By

SITTI HADIJAH
 Living state: Wet Mount Method
Hanging drop Preparat

 Fixed state: pewarnaan

Fiksasi:
 Melekatkan spesimen pada obyek glass
 Membunuh kuman tanpa merubah morfologinya
 Mencegah enzym yang dapat merusak morfologi sel
 Sebagai intensifier sehingga kuman mudah di cat

 Macam fiksasi:
Secara phisic: pemanasan
Secara chemis: methyl/ethyl alkohol, formalin, asam asetat
 Sifat cat:
 Mempunyai : struktur cincin benzena
gugus chromofor menentukan warna cat
gugus auxochrome menentukan sifat elektrolit
dissosiasi/ kemampuan membentuk salt linkages dengan protein
jaringan dll.

Macam cat:

Basic dyes: garam-garam cat yang chromofor (ion-ion cat)nya

kation dengan anion: Cl, SO4, asetat, oksalat
ex. Methylen blue, safranin, crystal violet

Acid dyes: khromofornya anion dengan kation: Na+, K+, Ca+, NH4+
Ex. Fuchsin, acid fuchsin, congo red dll
 Preparasi smear:

 Smear: lesi, exudate, darah, jaringan atau

koloni kuman yang terisolir

Smear fiksasi pewarnaan

Types of stain

 Simple stains

 Differential stains

 Special stains

 General stains
 Pewarnaan sederhana

 Menggunakan satu macam zat warna

 Kuman terwarnai oleh zat warna

 Example: Methylen blue kuman berwarna biru

Safranin kuman berwarna merah

Pewarnaan negatif

 Zat warna Iodin Ink

 Kuman tidak terwarnai dengan bakcground gelap

 Kapsul jernih
Pewarnaan differensial
1. Pewarnaan Gram:
 Paling umum digunakan
 Tehnik pengecatan diagnostik

Cat: crystal violet (primary stain)

Lugol (mordan)
Alkohol
Safranin (counter stain)
Bakteri Gram positif purple
Bakteri Gram negatif merah
 primary
stain

mordant

decolorization

counterstain

positive
negative
Kuman Gram positif Kuman Gram negatif
PENJELASAN:

 Setelah diberi karbol ungu kristal semua kuman

menjadi ungu, zat warna diserap dalam dinding sel
dan protoplasma
 Pemberian lugol menyebabkan terbentuknya komplek
ungu kristal-jodium yang berwarna ungu tengguli
kotor
 Pencucian dengan alcohol menyebabkan terjadinya
diferensiasi dari dua macam kuman:
- Kuman tetap berwarna ungu
- Kuman tidak berwarna, sebab zat warna dilarutkan
oleh alcohol dan keluar dari sel kuman
 Fukhsin sebagai pewarna kontras (counter stain)
mewarnai kuman yang tidak berwarna menjadi
merah
 Kuman Gram Positif Kuman Gram negatif
 Struktur dinding sel  Lapisan peptidoglikanya lebih  Lapisan peptodoglikannya lebih
 Komposisi dinding sel tebal (15-80 nm) berlapis tunggal tipis (10-15 nm) berlapis tiga
 Kepekaan terhadap (mono) (multi)
penisilin  Kandungan lipid rendah (1-4%),  Kandungan lipid tinggi (11-22%),
 Resistensi terhadap alkali peptidoglikan ada sebagai lapisan peptidoglikan ada didalam lapisan
(1% KOH) tunggal; komponen utama kaku sebelah dalam; jumlahnya
 Kepekaan terhadap merupakan lebih dari 50% berat sedikit merupakan sekitar 10%
jodium kering pada beberapa sel bakteri, berat, tidak ada asam tekoat.
 Resistensi terhadap memiliki asam tekoat  Kurang peka
tellurit  Lebih peka  Larut
 Sifat tahan asam  Tidak larut  Endotoksin
 Kepekaan terhadap  Toksin yang dibentuk  Lebih peka
streptomisin  Lebih tahan  Tidak ada yang tahan asam
 Persyaratan nutrisi  yang tahan asam  Peka
 Resistensi terhadap  Tidak peka  Relatif sederhana
gangguan fisik  Relatif rumit pada banyak species  Kurang resisten
 Lebih resisten
 Teori Salton
berdasarkan perbedaan kadar lipid
yang tinggi (20%) didalam dinding sel
kuman Gram negative
Zat lipid pada dinding sel membesar,
sehingga zat warna yang sudah diserap
mudah dilepaskan dan kuman menjadi
tidak berwarna.
pada kuman Gram positif mengalami
denaturasi protein pada dinding selnya
oleh pencucian dengan alcohol.
Protein menjadi keras dan beku, pori-
pori mengecil, sehingga komplek ungu
kristal-jodium dipertahankan dan sel
kuman tetap berwarna ungu. Bila
dinding sel dilarutkan dengan lisosim
(enzim), maka terbentuklah protoplas.
Sel melepaskan komplek ungu kristal-
jodium setelah dicuci dengan alcohol.
Jadi dinding sel menahan keluarnya zat
warna ungu.
Permeabilitas dinding sel

Teori ini berdasarkan tebal

tipisnya lapisan peptidoglikan
dalam dinding sel. Kuman Gram
positif mempunyai susunan dinding
sel yang kompak dengan lapisan
peptidoglikan yang terdiri dari 30
lapisan. Permeabilitas kurang dan
komplek ungu kristal-jodium tidak
dapat keluar.
Sedangkan pada Gram negative
mempunyai lapisan peptidoglikan yang
tipis, hanya 1-2 lapisan dan susunan
dinding sel tidak kompak. Permeabilitas
dinding sel lebih besar, sehingga masih
memungkinkan terlepasnya komplek ungu
 2. Pewarnaan tahan asam
ZEIHL-NEELSON METHOD

 Pewarnaan differensial untuk bakteri tahan asam

kelompok kuman ycobacterium

Prinsip: tergantung pada ketahanan bakteri terhadap dekolorisasi

alkohol asam dinding sel mengandung asam mikolat yang
berikatan dengan polisakarida yang mencegah karbol
fuchsin dari sel

Acid fast cells merah

Non Acid fast counter stain

Penjelasan:

Sesudah pencucian dengan asam-alkohol, kuman tahan asam

mempertahankan warna merahnya sedangkan kuman yang tidak tahan asam
melepaskan warna ini dan menjadi tidak berwarna. Sifat tahan asam ini
disebabakan karena terdapatnya asam mikolat yang terikat dalam dinding
sel. Dinding sel kuman tahan asam terdiri dari peptidoglikan,
arabinogalaktan dan lipid, sedangkan 50% dari lipid ini adalah asam
mikolat.

Hasil dapat dibaca sebagai berikut:

 Kuman tahan asam berwarna merah
 Kuman tidak tahan asam berwarna biru.
 Pewarnaan khusus
 Pewarnaan kapsul

Congo Red METHOD

 MUIR’S METHOD
 Carbol Fuchsin
 Ethanol
 MUIR’S Mordant
 Counterstain: Loeffler’s methylen blue

 ANTHONY METHOD:
Crystal violet
20% CUSO4
Pewaranaan spora

 Types:
 Moeller Modified Method
Carbol Fuchsin, Ethanol, Loeffer’s Methylen Blue
Vegetative cell biru, spora merah

 Pewarnaan Schaeffer fulton

◦ Bahan malachite green, safranin
◦ Spora kuman hijau
◦ Vegetative cell merah
◦ Pewarnaan Bartolomev dan Mittwer
Pewarnaan NEISSER

 Zat warna Neisser AB

Neisser C

Melihat granula metakhromatik

Granula metakhromatik biru gelap
Vegetatif sel kuning coklat
 Pewarnaan flagella

 Pewarnaan Leiffson
 Pewarnaan Bailey
mordan Asam tannin