Diterjemahkan dari bahasa Inggris ke bahasa Indonesia - www.onlinedoctranslator.

com

Teknis T e

Spektroskopi UV/Vis

Memvalidasi UV/Terlihat
Spektrofotometer

Spektrofotometer UV/Visible banyak digunakan oleh banyak laboratorium – termasuk Pengarang

yang ditemukan di akademisi dan penelitian serta jaminan kualitas industri. Teknik ini
Steve Upstone
terutama digunakan secara kuantitatif (walaupun beberapa analisis kualitatif juga UV/Vis/NIR utama
dapat dilakukan). Spesialis Spektroskopi

Untuk semua jenis penentuan kritis, apakah itu QC klinis, farmasi atau industri, PerkinElmer, Inc.

analisis atau penelitian lingkungan, instrumen harus bekerja sesuai dengan Seer Green, Inggris

spesifikasi. Dalam beberapa aplikasi ini, kinerja instrumen harus dipantau

secara teratur dan ada bukti dokumenter tentang hal ini.

Ini akan berlaku untuk setiap pengukuran yang berkaitan dengan kesehatan manusia atau hewan
(klinis atau farmasi/nutraceutical), makanan atau laboratorium yang menawarkan layanan
pengukuran terakreditasi (misalnya sesuai dengan ISO 17025). Validasi juga merupakan syarat
utama Good Laboratory Practice (GLP).

Frekuensi pengujian
Satu pertanyaan umum dari laboratorium berkaitan dengan frekuensi pengujian. Tidak ada
peraturan, dengan demikian, mengenai hal ini tetapi untuk analisis terkait kesehatan atau nutrisi
manusia, frekuensi pengujian setidaknya setiap bulan harus dipertimbangkan. Jika instrumen
berada dalam lingkungan throughput sampel yang tinggi, maka beberapa pengujian mingguan
tambahan (misalnya pemeriksaan absorbansi dan panjang gelombang) harus dilakukan.
 Menguji akurasi panjang gelombang
Akurasi panjang gelombang biasanya dinilai dengan menggunakan
sampel yang mengandung serangkaian puncak yang sangat tajam seperti
larutan holmium perklorat atau holmium oksida dan/atau filter kaca yang
253,7 nm 302,25 nm 313,16 nm 334,15 nm 365,48 nm
404,66 nm 435,83 nm 547,07 nm 576,96 nm 579,07 nm
Gambar 2.Panjang gelombang untuk lampu emisi merkuri.

didoping didymium atau dengan mengukur pancaran dari lampu. Jika

instrumen dilengkapi dengan lampu deuterium (D2) sebagai sumber UV,
lampu ini dapat digunakan. Lampu merkuri eksternal (Hg) juga dapat Filter kaca dan cairan
digunakan. Ini kurang nyaman daripada menggunakan metode yang Filter kaca (atau kuarsa) yang paling umum digunakan adalah
disebutkan sebelumnya tetapi ada metodologi (misalnya dalam tes holmium oksida. Ini memberikan cara cepat dan mudah
Ph.Eur.) untuk penggunaannya sebagai alternatif untuk standar gelas atau untuk memeriksa akurasi panjang gelombang. Standar ini
cairan. Keuntungan dari garis emisi adalah tidak dapat diganggu gugat memberikan serangkaian garis di wilayah yang terlihat. Ini
(yaitu panjang gelombang emisi tidak berubah dari waktu ke waktu). tidak memberikan puncak penyerapan yang kuat ke dalam
wilayah UV sehingga larutan oksida holmium dalam asam
perklorat (holmium perklorat) direkomendasikan oleh
Menggunakan lampu deuterium beberapa farmakope tetapi untuk pengujian instrumen non-
farmakope umum, kaca holmium oksida digunakan secara
Jika instrumen menggunakan lampu deuterium, dimungkinkan untuk
luas. Bahan lain yang digunakan adalah “didymium” –
mengukur garis pancaran yang sangat tajam pada 656,1 nm dengan
campuran praseodymium dan neodymium. Ini
mematikan lampu tampak dan mengukur energi (mode sinar
direkomendasikan oleh US Pharmacopoeia (USP 24) serta
tunggal). Ada juga garis emisi yang lebih lemah pada 486,0 nm yang
yang lainnya seperti JP (Japanese Pharmacopoeia). Seperti
dapat digunakan. Ini tidak seketat menggunakan standar panjang
holmium oksida, ia juga tersedia dalam bentuk larutan.
gelombang lainnya (karena lebih sedikit garis yang tersedia) tetapi
Larutan standar panjang gelombang lain yang tersedia
berfungsi sebagai cara yang sangat nyaman dan akurat untuk
secara komersial meliputi samarium perklorat,
menilai bahwa optik instrumen disejajarkan dengan benar. Beberapa
instrumen PerkinElmer (seperti LAMBDA™25/35/45) menggunakan
garis emisi D2 656,1 nm saat dinyalakan untuk mengkalibrasi
monokromator. Lainnya (seperti seri LAMBDA 800/900 dan LAMBDA Kuarsa oksida holmium 279,2 nm 360,9 nm
X50) dapat melakukan kalibrasi ini sesuai permintaan (dan 453,7 nm 536,5 nm
menyimpan nilai dalam firmware instrumen). UV WinLab™v5 dan v6 637,7 nm
memiliki metode untuk memeriksa ini dan menghasilkan laporan).
Solusi holmium perklorat 241,15 nm 287,15 nm
Metode ini menggunakan balok belakang untuk prosedur (untuk
361,5 nm 536,3 nm
berjaga-jaga jika sampel dibiarkan di posisi depan karena kesalahan).
Garis emisi 486,0 nm (tetapi bukan garis 656,1 nm) adalah salah satu gelas didimium 440,4 nm 481,0 nm
kemungkinan titik uji di Ph.Eur. 5.2 (2005). 513,4 nm 684,5 nm
879,3 nm

Gambar 3.Panjang gelombang untuk kaca holmium oksida, larutan holmium perklorat
dan kaca didymium.

Gambar 1.Puncak deuterium menunjukkan puncak mendekati 656,1 nm (puncak yang lebih kecil
karena tritium yang lebih berat).

Menggunakan sumber emisi merkuri

Penggunaan lampu emisi merkuri (Hg) adalah cara lain untuk
memeriksa panjang gelombang. Lampu ini menawarkan lebih banyak
garis dibandingkan dengan deuterium – khususnya di wilayah UV.
Kepraktisan menggunakan lampu semacam itu sedikit lebih sulit.
Lampu merkuri harus ditempatkan di kompartemen lampu
instrumen. Garis emisi merkuri utama ditunjukkan pada Gambar 2. Gambar 4.Spektrum larutan perklorat holmium untuk pengujian akurasi panjang gelombang.

2
Pengujian akurasi fotometrik (absorbansi). laboratorium sebagai bagian dari penentuan mereka tetapi sangat jarang
menemukannya digunakan di tempat lain karena kerumitannya dan
Seperti pengujian akurasi panjang gelombang, larutan atau filter
menawarkan presisi yang tidak diperlukan untuk sebagian besar pengukuran.
kaca/kuarsa dapat digunakan. Untuk aplikasi umum filter kaca abu-
abu densitas netral (seperti NIST®930D set) adalah cara mudah untuk
menguji akurasi fotometri instrumen. Ini menawarkan sejumlah
panjang gelombang di wilayah yang terlihat. Untuk pengujian di UV
baik filter atau larutan kaca "logam pada kuarsa" harus digunakan.
Logam pada filter kuarsa memiliki lapisan reflektif yang diterapkan
pada pelat kuarsa. Hal ini dapat menyebabkan masalah karena
pantulan punggung yang kuat dikirim kembali melalui optik
Gambar 5.Aksesori bukaan ganda.
instrumen sehingga mungkin tidak cocok untuk semua jenis
instrumen. Lapisan perlu dirawat dengan hati-hati karena setiap
kerusakan akan mengubah sifat optik.

Solusi yang paling umum digunakan untuk memeriksa akurasi

absorbansi adalah kalium dikromat. Ph.Eur. metode menguji
absorbansi pada empat panjang gelombang – 235, 257, 313 dan
350 nm menggunakan antara 57,0 dan 63,0 mg kalium dikromat
dalam asam sulfat 0,005 M yang diencerkan hingga 1000 mL.
Sejak tahun 2005 solusi kedua telah ditambahkan untuk
memberikan titik uji tambahan pada 430 nm. Ini menggunakan
jumlah kalium dikromat yang sama tetapi dibuat hingga 100 mL
(yaitu sepuluh kali lebih pekat dari larutan aslinya). Dalam kedua
kasus, nilai A 1%/1 cm dicatat dan diperiksa terhadap kisaran
target. Gambar 6.Koreksi apertur ganda untuk non-linearitas detektor.

Asam niktonat (asam hidroklorat 0,1 M) dalam kisaran antara 6

dan 24 mg/L) dapat digunakan untuk menilai akurasi fotometrik
di wilayah UV jauh (pada 213 nm dan 261 nm). Ini bukan
prosedur resmi tetapi bahan referensi tersedia secara komersial
untuk tes ini.
Kehati-hatian harus diberikan saat menyiapkan larutan karena
kalium dikromat bersifat higroskopis sehingga penting untuk
dikeringkan secara menyeluruh jika tidak beratnya akan salah dan
ini dapat mengakibatkan kegagalan yang tidak perlu.
Pengujian cahaya liar
Cahaya liar dapat didefinisikan sebagai jumlah panjang gelombang yang
tidak diinginkan yang ada dalam berkas sampel. Dalam instrumen
"dispersif" konvensional, monokromator berada di depan sampel dan
sampel menerima satu panjang gelombang pada satu waktu. Setelah
sampel, hanya ada detektor. Ini berarti bahwa setiap cahaya liar yang
melewati monokromator akan terlihat oleh detektor. Cahaya sesat memiliki
dampak yang kuat pada kemampuan instrumen untuk merekam secara
akurat pada absorbansi yang lebih tinggi dan merupakan spesifikasi utama

Koreksi apertur ganda untuk akurasi saat menilai kualitas spektrofotometer. Untuk instrumen monokromator

fotometrik tunggal (seperti yang ditemukan di sebagian besar laboratorium kimia dan
biokimia), nilai cahaya nyasar terbaik yang dapat dicapai (menggunakan
Tidak ada instrumen yang memiliki respons detektor linier sempurna
ASTM®metodologi) akan menjadi sekitar 0,01% T. Ini setara dengan satu
sehingga akurasi fotometrik yang diamati akan memiliki
dari setiap 10.000 foton disebabkan oleh cahaya yang menyimpang. Ini
penyimpangan yang lebih besar dari nilai yang disertifikasi sebagai
mungkin terdengar seperti jumlah kecil tetapi harus diingat bahwa
hasilnya. Dimungkinkan untuk mengoreksi kesalahan sistematik ini
absorbansi adalah skala logaritmik sehingga 3AU (setara dengan 0,1% T)
dengan menggunakan teknik yang disebut koreksi apertur ganda.
sama dengan hanya satu dari seribu foton yang benar-benar melewati
Prosedur ini hanya tersedia untuk instrumen dengan kisaran
sampel dan mencapai detektor. Jika radiasi nyasar sebagian besar adalah
performa atas. Untuk memperbaikinya, Anda perlu membeli aksesori
cahaya nyasar "jauh" (yaitu panjang gelombang agak jauh dari panjang
bukaan ganda. Aksesori ini terdiri dari serangkaian daun jendela -
gelombang analitik yang sebenarnya) maka tidak mungkin diserap oleh
baik manual maupun bermotor - yang mampu mengukur bagian atas
sampel dan dengan demikian akan menyebabkan linearitas menjadi lebih
dan bawah balok. Mekanismenya harus sangat tepat sehingga tidak
buruk pada absorbansi yang lebih tinggi karena absorbansi dibanjiri oleh
ada tumpang tindih antara kedua pengukuran tersebut. Kemudian
cahaya liar [konstan]. Jika diperlukan kinerja linier yang lebih besar dari 3A,
dimungkinkan untuk menghitung faktor koreksi yang dapat
sistem dengan lebih dari satu monokromator harus dipertimbangkan –
digunakan untuk pengukuran selanjutnya. Produsen instrumen akan
baik premonokromator (menggunakan alat bantu yang lebih kecil).
mengutip akurasi fotometrik dengan dan tanpa koreksi apertur
ganda sebagai bagian dari spesifikasi mereka. Ini juga akan
digunakan oleh beberapa standar nasional

3
 monokromator) atau monokromator ganda penuh (dua Semua pengujian harus dilakukan dengan menggunakan kuvet kuarsa berukuran 1 cm (10

monokromator ekuivalen). Namun, harus dipertimbangkan mm).

bahwa untuk sebagian besar sampel cair, mereka dapat

diencerkan atau diukur dalam kuvet pendek (misalnya 5
mm) sehingga pengukuran pada nilai absorbansi yang
tinggi tidak diperlukan – sistem monokromator ganda
biasanya hanya diperlukan untuk analisis bahan dan optik
di mana sampel tidak dapat disesuaikan.

Angka 8.ASTM®uji cahaya sesat pada 220 nm menggunakan larutan natrium iodida (NaI)
10 g/L yang menunjukkan cahaya sesat kurang dari 0,01% T.

Pengujian cahaya liar untuk farmakope

Farmakope Eropa (Ph.Eur.) melakukan tes dalam absorbansi

(tidak seperti ASTM®di mana transmisi digunakan sebagai mode
Gambar 7.Pengaruh cahaya liar instrumental pada linearitas absorbansi.
ordinat) dan nilai yang tercatat dari larutan kalium klorida berair
12 g/L pada 198 nm harus 2A atau lebih besar. Uji ini direvisi

Uji lampu sesat harus dilakukan pada instrumen dasar dan dalam
pada tahun 2005 karena panjang gelombang uji dipindahkan

konfigurasi yang ditentukan oleh pabrikan untuk pengujian tersebut.

dari 200 nm (yang telah digunakan sejak tahun 1988) menjadi

Jika ada aksesoris yang dipasang (mis. sippers, integrating spheres,

198 nm. Panjang gelombang asli 200 nm agak dipengaruhi oleh

cell changer, dll.) ini dapat memiliki efek merugikan pada nilai cahaya
suhu sampel dan apakah larutan telah dihilangkan gasnya atau

yang menyimpang karena kebocoran cahaya tambahan, dll. Pipa

tidak (kuvet tertutup kurang rentan terhadap hal ini) sehingga

plastik bening yang masuk ke ruang sampel dari luar dapat berfungsi
memindahkan titik uji ke 198 nm membuat pengujian lebih kuat.

sebagai serat optik dan mentransfer cahaya dari luar ke bagian

dalam instrumen. Direkomendasikan untuk menggunakan selang
hitam atau membungkus selang (selubung selang luar hitam dapat
digunakan dengan baik) sekitar 5 cm sebelum memasuki area
sampel untuk meminimalkan hal ini.

Pengujian cahaya menyimpang ke metodologi ASTM®

ASTM®pengujian cahaya liar melibatkan penggunaan dua solusi

– 10 g/L natrium iodida (NaI) untuk 220 nm dan 50 g/L natrium nitrit
(NaNO2) untuk 340 nm dan 370 nm. Solusi ini memiliki cut-off yang
sangat tajam di wilayah UV. Ini berarti bahwa jika cahaya terdeteksi
pada panjang gelombang di mana sampel seharusnya benar-benar
menghalangi, ini pasti disebabkan oleh cahaya liar yang melewati
bagian transparan dari spektrum sampel. Sebagai konfirmasi lebih
lanjut, dimungkinkan untuk memblokir sinar (bingkai logam dari filter
kaca kami yang dimasukkan "menyamping" ke dalam instrumen
membuat pemblokir sinar yang ideal) dan membandingkan
pengukuran larutan cahaya liar dengan sinar yang diblokir - Gambar 9.Pengujian cahaya menyimpang menurut Ph. Eur. menggunakan larutan KCl
12 g/L menunjukkan perbedaan cahaya sesat pada instrumen premonokromator
perbedaannya antara keduanya memberikan nilai cahaya nyasar. Tes
(LAMBDA 45) dibandingkan dengan instrumen monokromator tunggal (LAMBDA
serupa dapat dilakukan pada 650 nm menggunakan larutan biru 25/35). Ini juga menunjukkan peningkatan hasil saat menggunakan 198 nm sebagai
metilen 0,1 g/L atau mengukur sekitar batas aseton murni antara 250 titik uji, bukan 200 nm.
dan 320 nm.

4
Beberapa perusahaan farmasi menggunakan larutan uji cahaya
sesat mereka sendiri seperti larutan jenuh litium karbonat (pada
227 nm) atau natrium klorida (pada 205 nm) sebagai bagian dari
prosedur internal mereka tetapi ini tidak diakui secara resmi oleh
farmakope utama.
Pengujian resolusi
Farmakope Eropa memperkenalkan tes resolusi sebagai bagian dari
metodologi asli tahun 1988. Ini didasarkan pada pengukuran larutan
0,02% b/v larutan toluena dalam heksana, mengukur rasio puncak
(pada 269 nm) dan palung (pada 266 nm) dan mengukur rasio. Rasio
ini harus 1,5 atau lebih besarkecuali ditentukan dalam monografi.Ini
berarti bahwa, meskipun instrumen sangat diinginkan untuk lulus tes
ini, itu tidak penting tetapi sebagian besar produsen menganggap ini
sebagai bagian dari pembuatan instrumen yang "sesuai dengan obat-
obatan" dan beberapa melakukan pengukuran sebagai bagian dari
tes akhir mereka. prosedur. Dalam praktiknya, instrumen dengan
bandpass (lebar celah) sekitar 1,5 nm harus lulus uji ini. Untuk
instrumen bandpass tetap, pengukuran harus memberikan hasil yang
cukup konstan karena tidak ada gerakan mekanis yang terlibat. Jika
instrumen memiliki bandpass variabel – khususnya jika celah dapat
divariasikan secara terus-menerus menggunakan mekanisme
“rahang” motor stepper, hasil pengujian dapat lebih bervariasi
sehingga pengujian harus dilakukan lebih sering.
Gambar 10.Uji resolusi menggunakan toluena 0,02% b/v dalam heksana (dalam contoh ini
rasionya kira-kira 1,9).
Pada tahun 2005 Farmakope Eropa memperkenalkan metode
kedua yang melibatkan larutan toluena dalam metanol dan
berdasarkan spektroskopi turunan kedua (D2). Pada saat
penulisan, tes ini tidak banyak digunakan.
Pengujian tambahan
Mungkin berguna untuk melakukan tes tambahan pada instrumen
menggunakan metodologi yang tidak terdapat dalam farmakope
tetapi menggunakan subset dari prosedur layanan internal pabrikan
sendiri. Ini dapat memberikan indikasi hal-hal seperti kerusakan
lampu. Beberapa contohnya adalah:
stabilitas absorbansi (drift) –mengukur bagaimana perubahan
absorbansi (biasanya dalam absorbansi per jam) dalam kondisi yang
ditentukan.
Kerataan dasar –instrumen di-autozero dengan tidak ada apa
pun di kompartemen sampel di seluruh rentang kerjanya dan ini
kemudian diukur. Beberapa pabrikan menentukan kerataan
pada rentang terbatas (misalnya 200-800 nm) yang mungkin
bukan rentang kerja penuh instrumen. Ini biasanya terjadi pada
instrumen berbasis photomultiplier di mana photomultiplier
mengalami kehilangan sensitivitas yang cukup besar di atas 800
nm.
kebisingan -ini diukur pada panjang gelombang tertentu di bawah
kondisi yang ditentukan. Ini dapat diukur pada absorbansi nol atau
pada nilai absorbansi tertentu (misalnya 1A).
Reproduksibilitas(baik dari segi panjang gelombang dan akurasi
fotometrik).
Menguji reflektansi
Beberapa laboratorium ingin menguji keakuratan pantulan. Ini
cenderung menjadi instrumen yang lebih spesifik dan harus
dilengkapi dengan lampiran reflektansi yang sesuai. Ini biasanya
merupakan bidang integrasi untuk reflektansi difus dan total
dan keterikatan relatif atau absolut untuk reflektansi specular.
Untuk reflektansi difus, dimungkinkan untuk membeli standar
reflektansi difus. Ini adalah standar abu-abu di mana jumlah karbon
hitam yang berbeda ditambahkan ke bahan putih atau standar warna
di mana bahan putih diwarnai. Untuk material yang menyebar
sempurna, Spectralon®mungkin merupakan bahan terbaik. Ini adalah
bahan PTFE sinter putih eksklusif yang tahan terhadap menguning
dan dapat dibersihkan dengan mudah. Saat mengukur standar ini,
yang terbaik adalah menggunakan balok sebesar mungkin.
Standarnya tidak sepenuhnya homogen dan karenanya, untuk balok
yang sangat kecil, dimungkinkan untuk mengambil "kotoran" karbon
individu yang akan memberikan hasil yang tidak konsisten. Dengan
mengukur %RSD (Relative Standard Deviation (Gambar 16 – Halaman
9) dari standar ini, toleransi yang diharapkan dapat dinilai.
5
 Untuk mengukur pantulan specular, bahan yang paling umum
digunakan adalah cermin aluminium berlapis permukaan depan
karena cermin ini memantulkan seluruh rentang UV/Vis/NIR. Cermin
ini kurang dapat diandalkan dalam rentang UV karena setiap goresan
permukaan akan berkontribusi pada penyebaran yang lebih tinggi di
• Akurasi fotometri menggunakan standar grey glass.
Beberapa standar kaca abu-abu memiliki titik uji di
wilayah NIR selain rentang UV/Visible.
• Reflektansi – keduanya Spectralon®dan cermin aluminium dapat

wilayah UV karena fisika fenomena pencar. Satu masalah lain dengan digunakan untuk memeriksa pantulan di wilayah NIR. Spektral®
memotong di atas 2500 nm.
cermin ini adalah bahwa mereka sering harus dapat dilacak sebagai
bagian dari laboratorium yang memperoleh akreditasi (mis. ISO
17025). Cermin yang dapat dilacak seringkali memiliki spesifikasi yang Memvalidasi Spektrofotometer UV/Vis dan UV/Vis/NIR
buruk – seperti reflektifitas ±1% dan ini mungkin tidak cukup baik PerkinElmer Menggunakan perangkat lunak UV WinLab
untuk beberapa aplikasi (seperti pengukuran cermin laser di mana Perangkat lunak UV WinLab (v4 dan lebih tinggi) berisi fitur untuk
akurasi 0,1%R sangat diinginkan). Alasan untuk toleransi yang luas ini membantu kalibrasi spektrofotometer.
adalah bahwa laboratorium standar nasional membandingkan
standarnya dengan laboratorium lain sehingga semakin banyak Untuk instrumen kinerja sedang (LAMBDA 20, 25/35, 40/40P dan 45),
laboratorium yang terlibat, ada modul Instrument Performance Verification (IPV). Modul ini berisi
lebih dari dua puluh pengujian yang dapat dilakukan pengguna
untuk memeriksa kinerja. Beberapa tes memerlukan standar atau
Saat menguji pantulan, mungkin ada perdebatan tentang hasil yang lampu merkuri eksternal sedangkan yang lain tidak.
"benar" untuk sampel tertentu. Sebagian besar standar cukup ideal,
misalnya, Spectralon®hampir sempurna menyebar dan cermin
aluminium hampir sempurna specular. Sampel sebenarnya mungkin
berada di antara keduanya – menampilkan campuran dari kedua
jenis pantulan. Untuk mengatasi masalah ini, beberapa industri
(misalnya produsen cat) terkadang menggunakan ubin keramik yang
dikalibrasi karena memiliki komponen specular yang lebih tinggi.

Saat mengukur reflektansi (kecuali jika menggunakan aksesori

absolut), instrumen dan aksesori perlu dinolkan menggunakan
standar yang reflektansinya diketahui. Maka perlu dilakukan
koreksi matematis untuk menghilangkan kontribusi standar ini
dan mengubah pengukuran relatif menjadi pengukuran absolut.
Jika ini tidak dilakukan (yaitu nilai relatif digunakan) untuk satu
set standar absolut, hasilnya tidak valid.

Pengujian di wilayah Near Infrared (NIR).

Beberapa spektrofotometer juga memiliki kemampuan
inframerah dekat dan dapat mengukur lebih dari 900 nm
Gambar 11.Modul IPV – daftar metode.
sehingga perlu menilai kinerja di wilayah ini. Ada beberapa
prosedur pengujian yang berlaku di wilayah ini. Ini termasuk:

• Akurasi panjang gelombang kisi NIR menggunakan garis emisi
deuterium orde dua pada 1312,2 nm atau 972 nm (yaitu dua
kali masing-masing 656,1 nm dan 486 nm).
• Akurasi panjang gelombang menggunakan oksida holmium yang
memberikan puncak pada 1938 nm.
• Akurasi panjang gelombang menggunakan standar McCrone. Ini
adalah standar komposit yang memberikan jalur tambahan pada
NIR dari 481 nm menjadi 2326,8 nm (tersedia dari NPL Inggris).
Setiap pengujian dapat diisi dengan nomor seri standar dan informasi
tanggal kalibrasi (jika ada) dan frekuensi pengujian untuk setiap pengujian
juga dapat ditetapkan. Dalam perangkat lunak versi ES (Keamanan yang
Ditingkatkan), dimungkinkan untuk mengatur izin sedemikian rupa
sehingga seorang analis tidak dapat menggunakan instrumen jika gagal
dalam kalibrasi atau kalibrasi terlambat (ini dapat dikesampingkan oleh
administrator sistem, jika diperlukan). Jika ada tes yang diperlukan yang
bukan merupakan bagian dari modul IPV, ini dapat dibuat dengan
menggunakan metode UV WinLab standar.

• Cahaya nyasar menggunakan air pada kloroform 1420 nm pada 2365 nm.

6
 Tes
Akurasi panjang gelombang – lampu pihak ketiga
Kaca akurasi panjang gelombang
Solusi akurasi panjang gelombang
Akurasi panjang gelombang – D2
Pengulangan panjang gelombang – D2
Resolusi - uap benzena
Resolusi - toluena
Kaca akurasi fotometrik
Akurasi fotometrik – K2Kr207
Akurasi fotometrik – KNO3larutan
Kaca keterulangan fotometrik
Stabilitas dasar (kerataan)
Kebisingan (tiga tes)
Absorbansi stabilitas nol (drift)
Larutan KCl cahaya liar (uji Ph.Eur. 1988/2005)
NaI cahaya liar (ASTM®)
NaNO cahaya liar2(ASTM®)
Resolusi (toluena dalam metanol – Ph. Eur. 2005)
Akurasi fotometrik – K2Kr207pada 430 nm
(Ph.Eur.2005)
Untuk instrumen berkinerja tinggi, ada kumpulan Metode
Layanan. Sifatnya mirip dengan metode IPV tetapi ada lebih
banyak (mencerminkan kompleksitas tambahan dari
instrumen ini) dan merupakan metode analitik reguler yang
diatur ke dalam kumpulan daripada menjadi bagian dari
modul perangkat lunak terpisah. Ada juga metode servis
tambahan untuk beberapa aksesori utama seperti bola
integrasi dan Universal Reflectance Accessory (URA).
Gambar 12.Metode servis untuk instrumen berkinerja tinggi.
Standar yang Diperlukan
Lampu pihak ketiga (misalnya merkuri)
Set standar yang dikalibrasi(B0507805).Dapat dilacak ke PTB Jerman
Standar farmakope ditetapkan(B2500100)menggunakan holmium perklorat (uji Ph.Eur.)
Tidak diperlukan standar -menggunakan lampu deuterium instrumen (486 nm dan 656,1 nm)
Tidak diperlukan standar -menggunakan lampu deuterium instrumen (486 nm dan 656,1 nm)
Sel Benzena tersegel (pengganti toluena yang dapat diterima)
Standar farmakope ditetapkan(B2500100)menggunakan toluena dalam metanol (uji Ph.Eur.)
Set standar yang dikalibrasi(B0507805).Dapat dilacak ke PTB Jerman
Standar farmakope ditetapkan(B2500100)menggunakan K2Kr207solusi (Ph.Eur. test)
TAHU3larutan
Set standar yang dikalibrasi(B0507805).Dapat dilacak ke PTB Jerman
Tidak diperlukan standar
Tidak diperlukan standar
Tidak diperlukan standar
Standar cahaya liar(B2500099)
Standar cahaya liar(B2500099)
Standar cahaya liar(B2500099)
Toluena dalam larutan metanol
Solusi dari K2Kr207
Utilitas kalibrasi untuk instrumen LAMBDA
berkinerja tinggi
Instrumen LAMBDA berkinerja tinggi juga memiliki fasilitas onboard
untuk menyesuaikan pengaturan celah dan panjang gelombang
instrumen. Utilitas kalibrasi ini dapat diakses dengan mengklik kanan
ikon instrumen (di simpul instrumen UV WinLab). Tidak seperti tes lain
yang dijelaskan di sini, ini akan mengukur dan mengoreksi setiap
pergeseran panjang gelombang yang terdeteksi
– ini dapat dianggap sebagai semacam rutinitas "autotune".
Ini juga mengkalibrasi mekanisme celah variabel kontinu
serta memeriksa offset 0% T. Kalibrasi panjang gelombang
didasarkan pada garis emisi deuterium 656,1 nm (garis 486,0
nm juga dapat digunakan secara opsional). Monokromator
NIR juga dapat diperiksa menggunakan garis orde kedua
1312,6 nm. Harap diperhatikan bahwa pengganda foto
digunakan untuk semua pengujian (bahkan keakuratan
panjang gelombang NIR – karena fakta bahwa ini adalah efek
urutan kedua sehingga detektor sebenarnya masih
mendeteksi pada 656,1 nm). Jika memungkinkan, yang
terbaik adalah mengkalibrasi instrumen menggunakan
detektor standar daripada dengan aksesori. Ini karena celah
yang sangat sempit digunakan untuk kalibrasi panjang
gelombang sehingga sensitivitas menjadi penting. Untuk
LAMBDA 650 dan 750 versi “S” dan “R” khusus,
7

Gambar 13.Tangkapan layar utilitas kalibrasi.
Mengatur toleransi
Saat merancang tes validasi, perlu untuk menetapkan toleransi yang
realistis untuk pengujian tersebut, jika tidak maka akan gagal secara tidak
perlu. Toleransi harus terdiri dari tiga bagian yang harus ditambahkan
bersama-sama. Ini adalah:
• Ketidakpastian pengukuran yang diberikan pada sertifikat standar
(atau panjang gelombang emisi yang diterbitkan jika menggunakan
garis sumber emisi).
• Spesifikasi pabrikan untuk instrumen yang terkait dengan
standar tersebut (misalnya uji akurasi panjang gelombang
akan dipengaruhi oleh spesifikasi akurasi panjang
gelombang instrumen serta toleransi standar).
• Setiap pengaruh terhadap pengukuran yang berasal dari
operator atau bagian lain dari sistem.
Memvalidasi tes
Sejauh ini validasi instrumen sendiri sudah dibahas. Instrumen
mungkin bekerja dengan sempurna tetapi mungkin masih belum
sesuai untuk tujuan pengujian tertentu. Ini mungkin karena
instrumen memiliki spesifikasi yang tidak sesuai untuk penentuan
tersebut. Sebagai contoh sepele, instrumen yang berfungsi
sempurna yang mencakup rentang 190 hingga 900 nm tidak akan
cocok untuk mengukur absorbansi pada 1000 nm.
Validasi kuvet
Pengujian jenis kuvet yang dipilih untuk pengujian tertentu
juga harus disertakan dalam setiap validasi pengujian. Ini
harus dalam hal desain (makro, semi-mikro, mikro, ultra-
mikro, apakah dindingnya menghitam, dll.), bahan konstruksi
(kuarsa, silika leburan, silika NIR, kaca, dll.) dan toleransi
manufaktur dari panjang jalur nominal (biasanya ke norma
Jerman DIN 58963-1/2).
8
Gambar 14.Profil transmisi bahan kuvet non-sekali pakai yang umum
(grafik milik Hellma GmbH).
Memvalidasi pelarut
Air adalah pelarut yang umum digunakan dalam spektroskopi serapan
UV/Visible. Ini adalah bahan yang hampir sempurna yang menawarkan
transparansi lebih dari rentang UV/Visible (tetapi memiliki pita serapan
yang lebih kuat di wilayah NIR) dan ideal untuk berbagai analit yang
larut dalam air.
Beberapa bahan (misalnya spesies organik) tidak akan larut dalam air
dan lainnya (terutama senyawa biologis) mungkin memerlukan zat
lain untuk hadir untuk menstabilkan bahan tersebut (misalnya
larutan penyangga).
Oleh karena itu, perlu untuk memeriksa bahwa analisis
dilakukan pada panjang gelombang di mana pelarut cukup
transparan agar pengujian stabil dan dapat direproduksi. Ini
dapat dilakukan dengan menilai titik potong pelarut. Definisi
yang paling umum digunakan adalah titik dimana pelarut
memiliki transmitansi 10% (1 Absorbansi)
dalam kuvet 1 cm. Hal ini dapat dipastikan cukup mudah dengan
memindai sendiri pelarut atau buffer dalam kuvet kuarsa 1 cm
(menggunakan udara sebagai autozero) dan mengamati titik di
mana spektrum mencapai 1 absorbansi.
Di luar titik cut-off, pelarut menjadi benar-benar buram dan instrumen
akan mencoba sebaik mungkin untuk melanjutkan pengukuran
(terutama jika pelarut ada di sampel dan balok referensi) tetapi apa yang
diamati tidak berguna secara analitik dan metode rutin harus dibuat.
sedemikian rupa sehingga mereka tidak mengumpulkan data di mana
pelarut berada di luar titik batasnya karena hanya akan menyebabkan
kebingungan dalam mencoba menginterpretasikan hasil yang tidak
berarti. Mengukur sampel dalam mode energi (sinar tunggal) akan
memberikan gambaran yang lebih jelas tentang apa yang diamati oleh
detektor instrumen.
Produsen pelarut menawarkan tingkat kemurnian pelarut yang Nilai Berarti
berbeda dan titik potong UV biasanya akan dinyatakan pada N
botol. Beberapa perkiraan titik potong pelarut umum X–=1
N
∑X Saya
ditunjukkan pada tabel di bawah ini.
Saya=1

Nilai rata-rata aritmatika dari sekumpulan titik data.

Pelarut Batas (nm)
(>1 AU dalam kuvet 1 cm) Deviasi Standar
Air 190 N
1
Sikloheksana 200 SX= N–1
• ∑(XSaya–X–) 2

Asetonitril 200 Saya=1

Metanol 205 Deviasi Standar Relatif (%RSD)

Isopropanol 210 SX• 100

RSD(%) = X–
Diklorometana 233
Etil asetat 256
Kesalahan residual (data linearitas atau kurva kalibrasi)
Toluena 254
N
Aseton 330 1
Sy= ∑(y*Saya–ySaya) 2
df
Saya=1

Menggunakan statistik untuk mengevaluasi data Perbedaan

N
Teknik analisis statistik memberikan “perangkat” yang berguna 1
dalam penilaian data validasi – baik dalam hal kalibrasi
SX2 =
(N–1)
∑(XSaya–X– ) 2

instrumen maupun yang berkaitan dengan pengujian tertentu. Saya=1

Di mana:

N Jumlah titik data.

Penting juga untuk menentukan kekokohan kalibrasi atau
pengujian dalam hal akurasi dan presisi. Diagram di bawah ini
memberikan representasi visual yang baik dari kedua istilah
ini.
XSaya Nilai analitik titik data (misalnya konsentrasi). Nilai
ySaya ordinat titik data (misalnya absorbansi).
ySaya* Titik yang sesuai pada kurva kalibrasi. df
Jumlah derajat kebebasan (kurva linier tanpa perpotongan = 1,
kurva linier ditambah suku perpotongan = 2, kurva kuadrat
tanpa perpotongan = 2, kurva kuadrat dengan perpotongan =
3).

Penilaian kesalahan

Kesalahan acak

Kesalahan acak disebabkan oleh penyimpangan yang tidak dapat

Gambar 15.Representasi bergambar akurasi dan presisi.
Menilai presisi berguna saat berhadapan dengan autosampler – baik
perangkat tipe “sippers” atau carousel. Perangkat ini bergantung pada
pemompaan sampel melalui flowcell dan, oleh karena itu, cenderung
terbawa. Meskipun dimungkinkan untuk menyusun parameter operasi
yang akan menghindari hal ini (misalnya waktu pemompaan minimum),
parameter tersebut akan dipengaruhi oleh hal-hal seperti viskositas
sampel, suhu, dll.
Penilaian statistik dari hasil pengukuran
Rumus statistik berikut berguna dalam menilai presisi
dan akurasi:
dihindari dari hasil analisis yang diperoleh denganNpenentuan
sampel yang sama dari nilai terkait (nilai rata-rata sampel yang tidak
diketahui, nilai yang diketahui dengan sampel referensi). Ukuran
untuk kesalahan acak adalah keterulangan, diperkirakan dari nilai
pengukuran dari pengukuran berulang yang sepenuhnya
independen. Setiap pengukuran berulang harus dilakukan seolah-
olah itu adalah sampel terpisah yang tidak diketahui.
Kesalahan sistematis, bias
Kesalahan sistematis (bias) adalah penyimpangan dari nilai rata-
rata yang diperoleh dariNpengukuran berulang (harapan) dari
nilai terkait (nilai benar benar atau konvensional). Jika ada
kesalahan sistematis, perbedaan ini lebih besar dari rentang
kepercayaan nilai rata-rata. Kisaran kepercayaan masing-masing
dihitung dari standar deviasi sesuai dengan akurasi statistik yang
diberikan. Penyimpangan sistematis juga ditandai dengan istilah
kebenaran.

9
 Bagan Shewhart

Bagan Shewhart (atau Means Control Charts) adalah alat yang berguna
untuk membuat tren data – baik dalam kumpulan analitik tertentu (jika ada
jumlah sampel yang signifikan secara statistik) atau selama periode waktu
tertentu. Mereka berguna untuk trending data analitik dan hasil dari
kalibrasi sehingga setiap perubahan kinerja instrumen dapat dipantau dan
hasil dari setiap perubahan dalam sistem pengukuran (seperti perubahan
lampu) dapat dinilai. UV WinLab menggunakan database sebagai tempat
penyimpanan utama untuk data sehingga memungkinkan untuk
menanyakan database ini menggunakan kombinasi kriteria pencarian
seperti pengguna, rentang tanggal, instrumen, kata kunci baik dalam
nama metode atau tugas (data) untuk memilih data yang sesuai dengan
kriteria pencarian.

Dalam contoh yang ditunjukkan, deviasi dari garis emisi Gambar 16.Bagan Shewhart menunjukkan deviasi dari garis emisi deuterium pada
656,1 nm.
deuterium pada 656,1 nm cenderung menunjukkan deviasi
rata-rata sekitar 0,016 nm (spesifikasi adalah 0,08 nm untuk
instrumen khusus ini – spektrofotometer LAMBDA 1050 UV/
Vis/NIR). Batas statistik (berdasarkan standar deviasi 2 dan
3 – 2σ dan 3σ) juga ditunjukkan pada diagram.

Standar Tersedia dari PerkinElmer

Bahan standar berikut tersedia dari PerkinElmer:

Nomor Bagian Keterangan Ketertelusuran

B0507805 Kumpulan Bahan Referensi Akurasi Fotometrik dan Panjang Gelombang PTB Jerman
Kumpulan bahan referensi sekunder yang dapat dilacak ke NIST®untuk
memverifikasi akurasi ordinat dan absis (panjang gelombang) spektrometer UV/Vis
dan UV/Vis/NIR. Set ini terdiri dari empat filter kaca yang dipasang di dudukan pegas
aluminium presisi. Mereka dirancang untuk digunakan dengan pemegang kuvet 10
mm standar dari sebagian besar spektrometer UV/Vis dan UV/Vis/NIR. Set ini
disediakan dalam wadah aluminium yang kuat. Ada tiga filter kaca densitas netral
untuk memeriksa akurasi ordinat dan filter kaca holmium oksida untuk memeriksa
akurasi panjang gelombang spektrometer. Setiap filter memiliki nomor identifikasi
unik. Nilai ordinat dan absis bersertifikat serta toleransi dari setiap filter dikutip
dalam Sertifikat Kalibrasi terlampir. Panjang gelombang terukur untuk ketiga filter
densitas netral adalah 440.0, 546.1, 635.0, 1700, dan 2300 nm.

N1010545 Filter Kaca Holmium Oksida Institut Standar dan

Filter kaca holmium oksida untuk memeriksa keakuratan panjang gelombang spektrometer Teknologi Nasional AS (NIST®)
UV/Vis atau UV/Vis/NIR. Filter dipasang di dudukan pegas aluminium presisi dan disediakan
dalam wadah aluminium yang kuat, dengan Sertifikat Kalibrasi.

B2500099 Bahan Referensi Solusi Stray Light Set Instrumen dikalibrasi

Set terdiri dari empat larutan dalam kuvet tertutup – satu larutan referensi dan tiga larutan uji. menggunakan NIST®standar 930D
Kuvet dirancang untuk digunakan dengan pemegang kuvet 10 mm standar dari sebagian besar
spektrometer UV/Vis dan UV/Vis/NIR. Larutan uji terdiri dari natrium iodida, natrium nitrit, dan
kalium klorida, yang berfungsi sebagai filter high-pass dengan panjang gelombang cut-off yang
sangat presisi. Potassium Chloride (KCL) untuk mengukur nyasar pada 200 nm, Sodium Iodide
(NaI) untuk mengukur cahaya nyasar pada 220 nm, dan Sodium Nitrite (NaNO2) untuk mengukur
cahaya liar pada 340 dan 370 nm. Perangkat ini disediakan dalam wadah aluminium yang kuat,
dengan Sertifikat Kalibrasi.

10
Standar Tersedia dari PerkinElmer, lanjut
Nomor Bagian Keterangan Ketertelusuran

B2500100 Set Bahan Referensi Farmakope Instrumen dikalibrasi

Set yang terdiri dari enam larutan dalam kuvet tertutup – dua larutan referensi dan empat menggunakan NIST®standar 930D
larutan uji untuk memverifikasi kalibrasi sesuai dengan monografi farmakope:
• Akurasi ordinat (fotometrik); kalium dikromat. Panjang gelombang yang diukur adalah
235, 257, 313 dan 350 nm
• Akurasi absis (panjang gelombang); holmium perklorat
• Tingkat radiasi nyasar; kalium klorida untuk mengukur radiasi liar pada 200 nm
• Resolusi; toluena dalam heksana

Kuvet dirancang untuk digunakan dengan pemegang kuvet 10 mm standar dari sebagian
besar spektrometer UV/Vis dan UV/Vis/NIR. Set ini disediakan dalam dua wadah aluminium
yang kuat dengan Sertifikat Kalibrasi.

PELA9057 Spektral yang dikalibrasi®Standar Reflektansi Difus Institut Standar dan

(Diameter 1,25") 250 - 2500 nm, dilaporkan setiap 50 nm. CD-ROM dilengkapi dengan data setiap 1 nm. Teknologi Nasional AS (NIST®)
PELA9058
(2" dia.)

PELA9010 Spektral®Bahan Referensi Reflektansi Difus UV/Vis/NIR Spektral®set bahan Institut Standar dan
(Diameter 1,25") referensi reflektansi difus terdiri dari referensi putih difus Teknologi Nasional AS (NIST®)
PELA9011 bahan dan pilihan tiga bahan referensi abu-abu menyebar. Setiap bahan referensi dalam rangkaian

(2" dia.) dilengkapi dengan data reflektansi difus lengkap dari 250 nm hingga 2500 nm, dan dipasang dalam
bingkai aluminium anodized. Set dikemas dalam wadah penyimpanan kedap udara.

• Tahan lama, lembam secara kimiawi

• Nilai pantulan – 99%, 75%, 50% dan 2%

• Dapat dicuci

PELA9012 Spektral®Bahan Referensi Reflektansi Difus UV/Vis/NIR Spektral®set bahan Institut Standar dan
(Diameter 1,25") referensi reflektansi difus terdiri dari bahan referensi putih difus dan pilihan Teknologi Nasional AS (NIST®)
PELA9013 tujuh bahan referensi abu-abu difus.
(2" dia.) Setiap bahan referensi dalam rangkaian dilengkapi dengan data reflektansi difus lengkap dari 250 nm
hingga 2500 nm, dan dipasang dalam bingkai aluminium anodized. Set dikemas dalam wadah
penyimpanan kedap udara.
• Tahan lama, lembam secara kimiawi

• Nilai pantulan – 99%, 80%, 60%, 40%, 20%, 10%, 5% dan 2%

• Dapat dicuci

PELA9018 Set Empat Standar Warna (Merah, Hijau, Biru, dan Kuning) Institut Standar dan
(Diameter 1,25") Teknologi Nasional AS (NIST®)
PELA9019 (diameter 2")

PELA9020 Set Standar Empat Warna dan Empat Abu-abu 2" (Merah, Hijau, Biru, Kuning, Plus Institut Standar dan
Empat Abu-abu) (99%, 50%, 20%, 2%) Teknologi Nasional AS (NIST®)

PELA9021 Set Delapan Warna 2" Standar (Merah, Hijau, Biru, Kuning, Orange, Cyan, Violet Institut Standar dan
dan Ungu) Teknologi Nasional AS (NIST®)

L6310204 Cermin Referensi Permukaan Kedua UV/Vis/NIR Diproduksi oleh OMT Solutions,
Desain cermin referensi permukaan multi-lapisan multi-lapisan logam dioptimalkan untuk Eindhoven, Belanda
stabilitas dan pantulan maksimum dalam rentang UV/Vis/NIR dari 200 nm – 2.600 nm untuk Ini tidak dapat dilacak ke standar
memeriksa keakuratan absolut dan mengoreksi spektrum aksesori pantulan spekuler non- nasional karena menawarkan
absolut. akurasi yang lebih besar daripada
• Pelat depan silika pelindung 2 mm yang mudah dibersihkan bahan standar yang tersedia secara
• Kurva pantulan halus tanpa pita serapan terkait air dalam rentang NIR umum.
• Ukuran 50 mm x 100 mm
• Kalibrasi pada insidensi 8 derajat dalam rentang panjang gelombang 200 nm - 2.500 nm,
ketidakpastian kalibrasi umumnya < 0,25%

Disampaikan dalam wadah pelindung yang ringan, disertai dengan laporan kalibrasi dan CD-
ROM dengan data kalibrasi di Excel yang berbeda®format.

11
Standar Tersedia dari PerkinElmer, lanjut
Nomor Bagian Keterangan Ketertelusuran

N1010504 Cermin Referensi Sekali Pakai untuk Spektroskopi Reflektansi Institut Standar dan
Cermin ini diperlukan untuk memeriksa keakuratan absolut dan untuk mengoreksi spektra Teknologi Nasional AS (NIST®)
aksesori pemantulan specular non-absolut. Cermin adalah bahan referensi sekunder dan
dikalibrasi menurut peraturan GLP, rentang panjang gelombang 250 hingga 2.500 nm.

Kalibrasi ulang standar

Sebagian besar standar dapat dikalibrasi ulang. Dalam beberapa kasus
(misalnya cermin aluminium), standar itu sendiri adalah bahan yang murah
dan juga tergores seiring waktu sehingga tidak praktis untuk mengkalibrasi
ulang. Oleh karena itu, ini disebut sebagai "sekali pakai".

Beberapa standar cair dapat menimbulkan masalah dengan kurir/maskapai

penerbangan saat dikirim kembali untuk kalibrasi ulang karena bahan
(walaupun hanya jejak) yang dikandungnya.

Bacaan lebih lanjut

Miller, JN, "Metode Statistik Dasar untuk Kimia Analitik, Bagian

2. Metode Kalibrasi dan Regresi, Review" Analis, 116 (1995).

Demey, RC, Sinclair R., Spektroskopi Terlihat dan Ultraviolet,

John Wiley and Sons, New York, 1987.

Nijnatten, PA, “Kalibrasi Filter Kaca Kepadatan Netral untuk

Menghasilkan Standar Transmisi” Institut Fisika Terapan TNO,
Eindhoven, Belanda (sekarang dapat dihubungi melalui
www.omtsolutions.com).

MacDonald, RP, Kegunaan untuk filter homium oksida dalam

spektrofotometri. ClinChem 10: 1117-1120, 1964.

Slavin, W., Cahaya sesat dalam spektrofotometri ultraviolet, tampak

dan inframerah-dekat. Kimia Anal 35: 561-566, 1963.

Definisi standar istilah dan simbol yang berkaitan dengan spektroskopi

molekuler (E131-71), dalam Manual tentang Praktik yang
Direkomendasikan dalam Spektroskopi. Philadelphia, PA: American
Society of Testing Materials Committee E13, 1969, hlm 10-34.

Metode standar untuk memperkirakan energi radian sesat

(E387-72), dalam Analytical Methods of Spectroscopy, Philadelphia,
PA: American Society of Testing Materials Committee E-13, Buku
Tahunan ASTM®Standards, 1974, hlm 291-302.

PerkinElmer, Inc.
940 Jalan Musim Dingin

Waltham, MA 02451 USA P:

(800) 762-4000 atau (+1)
203-925-4602
www.perkinelmer.com

Untuk daftar lengkap kantor global kami, kunjungi www.perkinelmer.com/ContactUs

Hak Cipta ©2012, PerkinElmer, Inc. Semua hak dilindungi undang-undang. PerkinElmer®adalah merek dagang terdaftar dari PerkinElmer, Inc. Semua merek dagang lainnya adalah milik dari pemiliknya masing-masing.

009965_01