Diterjemahkan dari bahasa Inggris ke bahasa Indonesia - www.onlinedoctranslator.

com

Penelitian Pangan Internasional 66 (2014) 69–77

Daftar isi tersedia diScienceDirect

Riset Pangan Internasional

halaman utama jurnal:www.elsevier.com/local/foodres

Kuantifikasi vitamin larut lemak dan karotenoid terpilih dalam susu formula bayi
dan suplemen makanan menggunakan kromatografi cair cepat ditambah
dengan spektrometri massa tandem
Chamila Nimalaratnesebuah, Matahari Chenxingsebuah, Jianping Wusebuah, Jonathan M. Curtissebuah, Andreas Schiebersebuah,b,⁎
sebuahDepartemen Ilmu Pertanian, Pangan dan Gizi, University of Alberta, Pusat Pertanian/Kehutanan 4-10, Edmonton, AB T6G 2P5, Kanada
bInstitut Ilmu Gizi dan Pangan, Universitas Bonn, Römerstrasse 164, D-53117 Bonn, Jerman

articleinfo abstrak

Riwayat artikel: Metode analitik yang sensitif dan cepat telah dikembangkan dan divalidasi untuk identifikasi dan kuantifikasi
Diterima 10 Maret 2014 Diterima simultan sembilan vitamin yang larut dalam lemak dan turunannya (retinol, retinil asetat, retinil palmitat,
30 Agustus 2014 Tersedia online 6 kolekalsiferol (D3), α-, β-, γ-, dan δ -tocopherol, α-tocopheryl acetate) bersama dengan tiga karotenoid (β-carotene,
September 2014
lutein dan zeaxanthin) dalam suplemen makanan dan formula bayi menggunakan sistem kromatografi cair cepat
(UFLC) ditambah dengan spektrometri tandemmass. Pemisahan dilakukan dalam waktu 15 menit pada YMC C30
Kata kunci:
kolom (100 mm × 2 mm ID, 3 μm) menggunakan metanol:air (90:10 v/v) dantert-butil metil eter (TBME):metanol
Vitamin yang larut dalam lemak

Kromatografi cair cepat (80:20 v/v) sebagai fase gerak dengan elusi gradien. Kuantifikasi dilakukan dengan pemantauan reaksi berganda
Suplemen makanan dalam kombinasi dengan akuisisi tergantung informasi (IDA) menggunakan ionisasi kimia tekanan atmosfer (APCI)
Formula bayi dalam mode positif. Pemindaian ion produk yang ditingkatkan digunakan dan spektrum massa dari setiap senyawa
Pemantauan reaksi ganda target mengkonfirmasi keberadaannya dalam ekstrak yang dianalisis. Pemulihan ekstraksi untuk semua analit
melonjak pada dua level berkisar antara 90% hingga 105%. Nilai presisi harian keseluruhan untuk metode
berdasarkan standar deviasi relatif untuk tiga tingkat QC berada di bawah 6% untuk semua analit. Akurasi berkisar
antara 87,6% hingga 113,5%.

© 2014 Elsevier Ltd. Semua hak dilindungi undang-undang.

1. Perkenalan
Vitamin adalah golongan senyawa yang heterogen secara kimiawi
yang memainkan peran penting dalam nutrisi manusia. Mereka
diklasifikasikan menjadi vitamin yang larut dalam air, termasuk vitamin
B kompleks dan vitamin C, dan vitamin yang larut dalam lemak (FSVs)
yang terdiri dari vitamin A, D, E dan K. Dalam makanan, FSV dapat
dideteksi dalam berbagai bentuk kimia dengan biologis yang berbeda.
aktivitas. Diet seimbang harus cukup untuk menyediakan jumlah
vitamin yang dibutuhkan tubuh. Namun, karena kerugian selama
pemrosesan dan penyimpanan, dan juga karena kelompok populasi
tertentu membutuhkan asupan vitamin yang lebih tinggi, berbagai
suplemen multivitamin bermunculan di pasaran. Meskipun vitamin
adalah nutrisi penting,Penniston & Tanumihardjo, 2006). Pengujian
standar untuk menilai keseragaman konten dan untuk
menggambarkan variasi lintas produk di antara yang ada
⁎Penulis koresponden di: Institute of Nutritional and Food Sciences, University of Bonn,
Römerstrasse 164, D-53117 Bonn, Jerman. Tel.: +49 228 73 4452; faks: +49 228 73 4429.
Alamat email:Schieber@uni-bonn.de (A. Schieber).
formulasi sangat penting untuk badan pengawas dan industri. Selain itu,
persyaratan peraturan untuk pelabelan yang tepat pada makanan bayi yang
diperkaya dengan vitamin dan suplemen makanan membutuhkan metode
analitik yang andal untuk analisis kuantitatif vitamin dalam makanan.
Berbagai metode telah dilaporkan untuk analisis FSV dalam berbagai
jenis matriks termasuk produk makanan dan pakan, sampel biologis, dan
obat-obatan. Sebagian besar metode didasarkan pada kromatografi cair
kinerja tinggi (Escriva, Esteve, Farre, & Frigola, 2002; Gentili et al., 2012;
Mendoza, Pons, Bargallo, & Lopez-Sabater, 2003) tetapi hanya sedikit yang
dikembangkan untuk penentuan FSV secara simultan. Dalam tinjauan baru-
baru ini tentang metode analisis FSV, kebutuhan untuk mengembangkan
metode analisis untuk mengidentifikasi dan mengukur beberapa vitamin
dan senyawa terkait seperti karotenoid dalam proses kromatografi tunggal
ditekankan (Blake, 2007). Namun, ada kesulitan untuk penentuan FSV secara
bersamaan. Pertama, vitamin hadir sebagai vitamer yang terkait secara
struktural dan bentuk sintetik, yang membutuhkan metode pemisahan yang
sangat efisien. Kedua, konsentrasi vitamin yang berbeda sangat bervariasi
bahkan dalam satu sampel, yang memerlukan metode analitik dengan
sensitivitas dan selektivitas tinggi dan berlaku untuk rentang dinamis yang
besar. Selain itu, banyaknya komponen yang ada dalam makanan dan
suplemen diet multivitamin menyiratkan risiko gangguan.

http://dx.doi.org/10.1016/j.foodres.2014.08.034 0963-9969/©
2014 Elsevier Ltd. Semua hak dilindungi undang-undang.
70 C. Nimalaratne et al. / Riset Pangan Internasional 66 (2014) 69–77
Kuantifikasi simultan vitamin A, D3dan E dalam formula bayi yang
diperkaya telah dicapai dengan menggunakan kromatografi cair
ditambah dengan spektrometri massa ionisasi kimia tekanan atmosfer
(LC-APCI-MS) dalam mode ion positif. Sampel disaponifikasi dan FSV
dipekatkan menggunakan ekstraksi fase padat (SPE). Vitamin yang
diekstraksi dipisahkan menggunakan fase stasioner fase normal dan
dideteksi dengan spektrometri massa pemantauan ion terpilih (SIM).
Heudi, Trisconi, & Blake, 2004). Namun, sistem fasa terbalik lebih
disukai daripada HPLC fasa normal karena stabilitas kolomnya yang
lebih baik. Prosedur penentuan kandungan vitamin A asetat, vitamin A
palmitat, vitamin E asetat, vitamin D3dan vitamin K dikembangkan oleh
Stary, Cruz, Donomai, Monfardini, dan Vargas (1989). FSV diekstraksi
menjadi heksana dan dipisahkan oleh HPLC pada fase terbalik C18fase
dengan ultraviolet (UV) deteksi. Untuk sampel fisiologis seperti plasma
manusia, vitamin A, E, 25(OH)D2dan 25(OH)D3dipisahkan pada RP-C18
kolom dengan elusi gradien dan semua senyawa dielusi dalam waktu
kurang dari 15 menit (Alvarez & De Mazancourt, 2001). Vitamin A, E dan β-
karoten dalam susu sapi secara bersamaan dipisahkan pada RP-C18kolom
menggunakan metanol:sistem pelarut air dalam waktu sekitar 30 menit (
Plozza, Trenery, & Caridi, 2012) tetapi pemisahan vitamin D3
tidak dimasukkan dan dilaporkan sebagai metode terpisah (Trenerry,
Plozza, Caridi, & Murphy, 2011). Metode LC/MS lain dijelaskan untuk
penentuan vitamin A, vitamin A asetat, vitamin A palmitat, vitamin E (α-
tokoferol), vitamin E asetat, dan koenzim Q10 dalam suplemen diet
multivitamin menggunakan RP-C30fase stasioner. Ini C30fase diam
terbukti mengungguli RP-C18fase dalam pemisahan isomer geometris
dan posisional tokoferol. Vitamin diekstraksi dengan minyak bumi
ringan, etil asetat, dan metanol tanpa saponifikasi dan dikuantifikasi
dengan LC-(APCI)-MS Coupling ke APCI-MS memberikan sensitivitas
dan selektivitas tinggi dan mengecualikan kemungkinan interferensi
dalam sampel kompleks ini. Ini juga merupakan aplikasi pertama
analisis LC-APCI-MS untuk vitamin A dan vitamin E dalam kapsul dan
tablet suplemen multivitamin pada C30kolom, tetapi kuantifikasi vitamin
D tidak dimasukkan dalam penelitian ini (Breithaupt & Kraut, 2006).
Kromatografi cair kinerja ultra (UPLC) digunakan untuk penentuan FSV.
Citova dkk. (2007)menjelaskan metode UPLC-DAD untuk menganalisis retinol
dan α-tokoferol dalam serum manusia.Paliakov dkk. (2009)mengembangkan
metode UPLC kuantitatif cepat dengan deteksi UV untuk menentukan
vitamin A, E (α- dan γ-tokoferol), β-karoten dan koenzim Q10 dalam serum
manusia. Pemisahan dicapai dengan menggunakan C18kolom dengan run
time 2 menit.
Mengembangkan metode analitik yang cepat dan andal untuk
menentukan FSV sangat penting dalam hal nutrisi dan perspektif
regulasi. Oleh karena itu, tujuan dari pekerjaan ini adalah untuk
menetapkan metode analitik yang sensitif dan selektif menggunakan
sistem kromatografi cair cepat yang digabungkan dengan APCI-MS/MS
untuk pemisahan dan kuantifikasi simultan FSV dan karotenoid terpilih
dalam suplemen makanan dan formula bayi.
2. Percobaan
2.1. Bahan kimia
Metanol,tert-butil metil eter (TBME),n-heksana, etil asetat, etanol,
dan air kelas HPLC dibeli dari Fisher Scientific (Ottawa, ON, Kanada).
Retinol (Nkemurnian 99,0%), retinil asetat (kemurnian ~ 90,0%), retinil
palmitat, (±)-α-tokoferil asetat (Nkemurnian 96,0%), cholecalciferol (N
kemurnian 98,0%), dan butylated hydroxy toluene (BHT) diperoleh dari
Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA). Turunan vitamin E [(±)-α-tokoferol (≥
kemurnian 95,0%), β-tokoferol (≥kemurnian 95,0%), γ-tokoferol (≥
kemurnian 95,0%), dan δ-tokoferol (≥kemurnian 95,0%)] dibeli dari
Calbiochem (Darmstadt, Jerman). β-Karoten (kemurnian 96,0%),
zeaxanthin (kemurnian 97%), dan lutein (kemurnian 96%) berasal dari
CaroteNature (Lupsingen, Swiss).
2.2. Sampel
Tiga merek susu formula komersial yang berbeda dan empat suplemen
multivitamin yang berbeda dibeli di toko makanan kesehatan setempat
(Edmonton, AB, Kanada). Formula bayi dan suplemen multivitamin adalah
campuran vitamin dan mineral yang larut dalam air dan larut dalam lemak.
Semua sampel disimpan pada suhu 21 °C dalam kemasan aslinya dan
analisis diselesaikan dalam waktu dua minggu.
2.3. Ekstraksi vitamin yang larut dalam lemak
2.3.1. Suplemen diet
Semua suplemen multivitamin berbentuk tablet. Untuk preparasi sampel,
15-20 tablet digiling menggunakan penggiling kecil hingga diperoleh serbuk halus
dan disimpan dalam botol kaca tertutup yang dilapisi aluminium foil. Kuantitas
200 mg ditimbang secara akurat ke dalam tabung gelas uji yang ditutup dengan
aluminium foil untuk melindungi sampel dari cahaya. Untuk ekstraksi FSV,
digunakan heksana:etil asetat (9:1, v/v, dengan 0,01% butylated hydroxytoluene
(BHT)) (Kamao et al., 2007). Setelah penambahan 5 mL pelarut ekstraksi, sampel
dicampur secara menyeluruh selama 30 detik menggunakan vortex mixer dan
ditempatkan dalam penangas ultrasonik selama 15 menit pada suhu 21 °C.
Setelah sentrifugasi pada 3000 rpm selama 5 menit, lapisan organik dipindahkan
ke labu bundar 50 mL, dan 5 mL larutan ekstraksi lainnya ditambahkan dan
prosedur ekstraksi di atas diulangi. Secara total, empat ekstraksi dilakukan dan
ekstrak organik gabungan diuapkan dengan nitrogen. Residu dilarutkan dalam
metanol dan dibuat hingga 5 mL dalam labu volumetrik. Ekstrak kemudian
disaring dengan filter jarum suntik nilon 0,2 μm (Mandel Scientific, Guelph, ON,
Kanada) dan disimpan dalam botol kaca amber yang dibersihkan dengan nitrogen
pada suhu −20 °C sampai analisis. Untuk melindungi sampel dari cahaya selama
ekstraksi, semua peralatan gelas yang digunakan ditutup dengan aluminium foil
dan digunakan kondisi cahaya redup. Botol kaca amber digunakan untuk tujuan
penyimpanan dan analisis.
2.3.2. Formula bayi
Ekstraksi dilakukan sesuai dengan prosedur yang dijelaskan oleh
Huang, LaLuzerne, Winters, dan Sullivan (2009)dengan sedikit
modifikasi. Untuk tujuan ini, 10 g susu formula ditimbang secara akurat
ke dalam labu Erlenmeyer yang ditutup dengan aluminium foil.
Selanjutnya, 40 mL etanol dengan pirogalol 2% dan 20 mL larutan KOH
berair 50% ditambahkan, dan sampel dicampur secara menyeluruh,
dibersihkan dengan nitrogen dan dibiarkan semalam saponifikasi pada
suhu kamar menggunakan pengocok mekanis dengan kecepatan 200
rpm. . Untuk ekstraksi FSV, sekitar 30 mL heksana yang distabilkan
dengan 0,01% BHT ditambahkan ke dalam campuran. Sampel dibiarkan
terguncang selama 30 menit lagi. Fase atas organik dipindahkan ke
labu alas bulat dan fase bawah diekstraksi tiga kali lagi dengan
heksana. Fase atas organik digabungkan dan dikeringkan di bawah
nitrogen. Residu dilarutkan dalam metanol dan dibuat hingga 5 mL
dalam labu volumetrik.
2.4. Kondisi instrumentasi dan kromatografi
2.4.1. UFLC-DAD
Sampel dianalisis menggunakan sistem Shimadzu UFLC-XR
(Shimadzu, Kyoto, Jepang) yang dilengkapi dengan degasser
DGU-20A3, pompa biner LC-20AD XR, autosampler SIL-20AC XR, oven
kolom CTO-20AC, susunan dioda SPD-M20A detektor, dan modul bus
komunikasi CBM-20A. Suhu autosampler dipertahankan pada 15 °C
selama analisis. Pemisahan analit dilakukan pada polimer YMC C30
kolom fase terbalik, ID 100 mm × 2,0 mm dan ukuran partikel 3 μm
(YMC America, Allentown, PA, USA) dioperasikan pada 21 °C. Volume
injeksi adalah 3 μL. Komposisi fase gerak A adalah metanol:air (90:10, v/
v); fase gerak B terdiri dari TBME:metanol (80:20, v/v). Program gradien
adalah 0–8 menit
 C. Nimalaratne et al. / Riset Pangan Internasional 66 (2014) 69–77 71

(8–40% B), 8–13 menit (40–100% B), 13–14,5 menit (100% B), dan 14,5–
14,6 menit (8% B) dan laju aliran adalah 0,3 mL/menit. Deteksi
dilakukan pada 325 nm untuk retinol, 285 nm untuk senyawa
cholecalciferol dan vitamin E, dan 450 nm untuk karotenoid.
2.4.2. APCI-MS/MS
FSV dan karotenoid dikuantifikasi menggunakan analisis UFLC-APCI-MS/MS.
Sistem UFLC yang dijelaskan di atas dihubungkan ke spektrometer massa
perangkap ion linier 4000 QTRAP (AB Sciex, Concord, ON, Kanada) yang dilengkapi
dengan sumber APCI yang dioperasikan dalam mode ionisasi positif. Multiple
reactionmonitoring scanswere digunakan untuk deteksi selektif dan kuantifikasi
senyawa target. Pengaturan akuisisi dioptimalkan dengan infus larutan 1 μg/mL
dari setiap senyawa standar pada laju aliran 50 μL/menit melalui pompa jarum
suntik model 11plus (Harvard Apparatus, Holliston, MA, USA) dengan aliran
makeup LC 0,25 mL / mnt. Penyetelan manual digunakan untuk memastikan
transisi yang benar untuk setiap ion molekul yang dipilih. Kondisi optimal
termasuk potensi declustering, energi tabrakan, potensi keluar tabrakan dan
potensi keluar.Tabel 1menunjukkan transisi yang dipilih dan parameter instrumen
yang dioptimalkan. Optimasi sumber dilakukan dengan flow injection analysis
(FIA) larutan standar 1 µg/mL dalam fase gerak yang mengandung 50% eluen B
pada laju alir 0,25 mL/menit. Kondisi deteksi MS dioptimalkan dengan infus
langsung untuk parameter yang bergantung pada senyawa dan optimasi
parameter sumber dilakukan dengan analisis aliran injeksi (FIA). Parameter
instrumen yang dioptimalkan adalah gas tirai (30 psi), gas nebulisasi (30 psi), arus
jarum (4 μA) dan suhu sumber ion (450 °C). Metode akuisisi yang bergantung pada
informasi (IDA) digunakan untuk membuat profil senyawa. Ambang batas IDA
ditetapkan pada 100 cps, di atasnya spektrum ion produk yang ditingkatkan (EPI)
dikumpulkan dari delapan puncak paling intens. Spektrum massa diperoleh
selama rentang pemindaian darim/z100 hingga 600. Tingkat pemindaian ion
produk yang ditingkatkan (EPI) ditetapkan pada 4000 amu/dtk. Identifikasi
senyawa didasarkan pada waktu retensi dan spektrum massa dibandingkan
dengan standar. Analis (Versi 1.5; ABSciex) digunakan untuk akuisisi dan analisis
data.
2.5. Pembuatan larutan standar
Kurva kalibrasi disiapkan dengan menganalisis larutan standar yang
berbeda pada konsentrasi mulai dari 0,05 hingga 50 μg/mL
menggunakan transisi terpilih yang ditunjukkan padaTabel 1. Setiap
standar vitamin dilarutkan dalam metanol kecuali retinil palmitat, yang
dilarutkan dalam TBME:metanol (1:1, v/v), dan volumenya disesuaikan
untuk menyiapkan larutan 1 mg/mL dalam labu takar. Larutan stok
disimpan dalam botol coklat di bawah nitrogen pada suhu -20 °C.
Ketika terlindung dari cahaya dan udara, larutan stok dianggap stabil
pada suhu -20 °C selama periode analisis (maksimum 3 hari) (Dabre,
Azad, Schwämmle, Lammerhofer, & Lindner, 2011; Catatan Teknis
Dionex 89, 2010). Grafik kalibrasi direkam dengan memplot masing-
masing area puncak terhadap konsentrasi dalam μg/mL.
2.6. Validasi metode
Metode UFLC-APCI-MS/MS yang baru dikembangkan telah divalidasi
untuk pemulihan ekstraksi, batas deteksi, batas kuantitasi, linieritas,
dan presisi dan akurasi harian menurutpedoman ICH (1997)danUSFDA
(2001). Analisis rangkap tiga dari setiap pengenceran dilakukan pada
hari yang sama.
2.6.1. Pemulihan ekstraksi
Eksperimen pemulihan dilakukan dengan menggunakan metode
penambahan standar dengan menambahkan suplemen makanan dan
sampel susu formula dengan senyawa standar pada dua tingkat konsentrasi
yang berbeda. Konsentrasi lonjakan berikut digunakan; untuk 10 g susu
formula bayi, retinol (100 μg, 10 μg), cholecalciferol (5 μg, 1 μg), α-tokoferol
(5 μg, 1 μg) dan β-karoten (100 μg, 20 μg) dan untuk 200 mg suplemen
makanan, retinol (200 μg, 10 μg), retinyl acetate (200 μg, 10 μg), retinyl
palmitate (200 μg, 10 μg), α-tocopheryl acetate (500 μg, 50 μg) dan
cholecalciferol (20 μg , 1 μg) dan β-karoten (500 μg, 50 μg).
2.6.2. Linearitas dan batas deteksi (LOD) dan kuantifikasi (LOQ)
Linearitas respon detektor dan batas deteksi diuji untuk setiap
senyawa target pada kisaran 0,05–50 μg/ml. Setiap kurva kalibrasi
dibuat dengan tujuh konsentrasi berbeda (0,05, 0,1, 0,5, 1,0, 5,0 10,0,
50,0 μg/ml). Analisis regresi linier dilakukan untuk setiap standar
referensi dan linieritasnya dinyatakan sebagai koefisien determinasi (R2
). LOD dan LOQ didefinisikan sebagai konsentrasi terendah yang
menghasilkan sinyal instrumental yang berbeda secara signifikan dari
sinyal latar pada rasio signal-to-noise masing-masing sama dengan 3
dan 10. Konsentrasi terendah pada rentang linier adalah batas
kuantifikasi. LOD dan LOQ ditentukan menurut persamaan berikut
dengan menyuntikkan serangkaian larutan encer dari masing-masing
standar dengan konsentrasi yang diketahui.
3:3σ 10σ
LOD¼ LOQ¼
S S
Deviasi standar (SD) (σ) didasarkan pada kurva kalibrasi
menggunakan sampel yang mengandung analit masing-masing dalam
kisaran LOD dan LOQ. Standar deviasi residual dari garis regresi
digunakan sebagai standar deviasi danSadalah kemiringan kurva
kalibrasi (ICH, 1997; USFDA, 2001).
2.6.3. Presisi dan akurasi harian
Presisi dinyatakan sebagai standar deviasi relatif (% RSD) pada tiga tingkat
konsentrasi yang digunakan. Presisi intra-hari, juga disebut keterulangan, dinilai
menggunakan 9 penentuan untuk setiap senyawa referensi menggunakan 3
konsentrasi dan masing-masing 3 ulangan. Keakuratan dinyatakan sebagai
persentase nilai sebenarnya dan dievaluasi menggunakan tingkat konsentrasi
yang berbeda, tingkat rendah (0,5 μg/mL), tingkat menengah

Tabel 1
Parameter yang dioptimalkan untuk analisis vitamin dan karotenoid UFLC-MS/MS.

Menggabungkan Deteksi panjang gelombang (nm) Transisi yang dipilih DPsebuah(V) CEsebuah(V) CXPsebuah(V) EPsebuah(V)

Ion induk (m/z) [M + H]+ Produksi (m/z)

Retinol 325 287 269 53 21 8 10

Retinil asetat 325 329 269 55 17 46 10
Kolekalsiferol 285 385 367 55 15 48 10
δ-tokoferol 285 403 371 80 42 10 10
β- dan γ-tokoferol 285 417 151 80 39 10 10
α-tokoferol 285 431 413 60 25 15 10
α-tokoferil asetat 285 473 207 80 29 16 10
Retinil palmitat 325 525 269 60 23 13 10
Lutein dan zeaxanthin 450 569 551 36 21 12 10
β-Karoten 450 537 445 80 21 14 10

sebuahDP, potensi declustering; CE, energi tumbukan; CXP, potensi keluar tabrakan; EP, potensi keluar.
72
level (5 μg/mL), dan level tinggi (50 μg/mL). Identitas dan kemurnian
senyawa dipantau dengan waktu retensi dan simetri puncak, dan dengan
membandingkan data spektral dari puncak sampel dengan yang diperoleh
untuk standar.
3. Hasil dan Pembahasan
3.1. Pemisahan FSV dan karotenoid oleh UFLC-DAD-(APCI) MS/MS
Penerapan C30fase diam untuk penentuan karotenoid (Schlatterer &
Breithaupt, 2006), retinoid (van Breemen et al., 1998), tokoferol (
Schieber & Carle, 2008) dan senyawa terkait lainnya dalam matriks
makanan kompleks telah lama dibuktikan. Keunggulan fasa diam ini
tampaknya disebabkan oleh kombinasi kerapatan ikatan dan panjang
rantai yang diperpanjang yang ditemukan di C30
fase (Rimmer, Sander, & Wise, 2005). Dalam metode UFLC-DAD-MS/MS yang
disajikan di sini, polimer C30kolom dievaluasi untuk identifikasi dan
kuantifikasi simultan yang cepat dari dua belas senyawa termasuk FSV dan
karotenoid terpilih dalam waktu 15 menit. Kolom yang digunakan di sini
terdiri dari partikel 3 μm dan dianggap sebagai kolom HPLC. Dengan
menggunakan kolom ini pada sistem UFLC, yang memiliki kemampuan
untuk beroperasi pada tekanan yang lebih tinggi dibandingkan dengan
sistem HPLC konvensional, kami meningkatkan efisiensi pemisahan.
Metode kromatografi cair cepat pertama kali dikembangkan
dengan deteksi DAD. Sistem pelarut yang dipilih sebagai fase gerak
terdiri dari metanol, TBME dan air. Eluen ini telah berhasil digunakan
dalam kombinasi dengan C30kolom untuk penentuan senyawa lipofilik
seperti karotenoid, ester karotenoid dan tokoferol (Breithaupt & Kraut,
2006; Schlatterer & Breithaupt, 2006). Pemisahan optimal dalam waktu
analisis singkat dicapai dengan sistem pelarut biner yang terdiri dari
metanol:air (90:10 v/v) sebagai fase gerak A dan TBME:metanol (80:20,
v/v) sebagai fase gerak B, suhu kolom 21 °C dan laju alir 0,3 mL/menit.
Itu
Intensitas, cps
2
1 11
2 11
1
Absorbansi, mAU
1.0 2.0
Gambar 1.Kromatogram ion total (TIC) dan kromatogram DAD dari campuran standar dua belas vitamin larut lemak dan karotenoid (pada 285 nm, 325 nm dan 450 nm). Identifikasi puncak: 1) retinol, 2)
retinyl acetate, 3) δ-tocopherol, 4) cholecalciferol, 5) β-tocopherol, 6) γ-tocopherol, 7) α-tocopherol, 8) α-tocopheryl acetate, 9) lutein , 10) zeaxanthin, 11) retinyl palmitate dan 12) β-karoten.
C. Nimalaratne et al. / Riset Pangan Internasional 66 (2014) 69–77
pemisahan senyawa ditunjukkan padaGambar 1. Karena penyerapan
maksimum analit yang ditargetkan berbeda, deteksi dilakukan pada
tiga panjang gelombang yang berbeda. Semua senyawa dipisahkan
pada awal kecuali β- dan γ-tokoferol.
Parameter spektrometri massa dioptimalkan secara terpisah untuk
setiap senyawa untuk memaksimalkan sensitivitas deteksi. Spektrometer
massa dioperasikan dalam mode positif menggunakan ionisasi APCI.
Meskipun ionisasi elektrospray (ESI) dan APCI telah digunakan secara efektif
untuk analisis vitamin dan karotenoid yang larut dalam lemak, APCI lebih
disukai daripada ESI karena linearitas respons detektor yang lebih tinggi (
van Breemen, 2001). Namun, disarankan agar senyawa fenolik seperti
vitamin E dideteksi dengan sensitivitas tertinggi menggunakan ESI dalam
mode ionisasi negatif. Ini karena kemampuannya yang lebih tinggi untuk
mendeprotonasi dan menghasilkan ion kuasimolekul bermuatan negatif
[MH]−(Breithaupt & Kraut, 2006). Karena kami mencoba untuk mencapai
identifikasi simultan molekul FSV ini dalam satu proses kromatografi, APCI
digunakan dalam penelitian ini untuk mendapatkan efisiensi ionisasi yang
cukup untuk semua spesies FSV ini. Setiap senyawa dikarakterisasi dengan
adanya ion induk [M + H]+dan spektrum massa ion produk masing-masing.
Kromatogram arus ion total (TIC) dari campuran standar dan spektrum
massa ion produk ditunjukkan padaGambar. 1 dan 2.
Transisi molekul yang dipilih tercantum dalamTabel 1. Ion produk
utama padam/z269 identik untuk retinol, retinyl acetate dan retinyl
palmitate dan masing-masing dibentuk dengan eliminasi air, asam
asetat, dan asam palmitat. Hasilnya konsisten dengan temuan yang
dilaporkan olehBreithaupt dan Kraut (2006). Ion produk cholecalciferol
berada dim/z367, yang dibentuk oleh hilangnya air dari ion induk
terprotonasi. Untuk δ-tokoferol, ion produk dim/z 371 dibentuk oleh
hilangnya metanol. β-Tocopherol dan γ-tocopherol, yang merupakan
isomer yang berbeda dalam penempatan gugus metil pada struktur
cincin, tidak dapat dibedakan dengan spektrometri massa. Ion produk
dim/z151 dikaitkan dengan hilangnya rantai phytyl. Untuk
TIK
4
7
6
5
8
12
3
9 10
325 nm
56
3 7 285 nm
8
12
9
10 450 nm
3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9,0 10,0 11,0 12,0 13,0 14,0 15,0
Waktu, min
 C. Nimalaratne et al. / Riset Pangan Internasional 66 (2014) 69–77 73

α-tokoferol,m/z165 adalah ion produk utama, yang dibentuk oleh hilangnya temuan harus terkait dengan derajat dan posisi substitusi metil dari
rantai fitil dan ion produk minor padam/z413 terbentuk karena kehilangan tocomers.
air; untuk α-tocopheryl acetate, ion produknya adalah padam/z207, yang
dibentuk oleh hilangnya rantai phytyl. Meskipun α-tocopherol, β-tocopherol, 3.2. Validasi metode
γ-tocopherol dan δ-tocopherol semuanya adalah senyawa vitamin E
(tokomer), mereka memiliki ion produk yang berbeda di bawah kondisi APCI Kemampuan kuantitatif dari metode ini diuji. Kurva kalibrasi dengan
dalam mode ionisasi positif. Ini 7 titik diplot menggunakan luas puncak terhadap

[M+H]+
[M+H]+
Maks. 1,0e6 cps. 569.6 Maks. 6.1e6 cps. 537.5
100
100
β-Karotin
80 Lutein H3C OH 80 H3C CH3 CH3 CH3
H3C

H3C CH3 CH3 CH3

Rel. Int. (%)

Rel. Int. (%)

60
CH3 CH3 H3C CH3 60 CH3
CH3 CH3 H3C CH3
HO CH3

40
40
[M+H-92]+
20 [M+H-18]+
20
477.5 551.4 445.5
0 0
120 160 200 240 280 320 360 400 440 480 520 560 600
120 160 200 240 280 320 360 400 440 480 520 560 600
m/z, Da [M+H]+ m/z, Da
525.6 [M+H]+
100 Maks. 1.4e6 100
Retinil palmitat Maks. 7.6e6 cps. 473.5

80 HC CH3 CH3 CH3 HAI α-tokoferil asetat

3
80
[M+H-266]+
HAI H3C(H2C)14
Rel. Int. (%)

60
CH3 60 207.1 HC
3 CH3
Rel. Int. (%)

[M+H-256]+ H3C
40 269.2 HAI
40 HAI
CH3
CH3
H3C CH3 CH3 CH3
20
20

0
120 160 200 240 280 320 360 400 440 480 520 560 600 0
120 160 200 240 280 320 360 400 440 480 520 560 600
m/z, Da
m/z, Da
[M+H]+ [M+H]+
100 287.3 Maks. 9.6e5 cps.
403.3
100 Maks. 9.4e5 cps.
% δ-tokoferol 80 Retinol
80 CH3 CH3

% CH3
H3C CH3 CH3 CH3
Rel. Int. (%)
Rel. Int. (%)

60 HO HAI
CH3
CH3 60
OH
% CH3
CH3
40 40
[M+H-32]+
% [M+H-18]+
371.3
20 20 269.2
%
0 120 160 200 240 280 320 360 400 440 480 520 560 600 0 120 160 200 240 280 320 360 400 440 480 520 560 600
m/z, Da
m/z, Da
[M+H]+ [M+H]+
100 431.5 100 417.5
Maks. 2.0e7 cps. Maks. 9.4e6 cps.
α-tokoferol β-Tokoferol, γ-Tokoferol
80 80 CH3 CH3
Rel. Int. (%)

CH3 CH3 CH3

Rel. Int. (%)

H3C
60 CH3
60 HO HAI
CH3
CH3
CH3
HO HAI CH3
H3C CH3
40 H3C CH3 40
[M+H-266]+ [M+H-266]+
20 165.1 20 151.0

0
120 160 200 240 280 320 360 400 440 480 520 560 600 0 120 160 200 240 280 320 360 400 440 480 520 560 600
m/z, Da m/z, Da
[M+H-60]+ [M+H]+
269.2 Maks. 1.1e6 cps.
100 100 385.4
[M+H]+ 367.6
Kolekalsiferol[M+H-18]+ Maks. 3.3e7 cps.
329.2
Retinil asetat
80 80 H3C
Rel. Int. (%)

CH3
H3C CH3 CH3 CH3 HAI CH3
Rel. Int. (%)

60 60 H3C
HAI CH3

CH3
40 40
CH2

20 20
HO

0 120 160 200 240 280 320 360 400 440 480 520 560 600
0
120 160 200 240 280 320 360 400 440 480 520 560 600
m/z, Da m/z, Da

Gambar 2.Produk spektrum massa ion [M + H] + ion vitamin larut lemak dan karotenoid digunakan dalam percobaan ini.
74 C. Nimalaratne et al. / Riset Pangan Internasional 66 (2014) 69–77

konsentrasi. Kurva kalibrasi menunjukkan linearitas yang sangat baik Tabel 3

dengan koefisien determinasi mulai dari 0,9938 hingga 0,9999, seperti yang Penentuan presisi dan akurasi harian pada tiga tingkat konsentrasi.

ditunjukkan padaMeja 2. Batas deteksi (LOD) dan kuantifikasi (LOQ) dihitung Menggabungkan Presisi intra-hari Akurasi (%)
sesuai denganpedoman ICH (1997), dan nilai yang diperoleh untuk setiap (RSD %)
analit berada di bawah tingkat yang diharapkan dalam suplemen makanan Tingkat konsentrasi Tingkat konsentrasi
dan formula bayi. LLOD berkisar dari 0,001 hingga 0,063 μg/mL dan LLOQ (μg/ml)⁎ (μg/ml)⁎
dari 0,003 hingga 0,210 μg/mL. Metode tersebut menunjukkan sensitivitas 0,5 5 50 0,5 5 50
yang sangat baik untuk vitamin E asetat dan kolekalsiferol, sedangkan
Retinol 2.4 4.0 1.8 104.1 109.3 93.3
sensitivitas untuk α- dan δ-tokoferol dan retinol relatif rendah. Sensitivitas Retinil asetat 2.0 0,3 1.2 107.1 106.7 98.6
rendah atau LLOD yang lebih tinggi untuk vitamin yang dirujuk dalam γ-tokoferol 2.4 1.6 0,3 103.7 111.6 97.2
deteksi spektrometri massa menggunakan ionisasi APCI mode positif Retinil palmitat 0,9 3.7 2.4 108.8 105.8 99.1
dengan fase gerak serupa sebelumnya diamati oleh Breithaupt dan Kraut Zeaxanthin 5.0 3.9 1.7 88.8 105.2 100.2
Lutein 2.4 4.8 1.4 94.5 101.1 100,5
(2006).
Kolekalsiferol 1.1 1.5 0,5 110.7 108.8 98.9
Agar metode analitik dianggap dapat diterima, presisi harus di bawah δ-tokoferol 1.5 1.3 6.0 90.2 87.6 102.6
15% dan akurasi harus berada dalam ±15% dari nilai rata-rata (Badan β-tokoferol 0,1 0,5 0,9 98.9 113.5 97.8
Pengawas Obat dan Makanan AS, 2001). Akurasi dan presisi intraday (% RSD) α-tokoferol 2.7 3.5 2.2 109.1 109.5 100.3
untuk semua sampel berada dalam kisaran yang dapat diterima untuk tiga α-tokoferol asetat 2.3 1.0 0,6 104.4 108.6 98.3
β-Karoten 0,4 1.1 0,2 95.4 103.5 99.6
tingkat konsentrasi yang digunakan. Nilai diberikan diTabel 3. Untuk ketiga
konsentrasi yang dianalisis, presisi berkisar antara 0,1 hingga 6,0% standar ⁎n = 3 ulangan untuk setiap tingkat konsentrasi.

deviasi relatif (RSD). Keakuratan pengukuran 12 senyawa ini berkisar antara

87,6 hingga 113,5% dan nilai rata-rata untuk tingkat konsentrasi rendah,
sedang, dan tinggi untuk semua senyawa masing-masing adalah 101,3%,
105,9%, dan 98,9%.
Pemulihan rata-rata dihitung dengan menambahkan sampel uji dengan
dua tingkat konsentrasi yang berbeda. Untuk setiap analit kami telah
memilih dua level spiking, sehingga konsentrasi sebenarnya dari analit yang
ada dalam sampel komersial suplemen makanan dan susu formula bayi
akan berada di antara level tersebut. Hasilnya diberikan diTabel 4. Tingkat
pemulihan untuk suplemen makanan dan susu formula masing-masing
adalah 93,2–109,3% dan 90,5–105,1%, menunjukkan pemulihan yang baik
dari metode ini dan juga penerapannya untuk berbagai konsentrasi analit.
3.3. Analisis suplemen makanan multivitamin dan susu formula bayi
Vitamin dan karotenoid dalam suplemen makanan multivitamin
diekstraksi dengan ekstraksi pelarut langsung, sedangkan formula bayi
mengalami saponifikasi untuk ekstraksi senyawa yang lengkap. Kondisi
saponifikasi yang berbeda telah diuji untuk ekstraksi vitamin yang larut
dalam lemak dari susu formula bayi dan pemilihan prosedur yang
memadai terutama tergantung pada senyawa target yang akan
dianalisis.Chavez-Servin, Castellote, & Lopez-Sabater, 2006; Escriva et
al., 2002; Heudi et al., 2004; Huang et al., 2009; Mendoza et al., 2003).
Saponifikasi semalam pada suhu kamar adalah prosedur ekstraksi yang
disukai untuk metode ini. Peningkatan suhu selama saponifikasi dapat
mengubah xanthophylls, yang diketahui terisomerisasi saat terkena
panas dan cahaya.
Meja 2
Koefisien determinasi (R2), rentang kalibrasi kurva kalibrasi standar dan batas bawah
deteksi (LOD) dan kuantisasi (LOQ) untuk vitamin dan karotenoid yang diperoleh dengan
analisis UFLC-MS/MS.
Metode ini telah berhasil diterapkan untuk analisis kuantitatif dari
sembilan vitamin yang larut dalam lemak dan tiga karotenoid dalam empat
suplemen multivitamin komersial dan tiga formula bayi menggunakan UFLC-
DAD-(APCI)-MS/MS dengan pemantauan reaksi berganda.Gambar 3
mengilustrasikan kromatogram ion yang diekstraksi untuk transisi MRM
terpilih untuk senyawa vitamin dalam suplemen makanan dan susu formula
bayi. Hasil analisis kuantitatif dirangkum dalamTabel 5 dan 6. Identifikasi
vitamin dan karotenoid didasarkan pada perbandingan waktu retensi dan
spektrum massa dengan senyawa standar. Kurva kalibrasi menggunakan
standar eksternal disiapkan untuk kuantifikasi. Metode MS kuantitatif
berdasarkan pemantauan beberapa reaksi memiliki keunggulan sensitivitas
dan selektivitas tinggi tidak termasuk kemungkinan gangguan dalam
sampel makanan kompleks.
Suplemen makanan mengandung jumlah yang serupa dengan yang
tertera pada label kecuali α-tocopheryl acetate, yang ditemukan pada
tingkat yang lebih rendah dari yang dinyatakan. Meski tidak disebutkan
pada label, ketiga sampel susu formula yang dianalisis mengandung β-
karoten, yang diubah menjadi vitamin A dalam tubuh manusia. Juga, jumlah
α-tocopherol dalam formula bayi lebih rendah dari label; β-tokoferol juga
terdeteksi. Namun, daftar bahan hanya menyatakan adanya vitamin A dan
vitamin E, yang mungkin mewakili semua isomer, atau tokomer, dan ester
dari masing-masing vitamin.
Efek matriks dapat menjadi batasan utama metode LC/MS kuantitatif, di
mana matriks sampel diekstraksi bersama dengan analit target dan
mengganggu kinerja metode analisis (Cappiello et al., 2008). Metode
ekstraksi sampel yang ditingkatkan dan pemisahan kromatografi yang lebih
baik dapat meminimalkan atau menghilangkan kemungkinan efek matriks (
Taylor, 2005). Penggunaan standar internal berlabel isotop juga telah
disarankan untuk meminimalkan kemungkinan efek matriks (Phinney et al.,
2010). Selain itu, dibandingkan dengan ESI, sumber APCI diketahui memiliki
toleransi yang lebih baik terhadap efek matriks (Souverain, Rudaz, &
Veuthey, 2004). Dalam metode saat ini, prosedur ekstraksi

Analit Rentang kalibrasi Koefisien dari LOD LOQ Tabel 4

(μg/ml) penentuan (R2) (μg/ml) (μg/ml) Pemulihan ekstraksi (%) analit melonjak pada dua tingkat menjadi suplemen makanan dan
formula bayi.
Retinol 1–100 0,9996 0,053 0,176
Retinil asetat 0,1–100 0,9999 0,008 0,026
Menggabungkan Suplemen diet Formula bayi
γ-tokoferol 1–100 0,9991 0,021 0,071
Retinil palmitat 1–100 0,9991 0,021 0,069 Tinggi Rendah Tinggi Rendah

Lutein 2,5–500 0,9992 0,010 0,033 (n = 4) (n = 4) (n = 4) (n = 4)

β-Karoten 5–500 0,9998 0,010 0,033
Retinol 104,7 ± 0,5 99,3 ± 2,5 102,2 ± 2,3 90,5 ± 8,4
Zeaxanthin 0,1–100 0,9938 0,009 0,029
Retinil asetat 104,1 ± 1,4 109,3 ± 3,8 – –
Kolekalsiferol 0,05–50 0,9997 0,002 0,005
Kolekalsiferol 101,8 ± 0,8 104,6 ± 0,8 105,1 ± 2,7 89,5 ± 3,0
δ-tokoferol 1–100 0,9992 0,041 0,137
α-tokoferil asetat 100,8 ± 3,1 105,2 ± 6,6 – –
β-tokoferol 0,1–50 0,9998 0,016 0,055
α-tokoferol – – 101,0 ± 1,8 98,8 ± 3,6
α-tokoferol 1–100 0,9990 0,063 0,210
Retinil palmitat 100,8 ± 1,3 101,2 ± 3,6 – –
α-tokoferil asetat 0,05–500 0,9998 0,001 0,003
β-Karoten 97,9 ± 3,7 93,2 ± 0,7 95,6 ± 2,1 91,3 ± 2,0
 C. Nimalaratne et al. / Riset Pangan Internasional 66 (2014) 69–77 75

100% XIC dari +MRM (10 pasang): Exp 1, 385.4/367.4 Da Maks. 1,3e4 cps. SEBUAH

Kolekalsiferol

0%
1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10.0 11.0 12.0 13.0 14.0 15.0
100%
Maks. 3.3e6 cps.
XIC dari +MRM (10 pasang): Exp 1, 473.4/207.2 Da

α -tokoferil asetat

0%
1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10.0 11.0 12.0 13.0 14.0 15.0
Maks. 1,2e5 cps.
100%
XIC dari +MRM (10 pasang): Exp 1, 569.4/551.2 Da

Lutein dan Zeaxanthin

0%
1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10.0 11.0 12.0 13.0 14.0 15.0
100% Maks. 1,4e4 cps.
XIC dari +MRM (10 pasang): Exp 1, 537.4/445.3 Da

β-Karoten

0%
1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10.0 11.0 12.0 13.0 14.0 15.0
Waktu, min

XIC dari +MRM (10 pasang): Exp 1, 287.2/ 269.3Da

Maks. 2.0e4 cps. B
100%
Retinol

0%
1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10.0 11.0 12.0 13.0 14.0 15.0
XIC dari +MRM (10 pasang): Exp 1, 385.4/367.3 Da
100% Maks. 1,9e4 cps.
Kolekalsiferol

0%
1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10.0 11.0 12.0 13.0 14.0 15.0
100%
Maks. 5.6e5 cps.
XIC dari +MRM (10 pasang): Exp 1, 417.4/151.3 Da

β-Tokoferol / γ-Tokoferol

0%
1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10.0 11.0 12.0 13.0 14.0 15.0

Maks. 5.0e4 cps.

100%
XIC dari +MRM (10 pasang): Exp 1, 431.4/413.3 Da
α-tokoferol

0%
1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10.0 11.0 12.0 13.0 14.0 15.0
Maks. 8626,7 cps.
100%
XIC dari +MRM (10 pasang): Exp 1, 537.4/445.3 Da
β-Karoten

0%
1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10.0 11.0 12.0 13.0 14.0 15.0
Waktu, min

Gambar 3.Kromatogram ion yang diekstraksi dari transisi MRM untuk senyawa vitamin yang terdeteksi dalam suplemen makanan 'D' (A) dan formula bayi 'B' (B).

menunjukkan pemulihan yang baik pada level spiking tinggi dan rendah dan analit
dipisahkan pada awal. Semua parameter dioptimalkan untuk mencapai
sensitivitas terbaik sehingga efek matriks dapat diminimalkan. Meskipun kami
tidak mengamati efek matriks yang signifikan selama kuantifikasi, beberapa
sampel menunjukkan standar deviasi yang lebih tinggi yang mungkin disebabkan
oleh efek matriks yang mungkin terjadi.
Dibandingkan dengan penelitian yang diterbitkan sebelumnya dalam aspek yang
serupa, penelitian ini memberikan keuntungan kuantifikasi simultan dari dua belas
vitamin dan karotenoid yang larut dalam lemak dalam waktu 15 menit dengan presisi
intra-hari kurang dari 6% untuk semua analit dalam tiga perbedaan.
konsentrasi. Sebagian besar metode analitik yang dilaporkan telah difokuskan
pada satu senyawa atau lebih sedikit senyawa. Metode yang baru-baru ini
dilaporkan pada vitamin dan karotenoid yang larut dalam lemak dalam makanan
nabati terpilih menghitung empat karotenoid dan enam vitamin yang larut dalam
lemak dalam waktu 30 menit dan dengan presisi harian yang baik berkisar antara
3 dan 7% (Gentili & Caretti, 2011). Beberapa metode telah ditujukan pada
kuantifikasi vitamin D3(Kwak, Jeong, Lee, Ahn, & Park, 2014) dan vitamin A (Lim,
Kim, Ahn, & Kim, 2011) dalam susu formula bayi dalam literatur terbaru dengan
pengulangan yang baik, tetapi dengan waktu berjalan lebih lama masing-masing
70 menit dan 30 menit. Dua belas analit target dalam susu dari berbagai
76 C. Nimalaratne et al. / Riset Pangan Internasional 66 (2014) 69–77

Tabel 5
Hasil analisis UFLC-MS/MS vitamin larut lemak dan karotenoid dalam suplemen makanansebuah.

Senyawa dianalisis Suplemen diet

SEBUAH B C D

Jumlah Jumlah Jumlah Jumlah Jumlah Jumlah Jumlah Jumlah

berlabel bertekad berlabel bertekad berlabel bertekad berlabel bertekad
(IU/tablet) (IU/tablet) (IU/tablet) (IU/tablet) (IU/tablet) (IU/tablet) (per tablet) (per tablet)

Retinil asetat 4000 3470 ± 330 4000 3150 ± 290 1000 957 ± 94 – –
Kolekalsiferol 400 374,2 ± 4,5 400 263,4 ± 5,6 400 275,6 ± 4,2 200 IU 289,6 IU ± 3,2
α-tokoferil asetat 30 19,7 ± 1,8 45 5,8 ± 0,3 25 14,7 ± 2,4 50 IU 18,4 IU ± 1,9
β-Karoten 1050 1084 ± 32 1000 942 ± 197 3000 2660 ± 350 2500 UI 2440 IU ± 130
Lutein – – – – – – 5 mg 6,5 mg ± 0,5
Zeaxanthin – – – – – – 1 mg 1,2 mg ± 0,1

sebuahNilai rata-rata ± SD selama delapan ulangan.

Tabel 6
Hasil analisis UFLC-MS/MS vitamin larut lemak dan karotenoid dalam susu formula bayisebuah.

Senyawa dianalisis Formula bayi

SEBUAH B C

Jumlah berlabel Jumlah ditentukan Jumlah berlabel Jumlah ditentukan Jumlah berlabel Jumlah ditentukan
(IU per 100 g) (IU per 100 g) (IU per 100 g) (IU per 100 g) (IU per 100 g) (IU per 100 g)

Retinol 1575 1450 ± 200 1538 1770 ± 390 1536 1510 ± 170
Kolekalsiferol 315 261 ± 53 308 215 ± 52 307 365 ± 57
β- atau γ-tokoferol nl 1,1 mg ± 0,3 nl 2,5 mg ± 0,8 nl 2,1 mg ± 0,3
α-tokoferol 10.2 4,8 ± 0,7 10 7,5 ± 1,7 10 10,7 ± 1,6
β-Karoten nl 312 ± 37 nl 320 ± 77 nl 104 ± 10

nl, Tidak berlabel.

sebuahNilai rata-rata ± SD selama delapan ulangan.

spesies dikuantifikasi dengan metode lain, tetapi dalam dua kolom terpisah
sebagai karotenoid dalam C30dalam 30 menit dan vitamin larut lemak lainnya
dalam C18dalam 22 menit dengan presisi intra-hari berkisar antara 5–10% (Gentili
et al., 2012).
4. Kesimpulan
Metode kromatografi cair cepat digabungkan dengan spektrometri
massa tandem telah dikembangkan dan divalidasi untuk analisis simultan
dan kuantifikasi vitamin dan karotenoid larut lemak terpilih dalam susu
formula bayi dan suplemen makanan. Sepengetahuan kami, ini adalah
metode pertama yang menggunakan C30fase diam untuk memisahkan dua
belas senyawa bioaktif lipofilik, termasuk keempat α-, β-, γ-, dan δ-isomer
tokoferol dalam sekali jalan hanya dalam waktu 15 menit. Senyawa yang
dianalisis dalam metode ini mewakili sebagian besar vitamin yang larut
dalam lemak (kecuali vitamin K, yang tidak dipertimbangkan dalam
percobaan kami) dan karotenoid yang terdapat dalam suplemen makanan
komersial dan susu formula bayi. Deteksi spektrometri massa
memungkinkan deteksi dan identifikasi vitamin dan karotenoid yang tidak
ambigu, yang sangat penting untuk penentuan analit yang andal dalam
matriks kompleks seperti susu formula dan suplemen makanan.
Terima kasih
Proyek ini didanai oleh Vitamin Fund yang diterima oleh Dr.
Schieber dari Food & Health Innovation Initiative of Faculty of
Agricultural, Life & Environmental Sciences, University of Alberta.
Referensi
Alvarez, JC, & De Mazancourt, P. (2001).Cairan performa tinggi yang cepat dan sensitif
metode kromatografi untuk penentuan simultan retinol, α-tokoferol,
25-hidroksivitamin D2dan 25-hidroksivitamin D3dalam plasma manusia dengan
deteksi ultraviolet photodiode-array.Jurnal Kromatografi B, 755,129–135. Blake, CJ
(2007).Status metodologi untuk penentuan vitamin yang larut dalam lemak di
makanan, suplemen diet, dan premix vitamin.Jurnal AOAC Internasional, 90, 897–
910.
Breithaupt, DE, & Kraut, S. (2006).Penentuan simultan vitamin A, E,
ester dan koenzim Q 10 mereka dalam suplemen diet multivitamin menggunakan
RP-C30fase.Riset dan Teknologi Pangan Eropa, 222,643–649.
Cappiello, A., Famiglini, G., Palma, P., Pierini, E., Termopoli, V., & Trufelli, H. (2008).Lebih-
efek matriks yang akan datang dalam kromatografi cair–spektrometri massa.Kimia
Analitik, 80(23), 9343–9348.
Chavez-Servin, JL, Castellote, AI, & Lopez-Sabater, MC (2006).Analisis simultan
vitamin A dan E dalam formula berbasis susu bayi dengan deteksi susunan dioda
kromatografi cair kinerja tinggi fase normal menggunakan kolom lubang sempit
pendek. Jurnal Kromatografi A, 1122,138–143.
Citova, I., Havlikova, L., Urbanek, L., Solichova, D., Novakova, L., & Solich, P. (2007).Kom-
persamaan dari metode kromatografi cair ultra-kinerja baru untuk penentuan retinol
dan alfa-tokoferol dalam serum manusia dengan HPLC konvensional menggunakan
kolom monolitik dan partikulat.Kimia Analitik dan Bioanalitik, 388, 675–681.
Dabre, R., Azad, N., Schwämmle, A., Lämmerhofer, M., & Lindner, W. (2011).Serentak
pemisahan dan analisis vitamin yang larut dalam air dan lemak pada bahan penukar
anion lemah fase terbalik multi-modal dengan HPLC-UV.Jurnal Ilmu Pemisahan, 34,
761–772.
Catatan Teknis Dionex 89 (2010).Penentuan vitamin yang larut dalam air dan lemak dengan
HPLC.Thermo Fisher Scientific Inc (Tersedia dari:http://www.dionex.com/en-us/ webdocs/
88784-TN89-HPLC-WaterFatSolubleVitamins-27Oct2010-LPN2598.pdf) Escriva, A., Esteve, M.,
Farre, R., & Frigola, A. (2002).Penentuan vitamin yang larut dalam lemak
dalam makanan yang dimasak, susu dan produk susu dengan kromatografi cair.
Jurnal Kromatografi A, 947,313–318.
Gentili, A., & Caretti, F. (2011).Evaluasi metode berdasarkan kromatografi cair–
diode array detector–spektrometri massa tandem untuk karakterisasi yang cepat dan
komprehensif dari vitamin yang larut dalam lemak dan profil karotenoid dari makanan
nabati pilihan.Jurnal Kromatografi A, 1218,684–697.
Gentili, A., Caretti, F., Bellante, S., Ventura, S., Canepari, S., & Curini, R. (2012).Memahami-
profil sive karotenoid dan vitamin yang larut dalam lemak dalam susu dari spesies hewan
yang berbeda dengan hyphenation LC-DAD-MS/MS.Jurnal Kimia Pertanian dan Pangan, 61,
1628–1639.
Heudi, O., Trisconi, MJ, & Blake, CJ (2004).Kuantifikasi simultan vitamin A,
D3 dan E dalam formula bayi yang diperkaya dengan kromatografi cair–spektrometri massa.
Jurnal Kromatografi A, 1022,115–123.
 C. Nimalaratne et al. / Riset Pangan Internasional 66 (2014) 69–77
Huang, M., LaLuzerne, P., Winters, D., & Sullivan, D. (2009).Pengukuran vitamin D di
makanan dan suplemen gizi dengan kromatografi cair/spektrometri massa tandem.
Jurnal AOAC Internasional, 92,1327–1335.
Pedoman ICH (1997).Konferensi Internasional tentang Harmonisasi: Panduan untuk Industri —
Validasi prosedur analitis. Daftar Federal 62 FR 27464, Mei 2007 (Tersedia dari:http://
www.fda.gov/cber/guidelines.htm)
Kamao, M., Tsugawa, N., Suhara, Y., Wada, A., Mori, T., Murata, K., dkk. (2007).Kuantifikasi-
kation vitamin yang larut dalam lemak dalam ASI manusia dengan spektrometri
massa tandem kromatografi cair.Jurnal Kromatografi B, 859,192–200.
Kwak, BM, Jeong, IS, Lee, MS, Ahn, JH, & Park, JS (2014).Penentuan cepat dari
vitamin D3dalam formula bayi berbahan dasar susu dengan kromatografi cair-spektrometri
massa tandem.Kimia Pangan, 165,569–574.
Lim, YO, Kim, B., Ahn, S., & Kim, J. (2011).Peningkatan akurasi untuk penentuan
tion vitamin A dalam formula bayi dengan kromatografi pengenceran-cair isotop /
spektrometri massa tandem.Kimia Pangan, 126,1393–1398.
Mendoza, BR, Pons, SM, Bargallo, AC, & Lopez-Sabater, M. (2003).Penentuan cepat
dengan kromatografi cair kinerja tinggi fase terbalik dari vitamin A dan E dalam susu
formula bayi.Jurnal Kromatografi A, 1018,197–202.
Paliakov, EM, Gagak, BS, Uskup, MJ, Norton, D., George, J., & Bralley, JA (2009).Cepat
penentuan kuantitatif vitamin yang larut dalam lemak dan koenzim Q-10 dalam
serum manusia dengan kromatografi cair tekanan ultra-tinggi fase terbalik dengan
deteksi UV.Jurnal Kromatografi B, 877,89–94.
Penniston, KL, & Tanumihardjo, SA (2006).Efek toksik akut dan kronis dari vitamin
min A.Jurnal Nutrisi Klinis Amerika, 83,191–201.
Phinney, KW, Rimmer, CA, Thomas, JB, Sander, LC, Sharpless, KE, & Wise, SA
(2010).Metode kromatografi cair pengenceran isotop–spektrometri massa untuk
vitamin yang larut dalam lemak dan air dalam formulasi nutrisi.Kimia Analitik, 83, 92–
98.
Plozza, T., Trenerry, VC, & Caridi, D. (2012).Penentuan simultan vitamin
A, E dan β-karoten dalam susu sapi dengan kromatografi cair kinerja tinggi–
spektrometri massa perangkap ion (HPLC–MS).Kimia Pangan, 134,559–563.
Rimmer, CA, Sander, LC, & Wise, SA (2005).Selektivitas fase diam rantai panjang
dalam kromatografi cair fase terbalik.Kimia Analitik dan Bioanalitik, 382, 698–707.
77
Schieber, A., & Carle, R. (2008).Stabilitas karotenoid dalam sayuran, buah-buahan, fungsional
makanan, dan suplemen diet dengan referensi khusus untuktrans-dancis-
isomerisasi. Di CA Culver, & RE Wrolstad (Eds.),Kualitas warna makanan segar dan
olahan, vol. 983. (hlm. 140). Washington, DC: Masyarakat Kimia Amerika. Schlatterer,
J., & Breithaupt, DE (2006).Xanthophylls dalam kuning telur komersial: Kuantitas
fikasi dan identifikasi oleh HPLC dan LC-(APCI)MS menggunakan C30fase.Jurnal Kimia
Pertanian dan Pangan, 54,2267–2273.
Souverain, S., Rudaz, S., & Veuthey, JL (2004).Efek matriks dalam LC-ESI-MS dan LC-APCI-
MS dengan prosedur ekstraksi off-line dan on-line.Jurnal Kromatografi A, 1058,61–66.
Stary, E., Cruz, AD, Donomai, CA, Monfardini, JL, & Vargas, JF (1989).Penentuan
vitamin A-palmitat, A-asetat, E-asetat, D3dan K1dalam campuran vitamin dengan
HPLC fase balik isokratik.Jurnal Kromatografi Resolusi Tinggi, 12,421–423. Taylor, PJ
(2005).Efek matriks: Tumit Achilles dari cairan kinerja tinggi kuantitatif
kromatografi cair–elektrospray–spektrometri massa tandem.Biokimia Klinis, 38,328–
334.
Trenerry, VC, Plozza, T., Caridi, D., & Murphy, S. (2011).Penentuan vitamin D3
dalam susu sapi dengan spektrometri massa kromatografi cair.Kimia Pangan, 125,
1314–1319.
Badan Pengawas Obat dan Makanan AS (2001). Pusat evaluasi dan penelitian obat.Panduan
untuk industri: Validasi metode bioanalitik. Badan Pengawas Obat dan Makanan AS (http://
www.fda.gov/downloads/Drugs/GuidanceComplianceRegulatoryInformation/ Guidances/
ucm070107.pdf. Diakses pada 09.09.2011)
van Breemen, RB (2001).Spektrometri massa karotenoid. Dalam SJ Schwartz (Ed.),Bajingan-
menyewa protokol dalam kimia analitik makanan (hal. F2.4.1). New York: John Wiley & Sons
Inc.
van Breemen, RB, Nikolic, D., Xu, X., Xiong, Y., van Lieshout, M., West, CE, dkk. (1998).
Pengembangan metode untuk kuantisasi retinol dan retinil palmitat dalam serum
manusia menggunakan kromatografi cair kinerja tinggi-ionisasi kimia tekanan
atmosfer-spektrometri massa.Jurnal Kromatografi A, 794,245–251.