UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN SARI AIR BUAH SRIKAYA

HIJAU DAN SRIKAYA MERAH (Annona Squamosa L.)

DENGAN METODE DPPH

PROPOSAL

OLEH:
DHEA AUDINA ADNIN
NPM 174301004

PROGRAM STUDI SARJANA FARMASI

FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS TJUT NYAK DHIEN MEDAN
2020
UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN SARI AIR BUAH SRIKAYA
HIJAU DAN SRIKAYA MERAH (Annona Squamosa L.)
DENGAN METODE DPPH

PROPOSAL

Diajukan sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana

Farmasi pada Fakultas Farmasi Universitas Tjut Nyak Dhien

OLEH:
DHEA AUDINA ADNIN
NPM 174301004

PROGRAM STUDI SARJANA FARMASI

FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS TJUT NYAK DHIEN MEDAN
2020

i
 LEMBAR PENGESAHAN

PROPOSAL

UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN SARI AIR BUAH SRIKAYA

HIJAU DAN SRIKAYA MERAH (Annona Squamosa L.)
DENGAN METODE DPPH

OLEH:
DHEA AUDINA ADNIN
NPM 174301004

Dipertahankan di Hadapan Penguji Proposal Fakultas Farmasi

Universitas Tjut Nyak Dhien pada Tanggal 15 April 2020

Disetujui oleh : Panitia Penguji :

Pembimbing,

Prof. Dr. Nasruddin Noer, M.Eng.Sc Dra. Hj. Juwairiah, M. Si

Ketua Program Studi Sarjana Farmasi,

Apt. Desy Natalia Siahaan, S.Farm., M.Farm.

Medan, 15 April 2020

Disahkan Oleh :
Dekan,

Apt. Yessi Febriani S.Farm., M.Si.

ii
 KATA PENGANTAR

Puji dan syukur kehadirat Allah SWT yang Maha Pengasih dan Maha

Penyayang yang telah melimpahkan rahmat, karunia, dan ridhoNya, sehingga

penulis dapat menyelesaikan penulisan proposal yang berjudul “Uji Aktivitas

Antioksidan Sari Air Buah Srikaya Hijau Dan Srikaya Merah (Annona Squamosa

L.) Dengan Metode DPPH”. Proposal ini diajukan sebagai salah satu syarat untuk

melaksanakan tugas akhir Sarjana Farmasi pada Fakultas Farmasi Universitas Tjut

Nyak Dhien.

Penulis menyampaikan terima kasih kepada kepada Dekan Fakultas

Farmasi Universitas Tjut Nyak Dhien Apt. Yessi Febriani S.Farm., M.Si. , yang

telah memberikan bantuan dan fasilitas selama masa pendidikan. Bapak Prof. Dr.

Nasruddin Noer, M.Eng.Sc, yang telah membimbing dengan penuh kesabaran,

tulus dan ikhlas selama penulisan proposal ini berlangsung. Ibu Dra. Hj.

Juwairiah, M. Si., selaku dosen penguji yang telah memberikan kritik, saran, dan

arahan kepada penulis dalam menyelesaikan proposal ini. Bapak dan Ibu staf

pengajar Fakultas Farmasi Universitas Tjut Nyak Dhien yang telah mendidik

selama perkuliahan dan Ibu Dra. Sudewi., M.Si., Apt., selaku penasehat akademik

yang memberikan bimbingan dan motivasi kepada penulis selama masa

perkuliahan.

Penulis juga mengucapkan terima kasih dan penghargaan yang tulus

kepada orang tua tersayang, keluarga tercinta dan teman-teman seperjuangan atas

doa, dukungan, semangat, dan pengorbanan baik moril maupun materil dalam

penyelesaian proposal ini.

iii
 Penulis menyadari sepenuhnya bahwa dalam penulisan proposal ini

masih jauh dari kesempurnaan, oleh karena itu dengan segala kerendahan hati,

penulis menerima kritik dan saran demi kesempurnaan proposal ini. Akhir kata

penulis berharap semoga proposal ini bermanfaat bagi ilmu pengetahuan

khususnya dibidang farmasi.

Medan, 15 April 2020

Penulis,

Dhea Audina Adnin

NPM.174301004

iv
 LEMBAR PERNYATAAN ORISINALITAS

Saya yang bertanda tangan di bawah ini,

Nama : Dhea Audina Adnin
Nomor Pokok Mahasiswa : 174301004
Program Studi : Sarjana Farmasi
Judul Proposal : Uji Aktivitas Antioksidan Sari Air Buah Srikaya
Hijau Dan Srikaya Merah (Annona Squamosa L.)
Dengan Metode DPPH

Dengan ini menyatakan bahwa proposal yang saya buat adalah asli karya sendiri

dan bukan plagiat. Apabila di kemudian hari diketahui proposal saya tersebut

terbukti plagiat karena kesalahan sendiri, maka saya bersedia diberi sanksi apapun

oleh Program Studi Sarjana Farmasi Fakultas Farmasi Universitas Tjut Nyak

Dhien. Saya tidak akan menuntut pihak manapun atas perbuatan saya tersebut.

Demikian surat pernyataan ini saya perbuat dengan sebenarnya dan dalam

keadaan sehat.

Medan, 15 April 2020

Penulis,

Dhea Audina Adnin

NPM. 174301004

v
 UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN SARI AIR BUAH SRIKAYA
HIJAU DAN SRIKAYA MERAH (Annona Squamosa L.)
DENGAN METODE DPPH

ABSTRAK
Latar Belakang: Srikaya merupakan buah yang terkenal akan kandungan
nutrisinya. Kandungan fitokimia yang utama dari buah srikaya adalah alkaloida,
glikosida, flavonoida, steroid, tanin, terpenoid serta komponen fenolik
Tujuan: Untuk mengetahui adanya aktivitas antioksidan sari air srikaya hijau dan
srikaya merah
Metode: Sampel diskrinning fitokimia dan diuji aktivitas antioksidannya metode
pemerangkapan DPPH yang diukur dengan menggunakan spektrofotometer UV-
Visible pada panjang gelombang 516 nm

Kata kunci: srikaya, DPPH, antioksidan, spektrofotometer sinar tampak

vi
 ANTIOXDIANT ACTIVITY TESTING OF AQUEOUS EXTRACT OF
GREEN SUGAR APPLE AND RED SUGAR APPLE (Annona Squamosa L.)
USING DPPH METHOD

ABSTRACT

Background: Sugar apple is a well-known fruit for its nutritional composition.

Major phytochemicals present in this fruit are alkaloids, glycosides, flavonoids,
steroids, tannins, terpenoids and phenolic compound
Objective: To determine the antioxidant activity of green sugar apple’s aqueous
extract and red sugar apple’s aqueous extract
Method: Samples were tested for phytochemical screening and antioxidant activity
that determined with scavenging DPPH, measured at a wavelength of 516 nm by
using a UV-Visible spectrophotometer

Keywords: antioxidant activity, sugar apple, DPPH, spectrophotometer visible

vii
 DAFTAR ISI

HALAMAN JUDUL................................................................................................ i
LEMBAR PENGESAHAN .................................................................................... ii
KATA PENGANTAR ........................................................................................... iii
LEMBAR PERNYATAAN ORISINALITAS ........................................................v
ABSTRAK ............................................................................................................. vi
ABSTRACT .......................................................................................................... vii
DAFTAR ISI ........................................................................................................ viii
DAFTAR TABEL .................................................................................................. ix
DAFTAR GAMBAR ...............................................................................................x
DAFTAR GAMBAR DALAM LAMPIRAN........................................................ xi
DAFTAR LAMPIRAN ......................................................................................... xii

BAB I PENDAHULUAN........................................................................................1
1.1 Latar Belakang....................................................................................................1
1.2 Rumusan Masalah...............................................................................................2
1.3 Hipotesis .............................................................................................................3
1.4 Tujuan Penelitian ................................................................................................3
1.5 Manfaat Penelitian ..............................................................................................3
1.6 Kerangka Pikir Penelitian ...................................................................................4

BAB II TINJAUAN PUSTAKA..............................................................................5

2.1. Uraian Tumbuhan ..............................................................................................5
2.2. Klasifikasi ..........................................................................................................6
2.3. Radikal Bebas ....................................................................................................6
2.4. Antioksidan .......................................................................................................8
2.5. Vitamin C ........................................................................................................10
2.6. Metode Pengujian Antioksidan .......................................................................11
2.7. Spektrofotometer UV-Vis ...............................................................................13

BAB III METODE PENELITIAN.........................................................................14

3.1 Alat........ ...........................................................................................................14
3.2 Bahan... .............................................................................................................14
3.3 Pembuatan Larutan Pereaksi ............................................................................14
3.4 Pengumpulan dan Pengolahan Bahan Tanaman...............................................16
3.5 Skrining Fitokimia............................................................................................16
3.6 Pembuatan Sari Air Buah Srikaya Hijau dan Merah ........................................18
3.7 Pengujian Aktivitas Antioksidan dengan Spektrofotometer UV-Visibel .........18

DAFTAR PUSTAKA ............................................................................................21

LAMPIRAN ..........................................................................................................23

viii
 DAFTAR TABEL

2.1 Tingkat Kekuatan Antioksidan….....................................................................9

ix
 DAFTAR GAMBAR

1.1 Skema Pikir Penelitian…...................................................................................4

2.1 Mekanisme Reaksi Antara Vitamin C dan DPPH............................................11
2.2 Reaksi DPPH dengan Senyawa Antioksidan...................................................12

x
 DAFTAR GAMBAR DALAM LAMPIRAN

1. Buah Srikaya Hijau dan Merah.........................................................................24

2. Buah Srikaya Hijau dan Merah Setelah Dipotong.............................................24

xi
 DAFTAR LAMPIRAN

1. Bagan Kerja Penelitian .............................................................................23

2. Foto Sampel..............................................................................................24

xii
 BAB I PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Tubuh manusia secara terus menerus memproduksi radikal bebas sebagai

produk samping dari proses metabolisme normal tubuh. Dalam keadaan normal
pembentukan radikal bebas akan diikuti oleh pembentukan antioksidan. Tetapi
polusi, radiasi ultra violet, rokok, diet tidak sehat, makanan berlemak tinggi, bahan
aditif makanan dan faktor-faktor lainnya tanpa disadari masuk kedalam tubuh
sehingga menyebabkan laju peningkatan produksi radikal bebas semakin cepat
(Khaira, 2010).
Kelebihan produksi radikal bebas dan kurangnya antioksidan merupakan
dua kondisi umum pemicu stress oksidatif. Keadaan stress oksidatif akan
membawa pada kerusakan oksidatif mulai dari tingkat sel, jaringan, hingga ke
organ tubuh yang menyebabkan terjadinya proses penuaan dan munculnya
penyakit. Langkah yang paling tepat untuk mengurangi stress oksidatif adalah
dengan mengurangi paparan terhadap radikal bebas dan mengoptimalkan
pertahanan tubuh dengan memperbanyak asupan antioksidan (Khaira, 2010).
Antioksidan merupakan senyawa yang dapat menghambat spesies oksigen
reaktif dan juga radikal bebas dengan cara bereaksi dengan radikal bebas reaktif
yang membentuk radikal bebas tidak reaktif yang tidak stabil sehingga dapat
mencegah penyakit-penyakit yang dihubungkan dengan radikal bebas seperti
karsinogenesis, kardiovaskuler, dan penuaan (Sayuti dan Yenrina, 2015).
Dalam beberapa tahun ini, terdapat kenaikan minat dalam antioksidan
alami dan yang kemudian berdasarkan studi literatur diakui bahwa penggantian
antioksidan sintetis oleh antioksidan alami mungkin memiliki beberapa manfaat
dan banyak penelitian tentang antioksidan alami telah difokuskan pada senyawa
fenolik, khususnya flavonoida sebagai sumber potensi antioksidan alami (Gupta,
2015).
Srrikaya (Annona squamosa) merupakan buah yang terkenal akan
kandungan nutrisinya. Kandungan fitokimia yang utama dari buah srikaya adalah
alkaloida, glikosida, flavonoida, steroid, tanin, terpenoid, serta komponen fenolik.
Selain itu juga mengandung protein, lemak, karbohidrat, fiber kasar, mineral,

1
kalsium, fosfor, zat besi, magnesium, asam askorbat, niasin, dan asam nikotinik
(Kowsalya, dkk, 2014).
Berdasarkan reaksi kimia yang terlibat, uji antioksidan pada umumnya
dibagi ke dalam 2 jenis, yaitu reaksi berbasis transfer atom hidrogen (hydrogen
atom transfer atau HAT) contohnya seperti metode ORAC dan TRAP serta reaksi
berbasis transfer satu elektron (electron transfer atau ET) contohnya seperti metode
ABTS/TEAC, DPPH, FRAP dan CUPRAC (Gupta, 2015).
Penentuan aktivitas antioksidan pada penelitian ini menggunakan metode
DPPH. Metode uji aktivitas antioksidan dengan DPPH (2,2-diphenyl-1-
picrylhydrazyl) dipilih karena metode ini adalah metode sederhana, mudah, cepat
dan peka serta hanya memerlukan sedikit sampel untuk evaluasi aktivitas
antioksidan dari senyawa bahan alam sehingga digunakan secara luas untuk
menguji kemampuan senyawa yang berperan sebagai pendonor elektron (Ridho,
dkk., 2013).
Prinsip dari metode uji aktivitas antioksidan ini adalah melakukan
pengukuran pemerangkapan radikal DPPH oleh suatu senyawa yang mempunyai
aktivitas antioksidan dengan menggunakan spektrofotometri UV-Vis sehingga
dengan demikian akan diketahui nilai aktivitas peredaman radikal bebas yang
dinyatakan dengan nilai IC50 (Inhibitory Concentration) (Ridho, dkk., 2013).
Berdasarkan uraian di atas, maka perlu dilakukan penelitian uji antioksidan
sari air buah srikaya hijau dan srikaya merah dengan metode pemerangkapan
DPPH dengan mengukur serapannya dengan spektrofotometer sinar tampak.
1.2 Rumusan Masalah

a. Apa saja golongan senyawa kimia terkandung di dalam buah srikaya hijau

dan srikaya merah (Annona squamosa L.)?

b. Apakah sari air buah srikaya merah (Annona squamosa L.) memiliki

aktivitas antioksidan yang lebih baik daripada sari air buah srikaya hijau

(Annona squamosa L.)?

c. Berapakah kekuatan antioksidan dari sari buah srikaya hijau dan srikaya

merah (Annona squamosa L.) dibandingkan dengan vitamin C?

2
1.3 Hipotesis

a. Buah srikaya hijau dan srikaya merah (Annona squamosa L.) memiliki

golongan kimia alkaloida, flavonoida, saponin, tanin, glikosida, dan

steroid/triterpenoid.

b. Sari air buah srikaya merah (Annona squamosa L.) memiliki aktivitas

antioksidan yang lebih baik daripada sari air buah srikaya hijau (Annona

squamosa L.)

c. Sari air buah srikaya hijau dan srikaya merah memiliki antioksidan yang

lebih kecil dari vitamin C.

1.4 Tujuan Penelitian

a. Untuk mengetahui senyawa kimia yang terkandung pada sari air buah

srikaya hijau dan srikaya merah (Annona squamosa L.)

b. Untuk mengetahui adanya aktivitas antioksidan sari air srikaya hijau dan

srikaya merah (Annona squamosa L.) dengan metode DPPH (2,2-diphenyl-

1-picrylhydrazyl)

c. Untuk mengetahui besar kekuatan aktivitas antioksidan dari sari air buah

srikaya hijau dan srikaya merah (Annona squamosa L.) dibandingkan

dengan vitamin C.

1.5 Manfaat Penelitian

Dapat memberikan informasi terkait golongan senyawa kimia dan kekuatan

aktivitas antioksidan yang terkandung pada sari air buah srikaya hijau dan

srikaya merah (Annona squamosa L.) serta memberikan informasi sari air dari

buah varietas warna mana yang memiliki aktivitas antioksidan yang lebih

baik.

3
1.6 Kerangka Pikir Penelitian
Kerangka pikir penelitian dapat dilihat pada Gambar 1.1

1. Alkaloida
2. Glikosida
Buah Srikaya Skrinning 3. Saponin
Merah dan Hijau Fitokimia 4. Tanin
5. Flavonoida
6. Triterpen/Steroid

Sari Air Buah Uji Aktivitas Nilai IC50 Sari Air

Srikaya Hijau dan Antioksidan Buah Srikaya Hijau
Sari Air Buah dengan Metode dan Sari Air Buah
Srikaya Merah DPPH Srikaya Merah
Gambar 1.1 Skema Pikir Penelitian

4
 BAB II TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Uraian Tumbuhan

Tumbuhan merupakan salah satu sumber yang penting dalam obat

tradisional. Srikaya (Annona squamosa) merupakan buah yang terkenal akan
kandungan nutrisinya. Kandungan fitokimia yang utama dari buah srikaya adalah
alkaloida, glikosida, flavonoida, steroida, tanin, terpenoid, serta komponen
fenolik. Selain itu juga mengandung protein, lemak, karbohidrat, fiber kasar,
mineral, kalsium, fosfor, zat besi, magnesium, asam askorbat, niasin, dan asam
nikotinik (Kowsalya, dkk., 2014).

2.1.1 Morfologi Tumbuhan

Srikaya merupakan tanaman perdu sampai pohon, berumah satu,
berkelamin banci, tinggi 2-7 m, batang gilik, percabangan sympodial, ujung rebah,
kulit batang coklat muda. Daun tunggal berseling, helaian berbentuk elips
memanjang sampat bentuk lanset, ujung tumpul, sampai meruncing pendek,
panjang 6-17 cm, lebar 2,5- 7,5 cm, tepi rata, gundul, hijau mengkilat. Bunga
tunggal, dalam berkas 1-2 berhadapan atau disamping daun. Daun kelopak
segitiga, waktu kuncup bersambung seperti katup, kecil. Mahkota daun mahkota
segitiga, yang teluar berdaging tebal, panjang 2-2,5 cm, putih kekuningan, dengan
pangkal yang berongga berubah ungu, daun mahkota yang terdalam sangat kecil
atau mereduksi. Dasar bunga bentuk tugu (tinggi). Benang sari berjumlah banyak,
putih, kepala sari berbentuk topi, penghubung ruang sari melebar, dan menutup
ruang sari. Putik banyak, setiap putik tersusun dari 1 daun buah, ungu tua, kepala
putik duduk, rekat menjadi satu, mudah rontok. Buah majemuk agregat, berbentuk
bulat membengkok di ujung, garis tengah 5-0 cm, permukaan berduri, berlilin,
bagian buah dengan ujung yang melengkung, pada waktu masak sedikit atau
banyak melepaskan diri satu dengan yang lain, daging buah putih keabu-abuan.
Tumbuh di dataran rendah sampai ketinggian 1000 meter di atas permukaan laut,
terutama pada tanah berpasir sampai tanah lempung berpasir dan dengan sistem
drainase yang baik pada pH 5,5- 7,4 (Yuniarti, 2008).

5
2.2. Klasifikasi
2.2.1 Klasifikasi Buah Srikaya Hijau Menurut Herbarium Medanense (2018)

Kingdom : Plantae
Divisi : Spermatophyta
Class : Dicotyledoneae
Ordo : Magnoliales
Famili : Annonaceae
Genus : Annona
Spesies : Annona squamosa L. Nama lokal : Srikaya Hijau
2.2.2 Klasifikasi Buah Srikaya Merah Menurut Herbarium Medanense
(2018)

Kingdom : Plantae
Divisi : Spermatophyta
Class : Dicotyledoneae
Ordo : Magnoliales
Famili : Annonaceae
Genus : Annona
Spesies : Annona squamosa L. Nama lokal : Srikaya Merah

2.3. Radikal Bebas

Radikal bebas merupakan molekul yang tidak stabil dan sangat reaktif
karena maengandung satu elektron tidak berpasangan pada orbit terluarnya.
Untuk mencapai kestabilan, radikal bebas akan bereaksi dengan molekul
disekitarnya untuk memperoleh pasangan elektron. Reaksi ini akan
berlangsung terus menerus dalam tubuh dan apabila tidak dihentikan akan
menimbulkan berbagai penyakit seperti penuaan dini, kanker, liver serta
penyakit degeneratif lainnya. Karena sangat reaktif, radikal bebas sangat
mudah menyerang sel-sel sehat di dalam tubuh, oleh karena itu tubuh
memerlukan pertahanan untuk menetralkan radikal bebas tersebut (Huliselan,
dkk., 2015).

6
 Secara biokimia, oksidasi merupakan proses pelepasan elektron dari suatu
senyawa. Sedangkan reduksi adalah proses pemerangkapan elektron. Senyawa
yang dapat menarik atau menerima elektron disebut oksidan atau oksidator,
sedangkan senyawa yang dapat melepaskan atau memberikan elektron disebut
reduktan atau reduktor. Dalam ilmu kimia, pengertian oksidan adalah senyawa
penerima elektron (electron acceptor), yaitu senyawa yang dapat menarik elektron
(Sayuti dan Yenrina, 2015).
Para ahli biokimia menyebutkan bahwa radikal bebas merupakan salah
satu bentuk senyawa yang memiliki elektron yang tidak berpasangan. Radikal
bebas adalah atom, molekul atau senyawa yang dapat berdiri sendiri yang
mempunyai elektron tidak berpasangan, oleh karena itu bersifat sangat reaktif dan
tidak stabil. Elektron yang tidak berpasangan selalu berusaha untuk mencari
pasangan baru, sehingga mudah beraksi dengan zat lain (protein, lipid, maupun
deoxyribonucleic acid (DNA)) dalam tubuh (Sayuti dan Yenrina, 2015).

Lipid di membran sel cukup rentan terhadap kerusakan oksidatif karena

radikal bebas cenderung untuk berkumpul dalam membran sel, dikenal sebagai
"lipid per oksidasi" (LOO) Ketika membran sel menjadi teroksidasi oleh ROS
(reactive oxygen species atau spesi oksigen reaktif), ia menjadi rapuh dan bocor.
Akhirnya, sel berantakan dan mati (Gupta, 2015).
Pembentukan radikal bebas terjadi secara terus menerus di dalam tubuh.
Hal ini terjadi melalui proses metabolisme sel normal, proses peradangan,
kekurangan nutrisi, maupun sebagai respon adanya radiasi sinar gamma,
ultraviolet (UV), polusi lingkungan dan asap rokok. Faktor yang menyebabkan
timbulnya radikal bebas dalam tubuh antara lain sinar X, asap mobil, bahan kimia
dalam makanan (pengawet, pewarna sintetik, residu pestisida, dan bahan
tambahan makanan lainnya), bahan kimia termasuk obat-obatan. Diet (pola makan
sendiri) juga dapat menyebabkan terbentuknya radikal bebas (Sayuti dan Yenrina,
2015).
Tubuh manusia memiliki sistem pertahanan endogen terhadap serangan
radikal bebas terutama terjadi melalui persitiwa metabolisme sel normal dan
peradangan. Jumlah radikal bebas dapat mengalami peningkatkan yang
diakibatkan faktor stress, radiasi, asap rokok, dan polusi lingkungan menyebabkan

7
sistem pertahanan tubuh yang tidak memadai, sehingga tubuh memerlukan
tambahan antioksidan dari luar yang dapat melindungi dari serangan radikal bebas
(Werdhasari, 2014).

2.4. Antioksidan
Antioksidan adalah senyawa yang mampu menangkal atau meredam efek
negatif oksidan dalam tubuh, bekerja dengan cara mendonorkan salah satu
elektronnya kepada senyawa yang bersifat oksidan sehingga aktivitas senyawa
oksidan tersebut dapat dihambat. Antioksidan bermanfaat dalam mencegah stress
oksidatif yang disebabkan oleh radikal bebas sehingga mencegah terjadinya
berbagai macam penyakit seperti penyakit kardiovaskuler, jantung kororner,
kanker, serta penuaan dini (Ramadhan, 2015).
Stress oksidatif dapat didefinisikan sebagai keadaan di mana radikal bebas
dalam tubuh kita melebihi jumlah pertahanan antioksidan kita. Mereka juga dapat
berfungsi untuk mempersingkat panjang telomere kromosom, yang dipercayai oleh
banyak ahli menjadi jam biologis paling akurat kita memiliki (Gupta, 2015)
Dalam bidang biokimia dan obat-obatan, antioksidan merupakan enzim
atau senyawa organik lain, seperti vitamin E atau β-karoten yang mampu
menangkal efek kerusakan akibat oksidasi pada jaringan hewan. Dalam industri
kimia, antioksidan sering mengacu pada senyawa yang menghambat autoksidasi
produk kimia seperti karet dan plastik. Dalam bidang kimia makanan, antioksidan
dapat mencegah oksidasi lemak, sehingga tidak terjadi ketengikan (Gupta, 2015).
Pada sistem enzim dalam tubuh manusia misalnya enzim superoksida
dismutase yang dapat berfungsi sebagai antioksidan, namun jika jumlah radikal
bebas lebih banyak daripada enzim yang terdapat dalam tubuh maka tubuh perlu
tambahan antioksidan dari luar (Huliselan, dkk., 2015).
Berdasarkan mekanisme kerjanya antioksidan dapat dibedakan menjadi 3, yaitu:
a. Antioksidan Primer (Antioksidan Endogenous)
Antioksidan primer ini bekerja untuk mencegah terbentuknya senyawa
radikal bebas baru. Ia mengubah radikal bebas yang ada menjadi molekul yang
berkurang dampak negatifnya, sebelum radikal bebas ini sempat bereaksi. Contoh
antioksidan ini adalah enzim SOD yang berfungsi sebagai pelindung hancurnya

8
sel-sel dalam tubuh serta mencegah proses peradangan karena radikal bebas.
Enzim ini berkerja oleh pengaruh mineral-mineral seperti mangan, seng, tembaga,
dan selenium yang terdapat dalam makanan dan minuman (Ramadhan, 2015)

b. Antioksidan Sekunder (Antioksidan Eksogenus)

Antioksidan sekunder disebut juga antioksidan eksogenus atau non-
enzimatis. Kerja sistem antioksdian non-enzimatis yaitu dengan cara memotong
reaksi oksidasi berantai dari radikal bebas atau dengan cara menangkapnya.
Radikal bebas dengan kata lain, tidak akan bereaksi dengan komponen seluler.
Contoh dari antioksidan sekunder adalah vitamin E, vitamin C, dan beta karoten
yang dapat diperoleh dari buah-buahan serta sayur-sayuran (Ramadhan, 2015).

c. Antioksidan Tersier
Antioksidan Tersier merupakan senyawa-senyawa yang memperbaiki sel-
sel dan jaringan yang rusak karena serangan radikal bebas. Kelompok antioksidan
tersier meliputi sistem enzim DNA-repair dan metionin sulfoksida reduktase yang
dapat memperbaiki DNA dalam inti sel. Enzim tersebut bermanfaat untuk
perbaikan DNA pada penderita kanker (Ramadhan, 2015).
Menurut Lung dan Destiani (2017), tingkat kekuatan antioksidan dapat dilihat dari
Tabel 2.1 berikut ini :
Tabel 2.1 Tingkat Kekuatan Antioksidan
Intensitas Antioksidan Nilai IC50 (μg/ml)
Sangat Kuat < 50
Kuat 50-100
Sedang 100-250
Lemah 250-500
Tidak Aktif >500

Dalam beberapa tahun ini, terdapat kenaikan minat dalam antioksidan

alami dan yang kemudian berdasarkan studi literatur diakui bahwa penggantian
antioksidan sintetis oleh antioksidan alami mungkin memiliki beberapa manfaat
dan banyak penelitian tentang antioksidan alami telah difokuskan pada senyawa

9
fenolik, khususnya flavonoida sebagai sumber potensi antioksidan alami. Jumlah
senyawa antioksidan alami yang ada dalam buah-buahan, sayuran dan suplemen
diet adalah asam askorbat, α-tokoferol, asam fenolik (asam benzoat, asam Trans-
cinnamic dan asam hydroxycinnamic), kumarin, lignans, stilbenes (dalam bentuk
glikosilat), flavonoida, isoflavonoida dan fenolik polimer (tanin) (Gupta, 2015).

2.5 Vitamin C
Salah satu antioksidan alami yaitu vitamin C. Vitamin C merupakan
antioksidan alami yang mudah dan murah bila dikonsumsi dari alam. Vitamin C
sebagai antioksidan berfungsi untuk mengikat O2 sehingga tidak mendukung reaksi
oksidasi (oxygen scavenger). Vitamin C terdapat dalam seluruh jaringan hidup dan
dapat mempengaruhi reaksi oksidasi-reduksi dalam jaringan tersebut. Sumber
utama vitamin C terdapat pada sayuran dan buah-buahan. Manusia merupakan satu-
satunya jenis primata yang tidak dapat mensintesis vitamin C. Kebutuhan rata-rata
vitamin C pada manusia per hari antara 45 sampai 75 mg. Keadaan stress yang
berkelanjutan dan terapi obat-obatan bisa meningkatkan kebutuhan akan vitamin C
(Sayuti dan Yenrina, 2015).
Vitamin C mempunyai berat molekul 178 dengan rumus molekul C6H8O2
dalam bentuk kristal tidak bewarna, bersifat larut dalam air, sedikit larut dalam
aseton/alkohol yang mempunyai berat molekul rendah. Vitamin C sukar larut dalam
kloroform, eter, dan benzena (Ditjen POM Depkes RI, 1979).
Vitamin C merupakan antioksidan non enzimatis yang larut dalam air.
Vitamin C berfungsi sebagai antioksidan karena secara efektif menangkap radikal
bebas terutama ROS. Sebagai antioksidan, vitamin C bekerja sebagai donor
elektron ke dalam reaksi biokimia baik intraseluler maupun ekstraseluler. Secara
intrasel vitamin C mampu menghilangkan senyawa oksigen reaktif di dalam sel
neutrofil, monosit, protein lensa, dan retina serta bereaksi dengan Fe-ferritin.
Diluar sel, vitamin C mampu menghilangkan senyawa oksigen reaktif, mencegah
terjadinya LDL teroksidasi, mentransfer elektron ke dalam tokoferol teroksidasi
dan mengabsorpsi logam dalam saluran pencernaan (Adawiah, dkk., 2016)

10
 Menurut Lung dan Destiani (2017) Vitamin C dapat langsung bereaksi
dengan anion hidroksil dengan mendonorkan satu elektron untuk membentukkan
senyawa semihidroaskorbat yang tidak bersifat reaktif dan selanjutnya mengalami
reaksi disproporsionasi untuk membentuk dehidroaskorbat yang bersifat tidak
stabil. Dehidroaskorbat akan terdegradasi untuk membentuk asam oksalat dan
asam treonat. Reaksi Vitamin C dan DPPH ditunjukan oleh Gambar 2.1
Gambar 2.1 Reaksi Antara Vitamin C dan DPPH (Souza, dkk., 2019)

2.6 Metode Pengujian Antioksidan

Berdasarkan reaksi kimia yang terlibat, uji antioksidan pada umumnya
dibagi ke dalam 2 jenis, yaitu reaksi berbasis transfer atom hidrogen (hydrogen
atom transfer atau HAT) dan reaksi berbasis transfer satu elektron (electron
transfer atau ET) (Gupta, 2015).
HAT menilai kemampuan antioksidan untuk meredam radikal bebas
(umumnya peroksil radikal) dengan cara donasi atom H. Sebagai contoh uji
berbasis HAT, adalah oxygen radical absorbance capacity (ORAC), total radical
trapping antioxidant parameter (TRAP), pemutihan β-karoten, dan pemutih crocin.
Sedangkan ET melibatkan satu reaksi redoks dengan oksidan sebagai indikator titik
akhir reaksi. Pengukuran spektrofotometris ET biasanya mengukur kapasitas
antioksidan dalam pengurangan oksidan, yang berubah warna ketika dikurangi.
Tingkat perubahan warna (baik peningkatan atau penurunan absorbansi pada
panjang gelombang tertentu) berhubungan dengan konsentrasi antioksidan dalam
sampel. Sebagai contoh uji berbasis ET adalah ABTS/TEAC (trolox equivalent
antioxidant capacity), DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazil), FRAP (ferric
reducing antioxidant power) dan CUPRAC (cupric reducing antioxidant capacity).
HAT dan ET dimaksudkan untuk mengukur kapasitas pemerangkapan radikal (atau
oksidan) (Gupta, 2015).

11
 Salah satu metode yang paling umum digunakan untuk menguji aktivitas
antioksidan adalah dengan menggunakan radikal bebas 1,1-diphenyl-2-
picrylhydrazil (DPPH). Pengukuran antioksidan dengan metode DPPH adalah
metode pengukuran antioksidan yang sederhana, cepat dan tidak membutuhkan
banyak reagen. Pada metode lain selain DPPH membutuhkan reagen kimia yang
cukup banyak, waktu analisis yang lama, biaya yang mahal dan tidak selalu dapat
digunakan pada semua sampel. Metode DPPH memberikan informasi reaktivitas
senyawa yang diuji dengan suatu radikal stabil. DPPH memberikan serapan kuat
pada panjang gelombang 517 nm dengan warna violet gelap. Penangkap radikal
bebas menyebabkan elektron menjadi berpasangan yang kemudian menyebabkan
penghilangan warna yang sebanding dengan jumlah elektron yang diambil (Sayuti
dan Yenrina, 2015)
Metode pemerangkapan radikal bebas DPPH diperkenalkan 50 tahun yang
lalu oleh Marsden Blois. Sebagai sampel uji, Blois menggunakan asam amino
sistein yang mengandung gugus thiol. Ketika larutan DPPH dicampurkan dengan
senyawa yang dapat mendonorkan atom hidrogen, akan dihasilkan bentuk
tereduksi dari DPPH dan berkurangnya warna ungu (Molyneux, 2004)
DPPH merupakan radikal bebas yang stabil. DPPH menerima elektron
atau radikal hidrogen kemudian akan membentuk molekul diamagnetik yang
stabil. Reaksi DPPH dengan senyawa antioksidan dapat dilihat pada Gambar 2.2
berikut:

R:H = antioksidan pemerangkap radikal R = antioksidan radikal

Gambar 2.2 Reaksi DPPH dengan Senyawa Antioksdian (Liang dan Kitts, 2014)

Parameter yang digunakan untuk menunjukan aktivitas antioksidan adalah

harga konsentrasi efisien atau Efficient Concentration (EC50) atau Inhibition
Concentration (IC50) yaitu konsentrasi suatu zat antioksidan yang dapat

12
menyebabkan 50% DPPH kehilangan karakter radikal atau konsentrasi zat suatu
antioksidan yang memberikan % penghambatan 50%. Zat yang mempunyai
aktivitas antioksidan yang tinggi akan mempunyai nilai EC50 atau IC50 yang rendah
(Molyneux, 2004).
Pada metode ini, larutan DPPH berperan sebagai radikal bebas yang akan
bereaksi dengan senyawa antioksidan sehingga DPPH akan berubah menjadi 1,1-
diphenyl-2-picrylhydrazin yang bersifat non-radikal. Peningkatan jumlah 1,1-
diphenyl-2-picrylhydrazin akan ditandai dengan berubahnya warna ungu tua
menjadi warna merah muda atau kuning pucat dan bisa diamati dan dilihat
menggunakan spektrofotometer sehingga aktivitas peredaman radikal bebas oleh
sampel dapat ditentukan (Sayuti dan Yenrina, 2015).
Panjang gelombang maksimum (λmaks) yang digunakan dalam pengukuran
sampel uji sangat bervariasi. Menurut beberapa literatur panjang gelombang
maksimum untuk DPPH antara lain 515 nm, 516 nm, 517 nm, 518 nm, 519 nm, dan
520 nm (Molyneux, 2004).

2.7 Spektrofotometer UV-Vis

Spektrofotometer UV-Vis adalah pengukuran panjang gelombang dan
intensitas sinar ultraviolet dan cahaya tampak yang diabsorbsi oleh sampel. Sinar
ultraviolet dan cahaya tampak memiliki energi yang cukup untuk mempromosikan
elektron pada kulit terluar ke tingkat energi yang lebih tinggi. Spektroskopi UV-
Vis biasanya digunakan untuk molekul dan ion anorganik atau kompleks di dalam
larutan. Spektrum UV-Vis mempunyai bentuk yang lebar dan hanya sedikit
informasi tentang struktur yang bisa didapatkan dari spektrum ini. Tetapi spektrum
ini sangat berguna untuk pengukuran secara kuantitatif. Konsentrasi dari analit di
dalam larutan bisa ditentukan dengan mengukur absorban pada panjang gelombang
tertentu dengan menggunakan hukum Lambert-Beer. Sinar ultraviolet berada pada
panjang gelombang 200-400 nm sedangkan sinar tampak berada pada panjang
gelombang 400-800 nm (Dachriyanus, 2004).

13
 BAB III METODE PENELITIAN

Penelitian ini dilakukan dengan menggunakan metode deskriptif di

Laboratorium Fitokimia dan Laboratorium Penelitian Fakultas Farmasi Universitas
Tjut Nyak Dhien meliputi pengumpulan dan pengolahan bahan tanaman, skrining
fitokimia, pembuatan sari air buah srikaya hijau dan srikaya merah (Annona
squamosa L.). Pengujian aktivitas antioksidan dilakukan dengan menggunakan
metode DPPH (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl).

3.1 Alat
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah alat-alat gelas
laboratorium, aluminium foil (Total Wrap), blender (Miyako), cawan porselin,
Hotplate (Hanna), kertas perkamen, kertas saring, neraca analitik (Mettler Toledo),
penangas air, spatula, spektrofotometer UV-Vis (Shimadzu).

3.2 Bahan
Bahan tumbuhan yang digunakan dalam penelitian ini adalah buah srikaya
hijau dan srikaya merah (Annona squamosa L.), air suling, metanol, bahan-bahan
yang berkualitas proanalisa: alfa naftol, amil alkohol, asam nitrat pekat, asam asetat
anhidrat, asam klorida pekat, asam sulfat pekat, benzena, besi (III) klorida, bismuth
nitrat, DPPH (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl), etilasetat, iodium, isopropanol,
kalium iodida, kloroform, metanol, natrium hidroksida, raksa (II) klorida, serbuk
magnesium, serbuk seng, dan timbal (II) asetat.

3.3 Pembuatan Larutan Pereaksi

3.3.1 Pereaksi Asam Klorida 2 N
Sebanyak 16,6ml HCl (p) diambil, kemudian dilarutkan dalam air suling
hingga 100ml (Depkes RI, 1995).

3.3.2 Pereaksi Dragendorff

Pereaksi dibuat dua larutan persediaan : (1) 0,6 gram bismuth nitrat dalam 2
ml HCL pekat dan 10 ml air; (2) 6 gram kalium iodida dalam 10 ml air. Larutan
persediaan ini dicampur dengan 7 ml HCl pekat dan 15 ml air (Depkes RI, 1995).

14
3.3.3 Pereaksi Bouchardat
Sebanyak 4 gram kalium iodida dan 2 gram iodium dilarutkan dalam air
suling secukupnya hingga 100 ml (Depkes RI, 1995).

3.3.4 Pereaksi Mayer

Sebanyak 2,266 gram raksa (II) klorida dilarutkan dalam air suling hingga
100 ml dan pada wadah lain dilarutkan 50 gram kalium iodida dalam 100 ml air
suling. 60 ml larutan I dicampurkan dengan 10 ml larutan II dan ditambahkan air
suling hingga 100 ml (Depkes RI, 1995).

3.3.5 Pereaksi Timbal (II) Asetat 0,4 M

Sebanyak 15,17 gram timbal asetat ditimbang, kemudian dilarutkan dalam
air suling bebas karbon dioksida hingga 100 ml (Depkes RI, 1995).

3.3.6 Pereaksi Molisch

Sebanyak 3 gram alfa naftol dilarutkan dalam 15 ml etanol 95 %
ditambahkan dengan asam nitrat 0,5 N secukupnya hingga diperoleh larutan 100
ml (Depkes RI, 1995).

3.3.7 Pereaksi Liebermann-Burchard

Sebanyak 5 ml asam asetat anhidrida dicampurkan dengan 5 ml asam
sulfat pekat kemudian ditambahkan etanol hingga volume 50 ml (Depkes RI,
1995).

3.3.8 Pereaksi Besi (III) Klorida 1%

Sebanyak 1 gram besi (III) klorida ditimbang, kemudian dilarutkan dalam
air suling hingga 100 ml, lalu disaring (Depkes RI, 1995).

3.3.9 Pembuatan Pereaksi DPPH

Pembuatan pereaksi DPPH 0,5 mM, Sebanyak 20 mg DPPH ditimbang
kemudian dilarutkan dalam metanol hingga diperoleh volume larutan 100 ml
(konsentrasi 200 µg/ml) (Molyneux, 2004).

15
3.4 Pengumpulan dan Pengolahan Bahan Tanaman
3.4.1 Pengumpulan Bahan Tanaman
Pengambilan bahan tanaman dilakukan secara purposif yaitu tanpa
membandingkan tanaman yang sama dengan daerah lain. Bahan tanaman yang
digunakan adalah buah buah srikaya hijau dan srikaya merah. Bahan diambil dari
Kota Tebing Tinggi, Provinsi Sumatera Utara.

3.4.2 Identifikasi Tanaman

Identifikasi tanaman dilakukan di Medanense – Fakultas Matematika dan
Ilmu Pengetahuan Alam, Departemen Biologi, Universitas Sumatera Utara.

3.5 Skrining Fitokimia

Skrining fitokimia dari sari air buah srikaya meliputi pemeriksaan
golongan senyawa alkaloida, glikosida, saponin, tanin, flavonoidaa dan
steroida/triterpenoida (Farnsworth, 1966).

3.5.1 Pemeriksaan Alkaloida

Ditimbang 0,5 g buah srikaya segar yang telah dihaluskan, ditambahkan 1
ml asam klorida 2 N dan 9 ml akuades, dipanaskan diatas penangas air selama 2
menit, didinginkan dan disaring. Filtrat dipakai untuk percobaan berikut:
a. Diambil 0,5 ml filtrat, lalu ditambahkan 2 tetes pereaksi Meyer, akan
terbentuk endapan putih/kuning.
b. Diambil 0,5 ml filtrat, lalu ditambahkan 2 tetes pereaksi Bouchardat, akan
terbentuk endapan berwarna coklat sampai kehitaman.
c. Diambil 0,5 ml filtrat, lalu ditambahkan 2 tetes pereaksi Dragendorff, akan
terbentuk endapan berwarna coklat atau jingga kecoklatan.
Alkaloida positif jika terjadi endapan atau kekeruhan paling sedikit dua
dari tiga percobaan diatas (Depkes RI, 1995).

3.5.2 Pemeriksaan Glikosida

Sebanyak 3 g buah srikaya segar yang telah dihaluskan disari dengan 30
ml campuran etanol 95 % dengan air suling (7:3), ditambahkan asam sulfat pekat
sehingga diperoleh pH 2, kemudian direfluks selama 10 menit, didinginkan dan

16
disaring. Diambil 20 ml filtrat ditambahkan 25 ml air suling dan 25 ml timbal (II)
asetat 0,4 M, dikocok, didiamkan 5 menit, lalu disaring. Filtrat diekstraksi dengan
20 ml campuran isopropanol dan kloroform (2:3), dilakukan berulang sebanyak
tiga kali. Kumpulan sari air diuapkan dengan temperatur tidak lebih dari 50 0C.
Sisanya dilarutkan dalam 2 ml metanol. Larutan sisa dipakai untuk percobaan
berikut:
Larutan sisa dimasukkan ke dalan tabung reaksi selanjutnya diuapkan di
atas penangas air, pada sisa ditambahkan 2 ml air dan 5 tetes pereaksi
Molisch. Tambahkan hati-hati 2 ml asam sulfat pekat melalui dinding tabung,
terbentuk cincin ungu pada batas kedua cairan, menunjukkan adanya ikatan gula.
Larutan percobaan diuapkan di atas penangas air. Larutkan sisa dalam 5 ml asam
asetat anhidrat. Tambahkan 10 tetes asam sulfat pekat, akan terjadi warna biru
atau hijau, menunjukkan adanya glikosida (Depkes RI, 1995).

3.5.3 Pemeriksaan Flavonoida

Diambil sebanyak 10 g buah srikaya segar yang telah dihaluskan
kemudian ditambahkan 100 ml air panas, dididihkan selama 5 menit dan disaring
dalam keadaan panas, filtrat yang diperoleh kemudian diambil 5 ml lalu di
tambahkan 0,1 g serbuk Mg dan 1 ml asam klorida pekat dan 2 ml amil alkohol,
dikocok, dan dibiarkan memisah. Flavonoida positif jika terjadi warna merah,
kuning, jingga pada lapisan amil alkohol (Farnsworth, 1966).

3.5.4 Pemeriksaan Saponin

Sebanyak 0,5 g buah srikaya segar yang telah dihaluskan, dimasukan ke
dalam tabung reaksi, ditambahkan 10 ml air panas dan disaring. Larutan atau
filtratnya diambil dan dimasukan ke dalam tabung reaksi, kemudian dikocok kuat-
kuat selama 10 detik. Jika terbentuk buih yang stabil pada tabung reaksi selama
tidak kurang dari 10 menit dengan tinggi buih 1-10 cm serta dengan penambahan
beberapa tetes asam klorida 2 N buih tidak hilang menunjukan adanya saponin
(Depkes RI, 1995).

17
3.5.5 Pemeriksaan Tanin
Sebanyak 0,5 g buah srikaya segar yang telah dihaluskan, disari dengan 10
ml akuades selama 15 menit lalu disaring. Filtrat diencerkan dengan akuades
sampai tidak berwarna. Lalu diambil sebanyak 2 ml dan ditambahkan 1-2 tetes
larutan pereaksi besi (III) klorida 10%. Larutan akan terjadi warna biru atau hijau
kehitaman menunjukan adanya tanin (Farnsworth, 1996).

3.5.6 Pemeriksaan Triterpenoid/Steroid

Sebanyak 1 g buah srikaya segar yang telah dihaluskan sebelumnya,
direndam dengan 20 ml n-heksana selama 2 jam lalu disaring, filtrat diuapkan
dalam cawan penguap. Sisanya ditambahkan pereaksi Liebermann-Burchard
(LB), munculnya warna merah ungu atau hijau biru menunjukan adanya
triterpenoid/steroid (Farnsworth, 1996).

3.6 Pembuatan Sari Air Buah Srikaya Hijau dan Merah

Buah srikaya hijau dan merah yang telah masak masing-masing dicuci
bersih dengan air dan ditiriskan. Kemudian dipisahkan dari kulit dan bijinya
sehingga menghasilkan daging buah saja. Lalu daging buah dihaluskan. Kemudian
ditimbang masing-masing 50 g buah srikaya yang telah halus dan direndam dalam
50 ml aquades. Kemudian masing-masing sampel disaring, filtrat hasil
penyaringan dianggap sebagai sari air buah srikaya.

3.7 Pengujian Aktivitas Antioksidan dengan Spektrofotometer UV-Visibel

3.7.1 Prinsip Metode Pemerangkapan Radikal Bebas DPPH
Kemampuan sampel uji dalam meredam proses oksidasi radikal bebas
DPPH dalam larutan metanol (sehingga terjadi perubahan warna DPPH dari ungu
menjadi kuning) dengan nilai IC50 (konsentrasi sampel uji yang memerangkap
radikal bebas 50%) sebagai parameter menentukan aktivitas antioksidan sampel uji
tersebut (Molyneux, 2004).

18
 3.7.2 Pembuatan Larutan DPPH 40 µg/ml
Larutan DPPH 0,5 mM (konsentrasi 200 µg/ml) dipipet sebanyak 5 ml,
kemudian dimasukkan ke dalam labu tentukur 25 ml, dicukupkan volumenya
dengan metanol sampai garis tanda (konsentrasi 40 µg/ml ).

3.7.3. Penentuan Panjang Gelombang Serapan Maksimum

Panjang gelombang maksimum dtentukan dengan menggunakan larutan
DPPH konsentrasi 40 µg/ml dan diukur serapannya pada panjang gelombang 400-
800 nm.

3.7.4 Pembuatan Larutan Induk Baku Sari Air Srikaya Hijau dan
Merah
Sebanyak 25 mg sari air buah srikaya (Annona squamosa L.) ditimbang
kemudian dilarutkan dalam labu tentukur 25 ml dengan metanol lalu volumenya
dicukupkan dengan metanol sampai garis tanda (konsentrasi 1000 µg/ml).

3.7.5 Pembuatan Larutan Induk Baku Vitamin C

Sebanyak 25 mg serbuk Vitamin C ditimbang kemudian dilarutkan dalam
labu tentukur 25 ml dengan metanol lalu volumenya dicukupkan dengan metanol
sampai garis tanda (konsentrasi 1000 µg/ml).

3.7.6. Penentuan Waktu Operasi (Operating Time)

Larutan induk baku sari air buah srikaya 1,25 ml dan larutan DPPH 0,5
mM, diukur serapannya untuk menentukan operating time larutan DPPH dalam
metanol sampai menit ke- 60 pada panjang gelombang serapan maksimum yang
telah diperoleh.

3.6.7 Pembuatan Larutan Uji Sari Air Srikaya Hijau dan Merah
Larutan induk dipipet sebanyak 1,25 ml; 2,5 ml; 3,75 ml; 5 ml; 6,25 ml
kemudian masing-masing dimasukkan ke dalam labu tentukur 25 ml (untuk
mendapatkan konsentrasi 50 µg/ml, 100 µg/ml, 150 µg/ml, 200 µg/ml, 250 µg/ml),
kemudian dalam masing-masing labu tentukur ditambahkan 5 ml larutan DPPH 0,5

19
 mM lalu volume dicukupkan dengan metanol sampai garis tanda
(konsentrasi 40 µg/ml). Dilakukan perlakuan yang sama untuk memperoleh
konsentrasi tersebut dari masing-masing larutan induk baku sari air srikaya hijau
dan sari air srikaya merah. Diamkan selama 34 menit, lalu diukur serapannya
menggunakan spektrofotometer UV-Visible pada panjang gelombang serapan
maksimum yang diperoleh pada menit ke 35.

3.6.8 Pembuatan Larutan Uji Vitamin C

Larutan induk vitamin C dipipet sebanyak 0,05 ml; 0,10 ml; 0,15 ml; dan
0,20 ml; ke dalam labu ukur 25 ml untuk mendapatkan konsentrasi larutan uji 2
µg/ml, 4 µg/ml, 6 µg/ml, dan 8 µg/ml. Ke dalam masing-masing labu tentukur
ditambahkan 5 ml larutan DPPH 0,5 mM lalu volumenya dicukupkan dengan
metanol sampai garis tanda (konsentrasi 40 µg/ml). Diamkan selama 34 menit, lalu
diukur serapannya menggunakan spektrofotometer UV-Vis pada panjang
gelombang yang diperoleh.

3.6.9 Analisis Persen Pemerangkapan Radikal Bebas DPPH

Menurut Molyneux (2004), penentuan persen pemerangkapan radikal
bebas dengan vitamin C sebagai kontrol menggunakan metode pemerangkapan
radikal bebas 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) Analisis IC50. Perhitungan
yang digunakan dalam penentuan aktivitas pemerangkapan radikal bebas adalah
nilai IC50 (Inhibitory Concentration), nilai tersebut menggambarkan besarnya
konsentrasi senyawa uji yang dapat memerangkap radikal bebas sebesar 50%.
Hasil perhitungan dimasukkan ke dalam persamaan regresi dengan konsentrasi
sampel (µg/ml) sebagai absis (sumbu x) dan nilai % inhibisi sebagai ordinatnya
(sumbu y).

20
 DAFTAR PUSTAKA

Adawiah, Sukandar, D., Muawanah, A. 2015. Aktivitas Antioksidan dan

Kandungan Komponen Bioaktif Sari Buah Namnam. Jurnal Kimia VALENSI.
1(2):130-136.
Dachriyanus. 2004. Analisis Struktur Senyawa Organik Secara Spektroskopi.
Padang: Lembaga Pengembangan Teknologi Informasi dan Komunikasi (LPTIK)
Universitas Andalas, Padang, Sumatera Barat, Indonesia. Halaman 1-3.
Depkes RI. 1995. MATERIA MEDIKA INDONESIA. JILID KEENAM. Jakarta:
Direktorat Jendral Pengawasan Obat dan Makanan. Halaman 297-337.
Ditjen POM Depkes RI. 1979. FARMAKOPE INDONESIA. EDISI KETIGA.
Jakarta: Direktorat Jendral Pengawasan Obat dan Makanan. Halaman 47.
Farnsworth, N.R. 1966 Biological and Phytochemical Screening of Plants. Journal
of Pharmaceutical Sciences. 55(3):225-276.
Gupta D. 2015. METHODS FOR DETERMINATION OF ANTIOXIDANT
CAPACITY: A REVIEW. IJPSR. 6(2): 546-566.
Herbarium Medanense. 2018. Identifikasi Tumbuhan. Medan: HERBARIUM
MEDANENSE (MEDA) UNIVERSITAS TJUT NYAK DHIEN.
Huliselan, Y.M., Runtuwene, M.R.J., Wewengkang, D.S. 2015. AKTIVITAS
ANTIOKSIDAN EKSTRAK ETANOL, ETIL ASETAT, DAN N-HEKSAN
DARI DAUN SESEWANUA (Clerodendron Squamatum
Vahl.).
PHARMACON Jurnal Ilmiah Farmasi-UNSRAT. 4(3):155-163.
Khaira, K. 2010. MENANGKAL RADIKAL BEBAS DENGAN ANTI-
OKSIDAN. Jurnal Sainstek. 2(2):183-187.
Kowsalya V., Behera P.R., Mary E.J., Anusha N., Vajrai R., Brindha P. 2014.
PRELIMINARY PHYTOCHEMICAL SCREENING AND ANTIBACTERIAL
EFFICACY STUDIES OF ANNONA SQUAMOSA
FRUIT. Int J Pharm Pharm Sci. 6(8):286-288.
Liang, N., Kitts, D.D. 2014. Antioxidant Property of Coffee Components:
Assessment of Methods that Define Mechanisms of Action. Molecules 2014. 19:
19180-19182.
Lung, J.K.S., Destiani, D.P. 2017. Uji Aktivitas Antioksidan Vitamin A, C, E
dengan Metode DPPH. Farmaka Suplemen. 15 (1):53-62.
Molyneux, P. 2004. The use of the stable free radical diphenylpicrylhydrazyl
(DPPH) for estimating antioxidant activity. Songklanakarin J. Sci. Technol. 26(2):
211-219.
Nandhakumar, E., Indumathi, P. 2013. In vitro Antioxidant Activities of Methanol
and Aqueous Extract of Annona squamosa (L.) Fruit Plup. J Acupunct Meridian
Stud. 6(3):142-148.
Neldawati, Ratnawulan, Gusnedi. 2013. Analisis Nilai Absorbansi dalam
Penentuan Kadar Flavonoid untuk Berbagai Jenis Daun Tanaman Obat. PILLAR
OF PHYSICS. 2:76-83.
Ramadhan, P. 2015. Mengenal ANTIOKSIDAN. Cetakan Pertama. GRAHA
ILMU Yogyakarta. Halaman 18-22.
Ridho, E.A. Sari, R., Wahdaningsih, S. 2013. UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN
EKSTRAK METANOL BUAH LAKUM (Cayratia trifolia) DENGAN
METODE DPPH (2,2-DIFENIL-1-PIKRILHIDRAZIL). Program Studi

21
Farmasi Fakultas Kedokteran, Universitas Tanjungpura. 1(1):5-6.
Sayuti, K., Yenrina R., 2015. ANTIOKSIDAN ALAMI dan SINTETIK. Padang:
Andalas University Press. Halaman 7-14.
Silalahi, J. 2006. Makanan Fungsional. Yogyakarta: Kanisius. Halaman 47-48.
Souza, V.C., Fim, F.C., Lima, M.E.A., Silva, L.B. 2019. Antioxidant Effects of
Vitamin C on Biomedical UHMWPE Compounds. Macromol. Symp.
383(1800002):1-10.
Werdhasari, A. 2014. Peran Antioksidan Bagi Kesehatan. Jurnal Biotek
Medisiana Indonesia. 3(2):59-68.
Yuniarti, T. 2008. ENSIKLOPEDIA TANAMAN OBAT TRADISIONAL. Jakarta:
MedPress. Halaman 381-384.

22
Lampiran 1. Bagan Kerja Penelitian

23
Lampiran 2. Foto Sampel

Gambar 1 Buah Srikaya Hijau dan Merah

Gambar 2 Buah Srikaya Hijau dan Merah Setelah

Dipotong

24
 13/04/2020

PROPOSAL PENELITIAN
“UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN SARI AIR BUAH
SRIKAYA HIJAU DAN SRIKAYA MERAH (Annona 
Squamosa L.) DENGAN METODE DPPH”
DHEA AUDINA ADNIN
174301004

PENDAHULUAN
Antioksidan merupakan senyawa yang dapat menghambat spesies oksigen reaktif dan
juga radikal bebas dengan cara bereaksi dengan radikal bebas reaktif yang membentuk
radikal bebas tidak reaktif yang tidak stabil sehingga dapat mencegah penyakit‐penyakit
yang dihubungkan dengan radikal bebas seperti karsinogenesis, kardiovaskuler, dan
penuaan. Berdasarkan reaksi kimia yang terlibat, uji antioksidan pada umumnya dibagi
ke dalam 2 jenis, yaitu reaksi berbasis transfer atom hidrogen (hydrogen atom transfer
atau HAT) contohnya seperti metode ORAC dan TRAP serta reaksi berbasis transfer satu
elektron (electron transfer atau ET) contohnya seperti metode ABTS/TEAC, DPPH, FRAP
dan CUPRAC

1
 13/04/2020

PENDAHULUAN
Prinsip dari metode uji aktivitas antioksidan ini adalah melakukan pengukuran
pemerangkapan radikal DPPH oleh suatu senyawa yang mempunyai aktivitas
antioksidan dengan menggunakan spektrofotometri UV‐Vis sehingga dengan demikian
akan diketahui nilai aktivitas peredaman radikal bebas yang dinyatakan dengan nilai
IC50 (Inhibitory Concentration) . Berdasarkan uraian di atas, maka perlu dilakukan
penelitian uji antioksidan sari air buah srikaya hijau dan srikaya merah dengan metode
pemerangkapan DPPH dengan mengukur serapannya dengan spektrofotometer sinar
tampak.

RUMUSAN MASALAH
•Apa saja golongan senyawa kimia terkandung di dalam buah srikaya hijau dan
srikaya merah (Annona squamosa L.)?

•Apakah sari air buah srikaya merah (Annona squamosa L.) memiliki aktivitas
antioksidan yang lebih baik daripada sari air buah srikaya hijau (Annona
squamosa L.)?

•Berapakah kekuatan antioksidan dari sari buah srikaya hijau dan srikaya merah
(Annona squamosa L.) dibandingkan dengan vitamin C?

2
 13/04/2020

HIPOTESIS
•Buah srikaya hijau dan srikaya merah (Annona squamosa L.) memiliki golongan
kimia alkaloida, flavonoida, saponin, tanin, glikosida, dan steroid/triterpenoid.

•Sari air buah srikaya merah (Annona squamosa L.) memiliki aktivitas antioksidan
yang lebih baik daripada sari air buah srikaya hijau (Annona squamosa L.)

•Sari air buah srikaya hijau dan srikaya merah memiliki antioksidan yang lebih
kecil dari vitamin C

TUJUAN PENELITIAN
Untuk mengetahui senyawa kimia yang terkandung pada sari air buah srikaya
hijau dan srikaya merah (Annona squamosa L.)

Untuk mengetahui adanya aktivitas antioksidan sari air srikaya hijau dan srikaya
merah (Annona squamosa L.) dengan metode DPPH (2,2‐diphenyl‐ 1‐
picrylhydrazyl)

Untuk mengetahui besar kekuatan aktivitas antioksidan dari sari air buah srikaya
hijau dan srikaya merah (Annona squamosa L.) dibandingkan dengan vitamin C.

3
 13/04/2020

MANFAAT PENELITIAN
Dapat memberikan informasi terkait golongan senyawa kimia dan kekuatan
aktivitas antioksidan yang terkandung pada sari air buah srikaya hijau dan
srikaya merah (Annona squamosa L.) serta memberikan informasi sari air dari
buah varietas warna mana yang memiliki aktivitas antioksidan yang lebih baik.

TINJAUAN PUSTAKA
Tuberkulosis adalah suatu penyakit menular yang disebabkan oleh kuman
Mycobacterium tuberculosis. Terdapat beberapa spesies Mycobacterium, antara
lain: M. tuberculosis, M. africanum, M. bovis, M. Leprae dsb. Yang juga dikenal
sebagai Bakteri Tahan Asam (BTA). Sumber penularan yaitu pasien TB BTA
(bakteri tahan asam) positif melalui percik renik dahak yang dikeluarkannya.
Sejalan dengan meningkatnya kasus TB, pada awal tahun 1990‐an WHO
mengembangkan strategi pengendalian TB yang dikenal sebagai strategi DOTS
(Directly Observed Treatment Short‐course).

4
 13/04/2020

TINJAUAN PUSTAKA
Srikaya (Annona squamosa) merupakan buah yang terkenal akan kandungan nutrisinya.
Kandungan fitokimia yang utama dari buah srikaya adalah alkaloida, glikosida,
flavonoida, steroida, tanin, terpenoid, serta komponen fenolik. Selain itu juga
mengandung protein, lemak, karbohidrat, fiber kasar, mineral, kalsium, fosfor, zat besi,
magnesium, asam askorbat, niasin, dan asam nikotinik. Srikaya merupakan tanaman
perdu sampai pohon, berumah satu, berkelamin banci, tinggi 2‐7 m, batang gilik,
percabangan sympodial, ujung rebah, kulit batang coklat muda.

TINJAUAN PUSTAKA
Antioksidan adalah senyawa yang mampu menangkal atau meredam efek
negatif oksidan dalam tubuh, bekerja dengan cara mendonorkan salah satu
elektronnya kepada senyawa yang bersifat oksidan sehingga aktivitas senyawa
oksidan tersebut dapat dihambat. Antioksidan bermanfaat dalam mencegah
stress oksidatif yang disebabkan oleh radikal bebas sehingga mencegah
terjadinya berbagai macam penyakit seperti penyakit kardiovaskuler, jantung
kororner, kanker, serta penuaan dini.

5
 13/04/2020

TINJAUAN PUSTAKA
Berdasarkan reaksi kimia yang terlibat, uji antioksidan pada umumnya dibagi ke
dalam 2 jenis, yaitu reaksi berbasis transfer atom hidrogen (hydrogen atom
transfer atau HAT) dan reaksi berbasis transfer satu elektron (electron transfer
atau ET). DPPH merupakan radikal bebas yang stabil. DPPH menerima elektron
atau radikal hidrogen kemudian akan membentuk molekul diamagnetik yang
stabil. Parameter yang digunakan untuk menunjukan aktivitas antioksidan adalah
harga konsentrasi efisien atau Efficient Concentration (EC50) atau Inhibition
Concentration (IC50)

TINJAUAN PUSTAKA
Pada metode ini, larutan DPPH berperan sebagai radikal bebas yang akan
bereaksi dengan senyawa antioksidan sehingga DPPH akan berubah menjadi 1,1‐
diphenyl‐2‐picrylhydrazin yang bersifat non‐radikal. Peningkatan jumlah 1,1‐
diphenyl‐2‐picrylhydrazin akan ditandai dengan berubahnya warna ungu tua
menjadi warna merah muda atau kuning pucat dan bisa diamati dan dilihat
menggunakan spektrofotometer sehingga aktivitas peredaman radikal bebas
oleh sampel dapat ditentukan

6
 13/04/2020

METODE PENELITIAN
Penelitian ini dilakukan dengan menggunakan metode deskriptif di
Laboratorium Fitokimia dan Laboratorium Penelitian Fakultas Farmasi
Universitas Tjut Nyak Dhien meliputi pengumpulan dan pengolahan bahan
tanaman, skrining fitokimia, pembuatan sari air buah srikaya hijau dan srikaya
merah (Annona squamosa L.). Pengujian aktivitas antioksidan dilakukan dengan
menggunakan metode DPPH (2,2‐diphenyl‐1‐picrylhydrazyl).
METODE PENELITIAN