BAHAN DAN METODE

Bahan , Alat dan Subyek Penelitian

Bahan Alat
• Parasetamol dan Fenilpropanolamin Hidroklorida (PT. Sanbe • Timbangan analitik (Sartorius tipe n2442),
Farma), • spektrofotometer UV-Vis (Beckman DU7500i),
• Parasetamol dan Fenilpropanolamin Hidroklorida BPFI (PPOM), • pH meter (BeckmanΦTM 50),
• Asetonitril, • tabung plasma (Vacuette 7 ml),
• Metanol (grade HPLC) Etilasetat, • jarum suntik,
• Metilen klorid dan Aqua bidestilata, • tabung ekstraksi,
• Natrium 1-heptan sulfonat, • agitator vortex,
• Natrium Asetat, • Rotator Roller Mixer,
• Asam asetat glasial, • instrumen Kromatografi Cair Kinerja Tinggi
• Asam klorida, • kolom C-18 (ODS Hypersil TM, 5 μm, 200 x 4,6 mm)
• Dikaliumhidrogenfosfat, • dan alat-alat gelas yang digunakan dalam laboratorium
• Natrium hidroksida. analisis.
Subyek percobaan
Dalam penelitian ini digunakan enam orang sukarelawan sebagai subjek percobaan yang telah memenuhi
persyaratan uji ketersediaan hayati melalui pengujian laboratorium klinik.
Metode

1. Pemeriksaan Bahan Baku

Pemeriksaan bahan baku parasetamol dan fenilpropanolamin
hidroklorida yang dilakukan meliputi pemerian, kelarutan, dan
identifikasi secara spektrfotometri UV.
2. Seleksi Sukarelawan
Dilakukan pengujian klinik terhadap enam orang sukarelawan yang
meliputi pengujian terhadap SGOT dan SGPT, kadar kreatinin serum,
kadar gula darah, dan darah rutin di Laboratorium Klinik Pramita
Bandung.
3. Pemberian Obat
Pemberian obat kepada sukarelawan dilakukan dengan metode three way crossover berikut ini :
4. Pengambilan Sampel Darah
Pengambilan sampel darah dilakukan pada jam ke- 0,0; 0,25; 0,5; 0,75;
1,0; 1,5; 2,0; 3,0; 4,0; 5,0; 6,0; 8,0; 10,0; dan 12,0 setelah pemberian
obat secara oral. Sampel darah disentrifuga dan diambil plasma-nya
kemudian disimpan pada temperatur –20o C.
5. Penetapan Kadar Obat dalam Plasma
a. Parasetamol
Kurva Baku Parasetamol
• Ditimbang parasetamol uji sebanyak 2,5 mg
• dilarutkan dengan metanol dalam labu takar 25 ml.
• Dari larutan induk tersebut dibuat variasi konsentrasi
sebesar 1, 2, 4, 6, 8, dan 10 μg/ml parasetamol dalam
plasma.
• Diambil 1 ml plasma dari setiap konsentrasi di atas dan
masukkan ke dalam tabung ekstraksi.
• Tambahkan 5 ml etil asetat ke dalam tabung tersebut
kemudian dikocok dengan menggunakan agitator vortex
selama 30 detik dan diputar dalam alat pencampur “Roller
Mixer” selama 15 menit
• kemudian disentrifuga selama 10 menit pada 400g.
• Lapisan bening dipindahkan ke dalam tabung lain dan
diuapkan.
• Residu dilarutkan kembali dalam 200 μl metanol. Sebanyak
20 μl larutan disuntikkan ke dalam Kromatografi Cair Kinerja
Tinggi (KCKT).
b. Fenilpropanolamin Hidroklorida
Kurva Baku Fenilpropanolamin Hidroklorida
• Ditimbang Fenilpropanolamin Hidro-klorida uji sebanyak 2
mg
• dilarutkan dengan aqua bidestilata dalam labu takar 25 m
• Dari larutan induk tersebut dibuat variasi konsentrasi
sebesar 0,04; 0,06; 0,08; 0,1; 0,2; dan 0,4 μg/ml
Fenilpropanolamin Hidroklorida dalam plasma.
• Diambil 1 ml dari setiap konsentrasi di atas dan masukkan
ke dalam tabung ekstraksi yang telah diisi dengan 100 μl
larutan K2HPO4 0,5 M pH 11.
• Tabung dikocok dengan vortex selama 30 detik dan
ditambahkan 5 ml Metilenklorida ke dalam tabung terseb
kemudian diputar dalam alat pencampur “Roller Mixer”
selama 15 menit kemudian disentrifuga selama 10 menit
pada 3000g.
• Lapisan bening dipindahkan ke dalam tabung lain dan
diuapkan. Residu dilarutkan kembali dalam 200 μl aqua
bidestilata. Sebanyak 20 μl larutan disuntikkan ke dalam
KCKT.
Penetapan Kadar Parasetamol dalam Plasma
Sukarelawan
• Sebanyak 1 ml plasma sukarelawan ditambahkan 5
ml etil asetat dalam tabung ekstraksi,
• dikocok dengan menggunakan agitator vortex
selama 30 detik dan diputar dalam alat pencampur
“Roller Mixer” selama 15 menit
• kemudian disentrifuga selama 10 menit pada 400g.
• Lapisan bening dipindahkan ke dalam tabung lain
dan diuapkan.
• Residu dilarutkan kembali dalam 200 μl metanol.
Sebanyak 20 μl larutan disuntikkan ke dalam KCKT.
Penetapan Kadar Fenilpropanolamin Hidroklorida dalam
Plasma Sukarelawan
• Sebanyak 1 ml plasma sukarelawan dimasukkan ke
dalam tabung ekstraksi yang telah diisi dengan 100 μl
larutan K2HPO4 0,5 M pH 11.
• Tabung dikocok dengan vortex selama 30 detik dan
ditambahkan 5 ml Metilenklorida ke dalam tabung
tersebut
• diputar dalam alat pencampur “Roller Mixer” selama
15 menit kemudian disentrifuga selama 10 menit
pada 3000g.
• Lapisan bening dipindahkan ke dalam tabung lain dan
diuapkan.
• Residu dilarutkan kembali dalam 200 μl aqua
bidestilata. Sebanyak 20 μl larutan disuntikkan ke
dalam KCKT.