INOKULASI DAN PEREMAJAAN BIAKAN DALAM MEDIA PADAT DAN CAIR

Prosedur Aseptis

 Sebelum kerja, meja diaseptiskan terlebih dahulu

 Dengan menyemprotkan alkohol 70%
 Disemprotkan di sekitar meja yang akan menjadi area kerja
 Lalu di lap dengan menggunakan tissue sampai dengan kering
 Siapkan 2 Bunsen lalu diatur nyala Bunsen sehingga diperoleh nyala api berwarna
biru , untuk memperoleh daerah steril
 Biarkan api menyala selama kurang lebih 10 menit sebelum bekerja
 Jarak 2 api Bunsen disesuaikan kurang lebih sekitar 40cm

Alat dan bahan :

Alat :
 Cawan petri steril
 Tabung reaksi steril
 Beserta rak tabung reaksi
 Pipet ukur steril
 Ose bundar
 Ose lurus
 Bunsen
 Cotton swab
 Inkubator

Bahan :
 Media Nutrien Agar
 Media Nutrien Broth
 Biakan bakteri Staphylococcus aureus
 Biakan bakteri pseudomonas aeruginosa
 Biakan bakteri Bacilus subtilis
 Biakan bakteri Escherichia coli

Pembuatan plat agar

 Siapkan pipet ukur steril ,buka dari kertas pembungkus

 Lalu pasangkan ujung pipet pada filler
  Siapkan cawan petri steril,buka dari kertas pembungkus
 Pipet 20ml media Nutrien Agar yang sudah cair , ujung pipet dan lulut elmeyer
sebelum dan sesudah pengambilan media ,di plambir terlebih dahulu pada nyala api
Bunsen
 Masukkan media kedalam cawan petri dan dibiarkan memadat
 Semua pengerjaan dilakukan didalam area Aseptis yang dibatasi oleh api Bunsen dan
pengerjaan dilakukan dekat dengan api Bunsen
 Ulang prosedur yang sama untuk pembuatan plat agar pada 7 cawan petri lainnya

Pembuatan Agar Miring

 Siapkan tabung reaksi steril dan pipet ukur steril yang sudah terpasang pilet
 Lalu pipet 5ml media Nutrien Agar yang sudah mencair
 Ujung pipet mulut erlenmeyer dan mulut tabung reaksi sebelum dan sesudah
pengambilan media di flondir terlebih dahulu pada nyala api Bunsen
 Masukkan media kedalam tabung reaksi steril
 Letakkan tabung reaksi dengan posisi miring dengan bantuan bold point dan biarkan
memadat
 Ulangi prosedur yang sama untuk pembuatan Agar Miring pada 3 tabung reaksi
lainnya

Pembuatan Agar Tegak

 Buat agar tegak dengan memipet 10 ml media agar NA cair kedalam tabung reaksi
steril
 Lalu dimasukkan ke dalam tabung reaksi steril
 Letakkan tegak pada rak tabung reaksi dan dibiarkan memadat
 Ulang prosedur yang sama untuk pembuatan Agar Tegak pada 3 tabung reaksi lainnya

Pembuatan Media Cair

 Siapkan pipet ukur steril ,buka dari kertas pembungkus

 Lalu pasangkan pada piler
 Pipet 10ml Media Nutrien Broth
 Masukkan kedalam tabung reaksi steril dan letakkan di rak tabung reaksi
 Ulang prosedur yang sama untuk pembuatan Media Cair pada 3 tabung reaksi lainnya
INOKULASI Plat Agar
 Sebelum melakukan proses inokulasi ,jarum ose di flambir terlebih dahulu.dengan
cara dipijarkan padanya api Bunsen hingga warnanya menjadi merah menyala
 Pemanasan diteruskan perlahan-lahan kearah pegangan jarum sampai batas kawat
 Pekerjaan ini dilakukan sebanyak 3 kali

Inokulasi Plat Agar (cara streak)

 Buatlah 4 area pada plat agar dengan menggunakan spidol pada bagian bawah cawan
petri
 Ambil inokula bakteri

Bakteri pertama yang digunakan adalah bakteri Bacilus subtilis

 Inokula diambil dengan menggunakan jarum ose bundar yang sudah di flambir
 Inokulasi kan bakteri ke setiap bagian dari plat Agar dengan goresan yang rapat
 Ulang prosedur yang sama untuk mengokulasikan bakteri yang lainnya

Bakteri yang kedua adalah Staphylococcus aureus

Bakteri yang ketiga adalah pseudomonas aeruginosa
Dan bakteri yang keempat adalah Escherichia coli

Setiap pergantian jenis bakteri ,ose di flambir terlebih dahulu

Setiap plat agar di inokulasi kan bakteri yang berbeda

Inokulasi Plat Agar ( cara swab)

Alat :
Cotton swab
 Buatlah 4 area pada plat Agar dengan menggunakan spidol pada permukaan luar
cawan petri bagian alas
 Ambil inokula yang berasal dari media cair dengan menggunakan cotton swab

Bakteri yang pertama yang digunakan adalah Bacilus subtilis

  Celupkan cotton swab pada media cair
 Lalu inokulasi kan bakteri ke setiap bagian dari plat agar dengan cara menghapus kan
cotton swab tersebut
 Ulang prosedur yang sama untuk 3 jenis bakteri yang lain

Bakteri yang kedua adalah Staphylococcus aureus

Bakteri yang ketiga adalah pseudomonas aeruginosa
Bakteri yang keempat adalah Escherichia coli
Setiap pergantian bakteri cotton swab yang digunakan selalu baru

Inokulasi Agar Miring

 Ambil inokula dengan ose bundar kemudian inokulasikan bakteri secara zig-zag
dimulai dari bagian bawah sampai bagian atas media agar miring

Bakteri pertama yang digunakan adalah Bacilus subtilis

 Ulang prosedur yang sama untuk pengerjaan pada 3 jenis bakteri yang lainnya

Bakteri yang kedua adalah Staphylococcus aureus

Bakteri yang ketiga adalah pseudomonas aeruginosa
Bakteri yang keempat adalah Escherichia coli

Setiap pergantian jenis bakteri ose di lakukan flambir terlebih dahulu pada nyala api Bunsen

Inokulasi Tegak

 Ambil inokula dengan menggunakan jarum ose lurus

 Inokula nya berasal dari media padat

Bakteri pertama yang digunakan adalah Bacilus subtilis

  Kemudian inokulasikan bakteri pada media dengan cara menusukkan jarum ose tepat
pada poros tengah tabung sampai mendekati dasar ke tabung
 Kemudian ditarik kembali secara perlahan-lahan
 Ulang prosedur yang sama untuk 3 jenis bakteri yang lainnya

Bakteri yang kedua yang digunakan adalah Staphylococcus aureus

Bakteri yang ketiga adalah pseudomonas aeruginosa
Bakteri yang keempat adalah Escherichia coli
Setiap pergantian bakteri jarum ose di flambir terlebih dahulu

Inokulasi Media Cair

 Ambil inokula dengan menggunakan jarum ose bundar , karena inokula berasal dari
media padat
 Lalu inokulasi kan bakteri pada media cair
 Media cair yang digunakan adalah Na

Bakteri pertama yang digunakan adalah Bacilus subtilis

 Ulang prosedur yang sama untuk 3 jenis bakteri yang lain
Bakteri yang kedua adalah Staphylococcus aureus
Bakteri yang ketiga adalah pseudomonas aeruginosa
Bakteri yang keempat adalah Escherichia Coli
Setiap pergantian bakteri jarum ose bundar di Lakukan flambir terlebih dahulu

Hasil pengamatan setelah diinkubasi

Pra inkubasi selama 30 menit
Inkubasi kan semua media yang telah diinokulasi kedalam inkubator pada suhu 37 derajat
Celcius selama 24 jam. Amati dan catat pertumbuhan yang terjadi pada masing-masing media