PROSEDUR KERJA

MIKROBIOLOGI

Waktu Prosedur Kerja

Pembuatan media bakteri: Media
pembenihan Nutrient Agar (NA) dibuat
22 Februari 2022 dengan cara Nutrient Agar (NA) dilarutkan
dalam aquadest dan dimasukkan kedalam
Erlenmeyer dan panaskan sampai mendidih.
Selanjutnya media tersebut disterilkan
dalam autoklaf pada suhu 121ºC selama 15
menit pada tekanan 1 atm.

Peremajaan Bakteri: Peremajaan

bakteri dilakukan dengan menggunakan
metode gores. Biakan murni bakteri
Propionibacterium acnes diambil satu ose
kemudian diinokulasikan dengan cara
digoreskan pada media NA secara aseptik.
Kemudian di inkubasi pada suhu 37ºC
selama 24 jam.

Pembuatan Larutan McFarland:

24 Februari 2022
Standar McFarland dibuat dengan cara
mencampur 9,95 ml asam sulfur (H2SO4)
1% dengan 0,05 ml barium klorida (BaCl2)
1%. Kemudian tabung disegel dan
digunakan untuk perbandingan suspensi
bakteri dengan standar. Larutan baku 0,5
Mc Farland ekuivalen dengan suspensi sel
bakteri dengan konsentrasi 1 x 108 CFU/ml
(Saeed dan Tariq, 2005).

Pembuatan suspensi bakteri:

 Pembuatan suspensi bakteri dilakukan
dengan cara mengambil satu ose bakteri
hasil peremajaan, kemudian dimasukkan ke
dalam media Nutrient Agar, selanjutnya
diinkubasi 37ºC selama 24 jam. Setelah 24
jam suspensi bakteri yang telah diinkubasi
disesuaikan dengan standar larutan 0,5
McFarland (1x108 CFU/ml) dengan
menambah aquadest steril (Suswati dan
Mufida, 2009).
25 Februari 2022
Pengujian potensi antibakteri:
Sebanyak masing-masing 20µl suspensi
bakteri uji ditambahkan ke dalam cawan
petri kemudian ditambahkan 10 mL media
NA. Cawan pertama dimasukkan paper disc
yang berisi kontrol positif (kloramfenikol)
dan kontrol negatif (aquadest) sedangkan
cawan yang kedua berisi larutan putik bunga
saffron, larutan nanopartikel perak dan
larutan nanopartikel perak putik bunga
saffron. Kemudian diinkubasi selama 24
jam pada suhu 37ºC. Zona hambat akan
diamati setelah masa inkubasi selama 24
jam.

1. Alat
Alat yang digunakan dalam penelitian ini meliputi seperangkat alat gelas
(Erlenmeyer), autoklaf, batang pengaduk, cawan petri, inkubator, jarum ose, kapas,
lampu spritus, neraca analitik, tabung reaksi, oven, pipet.
2. Bahan
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini meliputi aquadest, aqua pro injeksi,
bakteri Propionibacterium acnes, etanol 70%, kloramfenikol, Nutrient Agar (NA),
larutan putik bunga saffron (Crocus sativus), larutan nanopartikel perak, larutan
nanopartikel perak putik bunga saffron, larutan Mc Farland, paper disk, H2SO4, BaCl2.