimat

250 Gbr.3 A, Gbr.3 B dan Gbr.3 C menunjukkan interaksi antara konstituen minor di berbeda

251 rasio. Pada kombinasi -tokoferol dan -oryzanol, AIP maksimum mencapai 5,82 ±

252 0,042 jam pada konsentrasi maksimum. SE tampaknya tidak memiliki hubungan rasio-respons

253 tetapi terkait erat dengan rasio -tokoferol. Dibandingkan dengan -tokoferol, -oryzanol

254 lebih stabil pada suhu tinggi dan menghambat oksidasi untuk waktu yang lebih lama (Nyström, Achrenius,

255 Lampi, Moreau & Piironen, 2006), ketika rasio menurun, konsentrasi relatif -

256 oryzanol meningkat, derajat antagonisme menurun.

257 AIP maksimum pada kombinasi -tokoferol dan fitosterol adalah 5,02 ± 0,021 jam

258 (Pak6). Dalam campuran ini, rasio terbesar -tokoferol memainkan peran antioksidan yang kuat, dan

259 rasio paling kecil dari fitosterol memiliki pengaruh yang lemah dalam mempromosikan oksidasi. Selain itu, penurunan yang berbeda

260 ditunjukkan di Mr9 dan Mr10 di mana SE secara dramatis menyimpang dari 1, menunjukkan rasio

261 dipengaruhi oleh derajat antagonistik (Muhammad, Praseptianga, De Walle & Dewettinck, 2017).

262 Interaksi antara -tokoferol dan pitosterol sesuai dengan penelitian tentang -tokoferol

263 perlindungan tokoferol terhadap autoksidasi karotenoid (Anguelova & Warthesen, 2000;

264 Fuhrman, Volkova, Rosenblat & Aviram, 2000).

265 Menurut Gbr.3 C, aIP maksimum adalah 3,67 ± 0,015 jam di antara campuran -

266 oryzanol dan pitosterol. Sementara itu, UK menunjukkan tren yang meningkat seiring dengan peningkatan rasio. Di

267 karya ini, Mr11 dan Mr12 menunjukkan antagonisme yang signifikan. Untuk alasan ini, -oryzanol dan

268 fitosterol tidak dapat membentuk ikatan hidrogen ketika konsentrasi relatif -oryzanol kecil.
269 Menurut penelitian (Bot et al., 2008), ketika rasio massa -sitosterol dan -oryzanol adalah

270 2:3, efek ikatan hidrogen paling kuat. Selain itu, rasio besar pitosterol dipromosikan

271 oksidasi.

272 3.3.2 Interaksi diukur dengan metode penangkal radikal bebas DPPH

273 Kapasitas scavenging Mr3 adalah yang terkuat dalam kombinasi -tokoferol dan -

274 oryzanol, yang mencapai hingga 80% (Gbr.3 D). Dengan penurunan rasio, jenis interaksi

275 berubah dari antagonisme ringan menjadi sinergisme signifikan. Alasan sinergi itu adalah

276 ketika rasio -tokoferol rendah, -tokoferol bereaksi dengan radikal bebas DPPH dengan cepat karena

277 ke tingkat pembersihan yang cepat, kemudian dihasilkan radikal bebas -tokoferol. Setelah radikal bebas DPPH

278 dihilangkan, -oryzanol dengan rasio besar akan bergabung dengan radikal -tokoferol, cenderung

279 regenerasi -tokoferol, sehingga menunjukkan sinergisme. Ini mirip dengan interaksi antara

280 asam caffeic dan hesperidin untuk meningkatkan kapasitas antioksidan asam caffeic (Samra, Chedea,

281 Economou, Calokerinos & Kefalas, 2010). Studi lebih lanjut dapat digunakan untuk mendeteksi perubahan redoks

282 potensial dengan voltametri siklik untuk mengkonfirmasi dugaan.

283 Tingkat clearance Mr6 dan Mr8 adalah 65,10% dan 65,59%, masing-masing (Gbr.3 E). Itu

284 penurunan rasio disertai dengan penurunan yang signifikan dari tingkat clearance, yang menunjukkan bahwa

285 -tokoferol memiliki dampak yang lebih besar pada campurannya. Sebagai hasil dari penghambatan pitosterol

286 pada regenerasi -tokoferol (Mortensen & Skibsted, 1997), SE dari semua campuran kurang dari

287 1, menunjukkan efek antagonis. Ketika rasionya kurang dari 1:20, efek antagonisnya menjadi

288 signifikan, yang berkaitan erat dengan penurunan signifikan konsentrasi -tokoferol.

289 Pada konsentrasi total -oryzanol dan fitosterol tetap pada 14000 mg/kg, tertinggi

290 tingkat pembersihan hanya 31,08% ketika rasionya 6: 1, menunjukkan kapasitas pemulungan yang lemah
291 dari campuran (Gbr.3 F). Tren UK sejalan dengan peningkatan rasio yang berada di

292 kesesuaian dengan hasil yang diperoleh dari uji Rancimat. Selain itu, Mr11 menunjukkan signifikan

293 efek antagonis. Tidak hanya rasio -oryzanol yang rendah, tetapi juga kapasitas antioksidan dari -oryzanol

294 fitosterol cukup buruk. Dengan peningkatan rasio -oryzanol, antagonisme adalah

295 melemah, yang disebabkan oleh retensi bagian hidroksil fenolik dari asam ferulat dan

296 retensi kapasitas antioksidan tertentu setelah ikatan hidrogen. informasi rinci dari

297 interaksi antara konsentrasi yang berbeda dan rasio yang berbeda dari konstituen minor adalah

298 disediakan dalam bahan pelengkap naskah ini. Hasil pemeriksaan anak di bawah umur

299 konstituen pada rasio yang berbeda disajikan dalam bahan tambahan (Tabel S2).

300 3.4 Analisis Statistik Multivariat

301 Grafik skor OPLS-DA dari -tokoferol dan -orizanol, -tokoferol dan pitosterol, -

302 oryzanol dan pitosterol dibangun berdasarkan 29 kombinasi, seperti yang ditunjukkan pada Gbr.5. Semua sampel

303 pada gambar perkirakan Mc14 ditempatkan dalam elips dengan interval kepercayaan 0,050%, menunjukkan

304 bahwa tidak ada data yang abnormal. Hasil Gambar 5 menunjukkan bahwa kombinasi -oryzanol

305 dan fitosterol, -tokoferol dan fitosterol, -tokoferol dan -oryzanol diatur dalam urutan

306 sepanjang arah sumbu x dan jelas dipisahkan, dan semuanya diklasifikasikan dengan benar.

307 -Tocopherol dan pitosterol lebih terkonsentrasi pada diagram, dan kombinasi -

308 tokoferol dan -oryzanol, -oryzanol dan pitosterol sedikit tersebar. Dikombinasikan dengan

309 analisis data, SE campuran biner meningkat sepanjang arah negatif sumbu x di bawah

310 Uji Rancimat, dan SE meningkat sepanjang arah negatif sumbu y di bawah radikal bebas

311 metode scavenging, sehingga kombinasi di kuadran ketiga sama-sama memiliki efek sinergis di bawah

312 dua metode. Dalam percobaan ini, R2x (cum) dari OPLS-DA adalah 1, R2y (cum) adalah 0,456, Q2 (air mani)
313 adalah 0,388. Semakin dekat R2 bernilai 1, artinya sampel tidak terlalu terganggu oleh noise, dan

314 pengulangan dalam kelompok lebih baik. Q2 lebih besar dari 0,300 menunjukkan bahwa prediksi

315 kemampuan model itu baik.

316 4. Kesimpulan

317 Untuk campuran biner, meskipun ada antagonisme antara -tokoferol dan -oryzanol,

318 Mc4 dan Mc5 menyajikan nilai maksimum campuran biner di bawah dua metode deteksi

319 masing-masing, menunjukkan bahwa campuran ini memiliki stabilitas oksidasi terkuat dan kemampuan

320 mengais DPPH·. Selain itu, konsentrasi konstituen minor memiliki pengaruh besar pada

321 stabilitas oksidasi dan kemampuan menangkap radikal bebas. Secara khusus, kapasitas antioksidan

322 -tokoferol akan menurun di bawah konsentrasi tinggi. Namun, rasio terutama mempengaruhi tipe

323 interaksi atau tingkat sinergisme atau antagonisme, seperti tingkat penghambatan -

324 regenerasi tokoferol oleh fitosterol dan pembentukan ikatan hidrogen antara -oryzanol

325 dan fitosterol. Interaksi sinergis yang ditemukan dalam penelitian ini memiliki potensi penerapan

326 menunda oksidasi RBO. Faktanya, metode yang lebih berlimpah harus diterapkan untuk mengeksplorasi

327 mekanisme interaksi antioksidan, serta lebih banyak generasi penelitian dalam hal yang berbeda

328 matriks atau mengacu pada in vivo riset.

329

330

331 ucapan terima kasih

332 Pekerjaan ini didukung oleh National Natural Science Foundation of China (Hibah No.

333 31872895) dan Program Bimbingan Kebijakan di Provinsi Jiangsu (BX2019019).

334
335 Pernyataan konflik kepentingan

336 Tidak ada konflik kepentingan yang keluar dalam penyerahan naskah ini, dan naskah disetujui

337 oleh semua penulis untuk publikasi.

Referensi:

Anguelova, T., & Warthesen, J. (2000). Degradasi likopen, -arotene, dan -arotene selama lipid

peroksidasi. Jurnal Ilmu Pangan, 65(1), 71-75.

Ballus, CA, Meinhart, AD, de Souza Campos Jr, FA, & Godoy, HT (2015). Total fenolik dari

minyak zaitun murni sangat berkorelasi dengan mekanisme transfer atom hidrogen antioksidan

kapasitas. Jurnal Masyarakat Kimiawan Minyak Amerika, 92(6), 843-851.

Becker, EM, Nissen, LR, & Skibsted, LH (2004). Protokol evaluasi antioksidan: Kualitas makanan

atau efek kesehatan. Riset & Teknologi Pangan Eropa, 219(6), 561-571.

Becker, EM, Ntouma, G., & Skibsted, LH (2006). Sinergisme dan antagonisme antara quercetin

dan antioksidan pemecah rantai lainnya dalam sistem lipid yang meningkatkan organisasi struktural.

Kimia Makanan, 103(4), 1288-1296.

Bot, A., Adel, RD, & Roijers, EC (2008). Fibril -oryzanol + -sitosterol dalam organogel minyak nabati.

Jurnal Masyarakat Kimiawan Minyak Amerika, 85(12), 1127-1134.

Bot, A., & Agterof, WGM (2006). Penataan minyak nabati dengan campuran -oryzanol dengan -

sitosterol atau fitosterol terkait. Jurnal Masyarakat Kimiawan Minyak Amerika, 83(6), 513-

521.

Bot, A., Veldhuizen, YSJ, Adel, RD, & Roijers, EC (2009). Penataan non-tag dari minyak nabati

dan emulsi. Hidrokoloid Makanan, 23(4), 1184-1189.

Bou, R., Codony, R., Baucells, MD, & Guardiola, F. (2005). Pengaruh minyak bunga matahari yang dipanaskan dan makanan

suplemen pada komposisi, stabilitas oksidatif, dan kualitas sensorik daging ayam kampung.

Jurnal Kimia Pertanian & Pangan, 53(20), 7792-7801.

Chen, YF, Jin, J., Zheng, SW, Hu, MJ, & Jin, QZ (2014). Penentuan oryzanol dalam dedak padi

minyak dengan HPLC. Jurnal Asosiasi Sereal & Minyak Cina, 29(7), 112-115.

Claudia, J., Massimo, C., Cristina, AM, & Luisella, P. (2005). Aktivitas antioksidan gamma-oryzanol:

mekanisme aksi dan pengaruhnya terhadap stabilitas oksidatif minyak farmasi. Internasional

jurnal farmasi, 299(1-2), 146-154.

Espín, JC, Soler-Rivas, C., & Wichers, HJ (2000). Karakterisasi penangkal radikal bebas total

kapasitas minyak nabati dan fraksi minyak menggunakan radikal 2,2-difenil-1-pikrilhidrazil. jurnal

Kimia Pertanian & Pangan, 48(3), 648-656.

Fang, B., Wei, C., Wang, Y., Liu, J., Duan, Z., & Luan, X. (2014). Pengaruh proses pemurnian pada

komponen minor dalam minyak kedelai. Minyak & Lemak Cina, 39, 8-11.

Fu, Y., Zhang, Y., Hu, HY, Chen, Y., Wang, R., Li, D., & Liu, SB (2014). Desain dan

sintesis langsung dari pitosterol galloyl baru dengan aktivitas antioksidan yang sangat baik. Makanan

Kimia, 163, 171-177.

Fuhrman, B., Volkova, N., Rosenblat, M., & Aviram, M. (2000). Likopen secara sinergis menghambat LDL

oksidasi dalam kombinasi dengan vitamin E, glabridin, asam rosmarinic, asam carnosic, atau bawang putih.

Antioksidan & Sinyal Redoks, 2(3), 491-506.

Gordon, MH, & Magos, P. (1983). Pengaruh sterol pada oksidasi minyak nabati.Lain, 10(2),

141-147.

Gouvinhas, I., Machado, J., Sonia, G., Lopes, J., Martins-lopes, P., & Barros, AI (2014). fenolik

komposisi dan aktivitas antioksidan minyak zaitun portugis monovarietal dan komersial.

Jurnal Masyarakat Kimiawan Minyak Amerika, 91(7), 1197-1203.

Grandois, JL, Guffond, D., Hamon, E., Marchioni, E., & Werner, D. (2017). Microplate gabungan-

Analisis ABTS dan HPLC-ABTS ekstrak tomat dan lada mengungkapkan sinergis dan

efek antagonis dari komponen antioksidan lipofiliknya. Kimia Makanan, 223, 62-71.

Hajimehdipoor, H., Shahretani, R., & Shekarchi, M. (2014). Menyelidiki antioksidan sinergis

efek dari beberapa senyawa flavonoid dan fenolik. Jurnal Penelitian Farmakognosi, 1(3),

35-40.

Jorgensen, LV, Madsen, HL, Thomsen, MK, Dragsted, LO, & Skibsted, LH (1999).

Regenerasi antioksidan fenolik dari radikal fenoksil: ESR dan elektrokimia

studi hierarki antioksidan. Penelitian radikal bebas, 30(3), 207-220.

Kamal-Eldin, A., & Appelqvist, LA (1996). Sifat kimia dan antioksidan tokoferol

dan tokotrienol. Lipid, 31(7), 671-701.

Karmowski, J., Enke, K., Killenberg, M., & Böhm, V. (2015). Interaksi antara lipofilik

antioksidan diukur dengan uji photochemiluminescence dan -tokoferol setara

uji kapasitas antioksidan serta pengaruh senyawa matriks pada lipofilik

kapasitas antioksidan. LWT - Ilmu & Teknologi Pangan, 64(2), 817-823.

Kiritsakis, A., & Dugan, LR (1985). Studi dalam fotooksidasi minyak zaitun.Jurnal Amerika

Perkumpulan Ahli Kimia Minyak, 62(5), 892-896.

Kotíková, Z., Lachman, J., Hejtmánková, A., & Hejtmánková, K. (2011). Penentuan antioksidan

aktivitas dan kandungan antioksidan pada varietas tomat dan evaluasi interaksi timbal balik

antara antioksidan. LWT - Ilmu & Teknologi Pangan, 44(8), 1703-1710.

Lars, M., Kathleen, T., & Volker, B. (2010). In vitro aktivitas antioksidan tokoferol dan tokotrienol
 dan perbandingan konsentrasi vitamin E dan kapasitas antioksidan lipofilik pada manusia

plasma. Nutrisi molekuler & penelitian makanan, 54(5), 731-742.

Li, CM, Yao, YP, Zhao, GZ, Cheng, W., Liu, HL, Liu, CY, & Wang, S. (2011). Perbandingan

dan analisis asam lemak, sterol, dan tokoferol dalam delapan minyak nabati. Jurnal dari

Kimia Pertanian & Pangan, 59(23) 12493-12498.

Li, XR, Chen, DJ, Wang, GK, & Lu, Y. (2015). Menyelidiki interaksi albumin serum manusia

dengan DPPH dengan tidak adanya dan adanya delapan antioksidan. Spectrochimica acta. Bagian A,

Spektroskopi molekuler dan biomolekuler, 137, 1144-1152.

Liu, RJ, Liu, RR, Shi, LK, Zhang, ZY, Zhang, T., Lu, MY, & Wang, XG (2019). Efek dari

proses pemurnian pada parameter fisikokimia, komposisi kimia dan in vitro

aktivitas antioksidan minyak dedak padi. LWT - Ilmu & Teknologi Pangan, 109, 26-32.

Liu, RJ, Lu, MY, Zhang, T., Zhang, ZY, Jin, QZ, Chang, M., & Wang, XG (2020). Evaluasi

Sifat Antioksidan Mikronutrien dalam Minyak Nabati yang Berbeda. Jurnal Eropa

Ilmu & Teknologi Lipid, 122(2), 19.00079.

Luís, Â., Duarte, AP, Pereira, L., & Domingues, F. (2018). Interaksi antara bioaktif utama

polifenol buah beri: efek pada sifat antioksidan. Penelitian Makanan Eropa &

Teknologi, 244(1), 175-185.

Marfil, R., Nez, R., Martinez, O., Bouzas, PR, Rufiá, J., Rufián Henares, J., & Cabrera, C. (2011).

Penentuan polifenol, tokoferol, dan kapasitas antioksidan dalam minyak argan murni

(Argania spinosa, Skeels). Jurnal Sains & Teknologi Lipid Eropa, 113(7), 886-893.

Marinova, E., Toneva, A., & Yanishlieva, N. (2008). Efek antioksidan sinergis dari -tokoferol dan
 myricetin pada autoksidasi triasilgliserol minyak bunga matahari. Kimia Makanan, 106(2),

628-633.

Mortensen, A., & Skibsted, LH (1997). Stabilitas relatif kation radikal karotenoid dan homolog

radikal tokoferoksil. Sebuah studi kinetik waktu nyata dari hierarki antioksidan.Surat FEBS, 417(3),

261-266.

Muhammad, DRA, Praseptianga, D., De Walle, DV, & Dewettinck, K. (2017). Interaksi

antara antioksidan alami yang berasal dari kayu manis dan kakao dalam campuran biner dan kompleks.

Kimia Makanan, 231, 356-364.

Nyström, L., Achrenius, T., Lampi, A.-M., Moreau, RA, & Piironen, V. (2006). Sebuah perbandingan dari

sifat antioksidan steril ferulat dengan tokoferol pada suhu tinggi. Kimia Makanan,

101(3), 947-954.

Samra, MA, Chedea, VS, Economou, A., Calokerinos, A., & Kefalas, P. (2010).

Sifat antioksidan/prooksidan dari model senyawa fenolik: Bagian I. Studi tentang equimolar

campuran dengan chemiluminescence dan voltametri siklik. Kimia Makanan, 125(2), 622-629.

Schroeder, MT, Becker, EM, & Skibsted, LH (2006). Mekanisme molekuler antioksidan

sinergisme tokotrienol dan karotenoid dalam minyak sawit. Jurnal Pertanian & Pangan

Kimia, 54(9), 3445-3453.

Siger, A., Kaczmarek, A., & Rudzińska, M. (2015). Aktivitas antioksidan dan kandungan fitokimia

minyak rapeseed dingin yang diperoleh dari biji panggang. Jurnal Ilmu Lipid Eropa &

Teknologi, 117(8), 1225-1237.

Veličkovska, SK, Brühl, L., Mitrev, S., Mirhosseini, H., & Matthäus, B. (2015). Evaluasi kualitas
 minyak goreng dingin dari Makedonia. Jurnal Sains & Teknologi Lipid Eropa,

117(12), 2023-2035.

Winkler, JK, & Warner, K. (2008). Pengaruh konsentrasi fitosterol pada stabilitas oksidatif dan

polimerisasi termal minyak yang dipanaskan. Jurnal Sains & Teknologi Lipid Eropa,

110(5), 455-464.

Zhang, LS, Ni, JL, Liu, RJ, Chang, M., Jin, QZ, & Wang, XG (2019a). Interaksi aktif

mengais radikal bebas -tokoferol, -oryzanol dan pitosterol dalam etil asetat. Minyak Cina

& Lemak, 44(12), 104-108.

Zhang, LS, Zhang, T., Chang, M., Lu, MY, Liu, RJ, Jin, QZ, & Wang, XG (2019b). Efek dari

interaksi antara -tokoferol, oryzanol, dan fitosterol pada aktivitas antiradikal terhadap

radikal DPPH. LWT - Ilmu & Teknologi Pangan, 112, 108206.

Gambar 1 Kapasitas antioksidan RBO dengan penambahan konstituen minor : = -tocopherol, ●= -oryzanol,

= fitosterol. Data mewakili rata-rata (n = 3) ± standar deviasi. (A) stabilitas oksidasi RBO dengan

Uji Rancimat pada 110 °C, (B) kapasitas scavenging RBO dengan uji DPPH.

Gbr.2 Periode induksi tambahan (jam) dan kapasitas pemulungan (%) dari teori dan

nilai eksperimental serta efek sinergi dari konstituen kecil pada konsentrasi yang berbeda.

Nilai teoritis ( ), nilai eksperimen ( ), derajat sinergi (■). Data merepresentasikan mean (n = 3) ±

deviasi standar. Tanda bintang menunjukkan perbedaan yang signifikan dibandingkan dengan masing-masing nilai ESC

(*P<0,05, **P< 0,01). (A) interaksi antara -tokoferol dan -oryzanol dengan uji Rancimat, (B)

interaksi antara -tokoferol dan fitosterol dengan uji Rancimat, (C) interaksi antara -

oryzanol dan pitosterol dengan uji Rancimat, (D) interaksi antara -tokoferol dan -oryzanol dengan

Uji DPPH, (E) interaksi antara -tokoferol dan fitosterol dengan uji DPPH, (F) interaksi

antara -oryzanol dan pitosterol dengan uji DPPH. Simbolnya seperti pada Tabel 1.

Gbr.3 Periode induksi tambahan (jam) dan kapasitas pemulungan (%) dari teori dan

nilai eksperimental serta efek sinergi dari konstituen minor pada rasio yang berbeda. Nilai teoretis

( ), nilai eksperimen ( ), derajat sinergi (■). Data mewakili rata-rata (n = 3) ± standar deviasi.

Tanda bintang menunjukkan perbedaan yang signifikan dibandingkan dengan masing-masing nilai ESC (*P<0,05, **P< 0,01).

(A) interaksi antara -tokoferol dan -oryzanol dengan uji Rancimat, (B) interaksi antara -

tokoferol dan fitosterol dengan uji Rancimat, (C) interaksi antara -oryzanol dan pitosterol dengan

Uji Rancimat, (D) interaksi antara -tokoferol dan -oryzanol dengan uji DPPH, (E) interaksi

antara -tokoferol dan pitosterol dengan uji DPPH, (F) interaksi antara -oryzanol dan

fitosterol dengan uji DPPH. Simbolnya seperti pada Tabel 1.

Gbr.4 Mekanisme sinergisme dan antagonisme pada minyak dedak padi (A, B, C).

-Tocopherol dan -oryzanol akan bersaing satu sama lain untuk reaksi dengan radikal peroksil,

mengurangi kapasitas reaksi -tokoferol dengan oksigen aktif, menyebabkan antagonisme (A). -

Tokoferol berpura-pura mencegah efek mempromosikan oksidasi pitosterol serta oksidasi

asam lemak, menunjukkan antagonisme (B). Pembentukan ikatan hidrogen antarmolekul antara -

oryzanol dan pitosterol dapat menghilangkan pro-oksidasi pitosterol, selain itu tetap tertentu

kapasitas antioksidan untuk keberadaan bagian hidroksil fenolik dari -oryzanol, menunjukkan sinergisme (C).

Gbr.5 Plot skor model prediksi kelas disediakan oleh Proyeksi ortogonal ke Struktur Laten

Analisis Diskriminan (OPLS-DA) pada 29 kombinasi dengan mempertimbangkan nilai interaksinya sebagai kelas

kriteria keanggotaan. Replikasi sampel individu (n = 3) diberikan dalam skor model prediksi kelas

merencanakan.
Gbr.1 Kapasitas antioksidan RBO dengan tambahan konstituen minor : = -tocopherol, ●= -oryzanol, = pitosterol.

Data mewakili rata-rata (n = 3) ± standar deviasi. (A) stabilitas oksidasi RBO dengan uji Rancimat pada 110 °C, (B)

kapasitas pemulungan RBO dengan uji DPPH.

Gbr.2 Periode induksi tambahan (jam) dan kapasitas pemulung (%) dari nilai teoritis dan eksperimental juga

sebagai efek sinergi dari konstituen minor pada konsentrasi yang berbeda. Nilai teoritis ( ), nilai eksperimen ( ),

derajat sinergi (■). Data mewakili rata-rata (n = 3) ± standar deviasi. Tanda bintang menunjukkan perbedaan yang signifikan

dibandingkan dengan masing-masing nilai ESC (*P<0,05, **P< 0,01). (A) interaksi antara -tokoferol dan -oryzanol oleh

Uji Rancimat, (B) interaksi antara -tokoferol dan fitosterol dengan uji Rancimat, (C) interaksi antara -

oryzanol dan pitosterol dengan uji Rancimat, (D) interaksi antara -tokoferol dan -oryzanol dengan uji DPPH, (E)

interaksi antara -tokoferol dan pitosterol dengan uji DPPH, (F) interaksi antara -oryzanol dan pitosterol dengan

pemeriksaan DPPH. Simbolnya seperti pada Tabel 1.

Gbr.3 Periode induksi tambahan (jam) dan kapasitas pemulungan (%) dari nilai teoretis dan eksperimental sebagai

serta efek sinergi dari konstituen minor pada rasio yang berbeda. Nilai teoritis ( ), nilai eksperimen ( ),

derajat sinergi (■). Data mewakili rata-rata (n = 3) ± standar deviasi. Tanda bintang menunjukkan perbedaan yang signifikan

dibandingkan dengan masing-masing nilai ESC (*P<0,05, **P< 0,01). (A) interaksi antara -tokoferol dan -oryzanol

dengan uji Rancimat, (B) interaksi antara -tokoferol dan fitosterol dengan uji Rancimat, (C) interaksi antara

-oryzanol dan pitosterol dengan uji Rancimat, (D) interaksi antara -tokoferol dan -oryzanol dengan uji DPPH,

(E) interaksi antara -tokoferol dan fitosterol dengan uji DPPH, (F) interaksi antara -oryzanol dan

fitosterol dengan uji DPPH. Simbolnya seperti pada Tabel 1.

Gbr.4 Mekanisme sinergisme dan antagonisme pada minyak dedak padi (A, B, C).

-Tocopherol dan -oryzanol akan bersaing satu sama lain untuk reaksi dengan radikal peroksil, mengurangi

kapasitas reaksi -tokoferol dengan oksigen aktif, menyebabkan antagonisme (A). -Tocopherol berpura-pura mencegah

efek mempromosikan oksidasi pitosterol serta oksidasi asam lemak, menunjukkan antagonisme (B). Itu

pembentukan ikatan hidrogen antarmolekul antara -oryzanol dan pitosterol dapat menghilangkan pro-oksidasi

fitosterol, selain itu mempertahankan kapasitas antioksidan tertentu untuk keberadaan bagian hidroksil fenolik dari -

oryzanol, menunjukkan sinergisme (C).

Gbr.5 Plot skor model prediksi kelas yang disediakan oleh Proyeksi ortogonal ke Struktur Laten Diskriminan

Analisis (OPLS-DA) pada 29 kombinasi dengan mempertimbangkan efek sinergi (SE) sebagai kriteria keanggotaan kelas.
 Tabel 1 Komposisi konstituen minor yang ditambahkan sebagai campuran ke RBO murni.

Kombinasi konsentrasi yang berbeda rasio yang berbeda

Campuran Konsentrasi Konsentrasi total Campuran Konsentrasi rasio konsentrasi

(mg/kg) (mg/kg) (mg/kg)

-tokoferol dan -orizanol Mc1 50+2000 2050 Mr1 500+2000 1:4

Mc2 100+4000 4100 Mr2 200+2000 1:10

Mc3 200+8000 8200 Mr3 500+10000 1:20

Mc4 400+10000 10400 Mr4 100+10000 1:100

Mc5 500+12000 12500 Mr5 50+10000 1:200

-tokoferol dan pitosterol Mc6 50+2000 2050 Mr6 500+2000 1:4

Mc7 100+4000 4100 Mr7 200+2000 1:10

Mc8 200+8000 8200 Tuan8 500+10000 1:20

Mc9 400+10000 10400 Mr9 100+10000 1:100

Mc10 500+12000 12500 Mr10 50+10000 1:200

-oryzanol dan pitosterol Mc11 2000+2000 4000 Mr11 2000+12000 1:6

Mc12 4000+4000 8000 Mr12 4000+10000 1:2.5

Mc13 8000+8000 16000 Tuan 13 10.000+4000 2.5: 1

Mc14 10000+10000 20000 Mr14 12000+2000 6:1

Mc15 12000+12000 24000

Highlight:

• Konsentrasi campuran biner mempengaruhi kapasitas antioksidan total.

• Rasio campuran biner mempengaruhi jenis atau derajat interaksi antioksidan.

• Penghambatan fitosterol pada regenerasi -tokoferol menyebabkan antagonisme.

• Sinergi -oryzanol dan fitosterol berhubungan dengan ikatan hidrogen.

Pernyataan penulis CReditT

Ruru Liu, Ying Xu: Konseptualisasi, Metodologi, Analisis Formal, Kurasi Data,

Penulisan-Persiapan draf asli, Penulisan-Review dan Editing. Ming Chang:

Konseptualisasi, Metodologi, Penulisan-Review dan Editing. Lin Tang:Analisis formal,

Kurasi data, Penulisan-Penyusunan draft asli. Mengyao Lu: Konseptualisasi, Metodologi.

Ruiji Liu: Penulisan-Peninjauan dan Penyuntingan, Pengawasan, Administrasi Proyek, Pendanaan

Akuisisi. Qingzhe Jin, Xingguo Wang: Pengawasan, Administrasi proyek. Semua penulis

berkontribusi menulis dan menyetujui versi final naskah.